Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

57 страниц

548.00 ₽

Купить ГОСТ 12044-93 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на семена аниса, гороха, кориандра, кукурузы, льна, лука, моркови, овса, подсолнечника, проса, пшеницы, риса, ржи, свеклы, тмина, сои, фасоли, фенхеля, шалфея мускатного, ячменя и устанавливает следующие методы определения их зараженности болезнями: макроскопический, обмывки семян ( суспензии спор) и центрифугирования, отпечатков, анализа зародышей (эмбрионов), биологический и люминесцентный

  Скачать PDF

Заменяет ГОСТ 12044-81 ИУС 5-1994

Переиздание (июль 2011 г.)

Рекомендуется использовать вместо ГОСТ Р 50459-92 (ИУС 8-1994)

Дополнения:

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определения

4 Аппаратура, оборудование, материалы и реактивы

5 Отбор проб

6 Макроскопический метод

7 Метод обмывки семян (суспензии спор) и центрифугирования

8 Метод отпечатков

9 Метод анализа зародышей (эмбрионов)

10 Биологический метод

11 Люминесцентный метод

Приложение А (справочное)

Приложение Б (справочное)

Приложение В (справочное) Болезни злаковых культур

Приложение Г (справочное) Твердая головня злаков

Приложение Д (справочное) Споры головных грибов

Приложение Е (справочное) Здоровый и пораженный головней зародыш пшеницы

Приложение Ж (справочное) Признаки зараженности семян пшеницы и ржи

Приложение И (справочное) Признаки зараженности семян ячменя и овса

Приложение К (справочное) Болезни кукурузы

Приложение Л (справочное) Болезни риса

Приложение М (справочное) Болезни льна

Приложение Н (справочное) Болезни сои

Приложение П (справочное) Болезни бобовых и овощных культур

Приложение Р (справочное) Типы спор сапрофитных грибков, встречающихся на семенах

Приложение С (справочное)

Приложение Т (справочное)

Показать даты введения Admin

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СЕМЕНА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР

Методы определения зараженности болезнями

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2011

ГОСТ 12044-93

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Госстандартом России

ВНЕСЕН Техническим секретариатом Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации

2    ПРИНЯТ Межгосударственным советом но стандартизации, метрологии и сертификации

21 октября 1993 г.

За принятие проголосовали:

Наименование государства

Наименование национального органа по стандартизации

Кыргызская Республика Республика Молдова Российская Федерация Республика Таджикистан Туркменистан

Киргизе гандарт Молдовасга ндарт Госстандарт России Таджикста ндарт Туркменглангосинспскция

3    Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 02.06.94 № 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 12044-93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 января 1995 г.

4    ВЗАМЕН ГОСТ 12044-81

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль2011 г.

© Издательство стандартов, 1993 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2011

II

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Федерального агентства но техническому регулированию и метрологии

154

ГОСТ 12044-93

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СЕМЕНА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР

Методы определения зараженности болезнями

Agricultur.il seeds.

Methods for determination of dicscasc infestation

Дата введения 1995—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на семена аниса, гороха, кориандра, кукурузы, льна, лука, моркови, овса, подсолнечника, проса, пшеницы, риса. ржи. свеклы, тмина, сои, фасоли, фенхеля, шалфея мускатного, ячменя и устанавливает следующие методы определения их зараженности болезнями: макроскопический, обмывки семян (суспензии спор) и центрифугирования, отпечатков, анализа зародышей (эмбрионов), биологический и люминесцентный.

При определении зараженности семян болезнями устанавливают наличие или отсутствие грибных и бактериальных возбудителей, их видовой состав и степень зараженности. Результаты заносят в рабочую карточку, а для зерновых культур при определении зараженности всеми методами — в таблицу (приложение А).

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 908-2004 Кислота лимонная моногидрат пищевая. Технические условия ГОСТ 975-88 Глюкоза кристаллическая гид ратная. Технические условия ГОСТ 1277-75 Реактивы. Серебро азотнокислое. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2184-77 Кислота серная техническая. Технические условия

ГОСТ 2874-82* Вода питьевая. Гигиенические требования и контроль за качеством

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5962-67** Спирт этиловый ректификованный. Технические условия

ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 7328-2001 Гири. Общие технические условия

ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

• На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51232-98.

•• На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

I

И {.такие официальное

155

ГОСТ 12036-85 Семена сельскохозяйственных культур. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 12037-81 Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения чистоты и отхода

семян

ГОСТ 12038-84 Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения всхожести ГОСТ 13805-76 Пейтон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия

ГОСТ 17206—% Агар микробиологический. Технические условия ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия

ГОСТ 19569-891 Стерилизаторы паровые медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 19908-90 Тигли, чаши, стаканы, колбы, воронки, пробирки и наконечники из прозрачного кварцевого стекла. Общие технические условия

ГОСТ 20290-74 Семена сельскохозяйственных культур. Определение посевных качеств семян. Термины и определения

ГОСТ 20490-75 Реактивы. Кати марганцовокислый. Технические условия

ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытании

ГОСТ 21507-81 Защита растений. Термины и определения

ГОСТ 24104-20012 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 30556-98 Семена эфиромастичных культур. Методы определения всхожести

3    Определения

В настоящем стандарте применяют термины по ГОСТ 20290. ГОСТ 21507 и в соответствии с приложением Б. 1.

Рабочая проба — определенное количество семян, используемое для данного анализа.

4    Аппаратура, оборудование, материалы и реактивы

Весы аналитические.

Весы лабораторные но ГОСТ 24104.

Набор гирь по ГОСТ 7328.

Шкаф сушильный лабораторный.

Автоклавы по ГОСТ 19569 Центрифуга ЦВР-1.

Термостат для проращивания семян с диапазоном температур 20 1С — 40 "С.

Холодильник.

Лампа бактерицидная.

Камера бактериологическая (бокс для посева чистых культур).

Осветитель УФ.

Лампа ЛД 40 или Л Б 40.

Микроскопы биологические.

Микрометры окулярный и объективный (линейки).

Ш татив с набором лун ШНЛ-1.

Пипетки, колбы по ГОСТ 1770.

Пробирки центрифужные.

Чашки Петри и Коха.

Стаканы химические по ГОСТ 19908.

Растильни фаянсовые, пластмассовые, полистироловые.

Камера Горяева.

Пинцеты по ГОСТ 21241.

Спиртовка.

Скальпель.

Игла препаровальная и для посева культур грибов.

Баня водяная.

ГОСТ 12044-93

Прибор нагревательный (электроплитка).

Кипятильник.

Набор лабораторных решет.

Ситечко чайное.

Стекла предметные по ГОСТ 9284.

Стекла покровные по ГОСТ 6672.

Плитки керамические или их заменяющие.

Совки лабораторные.

Линейка (планка) для разделения анализируемой пробы.

Часы песочные.

Щетка капроновая.

Бумага фильтровальная но ГОСТ 12026.

Бумага лакмусовая.

Бумага миллиметровая.

Марля.

Пленка полиэтиленовая, коррекс.

Клейкая лента.

Вата.

Серебро азотнокислое но ГОСТ 1277.

Кати марганцовокислый но ГОСТ 20490.

Нагрий хлористый по ГОСТ 4233.

Натрия или калия гидроокись по ГОСТ 4328 или ГОСТ 24363.

Глюкоза кристаллическая гидратная по ГОСТ 975.

Декстроза.

Кислота лимонная по ГОСТ 908.

Кислота маточная.

Кислота серная по ГОСТ 2184 или ГОСТ 4204.

Анилиновый краситель голубой или синий для хлопчатобумажных тканей или синий трипано-вый «для микро*.

Агар по ГОСТ 17206.

Картофель.

Сухой агар Чапека.

Спирт этиловый ректификат но ГОСТ 5962 % %-ный или спирт этиловый гилрашзный высшей очистки по ГОСТ 17299 % %-ный.

Известь хлорная.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Вода питьевая но ГОСТ 2874.

Стрептомицин.

Пептон по ГОСТ 13805.

Песок кварцевый с размером частиц от 0.5 до 2 мм.

5    Отбор проб

5.1    Отбор проб по ГОСТ 12036: выделение навесок но ГОСТ 12037.

6    Макроскопический метол

Метод применяют для визуального обнаружения в семенах головневых образований, склеро-циев спорыньи и других грибов, а также галлов пшеничной нематоды (приложения В и Г).

6.1    Анализ проводят одновременно с определением чистоты семян по ГОСТ 12037.

7    Метол обмывки семян (суспензии спор) и центрифугирования

3

Метод применяют для определения наличия спор головни на поверхности семян хтаковых культур и лука: спор возбудителей батезни пасмо на семенах льна: спор рамуляриоза — на семенах

157

кориандра: спор ржавчины на клубочках свеклы и семенах аниса; спор и мицелий церкоспороза на семенах фенхеля. На зерновых культурах этим способом можно определить зараженность семян ржи стеблевой и твердой головней, пшеницы — стеблевой и твердой головней, ячменя — каменной и черной (ложной пыльной) головней, кукурузы — пыльной головней, проса — обыкновенной мелкоспоровой головней, риса — гельминтоспориозом, фузариозом, головней (приложения Г, Д. Ж. Л. М и П).

7.1    Отбор проб

7.1.1    Для проведения анализа из семян основной культуры отсчитывают подряд две рабочие пробы по 100 семян в каждой.

7.2 Проведение анализа

7.2.1    Каждую рабочую пробу помешают в пробирку, заливают 10 см3 воды и взбалтывают. Семена с гладкой поверхностью (пшеница, рожь) взбалтывают в течение 5 мин, семена с шероховатой поверхностью (свекла и др.) — 10 мин. семена льна — 1 мин. Полученные суспензии можно обследовать непосредственно под микроскопом для идентификации патогенов или можно выделить споры путем центрифугирования. В случае центрифугирования промывную воду от каждой пробы семян сливают в отдельные пробирки центрифуги и центрифугируют в течение 10—15 мин при скорости 2000—2500 об/мин. Если в центрифуге не все пробирки заняты суспензией, го свободные заполняют для равновесия чистой водой до того же уровня. По окончании центрифугирования из пробирок осторожно отбирают 9 см3 над осадочной жидкости. Оставшийся осадок взмучивают пипеткой и из каждой пробирки готовят по пять препаратов. Для установления вида гриба препараты просматривают иод микроскопом.

Количественный учет спор проводят в камере Горяева.

Зараженность спорами одного семени (X) в штуках вычисляют по формулам:

при подсчете в камере Горяева без предварительного центрифугирования

*|"тЙг:    (1)

при подсчете в камере Горяев;! с предварительным центрифугированием

(2)

где Nc — количество спор в I см3 суспензии, шт.;

10 — объем воды, взятой для смыва, см3;

100 — количество семян, взятых для анализа, шт.

Величину Nc в 1 см3 суспензии рассчитывают, умножая обнаруженное число спор на 250 тыс., если подсчет спор ведут в больших квадратах камеры Горяева, и на 400 тыс., если споры подсчитывают в малых квадратах камеры; если же подсчет ведут по всей плошали камеры, то обнаруженное число спор умножают на 1111.

За результат анализа принимают среднеарифметическое результатов двух проб.

8 Метод отпечатков

Метод применяют вместо ценгрифушрования для определения поверхностей засноренности семян зерновых культур головневыми грибами.

8.1    Отбор проб

8.1.1    Из семян основной культуры отсчитывают 10 семян.

8.2 Проведение анализа

8.2.1    Каждое семя обертывают отрезком прозрачной клейкой ленты размером 1 см-, плотно прижимая его по всей поверхности семени. Затем с помощью пинцета ленту отклеивают и помешают на предметном стекле под микроскоп для идентификации патогена и подсчета спор. Подсчет спор проводят в 10 полях микроскопа в соприкасавшихся с семенем частях отрезка ленты и устанавливают среднеарифметическое количество спор в одном поле зрения микроскопа.

Для пшеницы и ячменя с помощью окуляр-линейки иод микроскопом при однократном увеличении объектива измеряют длину и ширину семени с точностью до 0.1 мм.

158

ГОСТ 12044-93

На основании данных измерения длины и ширины определяют площадь поверхности семени (приложения С и Т).

Для семян других зерновых культур площадь поверхности семени измеряют наложением отпечатка на миллиметровую бумагу или посредством окулярной сетки микроскопа.

8.3 Обработка результатов


8.3.1 Количество спор, приходящееся на площадь отпечатка семени. (XJ вычисляют по формуле

где N — среднеарифметическое количество спор в поле зрения микроскопа;

S — площадь зрения микроскопа, мм2;

.S’, — площадь поверхности семени, мм2.

Пример. Площадь поверхности семян пшеницы при длине 6 мм и ширине 3.5 мм равна 57.7 мм. Если водном поле зрения микроскопа МБС-9 при 42-кратном увеличении насчитывается, в среднем. 10 спор, то количество их на одном семени составляет:

v 10 57.7 |ОЛ Х} = —— = 180 шт.

П р и м с ч а н и е — По паспортным данным площадь зрении микроскопа МБС-9 при 42-крагном увеличении равна 3.2 мм2.


8.3.2 Среднеарифметическое количество спор, приходящееся на одно семя (У), вычисляют но формуле

где IX) — сумма количества спор, обнаруженных на всех исследованных семенах;

10 — количество исследованных семян, шт.

9 Метол анализа зародышей (эмбрионов)

9.1    Метод применяют для обнаружения мицелия пыльной головни (Ustilago sp.) в эмбрионах семян пшеницы и ячменя, отделенных от эндосперма.

9.1.1    Отбор проб

Для анализа используют семена основной культуры, выделенные из навески массой 100 г для пшеницы и 120 г для ячменя.

9.1.2    Проведение анализа

9.1.2.1    Перед отделением зародышей (эмбрионов) семена ячменя дш отделения пленок помешают на 40 мин в 50 %-ный раствор серной кислоты. (Концентрированную химически чистую кислоту' разбавляют вдвое, наливая кислоту в воду).

Затем семена тщательно перемешивают, промывают проточной водой, а остатки пленок оттирают на решете капроновой щеткой.

9.1.2.2    Эмбрионы семян пшеницы и ячменя отделяют от эндосперма двумя способами.

Первый способ. Семена замачивают в стеклянной или эмалированной посуде в 1 дм3 горячего

5

свежеприготовленного раствора щелочи (КОН или NaOH. 100 г на 1 дм3 воды), в котором растворен анилиновый синий краситель для хлопчатобумажных тканей в количестве 1 г на 1 дм3 щелочи, и оставляют в термостате при 24 'С на 12—24 ч. Содержимое изредка перемешивают стеклянной палочкой; при этом зародыши отделяются у 80 % — 90 % семян. В раствор щелочи вместо анилинового синего красителя можно добавлять трипановый синий «дш микро» в такой же концентрации. Затем содержимое из посуды пропускают через лабораторные решета, вставленные одно в другое, диаметром отверстий 5. 3 и I мм и промывают проточной водой. Зародыши оседают на последнем решете диаметром отверстий I мм. Отделившиеся окрашенные зародыши переносят в колбу вместимостью 250 см3 с 20 %-ным раствором щелочи (200 г на 1 дм3 воды), взятой в количестве 200 см3, и кипятят в течение 10—15 мин. Затем зародыши переносят в чайное ситечко, пцательно промывают проточной водой, переносят в колбу с 50 %-ной молочной кислотой и снова кипятят I мин.

159

Второй способ. Семена помешают в эмалированную или стеклянную посуду, заливают 3 %-ным раствором щелочи и кипятят около 1 ч до полного отделения зародышей от эндосперма. Затем содержимое из посуды пропускают через набор лабораторных решет с диаметром отверстий 5. 3 и 1 мм с последующей промывкой их проточной водой. Зародыши, оставшиеся на последнем решете, переносят в колбу вместимостью 250 см' и кипятят 40 мин в 15 % — 20 %-ном растворе щелочи, взятой в количестве 200 см3, после чего их тщательно отмывают ог щелочи. Отмытые зародыши помещают в стеклянный бюкс или колбу, где налито небольшое количество раствора анилинового синего или трипанового синего красителя в концентрации 0,1 %, доводят до кипения на электроплитке или спиртовке и кипятят в течение 10—20 с. При работе с химикатами следует соблюдать меры предосторожности. Потеря зародышей после всех операций не должна превышать 20 %. Зародыши можно хранить в 50 %-ном водном растворе глицерина. После кипячения каждый зародыш просматривают под микроскопом или бинокулярной лупой при увеличении (12х — 15х). В поле зрения должен бы ть виден один зародыш. Покровным стеклом зародыш накрывать не следует.

9.1.2.3    Зародыши располагают в рядки, очерченные восковым карандашом, с помощью препаровальных игл или небольшого скальпеля, и просматривают иод микроскопом на предметном стекле или в чашках Петри. Зародыши необходимо просматривать в основном со стороны зародышевой почки, корешков и колеоптиля (приложение Е). где может располагаться мицелий, и со стороны щитка. Грибница головни при малом увеличении микроскопа представляет собой комочки спутанных гифов мицелия. Гифы окрашены в сине-голубой цвет, имеют толщину 3 мкм. Встречаются редкие случаи, когда в ткани щитка находятся другие грибы помимо головни, но они имеют другое строение и ясно различимы.

9.1.3    Обработка результатов

Подсчитывают все инфицированные зародыши независимо от места локализации мицелия в органах эмбриона и вычисляют их содержание в процентах к числу просмотренных зародышей. Например, всего проанализировано 2000 зародышей, из них пораженных оказалось 10; процент поражения составляет 0.5 %.

10 Биологический метод

Метод применяют для выявления внешней и внутренней зараженности семян болезнями. Он основан на стимуляции развития и роста микроорганизмов в зараженных семенах.

Зараженность семян определяют при проращивании их во влажной камере, на питательных средах, песке или в рулонах фильтровальной бумаги.

10.1    Анализ семян во влажной камере

При проращивании семян во влажной камере заболевания, вызываемые бактериями, выявляют но размягчению и ослизненню тканей семени. Заболевания, вызываемые грибами на проросших и непроросших семенах, проявляются в виде пятен различной формы и окраски, налета грибницы, пикнид. уродливости, деформации или отмирания частей проростков.

Для контроля правильности идентификации пагогонов применяют микроскопирование.

10.1.1    Отбор проб

10.1.1.1    Из средней пробы, предназначенной для анализа семян на зараженность болезнями, выделяют навеску. Из семян основной культуры отбирают четыре рабочие пробы но 50 или 100 семян в зависимости от вида анализируемых культур.

10.1.2 Подготовка к анашзу

10.1.2.1    Для проращивания семян во алажной камере применяют стерильные сухие чашки Петри. Коха или стеклянные стаканы, накрытые стеклом. На дно чашек (стаканов) помещают марлю в три слоя тын фильтровальную бумагу в два слоя, или фильтровальную бумагу, положенную на гигроскопическую вату, толщиной слоя не более 0.25 см.

Марлю, комбинированный субстрат или фильтровальную бумагу в чашках Петри шли Коха увлажняют с помощью пипетки, слегка приоткрывая при этом с одного края крышку чашки. Увлажнение считают нормальным, если при наклоне чашки с марлевых кружочков или фильтровальной бумаги стекает несколько капель воды.

Семена раскладывают на ложе с помощью пинцета на расстоянии 1—2 см друг от друга в зависимости от их крупности.

160

ГОСТ 12044-93

Закрытые чашки Петри. Коха или стаканы с заложенными в них семенами помешают в термостат для проращивания.

10.1.2.2    Термостаты предварительно тщательно моют горячей водой с моющими средствами и дезинфицируют 1 %-ным раствором марганцовокислого калия через каждые 10 дней. Перед каждым фитоанализом их дезинфицируют спиртом или бактерицидной лампой в течение 30 мин. Один раз в месяц термостаты дезинфицируют с помощью бактерицидных ламп в течение 8 ч.

10.1.2.3    Чашки Петри, марля, фильтровальная бумага, вата, пинетки, применяемые для анализа. должны быть стерильными. Стекло, на котором выделяют навески и отсчитывают семена, совки, чашки весов, растильни и другие предметы дезинфицируют спиртом. Чашки Петри и Коха с марлевыми кружочками, ватой или фильтровальной бумагой, а также пинетки заворачивают в оберточную бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 130 'С в течение 1 ч (при немедленном использовании их стерилизуют без завертывания в бумагу) или в автоклаве иод давлением 0.09807 МПа (1 атм) в течение 40—50 мин. Металлические предметы (пинцеты, препаровальные иглы и другое оборудование) стерилизуют над пламенем спиртовой или газовой горелки в процессе работы. Воду стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин иод давлением 0.09807 МПа (1 атм). Допускается применять свежекипяченую воду. Воду кипятят в химических колбах, закрытых ватными пробками, в течение 30 мин. считая с момента закипания.

10.1.3    Проведение анализа

10.1.3.1 Просмотр семян пшеницы, ржи. ячменя, кукурузы, льна, сои, эфиромасличных культур, подсолнечника, гороха, овощной фасоли, моркови проводят в сроки, установленные настоящим стандартом; просмотр семян остальных культур проводят в сроки, установленные для определения всхожести но ГОСТ 12038. ГОСТ 30556. Виды болезней семян, выявляемые при проращивании во влажной камере, указаны в таблице I.

Т а б л и на 1 — Вилы болезней семян, выявляемые при проращивании во влажной камере

Наименование культуры

Болезни

1 Пшеница и ячмень

Фузариоз, гсльминтоспориозы. полосатая пятнистость, сетчатая пятнистость. алыернарноз. сспториоз, плесени

2 Рожь

Фузариоз, гсльминтоспориоз. сспториоз

3 Овес

Фузариоз. красно-бурая пятнистость

4 Кукуруза

Фузариоз, липлодиоз, серая гниль

5 Соя

Фузариоз, бактериоз, белая гниль, аскохитоз. цсркоспороз. псроноспороз

6 Рис

Гсльминтоспориоз. пнрнкуляриоз. фузариоз. альгернариоз

7 Горох

Аскохитоз, бактериоз, белая и серая жили

8 Фасоль

Антракноз, бактериоз, белая и серая гнили, аскохитоз

9 Подсолнечник

Белая и серая гнили

10 Лен

Фузариоз. антракноз. бактериоз, крапчатость, плесени

11 Морковь

Фомоз

12 Кориандр

Бактериоз, фузариоз. фомоз. сспториоз

13 Фенхель

Бактериоз

14 Шалфей

Бактериоз

161    7

10.1.3.2    Дли стимуляции образования коншшеносцев и конидий с целью идентификации патогенов некоторых грибов, например Drechslera graminea (полосатая пятнистость). Dr. teres (сетчатая пятнистость). Fusarium nivale (снежная плесень) и др.. необходимо 12 ч чередование света и темноты при проращивании семян в чашках Петри. Коха или стеклянных стаканах с фильтровальной бумагой (освещенность 750— 1250 люкс).

10.2    Анализ семян на питательных средах

10.2.1    Отбор проб

10.2.1.1. Из средней пробы, предназначенной для определения зараженности, выделяют навеску семян основной культуры, из которой отбирают четыре рабочие пробы по 50 семян в каждой и помещают их в стерильную посуду с питательной средой.

10.2.2    Подготовка к анализу

10.2.2.1    Приготовление картофельного агора:

200 г вымытого, очищенного, нарезанного ломтиками картофеля заливают 1000 см3 воды и кипятят в течение 40 мин. затем жидкость фильтруют. В отфильтрованную жидкость доливают воду до 1000 см3, добавляют 20 г агора и подогревают до его полного растворения. Посте растворения агара раствор фильтруют в горячем состоянии через несколько слоев марли с вагной прокладкой и стерилизуют иод давлением 0,09807 МПа (I атм) в течение 30 мин или текучим паром два раза по 1 ч через сутки. После стерилизации в питательную среду добавляют стерильный 50 %-ный раствор лимонной кислоты из расчета 0.1—0.05 см3 (одна капля) на 10 см3 или концентрированную молочную кислоту (4 см3 кислоты на 1000 см3 среды) и жидкость разливают по чашкам.

10.2.2.2    Приготовление картофельно-глюкозного агара:

На I дм3 приготовленного агара (10.2.2.1) перед стерилизацией добавляют 20—30 г глюкозы, а после стерилизации лимонную или молочную кислоту (10.2.2.1).

10.2.2.3    Приготовление среды из сухого агара Чапека

На 1 дм3 берут 45—50 г сухого агара Чапека и стерилизуют иод давлением 0.09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин.

10.2.2.4    Стерилизация питательных сред

Стерилизацию питательных сред проводят в автоклаве под давлением, без давления (текучим паром) или в кипятильнике.

Питательные среды без глюкозы стерилизуют под давлением 0.09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин. питательные среды с глюкозой стерилизуют под дарением 0.04904 МПа (0.5 атм) в течение 25 мин.

Стерилизацию питательных сред текучим паром проводят в два приема но 1 ч через сутки. В перерыве между первым и вторым приемами стерилизуемые жидкости держат при температуре 25 *С - 30 *С.

10.2.3 Проведение анализа

10.2.3.1    В стерильные чашки Петри диаметром 9.5—10 см наливают 10 см3 простерилизованно-го агара. Толщина стоя среды в чашке Петри должна быть 3—4 мм. Разливку питательных сред в чашки и закладку семян проводят в бактериологической камере (стерильном боксе). Раскладку семян проводят на застывшую питательную среду пинцетом, периодически стерилизуя его обжиганием на спиртовке.

10.2.3.2    Семена промывают струей воды под водопроводным краном в течение 1—2 ч и дезинфицируют 1 %-ным раствором марганцовокислого калия или 0.1 %-ным раствором азотнокислого серебра, или 96 %-ным спиртом в течение 1—2 мин. Затем семена промывают в стерильной или прокипяченной воде и просушивают между листами стерильной фильтровальной бумаги. Семена помешают в чашки Петри по 10—25 шт. в зависимости от культуры и ставят их для проращивания в термостат при температуре 22 *С — 25 ’С. Проращивание семян проводят в течение срока, указанного для определения всхожести семян по ГОСТ 12038.

10.2.3.3    Для контроля правильности определения болезней при просмотре семян небольшую часть развившейся колонии исследуют в капле воды под микроскопом.

10.3    Анализ семян в рулонах фильтровальной бумаги

10.3.1    Отбор проб — по 10.1.1.1.

10.3.2    Проведение анализа

10.3.2.1 Для проращивания семян используют два слоя увлажненной до пашой влагоемкости фильтровальной бумаги.

162

1

На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002 (ЕН 285—96).

2

На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

156