МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

МОЛОКО

Методы определения ингибирующих веществ

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2016

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт маслоделия и сыроделия» (ФГБНУ ВНИИМС)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 22 ноября 2016 г. № 93-П) За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны Код страны no МК Сокращенное наименование национального органа по МК (ИСО 3166) 004-97 (ИСО 3166)004-97 по стандартизации Армения AM Минэкономики Республики Армения Киргизия KG Кыргызстандарт Россия RU Росстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2016 г. № 1876-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 23454-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 сентября 2017 г.

5    ВЗАМЕН ГОСТ 23454-79

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (wv/wgost.ru)

© Стандартинформ. 2016

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Библиография

[1] Технический регламент Таможенного союза ТР ТС 033/2013 «О безопасности молока и молочной продукции», принят решением Совета Евразийской экономической комиссии от 9 октября 2013 г Ne 67

11

УДК 637.127.6 006 354    МКС    67.100.10

Ключевые слова: молоко, методы анализа, чувствительность, ингибирующие вещества, антибиотики, дезинфектанты, поверхностно-активные вещества, фальсифицирующие вещества, тест-культура

Редактор Н.Н Оносовская Технический редактор В Ю Фотивва Корректор В И Воронцова Компьютерная верстка А А Ворониной

Сдано в набор 09 12 2016 Подписано в печать 27 12 2016 Формат    Гарнитура    Армап

Yen печ л 1.86 Уч -иэд л 1.68 Тираж 52 жз Зак 3298

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер , 4 wwwgostinfo ru info@go«mfo ги

ГОСТ 23454-2016

Содержание

1    Область применения ............................................................... 1

2    Нормативные ссылки................................................................ 1

3    Термины и определения............................................................. 2

4    Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы......... 2

5    Отбор проб........................................................................ 3

6    Условия проведения испытаний....................................................... 4

7    Метод определения ингибирующих веществ с использованием тест-культуры

термофильного стрептококка и индикатора резазурина................................... 4

8    Определение ингибирующих веществ с использованием стандартного диффузионного теста, содержащего в качестве тест-культуры споры Вас. stearothermophilus var. calidolaclis

и индикатор бромкрезолпурпур (Delvotest Т)............................................. 6

9    Определение ингибирующих веществ с использованием теста, содержащего в качестве тест-культуры споры Вас. stearothermophilus var. calidolactis и индикатор бриллиантовый

черный (BRT-inhibitor тест)........................................................... 6

10    Требования безопасности........................................................... 7

Приложение А (обязательное) Шкала оценки наличия/отсутствия ингибирующих веществ

в молоке с использованием тест-культуры Streptococcus thermophilus В19......... 8

Приложение Б (обязательное) Шкала оценки наличия/отсутствия ингибирующих веществ в молоке с использованием тест-культуры Bacillus stearothermophilus various

calidolactis и индикатора бромкрезолпурпур.................................. 9

Приложение В (обязательное) Шкала оценки наличия/отсутствия ингибирующих веществ в молоке с использованием тест-культуры Bacillus stearothermophilus various

calidolactis и индикатора бриллиантовый черный.............................. 10

Библиография....................................................................... 11

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО

Методы определения ингибирующих веществ

Milk Methods for determination of the inhibitors

Дата введения — 2017—09—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на молоко сырое цельное и обезжиренное, термически обработанное, предварительно восстановленное из сгущенного, концентрированного или сухого молока (далее — молоко) и устанавливает методы определения ингибирующих веществ, в том числе антибиотиков. дезинфектантов на основе хлора, перекиси водорода и надуксусной кислоты: поверхностноактивных веществ: фальсифицирующих веществ, добавляемых в молоко для ограничения развития микрофлоры, в том числе перекиси водорода и формалина.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4 021—75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 745-2003 Фольга алюминиевая для упаковки. Технические условия ГОСТ 1341-97 Пергамент растительный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ISO 1042—83, ISO 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная Технические условия ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 18300-87" Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

• В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12 1.019—2009 «Система стандартов безопасности труда Электробезопасность Общие требования и номенклатура видов защиты»

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р 55878-2013 «Спирт этиловый технический гидролизный ректификованный»

Издание официальное

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные и молочные составные, молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования Методы испытаний.

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 32901-2014 Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины в соответствии с [1). а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    ингибирующие вещества: Любые вещества в молоке, которые не зависимо от их природы, тормозят или препятствуют развитию микроорганизмов.

3.2    тест-культура: Штамм микроорганизмов определенного вида, характеризующийся устойчивой способностью интенсивно развиваться в молоке и проявлять повышенную чувствительность к ингибирующим веществам.

3.3    чувствительность диагностического метода: Способность метода фиксировать по развитию тест-культуры отсутствие или наличие ингибирующего эффекта.

3    4 препарат СКИВ: Сухое обезжиренное молоко, гарантированно не содержащее ингибирующие вещества и предназначенное для постановки контрольной пробы при определении ингибирующих веществ в молоке.

4    Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы

Весы утвержденного типа, поверенные в установленном порядке, с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0,2 мг.

Термостат жидкостный (редуктазник). позволяющий поддерживать температуру от 25 °С до 65 °С. с отклонением от заданной температуры ± 1 °С.

Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 20 °С до 100 ^вС. с погрешностью ± 2 °С.

Термостат (термо-блок), позволяющий поддерживать температуру от 15 °С до 70 °С. с отклонением от заданной температуры ± 1 °С.

Стерилизатор паровой медицинский (автоклав), позволяющий поддерживать температуру не менее 132 °С.

Термостат суховоздушный с естественной или принудительной циркуляцией воздуха, с охлаждением, позволяющий поддерживать температуру от 50 °С до 200 ^вС.

Термометр жидкостной стеклянный (не ртутный) по ГОСТ 28498, диапазоном измерения от 0 °С до 100 °С и ценой деления шкалы 1 °С.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры (160 ± 5) °С.

Часы по ГОСТ 27752 или таймер.

Плитка электрическая по ГОСТ 14919.

Спиртовка СЛ—1 по ГОСТ 25336.

2

ГОСТ 23454-2016

Петля бактериологическая.

Пробки резиновые конусные.

Емкости металлические или кастрюли, используемые для растворения, расплавления, нагревания или охлаждения питательных сред и воды.

Вспомогательное оборудование для отбора проб молока: мутовка, черпак, трубка, отборник, мешалка. пробник.

Фольга алюминиевая по ГОСТ 745.

Пергамент растительный по ГОСТ 1341.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026

Пипетки 1—1(2)—1 по ГОСТ 29169.

Пипетки 1—1(2)—1(2)—1(2. 5.10) по ГОСТ 29227.

Колбы мерные 2—50(100. 200. 500.1000)—2 по ГОСТ 1770.

Колбы конические Кн-2—100(250)—34 ТХС по ГОСТ 25336.

Цилиндры 1(2)—50(100)—1 поГОСТ 1770.

Пробирки П1(П2)—16(21)—150(200) ТС по ГОСТ 25336.

Ланцет.

Резазурина натриевая соль, массовая доля основного вещества не менее 85 %. ч.д.а. или ч.

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Сухая бактериальная закваска тест-культуры Streptococcus thermophilus В19, содержащая не менее 1 10⁹ КОЕ.

Стандартный диффузионный тест, включающий укупоренные фольгой ампулы вместимостью

1.0 см³, содержащие смесь агаризованной питательной среды со спорами Вас. stearothermophilus var. calidolactis и индикатором бромкрезолпурпур.

Стандартный диффузионный тест, включающий укупоренные фольгой ампулы, содержащие смесь агаризованной питательной среды со спорами Вас. stearothermophilus var. calidolactis и индикатором бриллиантовым черным.

Препарат сухой для контроля определения ингибирующих веществ в молоке (препарат СКИВ).

Допускается применение других средств измерения, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также материалов и реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.

5 Отбор проб

5.1    Основные понятия и общие правила отбора проб — по ГОСТ 26809.1.

5.2    Отбор проб для определения ингибирующих веществ проводят перед отбором проб для физико-химических и органолептических анализов и одновременно с пробой для проведения микробиологических анализов в соответствии с ГОСТ 32901.

Контроль ингибирующих веществ осуществляют путем анализа пробы, отобранной из транспортной или потребительской упаковки с молоком, попавшей в выборку.

Объем пробы для контроля ингибирующих веществ должен составлять не менее 100 см³.

Перед отбором проб молоко необходимо тщательно перемешать.

Оборудование, используемое для отбора проб, должно быть обработано пропариванием, кипячением.

5.3    Перед вскрытием упаковок с молоком крышки фляг, цистерн, потребительских упаковок и тд. очищают от загрязнений, промывают и протирают сухой марлей или другими неткаными материалами (салфетки и т.л.) для удаления остатков воды.

Отбор проб проводят в стерильную посуду достаточной вместимости и удобной формы (стеклянные колбы, банки и т.д.). закрывают стерильными пробками или крышками, которые закрывают стерильной бумагой и обвязывают.

5.4    Анализ сырого молока на наличие ингибирующих веществ следует проводить не раньше, чем через 4 ч после дойки.

3

6    Условия проведения испытаний

При выполнении испытаний в лаборатории следует соблюдать следующие условия:

-    температура окружающего воздуха.................................................................(20    ±    5)    ^вС;

-    относительная влажность воздуха..........................................................от 30 % до 80 %:

-    атмосферное давление ..................................от    84    до    106    (от 630 до 795) кПа (мм рт. ст.).

7    Метод определения ингибирующих веществ с использованием тест-культуры термофильного стрептококка и индикатора резазурина

7.1    Сущность метода

Метод основан на диагностике развития в молоке чувствительной тест-культуры Streptococcus thermophilus В19 и восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами.

По изменению или не изменению окраски резазурина визуально оценивают отсутствие/наличие ингибирующих веществ в молоке:

-    при отсутствии в молоке ингибирующих веществ тест-культура Streptococcus thermophilus В19 развивается и окраска резазурина меняется с серо-сиреневой на сиреневую с розовым оттенком или розовую, вплоть до белой;

-    при наличии в молоке ингибирующих веществ тест-культура Streptococcus thermophilus В19 не развивается либо ее развитие задерживается, а окраска резазурина остается серо-сиреневой или сиреневой.

Чувствительность метода позволяет обнаружить в молоке массовую концентрацию пенициллина— 0,004 мг/дм³, стрептомицина — 10 мг/дм³, тетрациклина — 1 мг/дм³, левомицетина — 5.0 мг/дм³; массовую долю активного хлора — 0,06 %. перекиси водорода — 0,005 %, надуксусной кислоты — 0,005 %, сульфонола — 0,15 %. формалина — 0.004 %.

7.2    Подготовка к анализу

7.2.1    Приготовление стерильного обезжиренного молока

Обезжиренное молоко разливают по 100 см³ в колбы вместимостью не менее 200 см³ или по 10 см³ в пробирки вместимостью не менее 20 см³ и стерилизуют при температуре (121 ± 1) “С в течение (10 ± 1) мин.

7.2.2    Приготовление основного раствора резазурина натриевой соли

Основной раствор резазурина натриевой соли массовой концентрации 0.0005 г/см³ готовят следующим образом.

0,100 г резазурина натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см³ и растворяют в небольшом количестве прокипяченной и охлажденной до температуры (25 ± 2) °С дистиллированной воды. Объем раствора доводят до метки прокипяченной и охлажденной до температуры (25 ± 2) °С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.

Раствор резазурина натриевой соли хранят при температуре от 4 °С до 10 °С не более 30 сут.

7.2.3    Приготовление коллекционной тест-культуры

7.2.3.1    Для восстановления активности тест-культуры колбу со 100 см³ обезжиренного стерилизованного молока, подготовленного по 7.2.1. подогревают до температуры (43 ± 1) °С. Порцию сухой бактериальной закваски тест-культуры Streptococcus thermophilus В19 вносят в стерилизованное молоко и тщательно перемешивают.

Культуру термостатируют при температуре (41 ± 1)°С в течение 16—18 ч до образования плотного сгустка, затем охлаждают до температуры (4 ± 2) °С и используют для приготовления коллекционной тест-культуры.

7.2.3.2    Для приготовления коллекционной тест-культуры в пробирку с 10 см³ стерильного обезжиренного молока вносят одну петлю культуры, приготовленной по 7.2.3.1. и выдерживают в термостате при температуре (41 ± 1) °С в течение 16—18 ч.

Коллекционную культуру хранят при температуре (4 ± 2) °С и пересевают через 10—14 сут. Через 3-4 пересадки ее снова готовят из сухой тест-культуры.

4

ГОСТ 23454-2016

Допускается использовать культуру дольше, если она не утратила своей активности и по микроскопическому препарату соответствует лредьявленным требованиям: продолжительность сквашивания при пересеве — не более 16—18 ч; сгусток плотный; консистенция однородная, допускается мягкая крупитчатость или вязкая: в поле зрения микроскопа в препарате тест-культуры — диплококки одиночные или собранные в цепочки.

7.2.4    Приготовление рабочей тест-культуры

7.2.4.1    Рабочую тест-культуру готовят из коллекционной тест-культуры в пробирках или колбах в зависимости от необходимого количества или из сухой бактериальной закваски термофильного молочнокислого стрептококка, предназначенной для определения ингибирующих веществ

7.2.4.2    При приготовлении рабочей тест-культуры из коллекционной в пробирку с 10 см³ стерильного обезжиренного молока вносят одну петлю коллекционной тест-культуры, а в колбу со 100 см³ стерильного обезжиренного молока вносят 0.1 см³ коллекционной тест-культуры или сухой бактериальной закваски на кончике ланцета и выдерживают в термостате при температуре (41 ± 1) °С 16—18 ч до образования плотного сгустка.

Полученную рабочую тест-культуру используют для проведения анализа.

В случае необходимости рабочую тест-культуру хранят в холодильнике температурой (4 ± 2) °С и используют в течение 24 ч.

Непосредственно перед применением рабочую тест-культуру перемешивают путем интенсивного встряхивания.

7.2.5    Приготовление контрольного раствора препарата СКИВ

Для получения контрольного раствора препарата вскрывают флакон с сухим препаратом СКИВ. Во флакон вносят пипеткой 10 см³ дистиллированной воды, подогретой до температуры (50 ± 10) закрывают пробкой и встряхивают до полного растворения.

Контрольный раствор препарата СКИВ готовят непосредственно перед испытанием, после проведения испытаний раствор хранению не подлежит.

7.3 Проведение анализа

7.3.1    В чистые пробирки наливают по 10 см³ анализируемого молока и закрывают сухими резиновыми пробками. Оставшуюся часть пробы сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С.

При наличии большого количества проб анализируемого молока анализ проводят сериями. Количество пробирок с анализируемым молоком в кахщой серии должно быть не более двадцати.

Проводят два параллельных определения одной пробы молока.

7.3.2    Одновременно проводят контрольный анализ. Для этого используют контрольный раствор препарата СКИВ. подготовленный по 7.2.5.

7.3.3    Пробирки с анализируемым молоком и контрольной пробой нагревают в водяной бане до температуры (87 ± 2) °С и выдерживают при указанной температуре 10 мин. затем охлаждают до температуры (46 ± 1) °С и стерильной пипеткой вносят 0.5 см³ рабочей тест-культуры, приготовленной по 7.2.4.

Содержимое пробирок тщательно перемешивают трехкратным переворачиванием. Затем пробирки выдерживают в течение 75 мин при температуре (45 ± 1) °С в жидкостном термостате или водяной бане.

7.3.4    В пробирки с анализируемым молоком и контрольной пробой вносят по 1 см³ основного раствора резазурина натриевой соли, подготовленной по 7.2.2, температурой (20 ± 2) °С. Содержимое пробирок перемешивают путем двукратного переворачивания.

7.3.5    Пробирки с анализируемым молоком и контрольной пробой выдерживают в редуктазнике или водяной бане при температуре (45 ± 1) °С в течение 10—15 мин.

7.4 Обработка результатов

При отсутствии в анализируемом молоке (и в контрольной пробе) ингибирующих веществ или их наличие в количестве равном или меньшем, чем предел обнаружения, содержимое пробирок будет иметь розовый с сиреневым оттенком или розовый, или белый цвет. При наличии в молоке ингибирующих веществ содержимое пробирок будет иметь цвет от серо-сиреневого до сиреневого в соответствии с приложением А.

5

8    Определение ингибирующих веществ с использованием стандартного диффузионного теста, содержащего в качестве тест-культуры споры Вас. stearothermophilus var. calidolactis и индикатор бромкрезолпурпур (Delvotest Т)

8.1    Сущность метода

Метод основан на изменении окраски агаровой среды со спорами Вас stearothermophilus var. calidolactis и индикатором бромкрезолпурпур от фиолетовой до желтой при отсутствии в анализируемом молоке ингибирующих веществ и сохранении фиолетовой окраски при их наличии.

Чувствительность метода позволяет обнаружить в молоке массовую концентрацию пенициллина — 0.002 мг/дм³, стрептомицина — 0,5 мг/дм³, тетрациклина — 0.07 мг/дм³. левомицетина — 3.5 мг/дм³; массовую долю активного хлора — 0.1 %. перекиси водорода — 0.015 %. надуксусной кислоты — 0.009 %, сульфонола — 0.12 %. формалина — 0,002 %.

8.2    Проведение анализа

8.2.1    Тест-набор состоит из набора ампул вместимостью 1.0 см³, содержащих смесь агаризован-ной питательной среды со спорами Bacillus stearothermophilus various calidolactis и индикатором бромкрезолпурпур.

Необходимое количество ампул маркируют и выдерживают до достижения температуры (20 ± 2) °С. Ампулы открывают, проколов фольгу с помощью любого острого предмета

С помощью специальной пипетки, находящейся в комплекте, добавляют в ампулу 0.1 см³ анализируемого молока. Для каждой пробы используют отдельную пипетку.

Пробирки термостатируют в термостате или водяной бане при температуре (64 ± 2) °С в течение (180 ± 5) мин.

8.2.2    Контрольное определение проводят в соответствии с 8.2.1, при этом в ампулу вносят 0.1 см³ препарата СКИВ. предварительно приготовленного по 7.2.5.

8.3 Обработка результатов

Для оценки результатов ампулы извлекают из термостата и определяют цвет их содержимого. Изменение цвета среды на желтый цвет в соответствии с приложением Б свидетельствует об отсутствии ингибирующих веществ на уровне чувствительности метода.

Отсутствие изменения цвета среды или изменение в пределах оттенков фиолетового цвета свидетельствует о присутствии ингибирующих веществ.

Изменение цвета среды на сизый цвет свидетельствует о неопределенном результате и требует проведения повторного анализа.

9    Определение ингибирующих веществ с использованием теста, содержащего в качестве тест-культуры споры Вас. stearothermophilus var. calidolactis и индикатор бриллиантовый черный (BRT-inhibitor тест)

9.1    Сущность метода

Метод основан на изменении цвета агаризованной среды со спорами Вас. stearothemiophilus var. calidolactis и индикатором бриллиантовым черным от фиолетового до желтого цвета при отсутствии в анализируемом молоке ингибирующих веществ и сохранении фиолетового цвета при их наличии.

Чувствительность метода позволяет обнаружить в молоке массовую концентрацию пенициллина— 0.003 мг/дм³. стрептомицина — 0.6 мг/дм³. тетрациклина — 0.2 мг/дм³. левомицетина — 5.0 мг/дм³; массовую долю активного хлора — 0.12 %, перекиси водорода — 0.02 %. надуксусной кислоты — 0.01 %. сульфонола — 0,12 %. формалина — 0.003 %.

9.2    Проведение анализа

9.2.1 Тест-набор состоит из набора ампул, содержащих смесь агаризованной питательной среды со спорами Bacillus stearothermophilus various calidolactis и индикатором бриллиантовым черным.

6

ГОСТ 23454-2016

Отбирают необходимое количество ампул, маркируют и открывают фольгу для внесения пробы анализируемого молока. С помощью специальной пипетки, находящейся в комплекте, добавляют 0.1 см³ анализируемого молока в ампулу. Для каждой пробы молока используют отдельную пипетку.

Пробирки помещают в термостат или водяную баню при температуре (64 ± 1) °С и выдерживают в течение (150 ± 15) мин.

9.2.2 Контрольное определение проводят в соответствии с 9.2.1, при этом в ампулу вносят 0,1 см³ препарата СКИВ, приготовленного по 7.2.5.

9.3 Обработка результатов

Для оценки результатов ампулы извлекают из термостата и определяют цвет содержимого.

Изменение цвета среды в ампуле на желтый цвет в соответствии с приложением В свидетельствует об отсутствии ингибирующих веществ на уровне чувствительности метода.

Отсутствие изменения цвета среды или изменение в пределах оттенков фиолетового цвета свидетельствует о присутствии ингибирующих веществ.

Изменение цвета среды в ампуле на бурый цвет свидетельствует о неопределенном результате и требует проведения повторного анализа.

10 Требования безопасности

10.1    При выполнении работ необходимо соблюдать следующие требования:

-    помещение лаборатории должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021;

-    требования техники безопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019:

-    работу со споровой тест-культурой проводят в соответствии с санитарными правилами, действующими на территории государства, принявшего стандарт.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4 009

10.2    Требования к оператору

Выполнение измерений может проводить специалист-микробиолог, имеющий специальное образование и освоивший методы микробиологического анализа.

7