Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

24 страницы

258.00 ₽

Купить МУК 4.1.3101-13 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств тифенсульфурон-метила в семенах и масле подсолнечника в диапазоне 0,002 - 0,2 мг/кг

 Скачать PDF

Оглавление

1. Погрешность измерений

2. Метод измерений

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

     3.1 Средства измерений

     3.2 Реактивы

     3.3 Вспомогательные устройства и материалы

4. Требования безопасности

5. Требования к квалификации операторов

6. Условия измерений

7. Подготовка к определению

     7.1 Подготовка органических растворителей

     7.2 Приготовление растворов для проведения анализа

     7.3 Установление градуировочной характеристики

     7.4 Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тифенсульфурон-метила на нем

     7.5 Подготовка концентрирующих патронов № 2 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тифенсульфурон-метила на нем

     7.6 Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

8. Отбор и хранение проб

9. Выполнение определения

     9.1 Семена подсолнечника

     9.2 Масло подсолнечника

     9.3 Условия хроматографирования

10 Обработка результатов

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

12. Оформление результатов

13. Контроль качества результатов измерений

Приложение. Полнота извлечения тифенсульфурон-метила из семян и масла подсолнечника

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
тифенсульфурон-метила в семенах и масле
подсолнечника методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3101-13

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов», Минсельхоза России (В.А. Калинин, Е.В. Довгилевич, А.В. Довгилевич, Н.В. Устименко).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. № 1).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 8 августа 2013 г.

4. Введены впервые.

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

8 августа 2013 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств тифенсульфурон-
метила в семенах и масле подсолнечника методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3101-13

Свидетельство о метрологической аттестации от 4.10.2012 № 01.00282-2008/0135.04.10.12.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств тифенсульфурон-метила в семенах и масле подсолнечника в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: тифенсульфурон-метил.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 3-(4-метокси-6-метил-1,3,5-триазин-2-илкарбамоилсульфамоил)тиофен-2-карбоновая кислота.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C12H13N5O6S2.

Молекулярная масса: 300,4.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белое кристаллическое вещество без запаха.

Давление паров: 1,7×10-5 мПа (при 25 °С).

Коэффициент распределения октанол-вода (20 °С): Kowlog Р = 0,20 (при pH 5), 0,02 (при pH 7).

Температура плавления: 176 °С.

Растворимость в воде, мг/дм3 (25 °С): 230 при pH 5,6270 при pH 7.

Растворимость в органических растворителях (г/дм3, 20 °С): хлористый метилен - 27,5; ацетон - 11,9; ацетонитрил - 7,3; метанол и этилацетат - 2,6; этанол - 0,9; ксилол - 0,2; гексан - менее 0,1.

Тифенсульфурон-метил стабилен при температуре 55 °С. Подвергается гидролизу при температуре 45 °С: DT50 составляет 4,7 ч (pH 3), 38 ч (pH 5), 250 ч (pH 7) и 11 ч (pH 9).

Тифенсульфурон-метил кислота с рКа - 4,0 (25 °С).

Краткая токсикологическая характеристика

Тифенсульфурон-метил относится к мало опасным веществам по острой пероральной (ЛД50 для крыс составляет более 5 000 мг/кг) и дермальной (ЛД50 для кроликов составляет более 2 000 мг/кг) токсичности, но к умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 ч) - более 7 900 мг/м3 воздуха). Не вызывает покраснения кожи, слабо раздражает слизистую оболочку таз. Не проявляет тератогенных и мутагененных свойств.

Область применения

Тифенсульфурон-метил - гербицид системного действия, проникающий через корни и листья растений и ингибирующий биосинтез изолейцина и валина. Рекомендуется для применения на посевах яровых и озимых зерновых культур (пшеница, ячмень, рожь, овес, тритикале) сои и кукурузы. Хорошо подавляет развитие широколистных сорняков, используется для послевсходовой обработки с нормой расхода 9 - 60 г д.в./га.

Тифенсульфурон-метил зарегистрирован в России в смеси с Рим-сульфуроном в качестве гербицида для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми и однолетними двудольными сорняками в посевах кукурузы с рекомендуемой нормой расхода по препарату 20 - 25 г/га.

В России гигиенические нормативы для семян и масла подсолнечника не установлены.

МДУ в импортируемой продукции (мг/кг): семена масличных - 0,05.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для тифенсульфурон-метила

Анализируемый объект

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг

Показатель точности (граница относительной погрешности), ±δ, %,

P = 0,95

Стандартное отклонение повторяемости, sr, %

Предел повторяемости, r, %

Предел воспроизводимости, R, %

Норматив оперативного контроля точности, K, мг/кг

(Р = 0,95, т = 2)

Семена подсолнечника

0,02 - 0,1 вкл.

50

1,98

5,51

7,71

0,59 ∙ X*

0,1 - 0,2 вкл.

25

1,93

5,37

7,51

0,30 ∙ X*

Масло подсолнечника

0,02 - 0,1 вкл.

50

2,23

6,20

8,68

0,59 ∙ X*

0,1 - 0,2 вкл.

25

2,16

6,00

8,41

0,30 ∙X*

_______________

* X - среднее значение массовой концентрации тифенсульфурон-метила в пробе (мг/кг).

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для тифенсульфурон-метила

Анализируемый объект

Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20

предел обнаружения, мг/кг

диапазон определяемых концентраций, мг/кг

полнота извлечения вещества, %

стандартное отклонение, S,%

доверительный интервал среднего результата, ±, %

Семена подсолнечника

0,02

0,02 - 0,2

73,96

1,46

±0,68

Масло подсолнечника

0,02

0,02 - 0,2

82,06

1,47

±0,69

2. Метод измерений

Метод основан на определении тифенсульфурон-метила с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах № 1 и 2.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Весы аналитические класса точности - специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г

ГОСТ Р 53228-08

Весы лабораторные общего назначения класса точности - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г

ГОСТ Р 53228-08

Колбы мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1 000 см3

ГОСТ 1770-74

Микрошприц объемом 100 мм3 со шкалой деления 0,001 см3 и погрешностью менее 1 % от номинального объема

 

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 см3 pH-метр/милливольтметр с диапазоном измерения 0 ... 14 pH; ±1 999 мВ

ГОСТ 29227-91

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф жидкостный, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С, ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ

Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 см3

ГОСТ 1770-74

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Тифенсульфурон-метил, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,6 %

 

Ацетон, осч

ТУ 6-09-3513-86

Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм

ТУ 6-09-2167-84

Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости)

ГОСТ 6709-72

Гелий, очищенный

ТУ-51-940-80

n-Гексан, хч

ТУ 6-09-3818-89

Калий марганцовокислый, чда

ГОСТ 20490-75

Кальций хлористый, ч

ТУ 6-09-4711-81

Кислота ортофосфорная, 85 %, чда

ГОСТ 6552-80

Кислота уксусная, ледяная

ГОСТ 61-75

Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с гидрофильным слабокислым сорбентом с постоянной активностью с размером частиц 63 - 200 мкм (С) (объем - 1 см3, масса сорбента - 0,6 г) (патрон № 1)

ТУ 4215-002-05451931-94

Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции со слабоосновным сорбентом с размером частиц 63 - 200 мкм с привитыми аминогруппами (объем - 1 см3, масса сорбента - 0,6 г) (патрон № 2)

ТУ 4215-002-05451931-94

Натрий сернокислый, безводный, хч

ГОСТ 4166-76

Натрий хлористый, хч

ГОСТ 4233-77

Этилацетат, чда

ГОСТ 22300-76

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами

ГОСТ 25336-82

Аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, максимальной загрузкой 10 кг, амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту

 

Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см3

 

Ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм3

 

Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная

ГОСТ 5556-81

Воронки делительные на 250 см3

ГОСТ 25336-82

Воронки лабораторные, стеклянные

ГОСТ 25336-82

Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3 000 см3, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм3 и диапазоном температур от 20 до 100 °С

 

Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1 000 см3

ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250 см3 и 4 000 см3 ТС

ТУ 92-891.029-91

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18

 

Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс., с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм3/мин

 

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С8

 

Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100 - 500 см3

ГОСТ 25336-82

Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 см3 и приемной конической колбой объемом 1 000 см3

ТУ-6-09-1678-86

Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г

 

Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 см3 и приемной конической колбой объемом 1 000 см3

 

Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г

ТУ-6-09-1678-86

Фильтры для очистки растворителей диаметром 20 мм, с отверстиями пор 20 мкм

 

Центрифуга лабораторная, настольная с максимальным рабочим числом оборотов 4 000 об./мин, рабочим объемом ротора 200 см3×4 ячейки, выбираемый временной диапазон работы от 0 до 100 мин и набором полипропиленовых банок емкостью 200 см3

 

Шприц инъекционный многократного применения объемом 10 см3

ГОСТ 22967-90

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать нормы, установленные ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-91.

5. Требование к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении;

• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению определений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов № 1 и 2 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах № 1 и 2, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7.1.2. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление 0,1 %-го раствора уксусной кислоты в этилацетате. В мерную колбу объемом 100 см3 помещают 50 см3 этилацетата, прибавляют 0,1 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают и доводят этилацетатом объем в колбе до метки.

7.2.1.2. Приготовление 2 %-го раствора уксусной кислоты в этилацетате. В мерную колбу объемом 100 см3 помещают 50 см3 этилацетата, прибавляют 2,0 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают и доводят этилацетатом объем в колбе до метки.

7.2.1.3. Приготовление 0,1 %-го водного раствора ортофосфорной кислоты. В мерную колбу объемом 1 000 см3 помещают 500 см3 очищенной воды, прибавляют 1,0 см3 ортофосфорной кислоты, перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.2. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и 0,1 %-й водный раствор ортофосфорной кислоты.

В плоскодонную колбу объемом 1 000 см3 помещают 300 см3 ацетонитрила и 600 см3 0,1 %-й водного раствора ортофосфорной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см3/мин в течение 5 мин, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

7.2.3. Приготовление градуировочных растворов

7.2.3.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией тифенсульфурон-метила 100,0 мкг/см3. Взвешивают 10 мг тифенсульфурон-метила в мерной колбе объемом 100 см3. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике не более 1 месяца.

1.2.3.2. Стандартный раствор № 2 с концентрацией тифенсульфурон-метила 10,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 50 см3 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.3.3. Стандартный раствор № 3 с концентрацией тифенсульфурон-метила 1,0 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 при перемешивании. Стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартного раствора и установления градуировочной характеристики, хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.3.4. Стандартный раствор № 4 с концентрацией тифенсульфурон-метила 0,5 мкг/см3. Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 при перемешивании. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.3.5. Стандартный раствор № 5 с концентрацией тифенсульфурон-метила 0,2 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 50 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 при перемешивании. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.3.6. Стандартный раствор № 6 с концентрацией тифенсульфурон-метила 0,1 мкг/см3. Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 при перемешивании. Стандартный раствор № 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 10 суток.

7.2.3.7. Стандартные растворы тифенсульфурон-метила с концентрацией 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/см3 для внесения в контрольные образцы. Методом последовательного разведения этилацетатом стандартного раствора № 2 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/см3 и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации тифенсульфурон-метила в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см3.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тифенсульфурон-метила на нем

7.4.1. Подготовка концентрирующего патрона № 1 для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см3 этилацетата и 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения тифенсульфурон-метила на концентрирующем патроне № 1

Из стандартного раствора тифенсульфурон-метила в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см3, отбирают 1 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см3 этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 18 см3 гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Исходный концентратор обмывают последовательно 10 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и 10 см3 0,1 %-го раствора ледяной уксусной кислоты в этилацетате. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие тифенсульфурон-метил, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения тифенсульфурон-метила на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

7.5. Подготовка концентрирующего патрона № 2 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тифенсульфурон-метила на нем

7.5.1. Подготовка концентрирующего патрона № 2 для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон № 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 этилацетата. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения тифенсульфурон-метила на концентрирующем патроне № 2

Из стандартного раствора тифенсульфурон-метила в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см3, отбирают 1 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 10 см3 0,1 %-го раствора ледяной уксусной кислоты в этилацетате, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Исходный концентратор обмывают последовательно 10 см3 0,1 %-го раствора ледяной уксусной кислоты в этилацетате и двумя порциями по 10 см3 2 %-го раствора ледяной уксусной кислоты в этилацетате. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С, сухой остаток растворяют в 2 см3 смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие тифенсульфурон-метил, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения тифенсульфурон-метила на концентрирующих патронах № 2 проводят каждый раз ври отработке методики или поступлении новой партии патронов.

7.6. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °С и скорости потока подвижной фазы 1 см3/мин 3 - 4 ч.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», от 21.08.79 № 2051-79, а также в соответствии с ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 22391-89 «Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках», ГОСТ Р 52465-05 «Масло подсолнечное. ТУ», ГОСТ Р 52062-03 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».

Отобранные пробы семян подсолнечника подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы подсолнечного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 10 суток.

9. Выполнение определения

9.1. Семена подсолнечника

9.1.1. Экстракция

Образец измельченных (размолотых на лабораторной мельнице) семян подсолнечника массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см3 с 5 г безводного сульфата натрия, прибавляют 50 см3 этилацетата и помещают на 10 мин на аппарат для встряхивания проб. После экстракции пробу центрифугируют 5 мин при скорости 4 000 об./мин. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см3 через фильтр средней плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см3 этилацетата и помещая на 10 мин на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют, фильтруют, экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 см3, упаривают до маслянистого остатка при температуре не выше 30 °С.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 20 см3 гексана, тщательно обмывая стенки концентратора, фильтруют раствор в сухую делительную воронку через фильтр «красная лента». Концентратор обмывают еще двумя порциями гексана по 20 и 10 см3 и объединяют все смывы в делительной воронке, фильтруя их через фильтр «красная лента». Тифенсульфурон-метил экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 см3, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см3 через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

9.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1

Сухой остаток, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 2 см3 этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 18 см3 гексана, перемешивают и вносят на заранее подготовленный патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 5 см3 смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и вносят на патрон, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 см3 0,1 %-го раствора ледяной уксусной кислоты в этилацетате, наносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3 и подвергают дальнейшей очистке на концентрирующих патронах № 2.

9.1.4. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2

Элюат, полученный по п. 9.1.3, вносят на подготовленный патрон № 2. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 см3 0,1 %-го раствора ледяной уксусной кислоты в этилацетате, вносят на патрон, элюат отбрасывают. Тифенсульфурон-метил элюируют 10 см3 2 %-го раствора ледяной уксусной кислоты в этилацетате. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.2. Масло подсолнечника

9.2.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Из пробы подсолнечного масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 см3 тремя порциями гексана объемом по 20 см3. Тифенсульфурон-метил экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 см3, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой сливают в коническую колбу объемом 100 см3. Верхний слой (гексан) отбрасывают.

Ацетонитрильный экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 см3 и промывают одной порцией гексана объемом 100 см3, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.3 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1» и по п. 9.1.4 «Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 2».

Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2 и 20 мм3 пробы вводят в хроматограф.

9.3. Условия хроматографирования

Хроматографическая система, включающая:

• хроматограф жидкостный, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С, ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу;

• компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С8.

Температура колонки: 30 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,1 %-й водный раствор ортофосфорной кислоты в соотношении 1:2.

Длина волны: 230 нм.

Объем вводимой пробы: 20 мм3.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

10. Обработка результатов

Содержание тифенсульфурон-метила в пробах рассчитывают по формуле:

X - содержание тифенсульфурон-метила в пробе, мг/кг;

Scm - высота (площадь) пика стандарта, мм;

Sпр - высота (площадь) пика образца, мм;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см3;

V - объем экстракта, подготовленного д ля хроматографирования, см3;

m - масса анализируемого образца, г (см3);

P - содержание тифенсульфурон-метила в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:

(1)

X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг,

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8×σr.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг».*

___________________

* 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для тифенсульфурон-метила проводят в начале и окончании каждой серии анализов, а также при смене: основных градуировочных растворов № 1 и 2 - каждый месяц, основных градуировочных растворов № 3, 4, 5 и 6 -каждые 10 суток.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание тифенсульфурон-метила в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см3.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация тифенсульфурон-метила контрольного измерения, мкг/см3;

C - известная концентрация градуировочного раствора тифенсульфурон-метила в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:2, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

1,66 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 1,66 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тифенсульфурон-метила, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

 - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:

 Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

(2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предел воспроизводимости (R):

(3)

X1, Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Приложение

Полнота извлечения тифенсульфурон-метила из семян и масла подсолнечника
(5 повторностей для каждой концентрации,
P = 0,95)

Среда

Внесено тифенсульфурон-метила, мг/кг

Обнаружено тифенсульфурон-метила, мг/кг

Полнота определения, %

Семена подсолнечника

0,02

0,0147 ± 0,0004

73,5

0,04

0,0299 ± 0,0003

74,8

0,10

0,0750 ± 0,0011

75,0

0,20

0,1451 ± 0,0035

72,5

Масло подсолнечника

0,02

0,0164 ± 0,0005

81,8

0,04

0,0328 ± 0,0006

82,0

0,10

0,0813 ± 0,0022

81,3

0,20

0,1662 ± 0,0018

83,1

Содержание

1. Погрешность измерений. 2

2. Метод измерений. 3

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы.. 3

4. Требования безопасности. 6

5. Требование к квалификации операторов. 6

6. Условия измерений. 6

7. Подготовка к выполнению определений. 6

8. Отбор проб и хранение. 9

9. Выполнение определения. 10

10. Обработка результатов. 11

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений. 12

12. Оформление результатов. 12

13. Контроль качества результатов измерений. 12

Приложение. 14. Полнота извлечения тифенсульфурон-метила из семян и масла подсолнечника (5 повторностей для каждой концентрации, P = 0,95) 14