Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

16 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ 33615-2015 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный порошок, яичный меланж, молоко, рыбу, мед и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона (3-амино-2-оксазолидинона) в диапазоне измерений от 0,7 до 62,5 мкг/кг, для сухого молока - от 7 до 625 мкг/кг.

 Скачать PDF

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины, определения и сокращения

4 Сущность метода

5 Метрологические характеристики

6 Требования безопасности и условия выполнения измерений

7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы

8 Подготовка к выполнению измерений

     8.1 Подготовка оборудования

     8.2 Приготовление растворов

     8.3 Отбор проб

     8.4 Подготовка проб

9 Проведение иммуноферментного анализа

     9.1 Общие положения

     9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа

     9.3 Проведение анализа

10 Обработка результатов измерения

11 Контроль точности результатов измерения

Приложение А (рекомендуемое) Комплектация тест-системы "Фуразолидон - ИФА"

Приложение Б (рекомендуемое) Схема заполнения лунок планшета

Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов измерения

 
Дата введения01.01.2017
Добавлен в базу01.02.2017
Актуализация01.02.2020

Этот ГОСТ находится в:

Организации:

27.10.2015УтвержденМежгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации81-П
18.01.2016УтвержденФедеральное агентство по техническому регулированию и метрологии4-ст
ИзданСтандартинформ2016 г.
РазработанФГБУ ВГНКИ

Food products, food raw materials. Immunoenzymatic method for determination of furazolidone metabolite

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона

ГОСТ

33615-

2015

Издание официальное



Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстан-

дарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. No 81 -П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны

Код страны

Сокращенное наименование национальною органа

по МК(ИСО 3166 ) 004-97

по МК (ИСО 3166(004-97

по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. Np 4-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33615-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случав пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

©Стандартинформ. 2016

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ 33615-2015

Содержание

1    Область применения................................................ 1

2    Нормативные ссылки............................................... ^

3    Термины, определения и сокращения..................................... 2

4    Сущность метода......................................................

5    Метрологические характеристики............................................

6    Требования безопасности и условия выполнения измерений....................... 3

7    Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы.......................

8    Подготовка к выполнению измерений.........................................

8.1    Подготовка оборудования..............................................

8.2    Приготовление растворов..............................................

8.3    Отбор проб .......................................................

8.4    Подготовка проб...................................................6

9    Проведение иммуноферментного анализа.....................................7

9.1    Общие положения..................................................7

9.2    Подготовка тест-системы к проведению анализа..............................7

9.3    Проведение анализа.................................... 7

10    Обработка результатов измерения.........................................7

11    Контроль точности результатов измерения....................................9

Приложение А (рекомендуемое) Комплектация тест-системы «Фуразолидон — ИФА»..........10

Приложение Б (рекомендуемое) Схема заполнения лунок планшета.....................10

Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов измерения...............11

in

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ. ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ
Иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона

Food products, food raw materials.

Immunoenzymatic method for determination of furazolidone metabolite

Дата введения — 2017—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный порошок, яичный меланж, молоко, рыбу, мед и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона (З-амино-2-оксазолидинона) в диапазоне измерений от 0.7 до 62,5 мкг/кг, для сухого молока — от 7 до 625 мкг/кг.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79ч Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2652-78 Калия бихромат технический. Технические условия ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-20031' Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ь В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 «Система стандартов безопасности труда Эпектробезопасность. Общие требования и номенклатура видов зашиты».

21 В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 7269-79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 19792—2001Мед натуральный. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 31467-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылоч-ныхстандартовло указателю «Нациомальныестандарты». составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, а котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины, определения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1    тест-систома: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.

3.1.2    вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.

3.1.3    рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа.

3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения:

AOZ — З-амино-2-оксаэолидинон (метаболит фуразолидона);

АГ —антиген;

АТ — антитела;

ИФА — иммуноферментный анализ;

ОП — оптическая плотность;

П — относительное поглощение;

ТМБ — 3,3\5.5'-тетраметилбензидин;

ФК — ферментный конъюгат.

4    Сущность метода

4.1    Иммуноферментный метод основан на измерении массовой концентрации AOZ в растворах экстрактов исследуемых проб с помощью прямого твердофазного конкурентного ИФА.

4.2    Прямой твердофазный конкурентный ИФА основан на способности маркерного метаболита AOZ и ФК в условиях конкуренции взаимодействовать со специфичными АТ. нанесенными на поверхность лунок планшета.

4.3    Связавшийся с AT AOZ, меченный пероксидаэой хрена, выявляют путем измерения интенсивности окрашивания продукта реакции окисления 3,3\5,5'-тетраметилбензидина (раствор № 5. см. приложение А) перекисью водорода.

и

Аналитический сигнал (регистрируемое значение ОП). характеризующий степень взаимодействия АТ с АГ. обратно пропорционален массовой концентрации AOZ в растворе.

В Российской Федерации действует ГОСТ Р 54644-2011 «Мед натуральный. Технические условия».


5 Метрологические характеристики

5.1 Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации (содержания) AOZ с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к- 2. указанной в таблице 1.

Таблица 1 — Метрологические характеристики метода

AOZ

(З-амиио-2-

оксазолидинои)

Диапазон измерений содержания. мкг/дм3 (млх/кг)

относительной расширенной неопределенности U. при коэффициенте охвата *»2,

Р = 0.95. %

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратичное отклонение повторяемости) аг. %

Показатель

воспроизводимости

(относительное

стандартное

отклонение

воспроизводимости)

о„.%

Предел

повторяемости

г, %

(при Р * 0.95. л-2»

В мясе, мясе птицы. яйцах, яичном порошке, яичном меланже. рыбе, молоке, меде

От 0.7 до 2.0 а ключ.

50

16

24

44

Се. 2.0 до 62.5 включ.

30

9

14

25

В сухом молоке

От 7 до 20 включ.

50

16

24

44

Св. 20 до 625 включ.

30

9

14

25

6 Требования безопасности и условия выполнения измерений

6.1    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

6.2    Помещения, в которых проводится анализ и подготовка проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией, и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и электробезопасности по ГОСТ 12.1.019.

6.3    К выполнению измерений допускаются лица, владеющие техникой ИФА и изучившие инструкции по применению тест-систем и инструкции по эксплуатации используемых приборов.

-    температура окружающего воздуха...................от    20    °С    до    30    вС:

-    атмосферное давление...........................от    84    до    106    кЛа;

-    напряжение в питающей электросети..................от    200    до    240    В:

-    частота переменного тока.........................от    49    до    51    Гц;

-    относительная влажность воздуха....................от    40%    до    80%.


6.4    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы

7.1 При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, аппаратуру, материалы и посуду.

-    весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIMLR 76-1 с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г и пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,05 г;

-    весы микроаналитические с наибольшим пределом взвешивания 52 г. с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более iO.OI мг;

-    pH-метр любой марки, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 3 до 10 ед. pH с погрешностью ±0.05 ед. pH;

-    фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерений ОП от 0 до 3 в комплекте с интерференционными светофильтрами для длин волн 450 и 620 им;

-    баню водяную с терморегулятором, позволяющим поддерживать температуру от 40 °С до 100 вС. с отклонением от заданной температуры ±5 вС;

-    измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

-    калькулятор любого типа с логарифмической функцией; 2

-    микроцентрифугу любого типа с частотой вращения 7000 об/мин:

-    морозильную камеру любого типа, обеспечивающую среднюю температуру в холодильной камере не выше минус 20 °С.

-    роторный испаритель любого типа или устройство для испарения экстрактов, с термостати-руемым нагревательным модулем с системой отдувки растворителей инертным газом.

-    термостат любого типа, поддерживающий температуру (37 ± 1) °С:

•    холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 0 °С до 8 °С;

-    центрифугу с бакет-ротором и адаптером для пробирок вместимостью 15 см2, частотой вращения не менее 4000 об/мин;

-    шейкер переворачивающий вертикального вращения 360° в одной плоскости с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин;

-    шейкер вортексного типа, с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин:

-    шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий поддержание температуры не менее (95 1 5) °С;

-    бумагу индикаторную универсальную. pH 0—12;

-    бумагу масштабно-координатную по ГОСТ 334. марки Н-1;

-    бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026:

-    колбы 1-100 (1000)-2 по ГОСТ 1770:

-    колбы конические Кн-1 -25(50>-24/29 ТС по ГОСТ 25336;

-    пипетки многоканальные переменной вместимости 0.03—0.3 см2, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1,0 %;

-    пипетки одноканальные переменной вместимости 0.005—0,05: 0,1—1.0; 0.5—5.0 см2 с допустимой относительной погрешностью дозирования по карбинолу и ацетонитрилу не более ±1 %;

-    пробирки стеклянные типа П-1-10-0,1 ХС по ГОСТ 25336;

-    пробирки стеклянные типа «Фалькон» вместимостью 50 см2 с завинчивающимися крышками;

-    пробирки типа «Эппендорф» вместимостью 1.5 см2:

-    цилиндры 1 (2.3)-10(250. 500)-1 по ГОСТ 1770.

7.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы;

-    воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

-    калия бихромат по ГОСТ 2652;

-    кислоту серную по ГОСТ 4204. концентрированную;

-    кислоту соляную по ГОСТ 3118, концентрированную, плотностью 1.19 г/см2, х. ч.;

•    метанол с содержанием основного вещества не менее 99 %, х. ч.;

-    натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч..

-    натрия фосфат додекагидрат с содержанием основного вещества не менее 98 %;

-    н-гексан с содержанием основного вещества не менее 98 %. х. ч.;

-    тест-систему для прямого твердофазного конкурентного ИФА в комплектации (приложение А), которая предназначена для определения AOZ;

-    этилацетат с содержанием основного вещества не менее 98 %, х. ч.

8 Подготовка к выполнению измерений

8.1    Подготовка оборудования

8.1.1    При подготовке к проведению измерений лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.

8.1.2    Подготовку и проверку фотометра и pH-метра проводят в соответствии с руководством по эксплуатации приборов.

8.2    Приготовление растворов

8.2.1 Приготовление раствора фосфата натрия с молярной концентрацией 0,3 моль/дм2

В мерную колбу вместимостью 1000 см2 вносят 11.4 г натрия фосфата додекагидрата, растворяют в 500 см2 дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки водой.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 1 мес.

4

ГОСТ 33615-2015
8.2.2    Приготовление раствора соляной кислоты с молярной концентрацией 1 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 8,5 см3 концентрированной соляной кислоты, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора в вытяжном шкафу при комнатной температуре — не более 1 мес.

8.2.3    Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0.1 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0.4 г гидроокиси натрия, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

8.2.4    Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ К,—К5

8.2.4.1 Приготовление исходного раствора Kq

В пробирку типа « Эппендорф» вносят 0.9 см3 дистиллированной воды, добавляют 0.1 см3 реактива No 1 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с.

82.4.2 Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ К,—Kj

Рабочие градуировочные растворы К,—К5 готовят в стеклянных пробирках типа «Фалькон» согласно таблице 2.

Таблица 2 — Приготовление рабочих градуировочных растворов К!—К*

Название и массовая

Вносимый объем, см3

приготовляемого раствора AOZ

дистиллированной

воды

исходного раствора Кэ

рабочего раствора К4

рабочего раствора К,

рабочего раствора Ks

К» (62.5 мтсг/ди3)

0.9

0.1

К4 (12,5 мкг/дм3)

0.8

0.2

К. (2.5 мкг/дм*)

0.8

0.2

К* (0.5 мкг/дм3)

0.8

0.2

К, (0 мкг/дм5)

1.0

Пробирки закрывают крышками и перемешивают на шейкере в течение 20 с.

Используют свежеприготовленные растворы.

8.2.5    Приготовление рабочего раствора буфера для промывки

В колбу вместимостью 50 см3 вносят 28 см3 дистиллированной воды, добавляют 1.47 см3 реактива No 3 (см. приложений А), перемешивают.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 3С — не более 1 мес.

8.2.6    Приготовление рабочего раствора реакционного буфера

В стеклянную пробирку вносят 10 см3 реактива No 4 (см. приложение А) и 0.0065 см3 реактива No 7 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с.

Срок хранения раствора при температуре от 2 4С до 8 °С — не более 1 сут.

8.2.7    Приготовление 20 % раствора метанола в рабочем растворе реакционного буфера

В колбу вместимостью 25 см3 вносят 8 см3 рабочего раствора реакционного буфера (см. 8.2.6). добавляют 2 см3 метанола, перемешивают.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 1 сут.

8.2.8    Приготовление рабочего раствора ферментного конъюгата

В стеклянную пробирку вносят 2.25 см3 реактива N9 4 (см. приложение А) и 0.25 см3 реактива No 2 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение Юс.

Используют свежеприготовленный раствор.

8.3 Отбор проб

8.3.1    Отбор проб мяса —по ГОСТ 7269.

8.3.2    Отбор проб мяса птицы — по ГОСТ 31467.

8.3.3    Отбор проб молока — по ГОСТ 26809.

8.3.4    Отбор проб яиц. яичного меланжа и яичного порошка — по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.

8.3.5    Отбор проб рыбы — по ГОСТ 31339.

8.3.6    Отбор проб меда — по ГОСТ 19792.

8.3.7 Срок хранения отобранных проб при температуре от 2 “С до 8 °С — 2 сут. При отсутствии возможности исследования проб в течение двух суток они должны быть заморожены при температуре минус 20 ®С со сроком хранения не более 2 мес.

8.4 Подготовка проб

8.4.1    Мышечную ткань предварительно очищают от жира, грубой соединительной ткани и измельчают на гомогенизаторе.

8.4.2    Яйца отделяют от скорлупы и перемешивают на гомогенизаторе. Меланж, яичный порошок тщательно перемешивают.

8.4.3    При подготовке питьевого молока проводят его обезжиривание с помощью центрифугирования в течение 15 мин при 4000 об/мин. Верхний слой удаляют.

При подготовке сухого молока 1 г пробы перемешивают с 10 см3 дистиллированной воды до полного растворения. Далее проводят обезжиривание, как описано выше.

В каждую пробирку вносят по 5 см дистиллированной воды. 0.5 см1 раствора соляной кислоты (см. 8.2.2) и 0.1 см' реактива N9 8 (см. приложение А) и перемешивают на переворачивающем шейкере е течение 10 мин


8.4.4    1.00 г гомогенизированной пробы или 1 см3 обезжиренного молока помещают в стеклянные пробирки типа «Фальком». Затем обрабатывают испытуемые пробы и градуировочные растворы, приготовленные по 8.2.4.2. как указано на рисунке 1.

Выдерживают на водяной бане при температуре 50 X в течение 3 ч или в термостате при температуре 37 X

в течение 16 ч


1

Пробирки охлаждают при комнатной температуре, добавляют 1.4 см3 раствора фосфата натрия (см. 8.2.1) и тщательно перемешивают на шейкере в течение 30 с


1

}_

Используя индикаторную бумагу, измеряют pH и доводят его значение до (7,0 ± 0.1) раствором соляной кислоты (см. 8.2.2) или раствором гидроокиси натрия (см. 8.2.3). перемешивают на шейкере 20 с и оставляют для

уравновешивания в течение 5 мин

1

Добавляют 12 cmj этилацетата и перемешивают на переворачивающем шейкере в течение 10 мин

Центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин при температуре (23 л 5) X


i

Переносят 6 см5 верхнего органического слоя в стеклянную пробирку и упаривают досуха в токе азота в системе упаривания при температуре 45 X. Допускается хранить полученный сухой экстракт, при отсутствии возможности непосредственной дальнейшей обработки, при температуре от 2 'С до 8 X в течение 24 ч

или при температуре минус 20 X 7 сут


1

К сухому экстракту добавляют 1 см3 раствора метанола (см. 8.2.7) и тщательно перемешивают на шейкере

до полного растворения


I

j_

Полученный раствор переносят в пробирку типа «Элпендорф». добавляют 0.5 см1 н-гексана и перемешивают на шейкере в течение 30 с. Центрифугируют при 7000 об/мин е течение 10 мин при температуре (23 л 5) X. Удаляют верхний гексановый слой. Процедуру обезжиривания повторяют еще раз

После удаления гексанового слоя нижний слой используют для проведения ИФА в соответствии с разделом 9


i

Рисунок! — Обработка испытуемых проб и градуировочных растворов

ГОСТ 33615-2015

9    Проведение иммуноферментного анализа

9.1    Общие положения

9.1.1    При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие в один и тот же набор (тест-систему). Разбавление или замена реагентов из набора (тест-системы) другой серии не допускается.

9.1.2    Наборы (тест-системы) следует хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в пределах срока хранения.

9.1.3    Окрашивание раствора субстрата No 5 (см. приложение А) является признаком его порчи и делает невозможным его применение для анализа.

9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа

9.2.1    Перед использованием тест-систему вынимают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин. после чего аккуратно встряхивают каждый флакон. Реактив № 3 (см. приложение А) необходимо прогреть в термостате при температуре 37 'С до полного растворения кристаллов солей и тщательно перемешать.

9.2.2    После использования реагенты тест-системы сразу убирают в холодильник.

9.2.3    На всех стадиях необходимо избегать воздействия прямого солнечного света.

9.2.4    Для каждого реактива и раствора используют отдельные съемные наконечники пипеток переменной вместимости. Внесение растворов в лунки проводят осторожно, не касаясь наконечниками их дна и стенок.

9.2.5    Каждый исследуемый раствор экстрактов испытуемых проб (см. 8.4) и градуировочных растворов (см. 8.2.4.2) анализируют в двух повторностях.

Примечание — Далее приведены расходы реактивов на два стрмпаЧ что достаточно для анализа трех исследуемых проб. Для другого числа проб количество используемых стрипов и смешиваемых объемов реагентов изменяют в соответствии с количеством исследуемых проб.

9.3 Проведение анализа

9.3.1    Из планшета извлекают необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы хранят в закрытом фольгированном полиэтиленовом пакете с зип-локом4 5 при температуре от 2 вС до 8 5С в течение всего срока годности тест-системы.

9.3.2    В лунки планшета вносят по 0.05 см3 экстрактов рабочих градуировочных растворов К,—К(см. 8.2.4.2) и растворов испытуемых проб.

Каждый раствор вносят в двойной повторности (лунки-дубли).

Внесение растворов проводят согласно приложению Б.

Далее в каждую лунку вносят по 0.05 см3 рабочего раствора ферментного конъюгата (см. 8.2.8). Стрипы заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре от 2 °С до 8 °С в течение 1 ч, после чего содержимое лунок сливают.

9.3.3    В лунки планшета вносят по 0.2 см3 раствора буфера для промывки (см. 8.2.5). оставляют на 1—2 мин и сливают. Процедуру промывки повторяют еще три раза. Остатки жидкости интенсивно стряхивают на чистую фильтровальную бумагу.

9.3.4    В лунки планшета вносят по 0.1 см3 раствора N® 5 (см. приложение А) и инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 10 мин. Добавляют по 0.1 см3 раствора Ne 6 (см. приложение А), аккуратно перемешивают легким постукиванием по ребру планшета. Помещают планшет в вертикальный фотометр и измеряют значения ОП при длине волны 450 нм.

10    Обработка результатов измерения

10.1 По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность значений ОП для них в процентах от среднего не должна превышать 10.

1

Издание официальное

2

3

4

Стрип — полоска из восьми лунок.

5

Зил-лох — замок, обеспечивающий герметизацию пакета.

7