Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

18 страниц

396.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на крупный рогатый скот и устанавливает методы лабораторной диагностики лейкозов

Показать даты введения Admin

С ГОСТ 25382-82 покупают: МУ 4.2.2723-10, Методические указания по лабораторной диагностике пс..., ГОСТ 34105-2017

Страница 1

*

\J$M /

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

КРУПНЫЙ РОГАТЫЙ СКОТ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛЕЙКОЗОВ

ГОСТ 25382-82 (СТ СЭВ 2702-80)

Издание официальное

Цена S коп.


ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ Москва

Страница 2

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

Л. Г. Бурба; А. Ф. Велихов: Е. А. Дун: Л. А. Зимсвич; М. П. Кудрявцеве; 6. М. Нахмансом; Г. А. Симомян

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. № 3153

Страница 3

УДК 636 : 576.8.07 : 006.354    Группа    С79

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

КРУПНЫЙ РОГАТЫЙ СКОТ    ГОСТ

Методы лабораторной диагностики лейкозов    25332—82

Domestic animals. Methods of laboratory

diagnostics of feucosus    (CT    СЭВ    2702_80)

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 января 1982 г. N9 3153 срок действия установлен

с 01.01. 83 до 01.01. 8»

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на крупный рогатый скот и устанавливает методы лабораторной диагностики лейкозов.

Стандарт предназначается для научно-исследовательских учреждений.

Стандарт полностью соответствует С'Г СЭВ 2702—80.

I. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1.    Для гематологического исследования берут с соблюдением правил асептики пробы крови из вены животного в пробирки с антикоагулянтом—10%-ным раствором дннатрневой соли эти-леиднамннтетрауксусной кислоты (ЭДТА) — из расчета 0.02 сма на I см3 крови. Из снежей или стабилизированной крови на предметных обезжиренных стеклах, подогретых до 25вС, готовят тонкие мазки крови.

Пробы стабилизированной крови для исследования направляют в лабораторию и исследуют не позднее чем через Зб-ч после взятия. Пробы для исследований отбирают не ранее чем через 15 суток после введения животным вакцин и аллергенов, за 15 суток до «тела и через 15 суток после отела.

1.2.    Для серологического исследования пробы крови берут из вены в стерильные пробирки. При длительном хранении проб сыворотку крови отделяют от сгустка. Сыворотку хранят при температуре минус 20°С и ниже. При исследовании на наличие антител

Перелечатка воспрещена

Издгг'80 офяцмеаьао*

© Издательство стандартов, 1982

Страница 4

Стр. 2 ГОСТ 25 382—82

против антигенов онкорпавнруса крупного рогатого скота в реакции диффузной преципитации (РИД; используют плазму стабилизированной крови, взятой в соответствии с п. i.l.

1.3. Пробы, взятие для гематологических к серологически* исследований крови, маркируют и отправляют в лабораторию с сопроводительным документом, в котором указывают наименование хозяйства (отделение, ферма), номер или кличку, пол и возраст животного.

1 4. Для гистологического и цитологического исследований бе-р\т патологический материал от трупов по позднее чем через 8 ч после смерти или убоя животного. Пробы помешают в фиксирую* щий раствор в соотношении 1 :30.

Для гистологического исследования вырезают кусочки органов м тканей (лимфатические узлы, селезенка, печень, почки, сердце, мышцы, грудная кость, стенка органов пищеварения и другие тка-ин) размером 2X2X1 см. Вырезают кусочки так, чтобы рядом с нормальной тканью были участки измененной и смежной ткани. Материал для исследования помещают в герметично закрывающийся сосуд с 8—10%-ным водным раствором формальдегида. Сосуд маркируют и с сопроводительным документом направляют в лабораторию.

1.5. Для цитологического исследования готовят мазки из свежей крови н препараты-отпечатки из кроветворных и других органов, полученных при биопсии или убое животного. Для этого с помощью пупкцнонной иглы, соблюдая правила асептики и антисептики, берут у животных пунктат из костного мозга (грудная кость) и лимфоузлов и готовят мазки на предметных стеклах. Препараты-отпечатки готовят путем прикосновения предметным стеклом к поверхности разреза кусочка органа.

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1.    Гематологический метод

Сущность метода заключается в обнаружении в периферической крови повышенного количества лейкоцитов, в основном лимфоидного ряда, и слабодифференцированных клеток (родоначальные, пролнмфоциты, лимфобласты), а также полиморфных, атипичных клеток кроветворных органов.

2.1.1.    Ann аратура, материалы и реактивы

2.1.1.1.    Для проведения исследования применяют: счетчик частиц электронный;

днлютер автоматический; счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы; фильтр микропористый стеклянный по ГОСТ 23932-79; микроскопы биологические марки МБИ или МРБ по ГОСТ .8284-78;

Страница 5

ГОСТ 25382—12 Стр. 3

пипетки вместимостью J, 2, 5, 10 см3 по ГОСТ 20292-7-4; мнкропнпеткн вместимостью 0,02; 0,03; 0,05; 0,1; 0,2 см3 по ГОСТ 20292-74;

цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 500, 1000 см3 по ГОСТ 20292-74;

весы лабораторные;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75;

камеру для подсчета клеток крови (камеру Горяева, Бюркера или других марок);

аппарат для фиксации и окраски мазков па предметных стеклах;

масло иммерсионное по ГОСТ 13739--78; раствор Гимза красильный; раствор Майн-Грюнвальда красильный; раствор Тюрка;

спирт метиловый по ГОСТ 6995-77;

ксилол по ГОСТ 9949— 76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

формалин технический (формальдегид) по ГОСТ 1625-75; раствор электролита изотонический; готовят следующим образом: берут 0.9 %-ный раствор хлористого натрия, фильтруют его через микропористый фильтр (фильтр Г-4), pH контролируют индикаторной бумагой. При добавлении трис-буфера доводят pH до 6—7,2. При использовании раствора в течение более 2 ч добавляют 5 см3 35%-ного раствора формальдегида на 1000 см3 электролита.

Для эритроиитолнза используют I %-ный водный раствор сапонина. смешивая его в соотношении 1000:5 с 35 %-ным раствором формальдегида. Раствор, свободный от пены, фильтруют сразу же после приготовления;

раствор стабилизирующий; готовят следующим образом: берут 50 г динатрисвой соли этнлендиаминтетрауксусной кислоты. 50 см3 35сй-ного раствора формальдегида, 2 см3 I %-ного раствора метиленового синего и 50 см3 дистиллированной воды. Раствор нагревают до полного растворения и фильтруют через микропористый стеклянный фильтр.

2.1.2. Проведение исследования Исследование проводят путем:

подсчета количества лейкоцитов с помощью электронного счетчика частиц;

подсчета количества лейкоцитов в счетной камере; дифференцированного подсчета лейкоцитов.

2.1.2.1. Подсчет количества лейкоцитов с помощью электронного счетчика частиц проводят в соответствии с правилами, прилагаемыми к каждому аппарату.

Страница 6

Стр. А ГОСТ 1JMI-8J

2.1.2.2. Подсчет количества лейкоцитов в счетной камере проводят в соответствии с ее техническими параметрами.

2.1.23. Дифференцированный подсчет лейкоцитов (определение лейкоцитарной формулы) проводят в окрашенном мазке под микроскопом с иммерсионным объективом с увеличением 90х. При этом подсчитывают не менее 100 клеток, просматривая равномерно все участки мазка. Дифференциальный подсчет лейкоцитов проводят в случае, если установленное количество лейкоцитов в 1 см3 крови превышает показатели, указанные для здоровых животных с учетом их возраста по «лейкозному ключу».

Результаты исследований оценивают по «лейкозному ключу» в соответствии с требованиями, указанными в таблице.

Boipact Ж4В9ЩЫХ. лет

Г«м**молпес*и

вгподелритмьяы*

животные

Гематолог mecxu в оло j петель* до по заболеванию леЬкеаам животные

Гематологически оолохеитедьиые >0 заболеванию лейкозом животные

Количество лейкоз 1ГТОИ • 1 см* крови

Абсолютное количество лимфоцитов » 1 см1 кроли

Абсолютно* количество лимфоцитов в 1 см1 крови

Co. 1 до 2

До 12000

От 9000 до 11000

Св. 11000

» 2 » А

> 11000

> ё000 » 10000

» 10000

» 4 » 6

» 10000

» С500 » 9000

» 9000

* 6

» 9001)

* 5500 * 8000

» tooo

2.1.3. Обработка результатов

Если количество лейкоцитов у животного будет ниже числа, •указанного 8 таблице, то результат исследования на лейкоз считают отрицательным (—).

Если число лимфоцитов будет в пределах норм, указанных в таблице, то результат оценивают как подозрительный ( + ). если ниже, чем наименьший показатель о таблице, то результат оценивают как отрицательный (—). Если число лимфоцитов в 1 см3 крови будет больше, чем указано п таблице, то результат оценивают как положительный ( +).

Животных, подозреваемых в заболевании лейкозом, подвергают двух-трехкратному исследованию с интервалом между ними 30 дней. Если при втором и третьем дополнительных исследованиях будут получены отрицательные результаты, таких животных признают здоровыми, а при установлении изменений в крови, характерных для больных или подозреваемых в заболевании, животных считают больными.

Страница 7

ГОСТ 2S342—82 Стр. 5

2.2. Цитологический метод

Сущность метода заключается в обнаружении в периферической крови и кроветворных органах (красный костный мозг, лимфатические узлы, селезенка) накопления морфологически измененных, преимущественно незрелых (родоначальные, слабодиффе-ренинрованиыс, лимфобласты, пролнмфоцнты, м пел области и др.) или патологических (опухолевых) клеток.

2.2.1.    Аппаратура и реактивы

2.2.1.1.    Для проведения исследований применяют аппаратуру и реактивы, указанные в п. 2.1.1, и дополнительно:

иглу для пункции кроветворных органов; шприц вместимостью 20 см3 по ГОСТ 18137-77; скальпель по ГОСТ 21240-77; ножницы;

натрий лимоннокислый по ГОСТ 22280-76, 3,8 %-ный раствор; спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67.

2.2.2.    Проведение исследования

2.2.2.1.    Мазки, приготовленные на предметных стеклах нз свежей кроии, пунктатов кроветворного костного мозга, селезенки, лимфоузлов и других органов и опухолей, а также препараты-отпечатки. приготовленные нз материала, взятого при биопсии, или нз кусочков органов при вскрытии животного, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Паппенгейму и исследуют под микроскопом с иммерсионным объективом с увеличением 90х.

2.2.3.    Обработка результатов

2.2.3.1.    Результат исследования считают положительным:

на лейкоз — прн обнаружении в мазках крови более 3 % и в кроветворных органах более 10% родоиачзльных слабодифферен-цнрованных (пролнмфоцнты, лимфобласты, миелобласты) или опухолевых клеток при нормальных показателях абсолютного количества лимфоцитов;

на слабодифференцированную форму лейкоза — прн обнаружении в гемограммах и цитограммах кроветворных органов повышенного процента родоначальных, слабоднфферениированных клеток макро-, мезо- и микрогенерацин лимфобластов и пролнмфоцитов;

на лимфоидный лейкоз — если отмечают увеличение количества клеток лимфоидного ряда различной степени зрелости (пролимфо-ингы и лимфобласты) в мазках крови, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга (лимфоидная метаплазия) и других органах;

на гематосаркому (лнмфосаркомы различных степеней зрелости) — если в гемограммах и цнтограммах превалируют атипичные (опухолевые) клетки, которые отличаются от нормальных по форме. величине, структуре и тождественны клеткам, образующим опухоли;

на лимфогрануломатоз — при установлении в мазках крови

лиыфеиитоза и препаратах пз лимфатических узлов — лимфоид-

Страница 8

Стр. 6 ГОСТ 253«2—82

ной гиперплазии, с обнаружением в них эозинофилов, нейтрофилов, базофилов, фибробластов, плазматических, атипичных, недифференцированных и гигантских клеток Березовского-Штернберга.

2.3. Серологический метод

Сущность метода заключается в выявлении в сыворотке крови животных с помощью реакции иммуноднффузни (РИД) преиипн-тнрующих антител против антигенов онкориавируса типа С крупного рогатого скота.

2.3.1.    Аппаратура и материалы

2.3.1.1.    Для проведения исследования применяют:

чашки биологические Петри;

рН-метр;

штамп для приготовления лунок;

баню водяную, обеспечивающую температуру нагрева 50°С j» более;

раствор буферный, pH 7,2;

агар очищенный по ГОСТ 17206-71;

антиген двойной, состоящий из гл и коп роте и дного (гп) и поли-летндиого (р24) антигенов онкорнавнруса типа С крупного рогатого скота.

Антиген хранят при минус 20 °С или лиофнлнзнруют.

Перед постановкой РИД приготовленный антиген сравнивают со стандартным антигеном, проверенным на специфичность и активность;

сыворотку положительную с преципитпрующими антителами с титром антител к гп-антигену от 1:16 до 1 :32 в РИД. Сыворотку получают от естественно или экспериментально зараженного крупного рогатого скота или овец;

сыворотку контрольную отрицательную.

2.3.2.    Подготовка к исследованию

2.3.2.1.    Расплавленный 0,8 %-ный раствор агара наносят равномерным слоем толщиной 2—3 мм на плоские стекла, чашки Петри или пластинки. После застывания агара специальным штампом делают лунки, не допуская образования трещин между ними и отслоения агара от дна чашки. Если в лунках до постановки реакции скапливается жидкость, то ее удаляют. Лунки для иммунодиффузии сразу после их образования закапывают агаром для предотвращения проникновения антигена нлн сыворотки под агаровый слой.

2.3.3.    Проведение исследования

2.3.3.1.    Антиген и контрольную сыворотку вносят в лунки в соответствии с чертежом. Антиген (А) вносят в центральную лунку* две диаметрально противоположные лунки заполняют контрольной сывороткой (КС). Оставшиеся четыре периферические лунки (1. 2, 3 ,4) заполняют испытуемыми сыворотками. Точкой, относи-

Страница 9

ГОСТ 2J332—>2 Стр. 7

тельно которой идет нумерация лунок с испытуемыми сыворотками. служит отметка в геле верхней части чашки.

Для внесения компонентов в лунки используют стерильные пн* летки, не допуская при этом контаминацию реагентов н сыоороток бактериями и другими веществами. Лунки заполняют до исчезновения мениска. После заполнения всех лунок чашки закрывают крышками и хранят во влажной камере при температуре от 18 до 27X.

Реакцию учитывают через 48—72 ч. Чашки просматривают на темпом фоне, направляя сфокусированный луч осветителя на дио чашки иод углом 30—45°. Реакцию оценивают по контрольной линии преципитата. Если она отсутствует или слабо выражена, то реакцию считают неудавшейся и ее следует повторить. Линия преципитации, формируемая контрольной сывороткой и антигеном, должна быть четкой, иметь форму прямой, кониы которой должны доходить до лунок с испытуемыми сыворотками, располагаться на одинаковом расстоянии от лунок (Л и КС).

Схема постановки и оценки рсакиии иммунодиффузии в геле агара (РИД)

/—!>гмnpvHiuw* сыиормти: I—яололн-тедьио ycairpj ими сиюротя*; i-c.taCono-ojmttr.!»..

«!о рсагмрукидпп сыворотка; <-тио>*ит<мьпо !*»•'»• эующая сюоротка со второй лотнкЯ преиипитацн»;

J- рсмсоооложяюмоо реагирующая cuboputkj: в—по-.lOAxiejbud pcarupvmisaa cuucv-отка с исспе-4Ифя-■iCCKOrt .гч,м:й срецнаитдп^х, 7 -отрицательно yet-(#р>к.гцая 1ицл|:.л»а с кмпоцнфшоскпя диаивЗ iijt-циплтиимп; Н— о'рииз^ьио iie«i круюшаа сыворотка с jOHofi опалесиеяцни; А—антик» оик-лхмвоирус* ч крупною гогатого скот»; КС—ионтрэдъияя сыворотка прошв r.rii«;oiii«iTttii»oto вмтитеи» оикорнаяирка ►ргп :ого рогатого скота

2.34. Обработка результатов

2.3.4.1. В зависимости от наличия и тнтра специфических антител против антигенов онкорнавнруса сыворотки квалифицируются на положительно, отрицательно и сомнительно реагирующие.

Положительно реагирующей считают сыворотку:

если между лунками с антигеном и испытуемой сывороткой образуется полоса преннпнтацнн, которая соединяется с контрольной линией,--позиция 2 (см. чертеж);

Страница 10

Op. 8 ГОСТ 25382-92

если линия преципитации между лунками с сывороткой и антигеном отсутствует, но контрольная линия образует вблизи лункн с испытуемой сывороткой изгиб, направленный в сторону лунки с антигеном. —позиция

если образуется вторая линия прецпинтацки, которая располагается ближе к лунке с испытуемой сывороткой и указывает на наличие в сыворотке преиипнтнруюншх против второго антигена антител (р24) онкорнавнруса типа С крупного рогатого скота,— позиция 4\

если контрольная линия значительно укорочена со стороны лунки с испытуемой сывороткой и имеет размытый изгиб в сторону лункн с антигеном или расположена очень близко к лунке с антигеном — позиция 5;

Примечание. Более четкая линия образуется, еедк такую сыворотку разбавить п соотношении I : 4 и.тл 1:8;

если образовалась нсспсцифнчеекая линия преципитации — позиция 6.

Отрицательно реагирующей считают сыворотку: если контрольная линия преципитации продолжается до лунки с испытуемой сывороткой без загибов или с небольшим загибом в сторону лунки с контрольной сывороткой — позиция /;

еслу сформировалась иеспецифнческая линия преципитации — позиция 7; при этом она перекрещивается с контрольной линией.

Сомнительно реагирующей считают сыворотку, если контрольная линия преципитации плохо просматривается вследствие наличия неспенифнческой линии преципитации. В этом случае проводят повторное взятие крови у этого животного и исследование сыворотки.

Если сомнительная реакция была зафиксирована дважды, с интервалом 1 месяц между исследованиями, сыворотку считают положительно реагирующей.

Сомнительная реакция может быть в результате подтекания положительно реагирующей сыворотки под слой агара к лунке с от-рицакльно реагирующей сывороткой или контаминации образца отрицательно реагирующей сыворотки — положительно реагирующей. В этом случае исследование повторяют.

2.4. Гистологический метод

Сущность метода включается в обнаружении у больных лейкозами животных разрастаний (пролиферация), нарушивших нор-мал1Ноо созревание и диффс-ренцировку кроветворных клеток, как в органах кроветворения (костный мозг, селезенка, лимфатические узлы), так и в соединительной ткани других органов.

2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы 2 4 1.1. Для проведения исследования применяют: микротом для парафиновых срезов; микротом для целлоидиновых срезов:

Страница 11

ГОСТ 25382—82 Стр. 9

микроскоп по ГОСТ 8284-78;

• стекла предметные и покровные по ГОСТ 9284-75; блоки деревянные или из другого материала; термостат, обеспечивающий регулирование температуры 80 °С; парафнн с точкой плавления 58 С:

формальдегид 8 -10%-иый, нейтральный, водный раствор; спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67; целлоидин: 2—3, 4—5 и 8 10 %-ные растворы в эталоне с эфиром сернокислым в соотношении 1:1; хлороформ но ГОСТ 20015-74; бальзам пихтовый по ГОСТ 2290-76; ксилол по ГОСТ 9949-76;

кислоту соляную по ГОСТ 3118-77, 1 %-ный спиртовым раствор;

эозин, 0,5 %-ный раствор или гематоксилин 10 %-ный раствор; кислоту азотную по ГОСТ 4461-77, 5 %-ный раствор; эфир сернокислый; карбол-ксилол.

2,4.2. Подготовка к исследованию

2.4.2.1.    Отобранные пробы органов фиксируют в формальдегиде в течение 48 ч и затем промывают п течение 10—24 ч в проточной поде. Затем из кусочков органов вырезают пластинки толщиной 3 мкм, площадью 1,5--2,5 см2, которые последовательно выдерживают в этиловом спирте с Концентрацией 70%, 80%, 96%.

В спирте каждой указанной концентрации обезвоживание длится 24 ч при температуре от 15 до 20X.

2.4.2.2.    Для приготовления и окраски целлоидиновых срезов обезвоженные кусочки патологического материала заключают в целлоидин. Вынуше из раствора целлоидина кусочки органов наклеивают на деревянные или из другого материала блоки, подсушивают и пометают в Панку со спиртом 70%-нон концентрации. Из кусочков органов, наклеенных на блоки, приготовляют целлоидиновые срезы толщиной 5—10 мкм и окрашивают их гематоксилин-эозином или другими красителями, заключают в бальзам и покрывают покровным стеклом. Вместо целлоидиновых можно готовить парафиновые срезы.

2.4.2.3.    Дли приготовления и окраски парафиновых срезов кусочки органов, обезвоженные согласно п. 2.4.2.1, заливают в парафнн. Из парафиновых блоков посредством парафинового микротома готовят срезы толщиной 3—5 мкм. которые для расплавления помешают в теплую воду. Затем срезы переносят на предметные стекла, сушат в термостате при температуре 37- 40'С и окрашивают гематоксилин-эозином или другим красителем.

2.4.3.    Проведение исследования

Приготовленные срезы просматривают под микроскопом при естественном пли искусственном освещении. При окуляре с увели-

Страница 12

Op. Ю ГОСТ 25382—S2

чснием 10ч н объективе с увеличением 10х определяют общую структуру исследуемых органов с учетом изменения ткани и отдельных ее участках в результате инфильтратнвных процессов (состояние фолликулов, межфолликулярных зон в селезенке и лимфатических узлах, присутствие клеток в просвете сосудов, паренхиме и интерстнцни органов и пр.).

При окуляре с увеличением 20х и объективе с увеличением 40х выявляют детали изменении, обращая внимание на характер пролиферирующих клеток (тип. степень днфферениировки, зрелость) и интенсивность (выраженность) патогистологическнх изменений. Одновременно определяют наличие сопутствующих заболеваний неленкозного характера с целью проведения дифференциальной диагностики или признаков, отягощающих основное заболевание (отеки, дистрофии, некрозы, кровоизлияния н прочее в скелетной мускулатуре, сердце, печени, почках и других органах).

2.4.4. Обработка результатов Результаты анализа считают положительными: на лимфоидный лейкоз —если в селезенке и лимфатических узлах наблюдают полное стирание рисунка за счет диффузной’инфильтрации клетками лимфоидного ряда, среди которых в'основном выявляют зрелые лимфоциты, в меньшем колнч<-стие обнаруживают пролнмфоциты. лимфобласты, среди которых иногда отмечают ретикулярные клетки;

в костном мозге строма сохранена, выявляется значительное истончение и рассасывание балок, скопления лимфоцитов могут располагаться в виде очагов или диффузно, заполняя все Kocfno-мозговые пространства (лимфоидная метаплазия); в почках, п’сче-HII. сердце, сычуге и других органах обычно выявляют скопления лимфоцитов в просвете капилляров и инфильтрацию лимфоидными клетками интерстициальной ткани;

на слабоднфференцированнын лейкоз (гемоцитобластоз) ~ если в костном мозге, селезенке, лимфатических узлах и другил органах наблюдают очаговые и диффузные пролифераты. клеточный состав которых представлен недифференцированными или слабо-дифференцированными клетками типа гемоиитойласта (родоиа* чальная клетка);

на мнелоиднын лейкоз —если обнаруживают в селезенке незрелые элементы гранулоцитарного ряда, мсгакарпоииты. клетки типа гемоиитобластов, ретикулярные клетки, фрагментацию и распад аргирофнльных волокон, и костном мозге — скопления зрелых и незрелых клеток гранулоцитарного ряда; в лимфатических узлах, печени. почках, легких и других органах наблюдают очаговые Диффузные разрастания миелондных элементов;

на лимфосаркому (слабодифференцированная лимфЬблас1*Нче-ская, лимфоцитарная, гистиоинтарная)—если в лимфатических узлах, органах пищеварения, воспроизведения, сердечной,- <*келег-

Страница 13

гост ism— 8i стр. 11

ной мышцах, других органах н тканях отмечают разрастание опухолей нз недифференцированных или слаболифференцированиых клеток лимфоидного типа (селезенка н костный мозг не изменены);

на лимфогранулематоз — если выявляют гиперплазию лимфоидных клеток или полиморфно-клеточную пролиферацию, склеротические изменения и некрозы а лимфатических узлах, селезенке, печени и других органах; среди полиморфных клеток ретикулярного типа выявляют многоядерные гигантские клетки типа Березовского-Штернберга, плазматические клетки, эозннофилы и нейт-рофилы в различной степени зрелости, а также фибробласты.

Страница 14

Изменение «>& 1 ГОСТ 25382-82 Крупный рогатый скот. Мстогы лабораторной диагностики лейкозов

Утверждено и введено в действие Постановлением Госчхаиствемного комитета СССР по стандарта* от 23.06.Ь9 .4 1957

Дат* авсхсиия 01 01.90

Но обло.*кс и первой страшисс стандарта после обо 5н;-е!:-*.я    <    С7    СЭВ

27<V2—80> дополнить обозначением. СТ СЭВ 6284—88.

Раздел ! дополнить пунктом — 16- <1.6. Для HMnvHo6crv*:»THoro анализа ?i ледьлуют свежие пробы кров к. но не ранее, чем через cvtkr после агатия. >?едостат<ишо просветленные? сыворотки kdobh цеитриф\гигvk - При длитель-» м .хранения проб сыворотку крови отделяют от кровяного сгустка. При хранении проб при плюс 4 сС сыворотки годны к исследованию п те^ке 10 cvt ТТри .хранении скноротки при температуре минус 20 X срок ппггодностн сыво-чтин ли исследования — I год. Рапложишииеся и силъчо геиссизиоовзнныс <к*поротни для исследования не пригодны».

Раздет 2 дополнить пунктами - 2 5—2.5 3: *2 5. И м м v к •> * е г м е и т н ы ft метод

Сущность ме-ола заключается в адсорбции антигеном -г~типовирусмых :*:Tii 1с*.! га поверхности пластины при инкубировании HenUTvevofl сыворотки с ►нтмвндовычи антителами, меченными (ферментом, с погледчдаей модификацией субстрата.

2 5 I Аппаратура, материалы, реактивы

Фотометр одно- или многоканальный с минимальны* *геделом показа-+г-х 1,5 шетиициоииых единиц и с автоматической регистр га ж.: ге-лльтэтов.

Автоматическое или полуавтоматическое оборудование д:9 промывания

гльстми

Термостат, обеспечивающий температуру (374:0.5) вС

Мнкропвлегки одноканальные автоматические.

Мнкропнпеткн восьми* или двенпдиатнканальные автомат-* ;Mt.

Мнкротнтровэльные пластмассовые оласгины с 96 лунками.

Стаканы химические вместимостью 500 см5 по ГОСТ 1770— 74.

Колби мерные вместимостью 100 см* по ГОСТ 1770--74

Колбы Эрленмейсрз вместимостью 100 см3 по ГОСТ 2533£—52.

Пробирки по ГОСТ 25336-82.

(П&до'ХЪМ сх. с 224)

Страница 15

(Прободение изменения к ГОСТ 25382-82>

Пипетки /рзд>преданные вместимостью 1 и J0 см’ по ГОСТ 202У2—7'..

Буферный раствор карбонатный с pH 8.8—9.6.

Буферный раствор физиологический фосфатный с pH 7.2—7,4. содержащий (Oii.< 20 или 80 (промывающий раствор).

Раствориюль • г.ромываюший раствор, содержащий инертный белок

Aii tit ген ВЛКРС для иммунофермеитяого а н ап та (ИФД), изготовлен нмй л\ культуральной жидкости инфицированной ВЛКРС культуры клеток селезенки ягнят >мбриО«Ов (KLS) или и очки ягняг-эмбрноиов (FLK). содержащий компоненты вируса ОР 51 н р 24. разведенный в карбонатном буферном мы* воре.

Сыворотка контрольная положительная, разведенная в растворителе.

Сыворотка контрольная отрицательная, представляющая собой смесь ке менее чем из 10 отрицательных сывороток крупного рогатого скота, разведен чая в растворителе

Коньюгат — антитс.-а против иммуноглобулинов крупного рогатого скота меченные пероксндазоЛ или другим ферментом, разведенные в растворителе

Испытуемая сыворотка из кропи крупного рогатого скота.

Субстрат ферментативной реакции.

2 5 2. Проведение исследования

В лунки микротитровальной пластины (панели) вносят по 0.05 или 0.1 или Э.2 см» раствора антигена. Пластину закрывают и инкубируют в течение !8 i во влажной камере при температуре плюс 4 ‘С,

После этого пластину четыре раза промывают физиологическим фосфатным буферным раствором так, чтобы лунки заполнялись полностью выдерживают з течение 3 мин и затем раствор кз лунок тщательно удаляют.

Готовят исходные разведения испытуемых сывороток.

Испытуемые сыворотки в исходном разведении вносят параллельно а две соседние лунки микротитровальной пластины в количестве 0.05 или 0.1 или 02 см-’ Таким же способом в каждую пластину вносят разведенные контрольные положительную и отрицательную сыворотки. Не каждой пласгине оставляют несколько лунок заполненных только растворителем (без сыворотки» Количество лунок с растворителем на пластине определяется конструкцией фотометра и используется для установки нулевого положения шкалы прибора.

Пластину закрывают и инкубируют при температуре от 20 до 37 ®С во влажной камере в течение 60—120 мин

(Продолжение сл. с. 225 J

224

Страница 16

(Продолжение изменения к ГОСТ ?5.?М—92)

Промывают пластику четыре ра^а прокывакхцим раствором.

D лунки вносят по 0,05 или 0,1 или 0/2 си* раствор» конъюгата, пластины закрывают и пакубируюг при температуре от 20 до 37 вС во влажной номере в Т€чс:*пс 60- 120 мин.

Примьвают глаепшу четыре ржа промывающим расттютюч li к.1ж*уи .1 ywv вискяг по 0.05 или 0.!. или 0.2 см1 раствора субстрата и нкк)(• i;iyк>» I ptf rrwivprrype or 20 до 37СС и течет*: 50—60 ыич. При жпб.чи. даисс’-и о ;i>nkh добавляют карбонатный буерный раствор, останавливающий

(Продолжение см. с. 2261

Страница 17

(Продолжение изменения к ГОСТ 25382—Я2Г'

реакцию, н измеряют оптическую плотность в каждой лунке к* Фотометре яри-длине полны, характерной для выЛрашюго субстрата.

2 53 Обработка резулиитоя

Результат считают положительным. Сч.’и оптическая плотность исследуемой пробы I» обеих лупках и два или Солее раза превышает ср-едтою арифметическую величину оптической п.ючрОС’и для отрицательной пробы в соответ*

СТПУИЧЦГМ рл ИСЛС'ПП».

(ИУГ. .V» 1C! !<*<> ;•)

Страница 18

Ролах гор //. Г.- Чистякова Технический редактор Ч И. Малжова Корректор Е. И. Евтеева

«.даю л иаС. вШЮ Подп. с nev ав 10-R2 1,0 о я 0.7в уч.-иэа. л. Тир 100(0 Цеча

лов.

Орд*и* «Зме Поч«та» »Г>дат«л1.стйо етаиавртов, 12867, Мссюо. НоиовресвеискиИ пев. а Тиа, «Мосшжсшв иочгтмао. Москва. Лилия пер . 6 Зек. И»