ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ЭМБРИОНЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ
Издание официальное
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО УПРАВЛЕНИЮ КАЧЕСТВОМ ПРОДУКЦИИ И СТАНДАРТАМ Москва
УДК 636.082.4:006.354 Группа Р38
государственный СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ЭМБРИОНЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Технические условия
Cattle embryos. Specifications
OKU 98 8500
Срок действия с 01.01.91 до 01.01.96
Настоящий стандарт распространяется на эмбрионы крупного рогатого скота и устанавливает требования к свежеполученным и замороженным эмбрионам, предназначенным для пересадки жи-вотным-реципиентам.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Эмбрионы крупного рогатого скота должны соответствовать требованиям настоящего стандарта и быть получены в соответствии с правилами по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота и ветеринарно-санитарными требованиями к центрам и пунктам по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, утвержденным в установленном порядке.
1.2. Эмбрионы для пересадки должны быть получены от клинически здоровых коров-доноров в возрасте от 3 лет и старше, осемененных спермой быков-улучшателей.
1.3. Характеристики
1.3.1. Эмбрионы, пригодные для пересадки, должны быть в возрасте 7—9 сут и находиться в стадии развития ранней морулы (Mol, черт. 1—4), поздней морулы (Мо2, черт. 5—8), ранней бластоцисты (Бл 1, черт. 9—12) и поздней бластоцисты (Бл2, черт. 13—16).
1.3.2. Эмбрионы в зависимости от морфологических показателей подразделяют на «отличные», «хорошие», «удовлетворительные», «условно пригодные» и «плохие» в соответствии с требованиями, указанными в таблице.
Перепечатка воспрещена
(С) Издательство стандартов, 1990
2 Зак. 261
С 2 ГОСТ 28424-90
Черт. 3 — Морула ранняя, удовлет- Черт. 4 — Морула ранняя, условно
верительная. Неравномерные шары пригодная. Рыхлые бластомеры
дробления. Грануляция в бластомерах
ГОСТ 28424-90 С. 3
Черт. 5 — Морула поздняя, отличная
Черт. 6 — Морула поздняя, хорошая. Выступающие светлые бластомеры
Черт. 7 — Морула поздняя, удовлетворительная. Частичным зародыш. Часть бластомеров выступает и разрушена
Черт. 8 — Мсрула поздняя, условно пригодная. Грануляция значительной части комплекса
С 4 ГОСТ 28424-90
Черт. 9 — Бластоциста ранняя, отличная |
Черт. 10 — Бластоциста ранняя, хо рэшая |
Черт. 11 — Бластсцнста ранняя, удовлетворительная. Сжатие комп лекса, трещина зоны пеллюцнда |
Черт. 12 — Бластоциста ранняя, ус ловно пригодная, деформация, ежа тие клеток |
ГОСТ 28424-90 С. 5
Черт 13 — Бластоциста поздняя, отличная
Черт. 14 — Бластоциста поздняя, хорошая
Черт. 15 — Бластоциста поздняя. Черт. 16 — Бластоциста поздняя, ус-
удовлетворительная Сжатие клсточ- ловно пригодная. Сжатие клеточного
ного комплекса, незначительный скол комплекса. Скол зоны пеллюцнда
зоны
Морфологические показателя качества «кбриоко» с оценкой
Морула ранняя (Mol).
Морулз поздняя (Мо2)
Зона пеллюии-да округлой формы. без трещин и сколов, соединена с цитоплазмой перивителлн-новэго пространства; перивител-липовое пространство без цитоплазматических включений; бластомеры четкие, прозрачные, одинаковой формы и размера, расположены симметрично
Зона пеллюци-да округлой фор. мы. без трешки и сколов, соединена с цитоплазмой перивителли-нового пространства; в перивител-лниовом пространстве наличие гранул и включений. бластомеры расположены ас-симстрично. неодинаковые по размеру, немного сжаты
В стадии раннего бластоииста (Бл I) наблюдается начало образования трофобласта и эмбриобласта. видна небольшая бластополость.
Трофобласт на фоне клеточного комплекса выявляется в виде более яркого просветления
Зона пеллюии-да округлой формы или с небольшой деформацией; допускается небольшая трещина или скол; в лернвителлиисвом пространстве гранулы. включения отдельных бластомеров; бластомеры расположены ассиметричко. немного сжаты и (или) смещены относительно центра. отдельные бластомсры темного цвета, грануляция отдельных бластомеров
Трофобласт выявляется в виде яркого просветления. смешен относительно центра
Зона пеллюци-да округлой формы или деформированная. разрыв оболочки с частичным выходом бластомеров клеточного комплекса. нарушена связь с цитоплазмой перивителли-нового пространства; перивитсл-линовое пространство заполнено как отдельными, так и разрушенными бластомерами
Зона пеллюци-да округлой формы или деформированная, имеется значительная трещина или скол, частично нарушена связь с цитоплазмой периви-теллинового пространства; в пе-ривителлиновом пространстве значительное количество бластомеров; бластомсры емеше ны относительно центра, связь между отдельными бластомерэми отсутствует, пик-ноз большей части бластомеров, часть бласгомс-ров темного цвета
Трофобласт трудно различим фоне клеточного комплекса
|
Продолжение |
|
Стадия
раэаи1ия
эмбриона |
|
Морф о логич г скис |
показатели качееша эмбрионов с оценкой |
|
|
отличные |
хорошие |
удовлетворит ел ыше |
условно пригодные |
плохие |
|
Бластоциста |
Зона пеллюци- |
Зона пеллюци- |
Зона пеллюци- |
Зона пеллюци- |
Зона пеллюци- |
|
поздняя (Бл. 2) |
да округлом формы. прозрачная без трещин и сколов; перивителли-новое пространство отсутствует; бластополость большая, расширенная, прозрачная; клетки тро-фобласта четко выражены, расположены в виде полусферической цепочки по внутренней поверхности зоны пеллюцнда; эм-брнобласт округлой формы в виде компактного скопления клеток |
да округлой формы; без трещин и сколов; пернви-теллиновое пространство отсутствует; бластопо-лость большая, расширенндм. прозрачная, клетки трофоблзста четко выражены; эмбриобласт округлой формы с одной или двумя выделенными клетками клеточного комплекса |
да округлой формы. прозрачная, допускается незначительная трещина или скол; перивителлииовое пространство отсутствует. бластополость большая. расширенная, прозрачная; клетки трофоблас-та четко выражены; змбриополость округлой формы, компактная с выделенными клетками от клеточного комплекса |
да округлой формы или деформированная. имеется значительная трещина или скол; перивителлииовое пространство отсутствует. бластополость большая, расширенная с незначительными цитоплазматическими включениями; клетки тро-фобласта четко выражены, нарушена связь между отдельными клетками; змбрио-бласт деформирован с выделенными клетками клеточного комплекса |
да деформирована. имеется значительная трещина или скол; бластополость большая, расширенная. затемнена или деформированная с цитоплазматическими включениями; клетки трофоблас-та могут быть деформированы, связь между отдельными клетками отсутствует; эмбриобласт деформирован. рыхлый. часть клетки разрушена, отсутствует связь у большинства клеток |
|
1.3.3. Свежеполученные и подлежащие замораживанию эмбрионы не должны быть контаминированы патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, грибами, вирусами и другими микроорганизмами.
1.4. Упаковка
1.4.1. Каждую серию свежеполученных эмбрионов после морфологической оценки помещают в соломинки (панеты) или полиэтиленовые пробирки, содержащие питательную среду, состоящую из фосфатно-буферной среды с 20 %-ной фетальной сывороткой крови крупного рогатого скота или сыворотки крови для биотехнологических работ, или 0,4 %-ного альбумина бычьей сыворотки крови и санирующего препарата ГАММ в дозе 100 мкг/см1 2, или спермо-сан-Г1ПК в дозе 200 ЕД/см2 среды. Укупорку соломинок (иайет), пробирок проводят в соответствии с правилами, утвержденными в установленном порядке.
1.4.2. Эмбрионы, предназначенные для замораживания, после четырехкратной проводки через фосфатно-буферную среду, содержащую наиболее высокую концентрацию криопротектора 1,5 г/моль диметилсульфоксида (ДМСО) или 1,4 г/моль глицерина, 20%-ную фетальную сыворотку крупного рогатого скота или 20 %-ную сыворотку крови для биотехнологических работ и санирующий препарат, помещают в пробирки или соломинки с указанной средой, закрывают пластиковыми пробками и замораживают в жидком азоте в соответствии с правилами, утвержденными в установленном порядке.
1.5. Маркировка
1.5.1. Каждую пробирку или соломинку (пайету) маркируют, нанося несмывающейся краской номер серин и дату получения эмбрионов.
1.5.2. Пробирки, соломинки (иайеты) с замороженными эмбрионами помещают в специальные канистры, которые переносят в сосуд Дьюара по ГОСТ 9293, содержащий не менее одной трети объема азота.
ГОСТ 28424-90 С. 9
2.3. Каждая серия замороженных эмбрионов после оттаивания при подготовке к пересадке их реципиентам должна быть принята (проверена) специалистом по пересадке эмбрионов предприятия-потребителя или изготовителя.
2.4. По требованию потребителя проверку санитарного состояния эмбрионов проводит отдел биологического контроля предприятия-изготовителя или ветлаборатория (районная, областная, краевая или республиканская).
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИИ
3.1. Определение качества эмбрионов по морфологическим показателям.
3.1.1. Аппаратура, материалы и среды
Лупа бинокулярная марок МБС-9, МБС-10 или аналогичных марок.
Микроскоп марок МБИ-10, ААБИ-13 или аналогичных марок.
Термостат с температурой нагрева 37—38 °С.
Сифон или шприц марки «Рекорд» с удлиненной иглой.
Чашки Петри или часовые стекла.
Цилиндры мерные вместимостью 500 см3 по ГОСТ 1770 или флаконы вместимостью 450—500 см3.
Пипетка Пастера.
Среда фосфатно-буферная с 20%-ной фетальной сывороткой крови крупного рогатого скота или 20%-ной сывороткой крови для биотехнологических работ.
Трипсин, раствор с массовой долей 0,25 %.
Санирующие препараты.
3.1.2. Подготовка к испытанию
Растворы, полученные после вымывания эмбрионов из каждого рога матки коров-доноров, помещают с соблюдением правил ассеп-тики в отдельные стерильные э.мбриопрнемникн вместимостью 450—500 см3 (цилиндры или флаконы), которые выдерживают в термостате при 37—38 °С или при комнатной температуре не ниже 18 °С в течение 20 мин для осаждения эмбрионов. Верхнюю часть раствора удаляют с помощью стерильного сифона или шприца с удлиненной иглой, оставляя 60—100 см3 раствора. Отстой переносят в 2—3 стерильные чашки Петри диаметром 90 мм, дно которых с внешней стороны расчерчено на квадраты со стороной 1 см.
3.1.3. Проведение испытания
Качество эмбрионов по морфологическим показателям определяют у всех свежеполученных эмбрионов и замороженных эмбрионов после их оттаивания.
Эмбрионы просматривают под бинокулярной лупой при увеличении 20—28*. Определяют по морфологическим показателям эмб-
1
ПРИЕМКА
2.1. Свежеполученные и замороженные эмбрионы принимают сериями.
Под серией понимают любое количество эмбрионов, полученное от одной коровы-донор а за один технологический цикл и оформленное одним документом о качестве (сертификат, см. приложение).
2
2.2. Каждая серия свежеполученных и замороженных эмбрионов должна быть принята (проверена) на предириятии-изготови-теле специалистом этого предприятия.
