Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

15 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ 33615-2015 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный порошок, яичный меланж, молоко, рыбу, мед и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона (3-амино-2-оксазолидинона) в диапазоне измерений от 0,7 до 62,5 мкг/кг, для сухого молока - от 7 до 625 мкг/кг.

  Скачать PDF

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины, определения и сокращения

4 Сущность метода

5 Метрологические характеристики

6 Требования безопасности и условия выполнения измерений

7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы

8 Подготовка к выполнению измерений

8.1 Подготовка оборудования

8.2 Приготовление растворов

8.3 Отбор проб

8.4 Подготовка проб

9 Проведение иммуноферментного анализа

9.1 Общие положения

9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа

9.3 Проведение анализа

10 Обработка результатов измерения

11 Контроль точности результатов измерения

Приложение А (рекомендуемое) Комплектация тест-системы "Фуразолидон - ИФА"

Приложение Б (рекомендуемое) Схема заполнения лунок планшета

Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов измерения

Показать даты введения Admin

Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)

Межгосударственный
СТАНДАРТ

ГОСТ
33615-
2015

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ,
ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Иммуноферментный метод
определения остаточного содержания
метаболита фуразолидона

Москва

Стандартинформ

2016

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. № 81-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по MK (ИСО 3166) 004-97

Код страны по MK (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. № 4-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33615-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Содержание

1 Область применения. 3

2 Нормативные ссылки. 3

3 Термины, определения и сокращения. 4

4 Сущность метода. 4

5 Метрологические характеристики. 4

6 Требования безопасности и условия выполнения измерений. 5

7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы.. 5

8 Подготовка к выполнению измерений. 6

8.1 Подготовка оборудования. 6

8.2 Приготовление растворов. 6

8.3 Отбор проб. 7

8.4 Подготовка проб. 8

9 Проведение иммуноферментного анализа. 9

9.1 Общие положения. 9

9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа. 9

9.3 Проведение анализа. 10

10 Обработка результатов измерения. 10

11 Контроль точности результатов измерения. 12

Приложение А (рекомендуемое) Комплектация тест-системы «Фуразолидон - ИФА». 12

Приложение Б (рекомендуемое) Схема заполнения лунок планшета. 12

Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов измерения. 12

ГОСТ 33615-2015

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Иммуноферментный метод определения остаточного содержания
метаболита фуразолидона

Food products, food raw materials.
Immunoenzymatic method for determination of furazolidone metabolite

Дата введения - 2017-01-01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный порошок, яичный меланж, молоко, рыбу, мед и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона (3-амино-2-оксазолидинона) в диапазоне измерений от 0,7 до 62,5 мкг/кг, для сухого молока - от 7 до 625 мкг/кг.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-791) Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

1) В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2652-78 Калия бихромат технический. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-20032) Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

2) В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 7269-79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 19792-20011) Мед натуральный. Технические условия

1) В Российской Федерации действует ГОСТ Р 54644-2011 «Мед натуральный. Технические условия».

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 31467-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю «Национальные стандарты», составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины, определения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.

3.1.2 вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.

3.1.3 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа.

3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения:

AOZ - 3-амино-2-оксазолидинон (метаболит фуразолидона);

АГ - антиген;

AT - антитела;

ИФА - иммуноферментный анализ;

ОП -оптическая плотность;

П -относительное поглощение;

ТМБ - 3,3',5,5'-тетраметилбензидин;

ФК - ферментный конъюгат.

4 Сущность метода

4.1 Иммуноферментный метод основан на измерении массовой концентрации AOZ в растворах экстрактов исследуемых проб с помощью прямого твердофазного конкурентного ИФА.

4.2 Прямой твердофазный конкурентный ИФА основан на способности маркерного метаболита AOZ и ФК в условиях конкуренции взаимодействовать со специфичными AT, нанесенными на поверхность лунок планшета.

4.3 Связавшийся с AT AOZ, меченный пероксидазой хрена, выявляют путем измерения интенсивности окрашивания продукта реакции окисления 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (раствор № 5, см. приложение А) перекисью водорода.

Аналитический сигнал (регистрируемое значение ОП), характеризующий степень взаимодействия AT с АГ, обратно пропорционален массовой концентрации AOZ в растворе.

5 Метрологические характеристики

5.1 Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации (содержания) AOZ с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата k = 2, указанной в таблице 1.

Таблица 1 - Метрологические характеристики метода

AOZ
(3-амино-2-оксазолидинон)

Диапазон
измерений
содержания,
мкг/дм3 (мкг/кг)

Значение
относительной
расширенной
неопределенности U,
при коэффициенте
охвата k = 2,
Р = 0,95, %

Показатель
повторяемости
(относительное
среднеквадратичное
отклонение повторяемости)
sr, %

Показатель
воспроизводимости
(относительное
стандартное
отклонение
воспроизводимости)
sR, %

Предел повторяемости
r, %
(при Р = 0,95,
n = 2)

В мясе, мясе птицы, яйцах, яичном порошке, яичном меланже, рыбе, молоке, меде

От 0,7 до 2,0 включ.

50

16

24

44

Св. 2,0 до 62,5 включ.

30

9

14

25

В сухом молоке

От 7 до 20 включ.

50

16

24

44

Св. 20 до 625 включ.

30

9

14

25

6 Требования безопасности и условия выполнения измерений

6.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

6.2 Помещения, в которых проводится анализ и подготовка проб, должны быть оборудованы при-точно-вытяжной вентиляцией, и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и электробезопасности по ГОСТ 12.1.019.

6.3 К выполнению измерений допускаются лица, владеющие техникой ИФА и изучившие инструкции по применению тест-систем и инструкции по эксплуатации используемых приборов.

6.4 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- температура окружающего воздуха....................от 20 °С до 30 °С;

- атмосферное давление..........................................от 84 до 106 кПа;

- напряжение в питающей электросети..................от 200 до 240 В;

- частота переменного тока......................................от 49 до 51 Гц;

- относительная влажность воздуха........................от 40 % до 80 %.

7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы

7.1 При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, аппаратуру, материалы и посуду:

- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г и пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,05 г;

- весы микроаналитические с наибольшим пределом взвешивания 52 г, с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,01 мг;

- рН-метр любой марки, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 3 до 10 ед. рН с погрешностью ±0,05 ед. рН;

- фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерений ОП от 0 до 3 в комплекте с интерференционными светофильтрами для длин волн 450 и 620 нм;

- баню водяную с терморегулятором, позволяющим поддерживать температуру от 40 °С до 100 °С, с отклонением от заданной температуры ±5 °С;

- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

- калькулятор любого типа с логарифмической функцией;

- микроцентрифугу любого типа с частотой вращения 7000 об/мин;

- морозильную камеру любого типа, обеспечивающую среднюю температуру в холодильной камере не выше минус 20 °С.

- роторный испаритель любого типа или устройство для испарения экстрактов, с термостатируемым нагревательным модулем с системой отдувки растворителей инертным газом;

- термостат любого типа, поддерживающий температуру (37 ± 1) °С;

- холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 0 °С до 8 °С;

- центрифугу с бакет-ротором и адаптером для пробирок вместимостью 15 см3, частотой вращения не менее 4000 об/мин;

- шейкер переворачивающий вертикального вращения 360° в одной плоскости с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин;

- шейкер вортексного типа, с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин;

- шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий поддержание температуры не менее (95 ± 5) °С;

- бумагу индикаторную универсальную, рН 0-12;

- бумагу масштабно-координатную по ГОСТ 334, марки Н-1;

- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;

- колбы 1-100 (1000)-2 по ГОСТ 1770;

- колбы конические Кн-1-25(50)-24/29 ТС по ГОСТ 25336;

- пипетки многоканальные переменной вместимости 0,03 - 0,3 см3, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1,0 %;

- пипетки одноканальные переменной вместимости 0,005 - 0,05; 0,1 - 1,0; 0,5 - 5,0 см3 с допустимой относительной погрешностью дозирования по карбинолу и ацетонитрилу не более ±1 %;

- пробирки стеклянные типа П-1-10-0,1 ХС по ГОСТ 25336;

- пробирки стеклянные типа «Фалькон» вместимостью 50 см3 с завинчивающимися крышками;

- пробирки типа «Эппендорф» вместимостью 1,5 см3;

- цилиндры 1(2,3)-10(250, 500)-1 по ГОСТ 1770.

7.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы:

- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

- калия бихромат по ГОСТ 2652;

- кислоту серную по ГОСТ 4204, концентрированную;

- кислоту соляную по ГОСТ 3118, концентрированную, плотностью 1,19 г/см3, х. ч.;

- метанол с содержанием основного вещества не менее 99 %, х. ч.;

- натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч.,

- натрия фосфат додекагидрат с содержанием основного вещества не менее 98 %;

- н-гексан с содержанием основного вещества не менее 98 %, х. ч.;

- тест-систему для прямого твердофазного конкурентного ИФА в комплектации (приложение А), которая предназначена для определения AOZ;

- этилацетат с содержанием основного вещества не менее 98 %, х. ч.

8 Подготовка к выполнению измерений

8.1 Подготовка оборудования

8.1.1 При подготовке к проведению измерений лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.

8.1.2 Подготовку и проверку фотометра и рН-метра проводят в соответствии с руководством по эксплуатации приборов.

8.2 Приготовление растворов

8.2.1 Приготовление раствора фосфата натрия с молярной концентрацией 0,3 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 11,4 г натрия фосфата додекагидрата, растворяют в 500 см3 дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки водой.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С - не более 1 мес.

8.2.2 Приготовление раствора соляной кислоты с молярной концентрацией 1 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 8,5 см3 концентрированной соляной кислоты, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора в вытяжном шкафу при комнатной температуре - не более 1 мес.

8.2.3 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,4 г гидроокиси натрия, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес.

8.2.4 Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ К1 - К5

8.2.4.1 Приготовление исходного раствора К0

В пробирку типа «Эппендорф» вносят 0,9 см3 дистиллированной воды, добавляют 0,1 см3 реактива № 1 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с.

8.2.4.2 Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ К1 - К5

Рабочие градуировочные растворы К1 - К5 готовят в стеклянных пробирках типа «Фалькон» согласно таблице 2.

Таблица 2 - Приготовление рабочих градуировочных растворов K1 - К5

Название и массовая
концентрация
приготовляемого

раствора AOZ

Вносимый объем, см3

дистиллированной воды

исходного раствора К0

рабочего раствора К5

рабочего раствора К4

рабочего раствора К3

К5 (62,5 мкг/дм3)

0,9

0,1

-

-

-

К4 (12,5 мкг/дм3)

0,8

-

0,2

-

-

К3 (2,5 мкг/дм3)

0,8

-

-

0,2

-

К2 (0,5 мкг/дм3)

0,8

-

-

-

0,2

K1 (0 мкг/дм3)

1,0

-

-

-

-

Пробирки закрывают крышками и перемешивают на шейкере в течение 20 с. Используют свежеприготовленные растворы.

8.2.5 Приготовление рабочего раствора буфера для промывки

В колбу вместимостью 50 см3 вносят 28 см3 дистиллированной воды, добавляют 1,47 см3 реактива № 3 (см. приложение А), перемешивают.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С - не более 1 мес.

8.2.6 Приготовление рабочего раствора реакционного буфера

В стеклянную пробирку вносят 10 см3 реактива № 4 (см. приложение А) и 0,0065 см3 реактива № 7 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С - не более 1 сут.

8.2.7 Приготовление 20 % раствора метанола в рабочем растворе реакционного буфера

В колбу вместимостью 25 см3 вносят 8 см3 рабочего раствора реакционного буфера (см. 8.2.6), добавляют 2 см3 метанола, перемешивают.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С - не более 1 сут.

8.2.8 Приготовление рабочего раствора ферментного конъюгата

В стеклянную пробирку вносят 2,25 см3 реактива № 4 (см. приложение А) и 0,25 см3 реактива № 2 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 10 с. Используют свежеприготовленный раствор.

8.3 Отбор проб

8.3.1 Отбор проб мяса -по ГОСТ 7269.

8.3.2 Отбор проб мяса птицы - по ГОСТ 31467.

8.3.3 Отбор проб молока - по ГОСТ 26809.

8.3.4 Отбор проб яиц, яичного меланжа и яичного порошка - по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.

8.3.5 Отбор проб рыбы -по ГОСТ 31339.

8.3.6 Отбор проб меда -по ГОСТ 19792.

8.3.7 Срок хранения отобранных проб при температуре от 2 °С до 8 °С - 2 сут. При отсутствии возможности исследования проб в течение двух суток они должны быть заморожены при температуре минус 20 °С со сроком хранения не более 2 мес.

8.4 Подготовка проб

8.4.1 Мышечную ткань предварительно очищают от жира, грубой соединительной ткани и измельчают на гомогенизаторе.

8.4.2 Яйца отделяют от скорлупы и перемешивают на гомогенизаторе. Меланж, яичный порошок тщательно перемешивают.

8.4.3 При подготовке питьевого молока проводят его обезжиривание с помощью центрифугирования в течение 15 мин при 4000 об/мин. Верхний слой удаляют.

При подготовке сухого молока 1 г пробы перемешивают с 10 см3 дистиллированной воды до полного растворения. Далее проводят обезжиривание, как описано выше.

8.4.4 1,00 г гомогенизированной пробы или 1 см3обезжиренного молока помещают в стеклянные пробирки типа «Фалькон». Затем обрабатывают испытуемые пробы и градуировочные растворы, приготовленные по 8.2.4.2, как указано на рисунке 1.

Рисунок 1 - Обработка испытуемых проб и градуировочных растворов

9 Проведение иммуноферментного анализа

9.1 Общие положения

9.1.1 При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие в один и тот же набор (тест-систему). Разбавление или замена реагентов из набора (тест-системы) другой серии не допускается.

9.1.2 Наборы (тест-системы) следует хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в пределах срока хранения.

9.1.3 Окрашивание раствора субстрата № 5 (см. приложение А) является признаком его порчи и делает невозможным его применение для анализа.

9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа

9.2.1 Перед использованием тест-систему вынимают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин, после чего аккуратно встряхивают каждый флакон. Реактив № 3 (см. приложение А) необходимо прогреть в термостате при температуре 37 °С до полного растворения кристаллов солей и тщательно перемешать.

9.2.2 После использования реагенты тест-системы сразу убирают в холодильник.

9.2.3 На всех стадиях необходимо избегать воздействия прямого солнечного света.

9.2.4 Для каждого реактива и раствора используют отдельные съемные наконечники пипеток переменной вместимости. Внесение растворов в лунки проводят осторожно, не касаясь наконечниками их дна и стенок.

9.2.5 Каждый исследуемый раствор экстрактов испытуемых проб (см. 8.4) и градуировочных растворов (см. 8.2.4.2) анализируют в двух повторностях.

Примечание - Далее приведены расходы реактивов на два стрипа1), что достаточно для анализа трех исследуемых проб. Для другого числа проб количество используемых стрипов и смешиваемых объемов реагентов изменяют в соответствии с количеством исследуемых проб.

1) Стрип - полоска из восьми лунок.

9.3 Проведение анализа

9.3.1 Из планшета извлекают необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы хранят в закрытом фольгированном полиэтиленовом пакете с зип-локом2) при температуре от 2 °С до 8 °С в течение всего срока годности тест-системы.

2) Зип-лок - замок, обеспечивающий герметизацию пакета.

9.3.2 В лунки планшета вносят по 0,05 см3 экстрактов рабочих градуировочных растворов К1 - К5 (см. 8.2.4.2) и растворов испытуемых проб.

Каждый раствор вносят в двойной повторности (лунки-дубли).

Внесение растворов проводят согласно приложению Б.

Далее в каждую лунку вносят по 0,05 см3 рабочего раствора ферментного конъюгата (см. 8.2.8). Стрипы заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре от 2 °С до 8 °С в течение 1 ч, после чего содержимое лунок сливают.

9.3.3 В лунки планшета вносят по 0,2 см3 раствора буфера для промывки (см. 8.2.5), оставляют на 1 - 2 мин и сливают. Процедуру промывки повторяют еще три раза. Остатки жидкости интенсивно стряхивают на чистую фильтровальную бумагу.

9.3.4 В лунки планшета вносят по 0,1 см3 раствора № 5 (см. приложение А) и инкубируют в термостате при температуре 37 °С втечение 10 мин. Добавляют по 0,1 см3 раствора № 6 (см. приложение А), аккуратно перемешивают легким постукиванием по ребру планшета. Помещают планшет в вертикальный фотометр и измеряют значения ОП при длине волны 450 нм.

10 Обработка результатов измерения

10.1 По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность значений ОП для них в процентах от среднего не должна превышать 10.

Связывание AT (или относительное поглощение П, %, рассчитывают по формуле

(1)

где ОПп - среднее значение ОП, измеренной в лунках с экстрактами градуировочных растворов К2 - К5 (см. 8.2.4) и с растворами экстрактов испытуемых проб;

ОПк – среднее значение ОП, измеренной в лунках с нулевым стандартом (экстрактом градуировочного раствора К1 (см. 8.2.4); По значениям процентов связывания, вычисленным для градуировочных растворов с соответствующими известными значениями массовой концентрации AOZ, мкг/дм3, строят градуировочный график в полулогарифмической системе координат.

10.2 Для построения градуировочного графика используют масштабно-координатную бумагу. На ось абсцисс наносят значения логарифмов концентраций AOZ в градуировочных растворах К2 - К5 (см. 8.2.4.2). По оси ординат откладывают значения процентов связывания, рассчитанные для массовых концентраций по формуле (1). Градуировочный график строят с использованием линейной зависимости.

10.3 С помощью градуировочного графика по значению процента связывания, полученного для растворов экстрактов испытуемых проб, находят логарифмы массовой концентрации в них AOZ. С помощью калькулятора вычисляют его обратное значение (антилогарифм), соответствующее массовой концентрации AOZ в растворе экстракта.

10.4 Массовую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе С, мкг/дм3 (мкг/кг), рассчитывают по формуле

С = с · К,

(2)

где с - массовая концентрация AOZ в рабочем растворе экстракта испытуемой пробы, определяемая по градуировочному графику, мкг/дм3;

К - коэффициент пересчета мкг/дм3 в мкг/кг в экстракте испытуемой пробы, учитывающий ее разведение; для сухого молока равен 10, для остальных проб - единице.

Образец записи результатов измерений приведен в приложении В. За окончательный результат принимают среднеарифметическое двух измерений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

(3)

где С1 и С2 - результаты определений массовой концентрации (содержания) AOZ, полученные в условиях повторяемости, мкг/дм3 (мкг/кг);

Сср - среднеарифметическое результатов двух определений массовой концентрации AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг);

rотн - предел повторяемости (%), приведенный в таблице 1.

Результаты измерений массовой концентрации (содержания) AOZ, мкг/дм3 (мкг/кг), округляют до первого знака после запятой.

10.5 Допускается использование программного обеспечения, позволяющего определять массовую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе по средним значениям ОП, измеренным в лунках с экстрактами градуировочных растворов и испытуемых проб.

С помощью компьютерной системы обработки данных строят градуировочную зависимость оптической плотности раствора от массовой концентрации AOZ и аппроксимируют линейной функцией.

Градуировочная зависимость считается приемлемой, если рассчитанное программным обеспечением значение коэффициента корреляции г2 ³ 0,98.

За результат измерений принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости

(4)

где C1, С2 - результаты параллельных определений массовой концентрации AOZ, мкг/дм3;

r - значение предела повторяемости для разных диапазонов измерения (см. таблицу 1).

Результат определения массовой концентрации (содержания) AOZ в анализируемой пробе представляют в виде

С ± 0,01 · U,

(5)

где С - массовая концентрация (содержание) AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг);

U - значение относительной расширенной неопределенности при коэффициенте охвата k = 2, % (см. таблицу 1).

11 Контроль точности результатов измерения

Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости) и воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5).

Приложение А
(рекомендуемое)

Комплектация тест-системы1) «Фуразолидон - ИФА»

1) Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настоящего стандарта.

В комплектацию тест-системы входят:

Планшет 96-луночный полистироловый стрипованный для иммунологических исследований, с иммобилизованными антителами;

Пакет полиэтиленовый фольгированный с зип-локом;

Пленка полиэтиленовая самоклеящаяся для заклеивания планшетов.

Растворы:

№ 1 - AOZ - раствор с известным содержанием AOZ (6,25 мкг/см3);

№ 2 - ФК - конъюгатAOZ с пероксидазой хрена;

№ 3 - раствор фосфатного буфера для промывки (20-кратный концентрат), рН (7,0-7,4);

№ 4 - реакционный буферный раствор с добавлением бычьего сывороточного альбумина, рН (7,0-7,4), стерильный;

№ 5 - раствор субстрата на основе 3,3',5,5'-ТМБ с добавлением перекиси водорода;

№ 6 - стоп-реагент - раствор серной кислоты молярной концентрации 0,5 моль/дм-3;

№ 7 - раствор натрия ацетата молярной концентрации 3,0 моль/дм3;

№ 8 - раствор 2-нитробензальдегида в ДМСО с молярной концентрацией 0,01 моль/дм3.

Приложение Б
(рекомендуемое)

Схема заполнения лунок планшета

Внесение реагентов следует проводить согласно следующей схеме:

 

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

А

K1

K1

№ 4

№ 4

№ 12

№ 12

№ 20

№ 20

№ 28

№ 28

№ 36

№ 36

В

К2

К2

№ 5

№ 5

№ 13

№ 13

№ 21

№ 21

№ 29

№ 29

№ 37

№ 37

С

К3

К3

№ 6

№ 6

№ 14

№ 14

№ 22

№ 22

№ 30

№ 30

№ 38

№ 38

D

К4

К4

№ 7

№ 7

№ 15

№ 15

№ 23

№ 23

№ 31

№ 31

№ 39

№ 39

Е

K5

К5

№ 8

№ 8

№ 16

№ 16

№ 24

№ 24

№ 32

№ 32

№ 40

№ 40

F

№ 1

№ 1

№ 9

№ 9

№ 17

№ 17

№ 25

№ 25

№ 33

№ 33

№ 41

№ 41

G

№ 2

№ 2

№ 10

№ 10

№ 18

№ 18

№ 26

№ 26

№ 34

№ 34

№ 42

№ 42

Н

№ 3

№ 3

№ 11

№ 11

№ 19

№ 19

№ 27

№ 27

№ 35

№ 35

№ 43

№ 43

Приложение В
(рекомендуемое)

Таблица для записи результатов измерения

Таблица В.1

Маркировка варианта

Значение ОП

Массовая концентрация (содержание) AOZ

по лункам

среднее

в экстракте с,
мкг/дм3

в исследуемой пробе С, мкг/дм3
(мкг/кг)

K1

 

 

 

 

0

 

K1

 

К2

 

 

 

0,3

0,5

 

К2

 

К3

 

 

 

0,4

2,5

 

К3

 

К4

 

 

 

1,1

12,5

 

К4

 

К5

 

 

 

1,8

62,5

 

К5

 

№ 1

 

 

 

 

 

 

№ 1

 

№...

 

 

 

 

 

 

№...

 

№ 42

 

 

 

 

 

 

№ 42

 

№ 43

 

 

 

 

 

 

№ 43

 

 

 

 

 

 

 

Ключевые слова: продукты пищевые, продовольственное сырье, метаболит фуразолидона, остаточное содержание, иммуноферментный метод, прецизионность метода, тест-система, антиген, антитела, оптическая плотность, ферментный конъюгат