Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

11 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ 24556-89 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на продукты переработки плодов и овощей и устанавливает методы определения витамина С: титриметрический с визуальным титрованием — для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих светлоокрашенные экстракты; титриметрический с потенциометрическим титрованием и фотометрический для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих темноокрашенные экстракты; титриметрический с цистеином и флуорометрический для определения суммы аскорбиновой и дегидроаскорбиновой кислот.

  Скачать PDF

Заменяет ГОСТ 24556-81

Переиздание. Апрель 2003 г.

Ограничение срока действия снято: Протокол № 4-93 МГС от 21.10.93 (ИУС 4-94)

Оглавление

1 Метод отбора проб

2 Титриметрический метод

2.1 Сущность метода

2.2 Аппаратура, материалы и реактивы

2.3 Подготовка к испытанию

2.4 Проведение испытания

2.5 Обработка результатов

3 Фотометрический метод

3.1 Сущность метода

3.2 Аппаратура, материалы и реактивы

3.3 Подготовка к испытанию

3.4 Проведение испытания

3.5 Обработка результатов

4 Титриметрический метод с использованием цистеина

4.1 Сущность метода

4.2 Аппаратура, материалы и реактивы

4.3 Подготовка к испытанию

4.4 Проведение испытания

4.5 Обработка результатов

5 Флуорометрический метод

5.1 Сущность метода

5.2 Аппаратура, материалы и реактивы

5.3 Подготовка к испытанию

5.4 Проведение испытания

5.5 Обработка результатов

Показать даты введения Admin

М Е Ж Г

ОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА С

Издание официальное

ИНК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ Москва

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ

Методы определения витамина С    ГОСТ

24556-89

Products of fruits and vegetables processing.

Methods for determination of vitamin C

MKC 67.080.01 ОКСТУ 9109

Дата введения 01.01.90

Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки плодов и овощей и устанавливает методы определения витамина С: тнтриметрическнй с визуальным титрованием — для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих светлоокрашенные экстракты: титриметрический с потенциометрическим титрованием и фотометрический для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих темноокрашенные экстракты; титри метрический с цистеином и флуорометрнческий для определения суммы аскорбиновой и дегилроаскорбиновой кислот.

Методики предназначены для определения витамина С в продуктах с массовой долей не менее I • 10“3 %; при использовании флуорометрнческого метода — не менее 2.5 • 10~3 %.

I. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ

Отбор и подготовка проб к испытанию — по ГОСТ 26313.

2. ТИТРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

2.1.    Сущность метода

Метод основан на экстрагировании витамина С раствором кислоты (соляной, метафосфорной или смесью уксусной и метафосфорной) с последующим титрованием визуально или потенциомет-ричсскн раствором 2.6-дихлорфснолиндофенолята натрия до установления светло-розовой окраски.

2.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104*. 1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г и допускаемой погрешностью ± 0,01 г.

Гомогенизатор.

pH-метр-м идл и вольтметр лабораторный для измерения pH и окислительно-восстановительных потенциалов с диапазонами от минус I до плюс 14 мВ и погрешностью не более ±0.05 при измерении pH и диапазонами от минус 100 до плюс 1400 мВ и погрешностью не более ± 5 мВ при измерении окислительно-восстановительных потенциалов. При измерении окислительно-восстановительных потенциалов используют электроды: измерительный — платиновый, вспомогательный — хлорсереб-ряный.

Мешалка магнитная с плавным регулированием частоты вращения.

Секундомер с погрешностью 0,2 с.

Воронки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 диаметром от 5 до 10 см.

Колбы мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 100,500, 1000. 2000 см3.

• С I толя 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).

Издание официальное    Перепечатка    воспрещена

© Издательство стандартов. 1989 © ИПК Издательство стандартов, 2003

ГОСТ 24556-89 С. 2

Колбы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 50,100, 250 см3.

Микробюретка по НТД с иеной деления не более 0,01 см3.

Палочки стеклянные.

Пипетки мерные лабораторные стеклянные по НТД исполнений 1.4 и 5 1-го класса точности вместимостью I см3; исполнений 1,4 и 5, I и 2-го классов точности вместимостью 2 см3; исполнений 2,3.6 и 7, I и 2-го классов точности вместимостью 5, 10. 20, 25 см3.

Стаканы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 50,100,1000 см3.

Ступка и пестик лабораторные фарфоровые по ГОСТ 9147 соответственно с наружным диаметром 70 или 90 мм и высотой 90 мм.

Цилиндры мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 100, 250 см3.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Песок кварцевый очищенный и прокаленный по ГОСТ 28561 п. 2.2.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Ацетон по ГОСТ 2603.

2,6-дихлорфе нол индофенол яг натрия, раствор массовой концентрации 0,250 г/дм3.

Кислота аскорбиновая должна соответствовать требованиям Государственной фармакопеи СССР. иэд. X. растворы массовыми концентрациями 1.0 и 0.1 г/дм3.

Кислота азотная по ГОСТ 4461 плотностью 1,41 г/см3, раствор с объемной долей 25 %.

Кислота метафосфорная по ГОСТ 841, растворы с массовой долей 3 и 6 %. Раствор с массовой долей 3 % готовят вдень испытаний разбавлением раствора с массовой долей 6 %. Раствор с массовой долей 6 % хранят в холодильнике в течение 10 дней.

Кислота соляная по ГОСТ 3118 плотностью 1,19 г/см3, раствор с массовой долей 2 %.

Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61 и раствор с массовой долей 3 %.

Кислота хлорная, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм3. Готовят перед обработкой электродов.

Кислота этилсндиаминтетрауксусная или двунатриевая соль кислоты, растворе массовой долей

5%.

Калин йодистый по ГОСТ 4232, раствор с массовой долей I % в растворе уксусной кислоты с массовой долей 3 %. Готовят перед обработкой электродов.

Натрий уксуснокислый плавленый, насыщенный раствор, готовят следующим образом: 200 г соли растворяют в 300 см3 волы.

Формальдегид, раствор с массовой долей 36—40 %.

Допускается применение импортной аппаратуры, лабораторной посуды и реактивов по классу точности и качеству не ниже отечественных.

Для проведения испытания, если нет других указаний, применяют реактивы квалификации «чистый для анализа» (ч.д.а.) и дистиллированную воду или воду эквивалентной чистоты.

2.3. Подготовка к испытанию

2.3.1.    Приготовление экстрагирующего раствора

В качестве экстрагирующего раствор;! используют растворы кислот — соляной с массовой долей 2 %, метафосфорной с массовой долей 3 % или смеси уксусной и метафосфорной кислот, которую готовят следующим образом: 15 г метафосфорной кислоты растворяют в 250 см3 дистиллированной воды, прибавляют 40 см3 ледяной уксусной кислоты, доводят водой до объема 500 см3, перемешивают и фильтруют в склянку с притертой пробкой. Хранят в холодильнике не более 10 дней.

2.3.2.    Приготовление стандартных растворов аскорбиновой кислоты

Для приготовления раствора аскорбиновой кислоты концентрации 1,0 г/дм3 взвешивают 0,1000 г аскорбиновой кислоты с погрешностью не более ± 0,0001 г, растворяют в экстрагирующем растворе в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки тем же раствором и перемешивают.

Для приготовлення раствор;! концентрации 0.1 г/дм3 вносят пипеткой 10 см3 раствора аскорбиновой кислоты концентрации 1.0 г/дм3 в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки экстрагирующим раствором и перемешивают.

Растворы аскорбиновой кислоты неустойчивы, поэтому их готовят перед проведением испытания.

2.3.3.    Приготовление раствора 2,6-днхлорфенолиндофенолята натрия и определение его титра

0,05 г 2.6-днхлорфенолиндофенолята натрия растворяют приблизительно в 150 см3 горячей

воды, предварительно прокипяченной в течение 30 мин или содержащей 0,042 г двууглекислого натрия, охлаждают до комнатной температуры, доводят до объема 200 см3 той же охлажденной водой, перемешивают и фильтруют в темную склянку. Раствор хранят в холодильнике не более 10 дней.

Титр раствор;! 2.6-днхлорфеналнндофсналята натрия устанавливают по стандартному раствору

аскорбиновой кислоты концентрации 1,0 и 0.1 г/дм3 вдень проведении испытания. Для этою в две колбы вместимостью 50 или 100 см3, в которые предварительно прибавлено по 9 см3 волы, вносят пипеткой по I см3 раствора аскорбиновой кислоты и быстро титруют раствором 2,6-дихлорфено-линдофенолята натрия до светло-розовой окраски, не исчезающей в течение 15—20 с.

Одновременно проводят контрольное испытание. Для этого в колбу вместимостью 50 или 100 см3 вносят I см3 экстрагирующего раствора. 9 см3 дистиллированной воды и титруют раствором

2,6-дихлорфенолиндофснолята натрия.

Титр раствор;» 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия в граммах аскорбиновой кислоты, эквивалентного одному кубическому сантиметру раствора 2,6-дихлорфенолнндофенолята натрия, вычисляют по формуле

где т — масса аскорбиновой кислоты, содержащаяся в I см3 стандартного раствора, г;

У, — объем раствора 2,6-дихлорфенолнндофенолята натрия, израсходованный на титрование стандартного раствор;! аскорбиновой кислоты, см3;

V2 — объем раствора 2.6-ди.хлор<|>енолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, см3.

2.3.4.    Приготовление раствора ацетатного буферного, с pH 4 готовят следующим образом: растворяют 300 г безводного уксуснокислого натрия в 700 см3 дистиллированной воды, добавляют 1000 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают и с помощью pH-метра устанавливают pH 4, добавляя, при необходимости, снова кислоту.

2.3.5.    Подготовка электродов для потенциометрического титрования

Измерительный платиновый электрод помещают в стакан вместимостью 50 см3 с раствором азотной кислоты, кипятят от 5 до 10 мин, промывают дистиллированной водой и оставляют в воде от 2 до 3 суг. Затем измерительный и вспомогательный электроды опускают в стакан вместимостью 100 см3 с раствором хлорной кислоты и замыкают накоротко (т.е. соединяют клеммы между собой). Через 2 ч электроды вынимают, не размыкая, промывают дистиллированной водой и помещают в стакан вместимостью 50 см3: измерительный — с раствором йодистого калия, вспомогательный — с дистиллированной водой. Через 15 мин электроды размыкают, измерительный электрод промывают дистиллированной водой.

Обработке подвергают электроды, нс бывшие в употреблении, или после перерыв;! в работе более 6 мес. Хранят в стакане с дистиллированной водой.

2.4. Проведение испытания

2.4.1.    Экстрагирование

Для приготовления экстракта навеску пробы массой от 5 до 50 г взвешивают с погрешностью ±0,01 г.

2.4.1.1.    Для экстрагирования вшамина С из сухих продуктов навеску пробы от 5 до 10 г растирают в ступке с небольшими количествами экстрагирующего раствора кислоты или смеси кислот (нс менее I см3 раствора на I г пробы) и песка, переносят в мерную колбу или мерный цилиндр вместимостью 100 см3, смывая ступку и пестик небольшими порциями экстрагирующего раствора до тех пор, пока объем нс достигнет метки. Содержимое выдерживают в течение 10 мин, перемешивают и фильтруют.

2.4.1.2.    Для экстрагирования витамина С из продуктов плотной консистенции навеску пробы от 5 до 50 г гомогенизируют нс более 2 мин с небольшим количеством экстрагирующего раствора (не менее I см3 раствора на I г пробы) и переносят в мерные колбу или цилиндр вместимостью 100 см3, смывая гомогенизатор небольшими порциями экстрагирующего раствора до тех пор, пока объем не достигнет метки. Содержимое выдерживают в течение 10 мин, перемешивают и фильтруют.

2.4.1.3.    Для экстрагирования витамина С из жидких продуктов навеску пробы от 5 до 50 г переносят в мерные колбы или цилиндр вместимостью 100 см3, смывая стенки стакана небольшими порциями экстрагирующего раствора до тех пор, пока объем не достигнет метки. Содержимое выдерживают в течение 10 мин, перемешивают и фильтруют.

2.4.1.4.    При исследовании продуктов, содержащих диоксид серы (SO,), навеску пробы от 5 до 50 г обрабатывают в зависимости от вида продукта, как указано в пп. 2.4.1.1—2.4.1.3, переносят в мерные колбу или цилиндр вместимостью 100 см3, добавляют ацетон в объеме, равном '/5 части массы навески, перемешивают доводят до метки экстрагирующим раствором. Содержимое выдерживают 10 мин, снов;! перемешивают и фильтруют.

ГОСТ 24556-89 С. 4

2.4.1.5.    При исследовании продуктов, фасованных в металлическую тару, навеску пробы от 5 до 30 г обрабатывают в зависимости от вида продукта, как указано в пп. 2.4.1.1—2.4.1.3, переносят в мерные колбу или цилиндр вместимостью 100 см3 при помощи экстрагирующего раствора, доводят до объема 50 см3 и перемешивают. Через 10 мин прибавляют 10 см3 насыщенного уксуснокислого натрия или 30 см3 ацетатного буферного раствора, прибавляют 10 см3 раствора этилендиамннтетра-уксусной кислоты или ее соли, перемешивают, доводят до метки экстрагирующим раствором, снова перемешивают и фильтруют.

2.4.1.6.    Полученные экстракты сразу используют для титрования.

2.4.2. Визуальное титрование

2.4.2.1.    В колбу вместимостью 50 или 100 см3 пипеткой вносят от 1 до 10 см3 экстракта, полученного по п. 2.4.1, доводят объем водой до 10 см3 и титруют раствором 2.6-днхлорфенолин-дофенолята натрия до пояатения слабо-розовой окраски, нс исчезающей в течение 15—20 с.

2.4.2.2.    Одновременно проводят контрольное испытание на содержание в продукте редуцирующих веществ. Для этого в колбу помешают такой же объем экстракта, как при определении по п. 2.4.2.1. прибаатяют равный ему объем ацетатного буферного раствора, раствор формальдегида в объеме, равном половине объема буферного раствора, перемешивают и выдерживают в течение 10 мин. закрыв предатрительно колбу пробкой. Затем содержимое титруют раствором 2.6-дихлор-фенолиндофенолята натрия.

2.4.3. Потенциометрическое титрование

2.4.3.1.    В стакан вместимостью 50 см3 вносят пипеткой объем экстракта, полученного по п. 2.4.1, но не более 25 см3, прибаатяют экстрагирующий раствор приблизительно до объема 30 сми погружают электроды рН-метра-милливольтметра так. чтобы при перемешивании они нс касались магнитного стержня мешалки. Затем титруют потенциометрически из микробюретки раствором

2.6- дн\лорфснолнндофенолята натрия. Раствор 2.6-дихлорфснолиндофснолята натрия прибаатяют порциями по 0.1—0,2 см3 при постоянном перемешивании. Записывают показания прибор;) в милливольтах. соответствующие каждому прибаатенному объему раствора 2,6-дихлорфснолнндофснолята натрия. При титровании стрелка прибора сначала отклоняется атево. затем ее движение замедляется и после точки эквивалентности стрелка отклоняется вправо. Объем раствора 2,6-дихлорфснолиндофено-лята натрия, соответствующий точке эквивалентности и. следовательно, израсходованныи на титрование объема, устанавливают по максимальной разнице («скачку») двух соседних показаний прибора или по потенциометрической кривой зависимости величины потенциала в милливольтах от объема раствора

2.6- днхлорфснолнндофснодята натрия в кубических сантиметрах.

2.4.3.2.    Одновременно проводят контрольное испытание на содержание в продукте редуцирующих веществ так. как указано в п. 2.4.2.2. Раствор титруют потенциометрически.

2.4.3.3.    За результат титровании принимают среднее арифметическое результатов двух титрований одного экстракта. При повторном титровании в области предполагаемой точки эквивалентности раствор 2.6-дихлорфснолнндофснолята натрия прибавляют по 1—2 капли.

2.5. Обработка результатов

2.5.1.    Массовую долю аскорбиновой кислоты (X) в процентах вычисляют по формуле

^    (Г,-и;)    Т    Г,-100

V\ m

где У, — объем раствора 2.6-днхлорфснолиндофенолята натрия, израсходованный на титрование экстракта пробы, см3;

У2 — объем раствор;) 2.6-дихлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, см3;

Г—титр раствора 2.6-дихлорфенолнндофенолята натрия, г/см3;

Г3 — объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта. см3;

V4 — объем экстракта, используемый для титрования, см3;

/л — масса навески продукта, г.

2.5.2.    За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на 10“3.

Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р = 0.95.

С. 5 ГОСТ 24556-89

3. ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

3.1.    Сущность метода

Метод основан на экстрагировании витамина С метафосфорной кислотой или смесью уксусной и метафосфорной кислот, восстановлении 2,6-дихлор<]к*нолн1щофснолнта натрия аскорбиновой кислотой с последующей экстракцией органическим растворителем (амилацетатом, бутилацетатом или ксилолом) избытка 2,6-дихлорфснолиндофснолята натрия и фотомстрнровании органического экстракта при длине волны 500 нм.

3.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

Аппаратура, материалы и реактивы — по и. 2.2 со следующим дополнением.

Центрифуга лабораторная, обеспечивающая частоту вращения 2000 мин-1, с центрифужными пробирками с притертыми пробками вместимостью 25 см3.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный или спектрофотометр, обеспечивающие измерение оптической плотности при длине волны Хтал = (500 ± 10) им.

Воронки делительные стеклянные но ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3.

Прибор для перегонки на шлифах.

Эфир уксусной кислоты амиловый (амилацетат).

Эфир уксусной кислоты бутиловый (бугнлаиетат) по ГОСТ 22300.

Гидрохинон, полунасыщсниый раствор в ацетоне.

Ксилол.

3.3.    Подготовка к испытанию

3.3.1.    Приготовление растворов по п. 2.3 со следующим дополнением

3.3.1.1.    Приготовление полунасыщснного раствора гидрохинона.

Сначала готовят насыщенный раствор гидрохинона в ацетоне. Для этого I г гидрохинона растворяют в 10 см3 ацетона и фильтруют. Полунасышенный раствор гидрохинона готовят смешиванием одного объема насыщенного раствора с таким же объемом ацетона.

3.3.1.2.    Органический растворитель не должен содержать окисляющих веществ. Проверку его чистоты осуществляют следующим образом: к I см3 раствора 2.6-дихлорфенолиндофенолята натрия сначала прибавляют раствор аскорбиновой кислоты до обесцвечивания, затем добавляют 10 смрастворителя, взбалтывают и оставляют на 10 мин. Если органический слой будет окрашен, то его следует очистить перегонкой, собирая фракцию, перегоняющуюся соответственно при температурах: амилацетат — при 149 ’С, бутилаиетат — при 126 *С, ксилол — при 137—141 'С.

Использованный после испытания органический растворитель очищают перегонкой, как указано выше.

Все работы с органическим растворителем следует проводить в вытяжном шкафу.

3.3.2.    Построение градуировочного графика

Дтя построения градуировочного графика готовят пять растворов. Для этого в центрифужные пробирки или делительные воронки вносят: в первую — 5,0 см3 экстрагирующего раствора кислот, в остальные последовательно по 0.2: 0.4; 0.6; 0.8 см3 раствора 2.6-дихлорфенолнндофенолята натрия и доба&ляют экстрагирующий раствор до объема 5,0 см3. Во все пробирки шли делительные воронки прибавляют по 5 см3 ацетатного буферного раствора, иеремешиатют и затем прибааляют по 10 сморганического растворителя.

Пробирки или делтельные воронки закрыатют пробками и содержимое перемешивают в течение 10 с. Пробирки центрифугируют, а воронки остааляют в покое до разделения слоев. Органический слой переносят в кювету с расстоянием между рабочими гранями 10 мм и измеряют его оптическую плотность при длине волны 500 нм. В качестве контрольного раствор;! сравнения используют чистый растворитель.

По полученным данным строят график зависимости оптической плотности органического экстракта 2,6-дихлорфснолиндофснолята натрия от объема раствора 2,6-днхлорфснолиндофснолята натрия в кубических сантиметрах.

Построение градуировочного графика проводят для каждого свежеприготовленного раствора

2,6-дихлорфснолиндофснолята натрия.

3.4.    Проведение испытания

3.4.1.    Экстрагирование

Экстрагирование витамина С из продукта проводят по п. 2.4.1.

3.4.2.    В центрифужную пробирку или делительную воронку вносят пипеткой от I до 5 смэкстракта испытуемой пробы, добавляют экстрагирующего раствора до объема 5 см3, такой же объем

ГОСТ 24556-89 С. 6

ацетатного буферного раствора и раствор 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия в объеме не более 2 см3. Перемешивают и прибавляют 10 см3 органического растворителя. Далее испытание проводят

по п. 3.3.2.

При получении мутного органического экстракта перед измерением оптической плотности экстракт фильтруют через фильтровальную бумагу.

3.4.3.    Одновременно проводят контрольное испытание на содержание в продукте редуцирующих веществ. Дтя этого в центрифужную пробирку или делительную воронку вносят такие же объемы экстракта и ацетатного буферного раствора, как при испытании исследуемой пробы по п. 3.4.2. прибавляют раствор формальдегида в объеме, равном половине объема буферного раствора, перемешивают и выдерживаю! в течение 10 мин. После этого прибавляют раствор 2,6-дихлорфено-линдофенолята натрия, снова перемешивают и прибавляют 10 см3 органического растворителя. Затем продолжают испытание по п. 3.3.2.

3.4.4.    При содержании в продукте растворимых в органическом растворителе красящих веществ их влияние определяют следующим образом: после проведения испытания по п. 3.4.2 в кювету с органическим экстрактом прибавляют две капли полунасыщеиного раствора гидрохинона, перемешивают палочкой, выдерживают 30 с и снова измеряют оптическую плотность. Полученное значение оптической плотности вычитают из начального значения оптической плотности органического экстракта.

3.5. Обработка результатов

3.5.1. Массовую долю аскорбиновой кислоты < А”,) в процентах вычисляют по формуле

_ (И, - К,- VQ Т У4- 100

где Г, — объем раствора 2,6-дихлорфенолнндофенолята натрия, израсходованный на проведение испытания, см3;

У2 — объем избытка раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, найденный по градуировочному графику, см3;

У3 — объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, см3;

Г—тигр раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, г/см3;

У4 — объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта,

см3;

Уу — объем экстракта, используемый для испытания, см3;

m — масса навески продукта, г.

3.5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на 10-3.

Расхождение между двумя пархисльными определениями не должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р ■ 0,95.

4. ТИТРИМ ЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЦИСТЕИНА

4.1.    Сущность метода

Метод основан на экстрагировании витамина С из продукта раствором метафосфорной кислоты, восстановлении дегидроаскорбиновой кислоты в аскорбиновую цистеином солянокислым при pH 7,0—7,5, устранении влияния редуцирующих веществ в присутствии формальдегида при pH, близком к нулю, и титровании раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Метод применяется при возникновении разногласий в оценке качества.

4.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по и. 2.2 со следующим дополнением.

Термостат электрический с водяной рубашкой или суховоздушный, обеспечивающие измерение температуры (37 ± 1)*С.

Колбы мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см3.

Калий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 2493, раствор с массовой долей 45 %.

Кислота серная по ГОСТ 4204, раствор с объемной долей 50 %.

/.-цистеин солянокислый.

4.3.    Подготовка к испытанию

4.3.1.    Приготовление растворов по п. 2.3.1 со следующим дополнением.

Свежеприготовленный раствор цистеина в растворе соляной кислоты; готовят следующим

образом: 50 мг цистеина растворяют в 4 см-' дистиллированной волы, прибавляют I см3 раствора соляной кислоты плотностью 1,19 г/см3 и перемешивают.

4.4.    Проведение испытания

4.4.1.    Экстрагирование

Экстрагирование витамина С из продуктов проводят no п. 2.4.1.

4.4.2.    От 10 до 20 см3 экстракта пипеткой приливают в мерную колбу вместимостью 50 см3. Одновременно в стакан вместимостью 50 см3 вносят такой же объем экстракта и приливают порциями раствор фосфорнокислого калия двузамешенного до установления pH 7.0—7,5, измеряя его с помощью pH-метра. Отмечают объем раствора фосфориокистого калия. После этого в колбу с экстрактом вносят 50 мг цистерна или его раствор, перемешивают до растворения и прибавляют установленный объем фосфорнокислого калия. Колбу закрывают пробкой и выдерживают в термостате при 37 *С в течение 30 мим. После этого раствор в колбе охлаждают, подкисляют раствором серной кислоты до pH. близкого к нулю, и снова охлаждают. Необходимый для подкисления объем серной кнеюты также устанавливают предварительно, пользуясь pH-метром, используя для этого стакан с экстрактом после прибавления в него фосфорнокислого калия. Раствор в колбе доводят до метки экстрагирующим раствором и перемешивают.

В колбу вместимостью 50 или 100 см3 — для визуального титрования или стакан вместимостью 50 см3 — для потенциометрического титрования вносят пипеткой от 10 до 20 см3 полученного раствора, прибавляют 2—3 см' раствора формальдегида, закрывают крышкой и выдерживают 8 мин, приливают раствор метафосфорной кислоты до объема 30 см3. Затем титруют раствором 2.6-дихлор-фенолиндофенолята натрия: светлоокрашенные растворы — визуальным титрованием, темноокра-шенные — потенциометрическим титрованием, как указано в пп. 2.4.2, 2.4.3.

За результат титрования принимают среднее арифметическое результатов двух титрований одного раствора.

4.5 Обработка результатов

4.5.1. Массовую долю витамина С (Я,) в процентах вычисляют по формуле

К, ■ Г К, К, 100

где У, — объем раствора 2,6-днхлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на титрование,

см3;

Т — титр раствора 2,6-днхлорфенолиндофенолята натрия, г/см3;

V2 — объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта.

см3;

Уу — объем раствора, полученный после восстановления, см3;

У4 — объем экстракта, используемый ятя восстаноатсння, см';

Уу — объем раствора, используемый для титрования, см3;

m — масса навески продукта, г.

4.5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на 10~3.

Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р = 0,95.

5. флуоромктрич некий метод

5.1. Сущность метода

Метод основан на экстрагировании витамина С из продукта раствором метафосфорной кислоты или смесью уксусной и метафосфорной кислот, окислении аскорбиновой кислоты активированным углем в дегидроаскорбиновую кислоту, взаимодействии ее с о-фенилендиамнном с образованием флуоресцирующего соединения и измерении интенсивности флуоресценции при алии ах волн 350 нм возбуждающего и 430 нм излучаемого света. Фоновую флуоресценцию измеряют

ГОСТ 24556-89 С. 8

после образования нефлуоресцирующего соединения дегнороаскорбиновой кислоты с борной кислотой.

5.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведении испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по п. 2.2 со следующим дополнением.

Флуориметр лабораторный, обеспечивающий измерение светового потока с длиной волны (350 ± 30) им возбуждающего и (430 ± 10) нм излучаемого света, с погрешностью не более 2.5 %.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры нагрев;) 115 ‘С, с погрешностью не более 5 ’С.

Насос вакуумный пластинчато-роторный и золотниковый.

Воронки лабораторные стеклянные с фильтрами из спекшегося стеклянного порошка по ГОСТ 25336. класс фильтра ПОР 16.

Воронка лабораторная фарфоровая Бюхнера по ГОСТ 9147 с наружным диаметром от 80 до 130 мм.

Колба лабораторная стеклянная с тубусом для фильтрования в вакууме по ГОСТ 25336 вместимостью не менее 1000 см3.

Колба мерная лабораторная стеклянная по ГОСТ 1770 вместимостью 25 см3.

Пробирки стеклянные с взаимозаменяемым конусом по ГОСТ 25336 вместимостью 10, 25 см3.

Чашка лабораторная фарфоровая выпарительная по ГОСТ 9147 вместимостью не менее 150 см3.

Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199. раствор с массовой концентрацией 500 г/дм3.

Кислота аскорбиновая, раствор с массовой концентрацией 0.06 г/дм3. Готовят перед проведением испытания.

Кислота борная по ГОСТ 9656, раствор с массовой долей 3 % в растворе уксуснокислого натрия. Готовят непосредственно перед проведением испытания.

Кислота соляная по ГОСТ 3118 плотностью 1,19 г/см3, раствор с объемной долей 10 %.

о-фенилендиамнн солянокислый, раствор массовой концентрацией 0.2 г/дм3. Готовят перед проведением испытания.

Уголь активированный.

Для проведения испытания, если нет других указаний, применяют реактивы квалификации «чистый для анализа» (ч.д.а.) или «химически чистый» (х.ч.) и дистиллированную воду или воду эквивалентной чистоты.

5.3.    Подготовка к испытанию

5.3.1.    Приготовление растворов по n. 2.3.1 со следующим дополнением.

5.3.1.1.    Стандартный раствор аскорбиновой кислоты концентрации 0,06 г/дм3

Для приготовления раствора концентрации 0,06 г/дм3 в мерную колбу вместимостью НЮ см3 вносят 6.0 см3 раствора аскорбиновой кислоты концентрации 1.0 г/дм3, полученного по п. 2.3.2, доводят экстрагирующим раствором до метки и перемешивают.

5.3.1.2.    Обработка активированного угля

200 г угля помешают в колбу вместимостью 2000 см3, прибавляют I дм3 раствор;) соляной кислоты, доводят до кипения и фильтруют через воронку Бюхнера в вакууме. Уголь переносят в стакан вместимостью 1000 см3, прибавляют I дм3 дистиллированной воды, перемешивают и снова фильтруют через воронку Бюхнера, еще раз смешивают уголь с I дм3 воды и фильтруют. Обработку водой повторяют. Отфильтрованный уголь помешают в фарфоровую чашку и высушивают при температуре 115 *С в течение 12—14 ч в сушильном шкафу. Хранят в склянке с притертой пробкой.

5.4.    Проведение испытания

5.4.1.    Экстрагирование

Экстрагирование В1гтамнна С из продукта проводят раствором метафосфорной кислоты или смесью уксусной и метафосфорной кислот по п. 2.4.1.

5.4.2.    Берут две колбы вместимостью 250 см3. В одну из них вносят 50 или 100 см3 испытуемого экстракта, в другую —такой же объем стандартного раствора аскорбиновой кислоты концентрации 0.06 или 0,1 г/дм3. Затем в обе колбы прибавляют соответственно по I или 2 г активированного угля, тщательно перемешивают и фильтруют через воронку с фильтрами из пористой пластинки или фильтровальной бумаги, отбрасывая первые порции фильтрата.

5.4.3.    Анализируемые растворы. В две мерные колбы вместимостью 25 см3 помешают по 5 смраствора уксуснокислого натрия, затем в одну прибавляют 5 см3 фильтрата анализируемой пробы, в другую — 5 см3 фильтрата стандартного раствора, полученных по п. 5.4.2. Содержимое колб доливают до метки дистиллированной водой и перемешиваю).

5.4.4.    Контрольные растворы. Для установлении влиянии фоновой флуоресценции в две мерные колбы вместимостью по 25 см3 каждая помешают по 5 см3 раствора борной кислоты и по 5 см3 фильтрата, полученного по п. 5.4.2: в одну — испытуемую пробу, в другую — стандартный раствор. Растворы в колбах выдерживают в течение 15 мин. периодически встряхивая; затем доливают до метки дистиллированной водой и перемешивают.

5.4.5.    Каждый раствор, полученный по пп. 5.4.3 и 5.4.4. вносят по 2 см3 пипеткой в две пробирки. Всего восемь пробирок. Затем во все пробирки прибавляют по 5 см3 раствора о-фени-ленднамнна. тщательно перемешивают и выдерживают в темноте 35 мин.

5.4.6.    Измеряют интенсивность флуоресценции растворов, полученных по п. 5.4.5, при длинах волн 350 нм возбуждающего и 430 нм излучаемого света.

5.5. Обработка результатов

5.5.1.    Массовую долю витамина С (Ху) в процентах вычисляют по формуле

v {Л-B) c-v т

=    (£-    D) т

где А — среднее значение интенсивности флуоресценции раствора анализируемой пробы;

В — среднее значение интенсивности флуоресценции контрольного раствора анализируемой пробы;

£ —среднее значение интенсивности флуоресценции стандартного раствора:

D — среднее значение интенсивности флуоресценции контрольного стандартного раствора: с — массовая концентрация стандартного раствора аскорбиновой кислоты, г/дм3;

Г—общий объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта, см3; т — масса навески продукта, г.

5.5.2.    За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на К)-3.

Расхождение между двумя параллельными определениями нс должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р ■ 0.95.