МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
ПРЕМИКСЫМетод определения содержания витамина К3
Издание официальное
Москва Стандарти нформ 2012
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 41 от 23—24 мая 2012 г.)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97 |
Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Азербайджан |
AZ |
Азгосстандарт |
Армения |
AM |
Минторгэкономразвития |
Кыргызстан |
KG |
Кыргызстандарт |
Российская Федерация |
RU |
Росстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 сентября 2012 г. № 446-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31486-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53027-2008
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе «Национальные стандарты».
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Национальные стандарты», а текст изменений — в информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе «Национальные стандарты»
© Стандартинформ, 2012
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТПРЕМИКСЫМетод определения содержания витамина Кз
Premixes.
Method for determination of vitamin K3
Дата введения —2013—07—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на премиксы и устанавливает фотометрический метод определения витамина К3.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 1942-86 1,2-Дихпорэтан технический. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стан-
Издание официальное
дарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Диапазоны измерений содержания витамина К3 и метрологические характеристики метода
Диапазоны измерений содержания витамина К3 и значения показателей повторяемости, воспроизводимости и точности при вероятности Р= 0,95 приведены в таблице 1.
Таблица 1 |
Диапазон измерений, г/т |
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратичное отклонение повторяемости) аг, % |
Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратичное отклонение воспроизводимости) UR, % |
Показатель точности (границы относительной погрешности) + 8, % |
От Одо ЮОвкпюч. |
4,8 |
7,1 |
14 |
Св. 100 до 500 » |
2,9 |
5,1 |
10 |
» 500 »1000 » |
2,7 |
4,9 |
9,6 |
|
4 Требования техники безопасности
4.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018 и электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.
4.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу с реактивами необходимо проводить в вытяжном шкафу.
4.3 При работе с концентрированными кислотами и щелочами необходимо использовать резиновые перчатки.
5 Отбор и подготовка проб к выполнению анализа
5.1 Отбор проб — по ГОСТ 13496.0.
Допускается отбирать пробы премиксов, упакованных в бумажные мешки, мешочным щупом с последующим заклеиванием отверстия.
5.2 Подготовка пробы к анализу — по [1].
6 Определение содержания витамина Кз
Сущность метода заключается в извлечении витамина К3 из исследуемой пробы этиловым спиртом, реэкстракции 1,2-Дихпорэтаном и фотометрировании продукта цветной реакции его с (2,4-Динитро-фенил)-гидразином при длине волны 635 нм.
6.1 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более + 0,0001 г.
Фотоэлектроколориметр с рабочим спектральным диапазоном от 315 до 980 нм с основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1 % или спектрофотометр типа СФ.
Аппарат для встряхивания жидкости типа АВУ-1.
Центрифуга лабораторная ЦЭ-2 с числом оборотов 3000 об/мин.
Баня водяная с регулятором нагрева.
Колбы конические Кн-2-(250)-(34,40) ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1(2)-2-25(100) по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 2(3)-1 (2)-2-0,5(1,0; 2,0; 5,0; 10; 25) по ГОСТ 29227.
Пипетки с одной меткой 1(2)-2-2(10,20,25,50) по ГОСТ 29169.
Цилиндры 1 (3)-50(100) по ГОСТ 1770.
Воронки лабораторные В-36(56, 75)-50(80,110) ХС по ГОСТ 25336.
Воронки делительные ВД-1-250ХС по ГОСТ25336.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 или фильтры «красная лента».
Аммиак водный по ГОСТ 3760.
(2,4-Д и н итрофен ил )-гид рази н.
Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья с объемной долей этилового спирта 96,0 %—96,3 %.
Кислота соляная по ГОСТ 3118.
Витамин К3 менадион (2-метил-1,4-нафтохинон) фирмы Supelko
1,2-Дихлорэтан по ГОСТ 1942.
Натрий углекислый по ГОСТ 83, раствор с массовой долей углекислого натрия 10 %.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Примечания
1 Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.
2 Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
6.2 Подготовка к выполнению анализа6.2.1 Приготовление раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина
80 мг (2,4-Динитрофенил)-гидразина, взвешенного с погрешностью не более ±0,01 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют при нагревании до 70 °С на водяной бане в 80 см3 этилового спирта по 6.1, охлаждают до комнатной температуры, добавляют 2 см3 соляной кислоты (35 %—38 %) и доводят содержимое в колбе до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают.
6.2.2 Приготовление раствора этилового спирта с массовой долей 40 %
В стеклянную емкость вносят 40 см3 этилового спирта, приливают 56 см3 дистиллированной воды, перемешивают.
6.2.3 Приготовление стандартного раствора витамина К3
Навеску витамина К3 массой 10 мг, взвешенную с погрешностью не более+0,1 мг, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, приливают до метки этиловый спирт с массовой долей 40 % и тщательно перемешивают.
Затем 10 см3 полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки этиловым спиртом с массовой долей 40 % и перемешивают.
25 см3 полученного раствора отбирают в делительную воронку вместимостью 250 см3, добавляют 50 см3 1,2-Дихлорэтана, 20 см3 раствора углекислого натрия с массовой долей 10 % и перемешивают в течение 0,5—1,0 мин. Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1,2-Дихлорэтана (нижнюю), переносят в другую делительную воронку, добавляют 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают в течение 0,5 мин. После перемешивания раствор снова отстаивают до фазоразделен ия и фазу, содержащую 1,2-Дихлорэтана, фильтруют через бумажный беззольный фильтр. Получают стандартный раствор витамина К3, в 1 см3 которого содержится 5 мкг витамина К3. Раствор витамина К3 хранят в холодильнике при температуре от 4 °С до 6 °С.
6.2.4 Построение градуированного графика
В 10 мерных колб вместимостью по 25 см3 приливают стандартный раствор витамина К3 (см. 6.2.3) в объемах, указанных в таблице 2.
Таблица 2 — Растворы сравнения |
Наименование показателя |
Номера колб |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
Объем стандартного раствора, см3 |
0,5 |
1,0 |
2,0 |
3,0 |
4,0 |
5,0 |
6,0 |
7,0 |
8,0 |
9,0 |
Масса витамина Kg, мкг/25 см3 |
2,5 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
35 |
40 |
45 |
|
В каждую из 10 колб приливают по 7,5 см3 раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина и помещают их в водяную баню одновременно с испытуемыми и контрольным растворами (см. 6.2.5) на 2 ч при температуре (70 + 2) °С, периодически перемешивая содержимое колб. После этого растворы в колбах охлаждают
до комнатной температуры, приливают в каждую колбу по 7,5 см3 смеси этилового спирта по 6.1 и водного аммиака с массовой долей 25 % в объемном соотношении 1:1, перемешивают, доводят объемы в кол-бахдо метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают и измеряют оптические плотности растворов сравнения в порядке возрастания их концентраций на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625 + 25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора.
По полученным данным строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значения оптической плотности растворов сравнения, на оси абсцисс — содержание витамина К3, мкг/25 см1 раствора.
6.2.5 Приготовление контрольного раствора
5 см31,2-Дихлорэтана отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см1, приливают 7,5 см3 раствора (2,4-Динитрофенил) - гидразина. Колбу помещают в водяную баню одновременно с испытуемыми пробами и растворами сравнения, далее проводят ту же самую обработку, что и с испытуемой пробой по 6.3.2 и 6.3.3.
6.3 Проведение анализа
6.3.1 Навеску премикса массой от 5 до 10 г, взвешенную с погрешностью не более + 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 250 см1, приливают 100 см3 этилового спирта с массовой долей 40 %, встряхивают на аппарате в течение 15 мин и центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин. Центрифугат фильтруют для устранения случайно оставшихся взвешенныхчастиц. Отбирают от 5 до 25 см1 фильтрата в зависимости от предполагаемого содержания витамина К3 в испытуемом образце премикса, в делительную воронку вместимостью 250 см3 приливают 50 см1 1,2-Дихпорэтана и 20 см3 раствора углекислого натрия с массовой долей 10 % и перемешивают в течение 0,5—1,0 мин.
Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1,2-Дихпорэтана, в полном объеме переносят в другую делительную воронку, приливают в нее 20 см1 дистиллированной воды и перемешивают в течение 0,5 мин.
После этого раствору снова дают отстояться до фазоразделения и фазу, содержащую 1,2-Дихлорэтана, фильтруют через бумажный беззольный фильтр.
6.3.2 5 см3 1,2-Дихлорэтанового экстракта испытуемых проб отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см1, приливают 7,5 см3 раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина (см. 6.2.1), колбу помещают в водяную баню и выдерживают ее 2 ч при температуре (70 + 2) °С, периодически перемешивая содержимое колбы.
6.3.3 По истечении указанного времени содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, приливают 7,5 см1 смеси этилового спирта по 6.1 и водного аммиака с массовой долей 25 % в объемном соотношении 1:1, доводят объем в колбе этиловым спиртом до метки, тщательно перемешивают и измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625+25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора (см. 6.2.5). Раствор готовят в день проведения анализа.
7 Обработка результатов анализа
7.1 Содержание витамина К3 в премиксе X, г/т, вычисляют по формуле
т v^v3 ■ 106 ’
где с — масса витамина К3, найденная по градуировочному графику, мкг; v — объем спиртового экстракта, см3; v2 — объем 1,2-Дихлорэтана, взятый для экстракции, см3;
106 — коэффициент перевода микрограммов в граммы; т — масса навески премикса, г;
v1 — объем фильтрата спиртового экстракта, взятый для экстрагирования 1,2-Дихлорэтаном, см3; vz — объем 1,2-Дихлорэтанового экстракта, взятый для окрашивания, см3;
106 — коэффициент перевода граммов в тонны.
7.2 Вычисления выполняют с точностью до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.
ГОСТ 31486-20128 Оформление результатов анализа
При анализе каждой пробы выполняют два параллельныхопределения, начиная со взятия навески испытуемой пробы. Если расхождениемежду результатами параллельныхопределений не превышает допустимое |Х, —Х2\ < 0,01rX (ХЬХ2,Х — результаты первого и второго параллельныхопределений и их среднеарифметическое значение соответственно), то среднеарифметическое значение принимают за результат анализа. В противном случае получают еще два результата определений и вычисляют окончательный результат анализа пробы по [2] (подраздел 5.2).
Значения предела повторяемости г и предела воспроизводимости R приведены в таблице 3.
Таблица 3 |
Диапазон измерений, г/т |
Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений) г, % |
Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R, % |
От Одо ЮОвключ. |
13 |
20 |
Св. 100 » 500 » |
8 |
14 |
» 500 » 1000 » |
8 |
14 |
|
По полученному результату анализа и значению относительной погрешности 5 (см. таблицу 1) рассчитывают абсолютную погрешность по формуле
Д = 0,015Х, (4)
гдеХ — среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.
Результат анализа представляют в виде (X + Д), %. Допускается представление результата в виде (X + дл), %, где Дл — значение характеристики погрешности результатов анализа, установленное при реализации методики в конкретной лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов анализа, при условии Дл < Д.
Библиография
[1] ИСО 6498:1998 Корма для животных. Приготовление проб для испытания
[2] ИСО 5725-6:1994 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6.
Использование значений точности на практике 2
УДК 636.085.55:006.354 МКС 65.120 С19
Ключевые слова: премиксы, витамин К3, метод, оптическая плотность, спектрофотометр, фотоэлектроколориметр
Редактор Н.В. Таланова Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор В.Е. Нестерова Компьютерная верстка ИЛ. Налейкиной
Сдано в набор 29.10.2012. Подписано в печать 15.11.2012. Формат 60 х 84%. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 0,93. Уч.-изд. л. 0,70. Тираж 115 экз. Зак. 1034.
1
2
ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru
Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.
Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.