Сертификация: тел. +7 (495) 175-92-77
Стр. 1
 

16 страниц

304.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на пищевые продукты и устанавливает методы выявления и определения содержания афлатоксинов В1 и М1

стандарт принят с правом досрочного введения

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Метод тонкослойной хроматографии

4 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

5 Требования безопасности

Приложение А Методика приготовления раствора гипохлорита натрия

Приложение Б Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ 30711-2001

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Методы выявления и определения содержания афлатоксинов Bi и Mj

Издание официальное

БЗ 8-2001


МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ Минск

Страница 2

ГОСТ 30711-2001

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН МГК 93, Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП) и Институтом питания Академии медицинских наук Российской Федерации (ИГ1 АМН РФ) и ТК 08 Кыргызской Республики. Кыргызским научно-исследовательским институтом профилактики и медицинской экологии

ВНЕСЕН Госстандартом России

2    ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 19 от 24 мая 2001 г.)

За принятие проголосовали:

Наименонаннс юсуиарстиа

Наименование национального органа по оанларшииии

Азербайджанская Республика Республика Армения Республика Беларусь Грузия

Республика Казахстан Кыргызская Республика Республика Молдова Российская Федерация Республика Таджикистан Туркменистан Республика Узбекистан Украина

Азгосстандарт

Армгосстандарт

Госстандарт Республики Беларусь Грузстандарт

Госстандарт Республики Казахстан

Кыргызстандарт

Молдовастандарт

Госстандарт России

Таджикстандарг

Главгосслужба «Туркменстандартлары»

Узгосстандарт

Госстандарт Украины

3    Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 27 июля 2001 г. № 296-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 30711-2001 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта РФ с 1 июля 2002 г.

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

© ИПК Издательство стандартов. 2001

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Госстандарта России

II

Страница 3

ГОСТ 30711-2001

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ НИШЕВЫЕ Методы выявления и определения содержания афлатоксинов Hi и Mi

Food-stulTs.

Methods Гог dctcction and determination of aflatoxins B, and M, content

Дата введения 2002—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты it устанавливает методы выявления и определения содержания афлатоксинов В, и М,.

2    Нормативные ссылки

ГОСТ 61-75 Кислота уксусная. Технические условия ГОСТ 1277-75 Серебро азотнокислое. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603-79 Апетон. Технические условия

ГОСТ 3652-69 Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 4159-79 Йод. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4461-77 Кислота азотная. Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 5789-78 Толуол. Технические условия

ГОСТ 5848-73 Кислота муравьиная. Технические условия

ГОСТ 5955-75 Бензол. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 6995-77 Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 9411-91 Стекло оптическое цветное. Технические условия

ГОСТ 10455-80 1.4-Дноксан. Технические условия

1'ОСТ 12026— 76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия

ГОСТ 22300-76 Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Тилы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования

И ианыс официальное

I

Страница 4

ГОСТ 30711-2001

3 Метод тонкослойной хроматографии

Метод основан па экстракции афлатоксинов В, и М, из пробы продукта, очистке экстракта от мешающих веществ и измерении массовой концентрации афлатоксинов В, и М, с помощью тонкослойной хроматографии при визуальном определении количества вещества в пятне.

Диапазон измеряемых содержаний афлатоксина В, во всех продуктах, кроме молочных: 0.003—0,02 мг/кг: в молочных продуктах: 0.0005 —0,003 мг/кг; афлатоксина М, — 0.0005— 0,005 мг/кг.

3.1    Отбор и подготовка проб

Отбор проб и подготовка их к испытанию — по методам, указанным в нормативном документе на конкретную продукцию. При испытании зерновых, зернобобовых продуктов, орехов и концентратов с высоким содержанием жира, какао-бобов и шоколада среднюю пробу перед измельчением замораживают при температуре не выше минус 10 *С.

Средние пробы орехов, зерна, зернобобовых, кондитерских изделий, какао-бобов, зерен кофе и листового чая измельчают до порошкообразного состояния, шоколад измельчают до получения однородной массы.

3.2    Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 20 г не ниже 2-го класса точности.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г не ниже 4-го класса точности.

Спектрофотометр диапазоном измерения, позволяющим проводить исследования при длине волны 360 нм, с допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1 %: кюветы кварцевые рабочей длиной 10 мм.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 40 до 150 "С с температурной погрешностью ±5 ’С.

Центрифуга лабораторная, обеспечивающая скорость вращения 4000 об/мин, стаканы центрифужные стеклянные вместимостью 200 см5.

Испаритель ротационный ИР 2М или аналогичный.

Прибор для флуоресцентного анализа витаминов в растворе мод. 833 или диагностическая лампа ОЛД 41, снабженные светофильтром УФС 1, УФС 2 или УФС 5 по ГОСТ 9411.

Аппарат для встряхивания проб типа ЛВУ-6С |1|.

Баня водяная |2|.

Электроплитка по ГОСТ 14919.

Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498 с допускаемой погрешностью ±2 'С в диапазоне измерений 0—100 *С.

Микрошпрни MLU-10 вместимостью 0,01 см’ [3|.

Камера для тонкослойной хроматографии с притертой крышкой.

Насос водоструйный лабораторный по ГОСТ 25336.

Колбы мерные по ГОСТ 1770 исполнения 2 вместимостью 10, 100 и 250 см1.

Цилиндр по ГОСТ 1770 с взаимозаменяемым конусом вместимостью 100 см3.

Пипетки по ГОСТ 29227 типа 3 исполнения 1 I-го класса точности вместимостью 1 и 10 см3.

Воронка делительная по ГОСТ 25336 с взаимозаменяемым конусом вместимостью 250 см3.

Воронка лабораторная по ГОСТ 25336 тина В диаметром 56 мм и высотой 80 мм.

Колба плоскодонная по ГОСТ 25336 исполнения 2 вместимостью 250 см\

Колба грушевидная по ГОСТ 25336 с взаимозаменяемым конусом 14/23 вместимостью 100 см1.

Колба остродонная по ГОСТ 25336 с взаимозаменяемым конусом 14/23 вместимостью 25 см1.

Распылитель стеклянный с грушей.

Колонка стеклянная хроматографическая длиной 300 и внутренним диаметром 20 мм.

Фильтры бумажные обеззоленные марки ФОМ по ГОСТ 12026.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Силикагель J1, 100—160 или 100—250 мкм. фирма «Лахема*. Чехия.

Флоризнл, 60—100 меш, фирма «Мерк», Германия.

Пластинки для тонкослойной хроматографии «Силуфол* 15 х 15 см. фирма «Кавалиер*. Чехия.

Пластинка стеклянная 20 х 20 см.

Афлатоксин В, кристаллический, фирма «Серва», Германия.

Лфлатоксин В2 кристаллический, фирма «Серва», Германия.

Страница 5

ГОСТ 30711-2001

Лфлатоксин М, кристаллический, фирма «Серна», Германия.

Ацетон по ГОСТ 2603, ч. д. а.

Бензол по ГОСТ 5955, ч. д. а.

Ацетонитрил |4|. ч.

Гексан |5|, ч.

Метанол-яд по ГОСТ 6905. ч.

Хлороформ технический по ГОСТ 20015.

Эфир этиловый технический |6|.

1,4-Диоксан по ГОСТ 10455. ч. д. а.

Йод по ГОСТ 4159, х. ч., раствор в этиловом эфире массопой концентрации 100 г/дм'.

Спирт изопропиловый |7|, ч. д. а.

Кислота азотная по ГОСТ 4461. ч. д. а., водный растпор 1:2.

Кислота лимонная 1-водная по ГОСТ 3652. ч. д. а.

Кислота уксусная по ГОСТ 61, ч. д. а.

Серебро азотнокислое по ГОСТ 1277, х. ч., раствор массопой концентрации 250 г/дм’.

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х. ч.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, ч. д. а., растворы массовыми концентрациями 40 г/дм; и 100 г/дм3.

Свинец (II) уксуснокислый основной |8|, ч., раствор массовой концентрации 150 г/дм5.

Вода дистиллнропанная по ГОСТ 6709.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материачов, не уступающих перечисленным выше по метрологическим и техническим характеристикам.

33 Условия измерений

Температура и относительная влажность в лабораторном помещении при выполнении измерений не должны превышать значений, оговоренных в нормативных документах на средства измерений, указанные в 3.2.

3.4 Подготовка к выполнению измерении

3.4.1    Подготовки растворителей

Все растворители кватификации «ч.» или «технический* перед использованием перегоняют, строго отбирая фракцию, соответствующую по температуре кипения основному веществу. Этиловый эфир перед перегонкой освобождают от перекисей общепринятыми методами.

3.4.2    lIpiuomoAteitue основных ристворов афлатоксипов Вх и В,

I мг кристаллического афлатоксина В, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см*. В другую мерную колбу такой же вместимости количественно переносят I мг афлатоксина В:. В колбы вносят по 2 см3 ацетонитрила. Содержимое колб тщательно перемешивают до полного растворения кристаллов афлатоксипов. после чего объем в колбах доводят до метки бензолом и содержимое колб вновь тщательно перемешивают. Массовая концентрация афлатоксипов в полученных основных растворах составляет около 10 мкг/см3. Основные растворы хранят в закрытых мерных колбах, плотно завернутых в алюминиевую фольгу, в холодильнике. Срок годности основных растворов афлатоксинов — 1 г.

Точную концентрацию афлатоксипов В, и В, в основных растворах определяют спектрофотометрическим методом. Для этого определяют оптическую плотность слоя раствора толшнной 1 см по отношению к контрольному раствору на спектрофотометре при длине волны 362 нм. В качестве контрольного раствора используют смесь бензол-ацетонитрил (98:2).

Массовую концентрацию афлатоксипов В, и В, в основных растворах с, мкг/см1, вычисляют по формуле

£ЛП1ИЮ    (1)

е/ ’

где I) — оптическая плотность раствора;

М — молекулярная масса афлатоксина:

для афлатоксина В, Л/ = 312,3 г/моль; для афлатоксина В, М = 314.3 г/моль;

£ — молярный показатель поглощения раствора афлатоксина в смеси бензол-ацетонитрнл (98:2) при длине волны 362 нм: для афлатоксина В, е = 1,98-10* дм’моль-‘см-1; для афлатоксина В, е = 2,09 10* дм3 моль-1 см-1;

/— толщина слоя раствора, см.

3

Страница 6

ГОСТ 30711-2001

3.4.3    Приготовление рабочего раствора смеси афлатоксинов В, и В2

В мерную колбу вместимостью 100 см' пипеткой вносят 10,0 см3 основного раствора афлаток-сика В, и 5,0 см3 основного раствора афлатоксина В,. Объем в колбе доводят до метки смесью бензола с ацетонитрилом (98:2 по объему). Содержимое колбы тщательно перемешивают. Массовая концентрация афлатоксинов В, и В, в полученном рабочем растворе составляет около 1 мкг/см5 и 0,5 мкг/см' соответственно. Точная концентрация афлатоксина В, в рабочем растворе соответствует его точной концентрации в основном растворе, деленной на фактор разведения 10. Рабочий раствор афлатоксинов В, и В, хранят в тех же условиях, что и основные растворы. Срок годности рабочего раствора афлатоксинов В, и В, - 1 г.

3.4.4    Приготов.хение рабочего раствора анатоксина А/,

Ампулу, полученную от фирмы-производителя и содержащую 0,01 мг афлатоксина М,. вскрывают. В ампулу вносят 1,0 см3 ацетонитрила. Содержимое ампулы аккуратно перемешивают и переносят в мерную колбу вместимостью 10 см3. Остаток афлатоксина М, извлекают из ампулы двумя порциями бензола объемом по 1,0 см3, каждый раз тщательно перемешивая содержимое ампулы и перенося его в ту же колбу. Объем содержимого в колбе доводят до метки бензолом. Содержимое колбы тщательно перемешивают. Массовая концентрация афлатоксина М, в полученном рабочем растворе составляет 1.0 мкг/см3. Рабочий раствор афлатоксина М, хранят в тех же условиях, что и растворы афлатоксинов В, и В2. Срок годности рабочего раствора афлатоксина М, — 1 г.

3.4.5    Приготовление смешанного раствора хлористого натрия и лимонной кислоты

В мерную колбу вместимостью 500 см3 вносят 100 г хлористого натрия и 12 г лимонной кислоты. Содержимое колбы растворяют в небольшом количестве воды, после чего объем в колбе доводят водой до метки.

3.4.6    Подготовка фюризша

100 г флорнзила помещают в плоскодонную колбу. В колбу вносят 200 см3 смеси гексан-ук-сусная кислота (99:1). Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 10 мин, после чего жидкость декантируют. Операцию повторяют еще 2 раза, каждый раз используя порции по 200 см! гексана. Флоризил высушивают на часовом стекле сначала в вытяжном шкафу при комнатной температуре до исчезновения запаха гексана. затем в сушильном шкафу при температуре ПО “С в течение 12 ч. Посте охлаждения флоризил переносят в плоскодонную колбу, куда вносят 10 см3 дистиллированной воды. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 60 мин, после чего флоризил переносят в герметично закрывающийся сосуд и выдерживают в закрытом состоянии в течение суток. Приготовленную порцию флорнзила используют в течение недели.

3.5 Выполнение измерений

3.5.1    Экстракция

3.5.1.1    Экстракция афлатоксина В, из зерновых, зернобобовых, орехов, кондитерских изделий, хлебопродуктов и концентратов

Навеску пробы массой 25,0 г помещают в плоскодонную колбу. В колбу вносят 25 см! раствора хлорида натрия концентрацией 100 г/дм3. Содержимое колбы тщательно перемешивают, добиваясь равномерного смачивания пробы. В колбу с помощью микрошприца вносят 0.0125 см' основного раствора афлатоксина В,, используемого в качестве внутреннего стандарта, и 100 см3 ацетона. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин, после чего содержимое колбы фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Отбирают 50 см3 фильтрата.

3.5.1.2    Экстракция афлатоксина В, из плодовых и овощных консервов

Навеску пробы массой 25.0 г помещают в плоскодонную колбу. В колбу вносят 25 см3 раствора хлорида натрия концентрацией 100 г/дм3. Содержимое колбы тщательно перемешивают. В колбу с помощью микрошприца вносят 0,0125 см3 основного раствора афлатоксина В,, используемого в качестве внутреннего стандарта, и 100 см3 ацетона. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин, после чего содержимое колбы количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3. Содержимое колбы доводят до метки смесью ацетон-вода (4:1). тщательно перемешивают и фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Отбирают 100 см’ фильтрата. Фильтрат упаривают на ротационном испарителе при температуре 35—40 'С приблизительно до половины объема.

3.5.1.3    Экстракция афлатоксина В, из какао-бобов, какао-порошка и шоколада

Навеску пробы массой 25,0 г помешают в плоскодонную колбу. В колбу вносят 50 см3 гексана. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 15 мин. выдерживают до полного осаждения нерастворимых в гексане веществ, после чего осторожно декантируют гексано-

4

Страница 7

ГОСТ 30711-2001

иый слой. Процедуру повторяют еше два раза аналогичным способом, каждый раз используя свежие порции гексана. Остатки гексана удаляют высушиванием в сушильном шкафу при 50 *С до исчезновения запаха растворителя.

К сухому остатку добавляют 0,010 см3 основного раствора афлатоксина В„ используемого в качестве внутреннего стандарта. 25 см3 раствора азотнокислого серебра и 125 см' хлороформа. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. после чего переносят в делительную воронку. После разделения фаз нижний хлороформный слой фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Отбирают 75 см3 фильтрата. Фильтрат переносят в плоскодонную колбу, куда добавляют 10 см' раствора азотнокислого серебра. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 10 мин. после чего переносят в делительную воронку. После разделения фаз верхний водный слой отбрасывают. Процедуру повторяют, используя свежую порцию раствора азотнокислого серебра. Хлороформный экстракт фильтруют через ватный тампон. Отбирают 50 см3 фильтрата и упаривают его на ротационном испарителе при температуре 35—40 *С приблизительно до половины объема.

3.5.1.4    Экстракция афлатоксина В, из кофе и чая

Навеску пробы массой 25.0 г помешают в плоскодонную колбу. В колбу вносят 15 см5 воды и перемешивают содержимое до равномерного смачивания пробы. Гуда же вносят 0,010 cmj основного раствора афлатоксина В,, используемого в качестве внутреннего стандарта, и 125 см’ хлороформа. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин, после чего переносят в центрифужные стаканы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. После этого верхний водный слой отбрасывают и отбирают 50 см3 хлороформного экстракта.

3.5.1.5    Экстракция афлатоксина В, из растительных масел и афлатоксннов В, и М, из животных масел

Навеску пробы массой 15,0 г помешают в плоскодонную колбу, куда добавляют 0.0125 cmj основного раствора афлатоксина В:, используемого в качестве внутреннего стандарта, 25 см3 гексана, 5 см’ раствора хлорида натрия массовой концентрации 40 г/дм3 и 100 см3 аиетонитрила. Содержимое колбы встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мни. затем переносят в делительную воронку. После разделения слоев гексановый слой отбрасывают.

3.5.1.6    Экстракция афлатоксннов В, и М, из молочных продуктов

Навеску натурального молока, кефира, сливок, ряженки, йогурта, простокваши массой 50.0 г, сухого молока массой 5.0 г, концентрированного молока, сыра и сметаны массой 25,0 г помешают в коническую колбу. К навеске концентрированного молока, сыра и сметаны добавляют 25 см3 воды, к навеске сухого молока — 50 см3 воды. Содержимое колбы доводят до температуры 35—38 *С на водяной бане, при этом добиваются растворения сухого молока и диспергирования сыра и кисломолочных продуктов. В колбу вносят 0.0125 см3 основного раствора афлатоксина В,, используемого в качестве внутреннего стандарта, 10 см3 предварительно подогретого до температуры 35—38 “С смешанного раствора хлорида натрия и лимонной кислоты массовыми концентрациями соответственно 200 и 24 г/дм3 и 100 см3 хлороформа, предварительно подогретого до той же температуры. Содержимое колбы встряхивают 5 мин, после чего переносят в центрифужные стаканы и центрифугируют при 4000 об/мин в течение 15 мни, после чего верхний водный слой отбрасывают, хлороформный слой переносят в плоскодонную колбу и обезвоживают добавлением 10 г сернокислого натрия. Хлороформный экстракт фильтруют через ватный тампон в цилиндр вместимостью 100 см3, измеряют объем фильтрата. Фильтрат переносят в грушевидную колбу и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 35—40 "С. (5статок в колбе растворяют в 1 см3 хлороформа.

3.5.2 Очистка же тракта

3.5.2.1 Очистка экстракта из зерновых, зернобобовых, орехов, кондитерских изделий, хлебопродуктов. плодоовощных консервов и концентратов

Водно-ацетоновый экстракт переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3. В колбу вносят 20 см3 раствора уксуснокислого свинца. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают, после чего фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Отбирают 80 см3 фильтрата. Фильтрат переносят в делительную воронку, куда добавляют 30 см3 гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают в течение 1 мин. После разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Процедуру повторяют, используя свежую порцию гексана и отбрасывая гексановый слой после разделения фаз.

К оставшемуся в делительной воронке водно-ацетоновому слою добавляют 40 см3 хлороформа. Содержимое воронки интенсивно встряхивают в течение 1 мин. После разделения фаз нижний хлороформный слой переносят в плоскодонную колбу. Экстрагирование остатков афлатоксннов из

5

Страница 8

ГОСТ 30711-2001

водно-ацетоновой фазы проводят еще 2 раза, каждый раз используя по 30 см-' смеси хлороформ -ацетон (3:1). Объединенные хлороформные экстракты обезвоживают в плоскодонной колбе, добавляя 10 г безводного сульфата натрия и выдерживая содержимое в течение 30 мин в темноте. После обезвоживания экстракт по частям фильтруют через ватный тампон в остродонную колбу и упаривают на ротационном испарителе при температуре 35—40 *С. Оставшийся сернокислый натрий промывают 15 см3 хлороформа, смыв добавляют к фильтрату. Содержимое отгонной колбы упаривают досуха. Остаток перерастворяют в 0.4 см' смеси бензол-ацетонитрил (98:2) и используют для хроматографического анализа.

3.5.2.2    Очистка экстракта из какао-бобов, какао-порошка и шоколада

Очистку экстракта проводят с помощью колоночной хроматографии, для чего на дно стеклянной колонки помешают ватный тампон, на который насыпают слой сернокислого натрия толщиной 5 мм и Юг силикагеля, суспендированного в 30 см1 хлороформа. Не позволяя просохнуть верхней кромке слоя силикагеля, на него насыпают слой сернокислого натрия толщиной 20 мм. Растворителю дают стечь, после чего в колонку вносят экстракт. Хлороформу дают стечь до поверхности слоя сернокислого натрия, после чего через колонку последовательно пропускают 150 см* гексана и 150 см5 этилового эфира. Элюат отбрасывают. В колонку вносят 150 см3 смеси хлороформ-метанол (97:3) и с этого момента начинают собирать элюат. После прекращения выхода элюата из колонки его по част ям упаривают в остродонной колбе на ротационном испарителе при температуре 35—40 *С досуха. Остаток в отгонной колбе растворяют в 0,4 см3 смеси бензол-ацетонитрил (97:3) и используют для хроматографического анализа.

3.5.2.3    Очистка экстракта из кофе и чая

Очистку экстракта проводят с помощью колоночной хроматографии. Для этого на дно стеклянной колонки помещают ватный тампон, на который насыпают слой сернокислого натрия толщиной 5 мм и 5 г флоризила, суспендированного в 20 см3 хлороформа. Не позволяя просохнуть верхней кромке слоя флоризила, на него насыпают слой сернокислого натрия толщиной 20 мм. Растворителю дают стечь, после чего в колонку вносят экстракт. Хлороформу дают стечь до поверхности слоя сернокислого натрия, после чего через колонку пропускают 150 см3 диоксана. Элюат отбрасывают. В колонку вносят 100 см3 смеси ацетон-метанол (9:1). С этого момента начинают собирать элюат. После прекращения выхода элюата из колонки его по частям упаривают в остродонной колбе на ротационном испарителе при температуре 35—40 'С досуха. Остаток в отгонной колбе растворяют в 0.4 см3 смеси бензол-ацетонитрил (97:3) и используют для хроматографического анализа.

3.5.2.4    Очистка экстракта из растительных масел

Ацетонитрильный экстракт обезжиривают гексаном. предварительно насыщенным ацетонитрилом. Для этого 160 см3 гексана встряхивают в делительной воронке с 10 см3 ацетонитрила. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отбрасывают.

Ацетонитрильный экстракт из пробы масла переносят в делительную воронку, куда добавляют 50 см3 гексана, насыщенного ацетонитрилом. Содержимое воронки встряхивают в течение 1 мин. После разделения фаз верхний гексановый стой отбрасывают. Обезжиривание экстракта повторяют еще два раза в аналогичных условиях, каждый раз используя свежую порцию гексана, насыщенного ацетонитрилом. Обезжиренный ацетонитрильный экстракт обезвоживают добавлением 10 г сернокислого натрия и выдерживанием в темноте в течение 30 мин.

Экстракт фильтруют через ватный тампон в грушевидную колбу и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 40—45 ‘С. Остаток в отгонной колбе растворяют в 2 см3 хлороформа и проводят его очистку с помощью колоночной хроматографии. Идя этого на дно стеклянной колонки помещают ватный тампон, на который насыпают слой сернокислого натрия толщиной 5 мм и суспензию 4 г силикагеля в 20 см’ бензола. Не позволяя просохнуть верхней кромке слоя силикагеля, на него насыпают слой сернокислого натрия толщиной 20 мм. Растворителю дают стечь, после чего в колонку вносят экстракт. Экстракту дают полностью впитаться в фильтрующий слой, после чего в колонку вносят 100 см3 смеси бензол-гексан-этиловый эфир (1:1:2). Растворителю дают полностью пройти через колонку, элюат отбрасывают. В колонку вносят 100 см3 смеси хлороформ-ацетон (9:1), с этого момента начинают собирать элюат. После прекращения выхода элюата из колонки его по частям упаривают в остродонной колбе на ротационном испарителе при температуре 35—40 *С досуха. Остаток в отгонной колбе растворяют в 0.4 см3 смеси бензол-ацето-нитрил (97:3) и используют для хроматографического анализа.

3.5.2.5    Очистка экстракта из молочных продуктов (включая животное масло)

Очистку экстракта проводят с помощью колоночной хроматографии. Для этого готовят колонку по 3.5.2.4, используя при этом 2 г силикагеля. В колонку вносят экстракт и дают ему полностью

6

Страница 9

ГОСТ 30711-2001

впитаться в фильтрующий слой. После этого проводят последовательное элюирование следующими смесями растворителей порциями по 25 см3:

-    толуол-уксусная кислота (9,5:0.5);

-    гексан;

-    этиловый эфир-гексаи-ацетоиитрил (5:3:0,5).

Элюаты отбрасывают. В колонку вносят 60 см5 смеси хлороформ-ацетон (4:1), с этого момента начинают отбирать выходящий элюат. После прекращения выхода элюата из колонки его по частям упаривают в остродонной колбе на ротационном испарителе при температуре 35—40 *С досуха. Остаток в отгонной колбе растворяют в 0.2 см3 смеси бензол-ацетонитрил (97:3) и используют для хроматографического анализа.

3.5.3    Качественное определение анатоксинов В1 и М,

На пластинку «Смлуфол» сверху и снизу наносят две тонкие карандашные линии на расстоянии 1,5 см от краев. На нижней (стартовой) линии отмечают 3 точки на расстоянии 2 см друг от друга, в которые наносят с помощью микрошприца по 0.002. 0,005 и 0,01 см' рабочего раствора смеси афлатокеннов В, и В,. При испытании молочных продуктов в эти же точки наносят дополнительно по 0,002, 0.005 и 0,01 СНГ рабочего раствора афлатоксина М,. На расстоянии I см между пятнами рабочих растворов наносят 0,01 и 0,02 см5 исследуемого раствора. Пластинку стартовой линией вниз помещают в хроматографическую камеру, предварительно заполненную смесью этиловый эфир-ме-танол-вода (94:4.5:1,5) (при испытании молочных продуктов — этиловый эфир-метанол-вода (90:8:2)). Развитие хроматограммы проводят до достижения фронтом растворителя верхней карандашной линии.

Пластинку извлекают из камеры, сушат на воздухе 5 мин и рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете. На хроматограмме рабочего раствора смеси афлатоксинов последние располагаются по напраатению движения фронта растворителя в следующем порядке: М,, В,, В,. Обнаружение на хроматограммах экстракта пяген, соответствующих по хроматографической подвижности и ивету флюоресценции пятнам афлатоксинов В, и М, из рабочих растворов, свидетельствует о возможном наличии этих афлатоксинов в пищевом продукте. Обнаружение на хроматограммах экстракта пятен, соответствующих по хроматографической подвижности и цвету флюоресценции пятнам афлатоксина В,, свидетельствует о правильном извлечении афлатоксинов из пробы.

Для подтверждения присутствия афлатоксинов В, и М, используют любой из следующих тестов.

По первому тесту пластинку опрыскивают из распылителя раствором азотной кислоты в воде (1:2) и рассматривают ее в ультрафиолетовом свете. Если ивет флюоресценции пятен на хроматограммах афлатоксинов изменился с синего на желтый, а цвет флюоресценции соответствующих пятен на хроматограммах экстракта не изменился, то афлатоксин в пробе отсутствует. Если же цвет флюоресценции соответствующих пятен на хроматограммах экстракта также изменился на желтый, то это служит подтверждением возможного наличия афлатокеннов в пробе.

По второму тесту на стеклянную пластинку 20 x20 см наносят 2—4 см' раствора йода в этиловом эфире, распределяют его по всей поверхности и даюг эфиру испариться. Над хроматографической пластинкой на расстоянии 0,5—1,0 см помешают пластинку с тонким слоем йода и подвергают ее воздействию паров йода в течение 1—2 мин. Затем пластинку рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете. Сохранение цвета и интенсивности флюоресценции пятен стандартов и соответствующих им пяген экстракта подтверждает возможное наличие афла-токсинов в пробе продукта.

3.5.4 Количественное онре(кление u(Jни токсинов    и М,

Пластинку «Силуфол* размечают тонкими карандашными линиями в соответствии с рисунком 1. В точку / микрошприцем наносят 0,020 см3 исследуемого раствора. В точку 2 наносят 0,005 см3, в точки 3, 4 \\ 5 соответственно 0,002, 0,004 и 0,006 см* рабочего раствора смеси афлатоксинов В, и В-,. При испытании молочных продуктов дополнительно наносят рабочий раствор афлатоксина М, в тех же количествах и в те же точки, что и рабочий раствор смеси афлатоксинов В, и В,. Массу афлатоксинов В, и М, та, иг, нанесенную в каждую точку, рассчитывают по формуле

mt = с-ПООО,    (2)

где с — концентрация афлатоксина в рабочем растворе, мкг/см3;

V — объем рабочего раствора афлатоксина. нанесенный в точку на пластинке, см3.

7

Страница 10

ГОСТ 30711-2001

Хроматографическую камеру заполняют смесью эфир-метанол-вода (94:4,5:1,5) (при испытании молочных продуктов — (90:8:2)). Пластинку помешают в камеру для развития хроматограммы в первом направлении до достижения фронтом растворителя верхней карандашной линии.

Пластинку извлекают из камеры и сушат на воздухе 5 мин, затем развитие хроматограммы проводят во втором направлении в системе хлороформ-ацетон (9:1) (при испытании молочных продуктов — хлороформ-ацетон-изопропило-вый спирт (85:10:5)). После достижения фронтом растворителя верхней карандашной линии пластинку извлекают из камеры, сушат на воздухе и рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете.

/—5 — том к и на не сем и я растворов слимиии и шереиия приведены и мм

Рисунок 1 — Схема нанесения растворов на хроматографическую пластинку

Обнаружение афлатоксинов В, и М, проводят аналогично 3.5.3. В случае подтверждения присутствия афлатоксинов В. и М, в пробе их количественно опре-

деляют, сравнивая интенсивность флюоресценции пятен афлатоксинов в пробе и пятен из рабочего расгвора афлатоксинов. Если интенсивность флюоресценции пятен афлатоксинов в исследуемом растворе выше интенсивности флюоресценции пятен, соответствующих 0,006 см' рабочего раствора смеси афлатоксинов. проводят повторное хроматографическое разделение. В этом случае на пластинку наносят меньшее количество исследуемого раствора.

3.6 Обработка результатов измерений

3.6.1 Содержание афлатоксина В,. Л*,, мг/кг. дчя зерновых, зернобобовых, орехов, кондитерских изделий, хлебопродуктов, плодоовощных консервов и концентратов вычисляют по формуле

АТГГГТ

(3)

10-

где /и, — масса афлатоксина В,, обнаруженная в пятне пробы, нг;

К, — обший объем водно-ацетонового экстракта (при испытании зерновых, зернобобовых и хлебопродуктов — суммарный объем добавленных растворов хлорида натрия и ацетона), см*;

К, — объем водно-ацетонового экстракта после прибавления к нему раствора ацетата свинца и воды, см3;

Vi — объем, до которого сконцентрирован экстракт перед хроматографическим разделением. cmj;

К — коэффициент извлечения афлатоксина В, по таблице 1;

т — масса навески пробы, г;

К — объем водно-ацетонового фильтрата, взятый на анализ, см5;

V\ — объем водно-ацетонового фильтрата после очистки ацетатом свинца, взятый на анализ, см3;

Ул — объем экстракта, нанесенный на пластинку, см3.

3.6.2 Содержание афлатоксина В,. Хг, мг/кг, дтя кофе, чая и какао вычисляют по формуле

Страница 11

ГОСТ 30711-2001

т, К К 1    (4)

X, =    '    ■    ’    ю3,

1 А т К V,

где /и, — масса афлатоксина В,, обнаруженная в пятне пробы, нг;

Vx — объем хлороформа, добаиленный к пробе для экстракции, см5;

У3 — объем, до которого сконцентрирован экстракт перед хроматографическим разделением, см’;

К — коэффициент извлечения афлатоксина В, по таблице 1; т — масса навески пробы, г;

У2 — объем хлороформного экстракта, взятый на анализ, см1;

К, — объем экстракта, нанесенный на пластинку. см3.

3.6.3 Содержание афлатоксина В, Х3> мг/кг, для растительных масел и афлатоксинов В, и М, Ху мг/кг, для животного масла вычисляют по формуле

у -    |/'    w-i    (5)

Л> ТтТ" Ш

где /л, — масса афлатоксина В, или М,. обнаруженная в пятне пробы, нг;

Vx — объем, до которого сконцентрирован экстракт перед хроматографическим разделением. см3;

К — коэффициент извлечения афлатоксина В, или М, по таблице I; m — масса навески пробы, г;

К — объем экстракта, нанесенный на пластинку, см3.

3.6.4 Содержание афлатоксинов В, или М,. Xt, мг/кг, для молочных продуктов вычисляют по формуле

„ _ ух уь ,л-з    Гб)

гг 10

где /я, — масса афлатоксина В, или М„ обнаруженная в пятне пробы, нг;

У, — объем хлороформа, доба&пенный к пробе дзя экстракции, см3;

У3 — объем, до которого сконцентрирован экстракт перед хроматографическим разделением, см’;

К— коэффициент извлечения афлатоксина В, или М, по таблице 1; m — масса навески пробы, г;

К — объем хлороформного экстракта, взятый на анализ, см3; гл — объем экстракта, нанесенный на пластинку, см3.

Таблица I — Коэффициенты извлечении афлатоксинов

Нанченопамис ipynnu продуктов

Нлнмемаваиис имкигокемма

Значение шиффимиешл мзнлечемим

Зерновые, зернобобовые, орехи, кондитерские изделии, хлебопродукты, плодоовощные консервы

Афлатоксин В,

0.75

Какао-бобы, какао-порошок, шоколад

Афлатоксин В,

0.75

Кофе, чай

Афлатоксин В,

0.80

Растительные и животное масла

Афлатоксин В,

0.70

Молочные продукты

Афлатоксин В,

0.70

Афлатоксин М,

0.70

За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, округленное до второй значащей цифры.

Расхождение между результатами двух параллельных измерений (в процентах от среднего значения) не должно превышать значений показателя сходимости d при доверительной вероятности Р = 0,95. указанных в таблице 2.

9

Страница 12

ГОСТ 30711-2001

Таблица 2 — Метрологические характеристики метода тонкослойной хроматографии

Значения метрологических характеристик для иихией |'н) и верхней (в) ipaiuiu лианатонов измеряемых содержаний при доверительной вероятности Р - 0.95

Наименование группы продуктов

Наименование

микоюксиил

Сходимость ретульгатов d. %

Воспроизводимое! i. резулыатон D. %

Модули ipjKII 11 интервалов относительной

IIOIPCUIIIOCTH измерений Й. %

Зерновые, зернобобовые, орехи, кондитерские изделия, хлебопродукты. плодоовощные консервы, концентраты

Афлатоксин В,

4,-60 - 50

D„ - 80 0, - 70

S., - 50 5,-40

Какао, какао-порошок, шоколад

Афлатоксин В,

d' -60 <-50

0-70

-70

S.-40 S0 - 40

Кофе, чай

Афлатоксин В,

d ~ 70 - 50

Z>H~80 Z)„ = 60

8„ - 50 S„-40

Растительные масла

Афлатоксин В,

d„ - 50 i - 30

D„ - 80 0,-40

S., - 50 S„ - 30

Маточные продукты

Афлатоксин В,

<4,-40

30

Da - 50 Du - 40

8„ -30 8» - 20

Афлатоксин М,

d = 100 4,”50

DM = 100 Д.-70

8„ = 60 3U~40

Расхождение между результатами измерений п двух лабораториях (в процентах от среднего значения) не должно превышать значений показателя воспроизводимости D при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в таблице 2.

Модули границ интервала относительной погрешности измерений при доверительной вероятности Р = 0.95 указаны в таблице 2.

В промежуточных точках диапазона измерений метрологические характеристики могут быть найдены методом линейной интерполяции.

4 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

Метод основан на экстракции афлатоксинов В, и М, из пробы продукта, очистке экстракта от мешающих вешеств и измерении массовой концентрации афлатоксинов В, и М, в экстракте с помошыо высокоэффективной жидкостной хроматографии с флюориметрическим детектированием.

Диапазон измеряемых содержаний афлатоксина В, во всех продуктах, кроме молочных: 0,003—0,02 мг/кг; в молочных продуктах: 0,0005—0.003 мг/кг: афлатоксина М, — 0.0005— 0,005 мг/кг.

4.1    Отбор и подготовка проб

Отбор проб и подготовка их к испытанию — по 3.1.

4.2    Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При проведении испытания используют средства измерений, реактивы и материалы по 3.2 со следующим дополнением:

Хроматограф жидкостный в составе:

насоса высокого давления с верхним пределом давления не менее 25 МПа, диапазоном регулирования подачи растворителя не менее 0,1—5 cmj/mhh, погрешностью поддержания скорости подачи растворителя не более 2,5 % при скорости потока 1,0 см}/мин и давлении 3,45 МПа;

петлевого устройства ввода пробы с рабочим объемом петли 0,020 см3;

флюорнметрического детектора, позволяющего проводить исследования при длине волны возбуждающего излучения 360 нм и длине волны эмиссии 420 нм, с проточной кварцевой кюветой объемом от 0,015 до 0.025 см3, с уровнем флуктуационных шумов не более X 10~5 ед. флюоресценции.

10

Страница 13

ГОСТ 30711-2001

относительной погрешностью измерения интенсивности флюоресценции не более 2 %. пределом детектирования по антрацену 810“12 г/см3;

регистрирующего устройства (самописца или интегратора), позволяющего проводить измерения при чувствительности 0.2 мВ/см, с погрешностью записи в рабочих условиях не более 0.5 %\

колонки длиной 250 мм и внутренним диаметром 4.6 мм. заполненной силикагелем с размером частиц 5 мкм. Эффективность колонки по афлатоксину В, — не менее 20000 теоретических тарелок на метр.

Толуол по ГОСТ 5789. ч. д. а.

Эфир этиловый уксусной кислоты по ГОСТ 22300. ч. д. а.

Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч. д. а.

4 3 Условия измерений

Температура и относительная влажность в лабораторном помещении при выполнении измерений не должны превышать значений, оговоренных в нормативных документах на средства измерений, указанные в 4.2.

4.4 Подготовка к выполнению измерений

4.4.1    Подготовка растворителей

Подготовка растворителей — по 3.4.1.

4.4.2    Приготовление рабочего раствора смеси афлатоксинов В, и В2

В мерную колбу вместимостью 100 см5 пипеткой вносят 1,0 см; основного раствора афлаток-сина В, и 0,5 см3 основного раствора афлатоксина В,, приготовленных по 3.4.2. Содержимое колбы доводят до метки смесыо бензола с ацетонитрилом (9Х:2 по объему) и тщательно перемешивают. Массовая концентрация афлатоксинов В, и В; в полученном рабочем растворе составляет около 0,1 мкг/см' и 0,05 мкг/см3 соответственно. Точная концентрация афлатоксинов В, и В, в рабочем растворе соответствует их точной концентрации в основных растворах, деленной на фактор разведения 100 и 200 соответственно. Рабочий раствор афлатоксинов В, и В, хранят в тех же условиях, что и основные растворы, приготовленные по 3.4.2. Срок годности рабочего раствора афлатоксинов — 1 г.

4.4.3    Приготовление рабочего раствора смеси анатоксинов В{, В, и Л/,

0.5 см5 рабочего раствора афлатоксина М„ приготовленного по 3.4.4. и 1 см3 рабочего раствора смеси афлатоксинов В, и В,, приготовленного по 3.4.3, переносят в мерную колбу вместимостью 10 см3. Объем в колбе доводят до метки смесыо бензола с ацетонитрилом (9:1 по объему). Содержимое колбы тщательно перемешивают. Массовая концентрация афлатоксина М, в получен

ном рабочем растворе составляет 0,05 мкг/см3, афлатоксинов В, 0,05 мкг/см3 соответственно. Точная концентрация афлатоксинов соответствует их точной концентрации в основных растворах, деленной на фактор разведения 100 и 200 соответственно. Рабочий раствор афлатоксинов В,, В, и М, хранят в тех же условиях, что и основные растворы, приготовленные по 3.4.2. Срок годности рабочего раствора афлатоксинов — 1 г.

и В,— около 0,1 мкг/см3 и В, и В, в рабочем растворе

BfBHD дармошАот,

Рисунок 2 — Хроматограмма рабочего раствора смеси афлатоксинов

4.4.4    Подготовка фюримиа

Флоризнл готовят по 3.4.5.

4.4.5    Подготовка хроматографа к работе

Готовят смесь толуол-этиланетат-муравьиная кислота (8:4:1), которую используют в качестве подвижной фазы. На флюорнмет-рнческом детекторе устанавливают длину волны возбуждающего излучения 360 нм и длину волны эмиссии 420 нм. Чувствительность детектора устанаативают таким образом, чтобы при вводе в хроматограф I иг афлатоксина В, перо самописца отклонялось на полную шкалу. Чувствительность самописца устанаативают на 10 мВ. Подвижной фазой кондииионируют колонку хроматографа при скорости потока 1.2 см3/мнн в течение 20 мин. после чего хроматограф считается готовым к работе.

Допускается использование подвижной фазы другого состава, обеспечивающей разделение пиков афлатоксинов В,, В, и М, не хуже, чем на образцовой хроматограмме (рисунок 2).

4.4.6    ()н/>еде.1ение времени удерживания и градуи/ювочных коэффициентов анатоксинов

В инжектор хроматографа микроширицем вводят 0.005 см3

II

Страница 14

ГОСТ 30711-2001

рабочего раствора смеси афлатоксинов В,. В, и М, и определяют время удерживания и высоты пиков каждого афлатоксииа на хроматограмме. Афлатоксин ы располагаются на хроматограмме в следующей последовательности по возрастанию времени удерживания: афлатоксин В,, афлатоксин В,, афлатоксин М,. Градуировочный коэффициент К для афлатоксинов В, и М, рассчитывают по формуле

где с — массовая концентрация афлатоксииа В, или М, в рабочем растворе, мкг/см3;

А, — высота пика афлатоксииа В-, (внутреннего стандарта), мм;

с, — массовая концентрация афлатоксииа В, (внутреннего стандарта) в рабочем растворе, мкг/см3;

Л — высота пика афлатоксииа В, или М,, мм.

За окончательный результат определения градуировочных коэффициентов принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 2 % от среднего значения.

Градуировку следует проводить через каждые 6 ч работы прибора.

4.5    Выполнение измерений

4.5.1    Экстракция

Экстракцию афлатоксинов проводят по 3.5.1.

4.5.2    Очистка жстракта

Очистку экстракта проводят по 3.5.2.

4.5.3    Х/юматографическии а/шиз

В инжектор хроматографа с помощью мнкрошприпа вводят 0,020 см5 очищенного и сконцентрированного экстракта. При появлении на хроматограмме экстракта пика, совпадающего по времени удерживания с пиком афлатоксииа В,. В, или М, на хроматограмме рабочего раствора, определяют его высоту. Если пик афлатоксииа В, или М, на хроматограмме экстракта выходит за пределы шкалы регистрирующего устройства, хроматографический анализ экстракта проводят повторно, вводя в инжектор меньший объем экстракта. Обнаружение на хроматограмме экстракте пика афлатоксииа В: свидетельствует о правильном извлечении афлатоксинов из пробы.

4.5.4    Качественное определение афлатоксинов В, и Л/,

При обнаружении на хроматограмме пиков, совпадающих по времени удерживания с пиками афлатоксинов В, или М, в рабочем растворе, для подтверждения присутствия афлатоксинов в пробе проводят их качественное определение по 3.5.3.

4.6    Обработка результатов измерений

Содержание афлатоксииа В, во всех продуктах и афлатоксинов В, и М, в молочных продуктах А', мг/кг, рассчитывают по формуле

где Л — высота пика афлатоксииа В, (или М,), мм:

Л — градуировочный коэффициент для афлатоксииа В, (или М.), рассчитанный по 4.4.6; с — массовая концентрация афлатоксииа В, (внутреннего стандарта) в основном растворе, мкг/см5, рассчитанная по 3.4.2;

К— объем основного раствора афлатоксииа В2, внесенный в пробу, см1;

Л, — высота пика афлатоксииа В, (внутреннего стандарта), мм; т — масса навески пробы, г.

За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, округленное до второй значащей цифры.

Расхождение между результатами двух параллельных измерений (в процентах от среднего значения) не должно превышать значений показателя сходимости d при доверительной вероятности Р= 0,95. указанных в таблице 3.

Расхождение между результатами измерений в двух лабораториях (в процентах от среднего значения) не должно превышать значений показателя воспроизводимости D при доверительной вероятности Р = 0.95, указанных в таблице 3.

12

Страница 15

ГОСТ 30711-2001

Таблица 3 — Метрологические характеристики метода высокоэффективной жидкостной хроматографии

Значения метрологических характеристик длм нижней Гм) и верхней (в) ipaiuiu диапазонов измеряемых содержаний при доверительной вероятности Р - 0.95

Наименование группы ироду кто»

Наименование

микоюксиил

Сходимость результатов d. %

Воспроизводимость результатов П, %

Модули грлпш интервалов относительной погрешности измерений S. %

Зерновые, зернобобовые, орехи, кондитерские изделия, хлебопродукты. плодоовощные консервы

Афлатоксин В,

4,-20 <£ * 10

D„ - 30 0„-2О

S„ - 20 8„ - 10

Какао-бобы, какао-порошок, шоколад

Афлатоксин В,

</, - 20 <4-10

Du - 30 Dt - 30

8„ - 20 SB- 20

Кофе, чай

Афлатоксин В,

d - 20 </„ - 20

D -30 ££-30

6 - 20 So - 20

Растительные масла

Афлатоксин В,

d„ - 20 <£-ю

Du - 30 />. = 20

6„ - 20 s„ - Ю

Маточные продукты

Афлатоксин В,

4,-20

<£-ю

Du - 30 0„-2O

S„ - 20 8U - 10

Модули границ интервала относительной погрешности измерений при доверительной вероятности Р = 0.95 указаны в таблице 3.

В промежуточных точках диапазона измерений метрологические характеристики могут быть найдены методом линейной интерполяции.

5 Требования безопасности

При работе с афлатоксинамн следует соблюдать особую предосторожность из-за их высокой токсичности. После проведения испытания и приготовления основного и рабочего растворов афлатоксипов необходимо ополоснуть рот и руки раствором гипохлорита натрия, затем тщательно вымыть руки с мылом. Раствор гипохлорита натрия готовят по приложению А.

Оборудование, находящееся в контакте с афлатоксинамн, посте проведения испытания необходимо обработать раствором гипохлорита натрия. Для обеззараживания растворов, содержащих афлатоксин, их упаривают досуха на ротационном испарителе, остаток растворяют в I см3 метанола, к полученному раствору добавляют 20 см* раствора гипохлорита натрия, выдерживают смесь в течение 2 ч и сливают в канализацию.

При работе с метанолом следует соблюдать правила техники безопасности в соответствии с общими санитарными правилами работы с метанолом |9J.

Помещение, в котором установлен жидкостный хроматограф, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.

13

Страница 16

ГОСТ 30711-2001

ПРИЛОЖЕНИЕ А (сираночное)

Методика приготовления раствора гнпохлорита натрия

Готовят растворы: 10 г хлорной извести в 170 см3 волы и 7 г углекислого натрия в 170 см' волы. Второй раствор приливают к первому при непрерывном перемешивании. Полученную смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Полученный раствор хранят в темноте.

ПРИЛОЖЕНИЕ Б (справочное)

Библиография

(1| ТУ 64—1 — 1080— 78 Аппарат универсальный для встряхивания жидкостей в колбах и пробирках АВУ 6с

|2| ТУ 46—22—603—75 Баня водяная лабораторная с электрическим или огневым подогревом

|3| ТУ 25-03-2152-76 Мнкрошприп МШ-10

|4| ТУ 6—09—3534—74 Ацетонитрил

|5| ТУ 6-09-3375-78 Гсксан

|6| ГФХ ст. 34 Эфир медицинский

|7| ТУ 6—09—402—87 Спирт изопропиловый

|8| ТУ 6—09—4140—75 Свинец (II) уксуснокислый основной

|9| N 4132—86 or 18.07.86 Общие санитарные правила работы с метанолом

УДК 663/664.001.4:006.354    МКС    67.040    Н59    ОКСТУ    9109

Ключепые слова: микотоксины, афлатоксины В, и М,, методы выявления и определения содержания, метод тонкослойной хроматографии, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

Редактор Т.П. Шашииа Технический редактор Л.Л. Гусева Корректор НЛ. Гина.жо Компьютерная «ерегка С.В. Рябовой

И за. лип. N: 02354 от 14.07.2000. Слано и набор 14.0В. 2001 Подписано и печать 13.09.2001. Усл.печл. 1.86. Уч.-шд-л. 1.90.

Тира* 693 экз. С 2019. Зак. 845.

И ПК Издательство сгандарюв. 107076. Москва. Колоде шый пер.. 14.

Набрано it Издатсльстве ка ПЭВМ Филиал ИПК Издательство стандартов “ «ни. "Московский печатник". 103062. Москва. Лилин пер.. 6.

Плр М 0S0I02