Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить ГОСТ Р 53912-2010 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на пищевые продукты и устанавливает ускоренный метод качественного определения (обнаружения) антибиотиков.

  Скачать PDF

Рекомендуется использовать ГОСТ 31903-2012 (ИУС 9-2013)

Действие завершено 15.02.2015
Дополнения:

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Сущность метода

4 Средства измерения, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы

5 Проведение исследования

6 Определение антибиотиков в анализируемой пробе

7 Требования, обесцвечивающие безопасность

Показать даты введения Admin

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ


<£>


НАЦИОНАЛЬНЫ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ


Й


ГОСТР

53912-

2010


ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ Экспресс-метод определения антибиотиков


Издание официальное


Москва

Стандартинформ

2011


Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации (ОАО «ВНИИС»)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 ноября 2010 г. № 364-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок— в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2011

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ Экспресс-метод определения антибиотиков

Foodstuffs. Express-method for determination of the antibiotics

Дата введения — 2012—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает ускоренный метод качественного определения (обнаружения) антибиотиков.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 53430-2009 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия ГОСТ 11773-76 Реактивы. Натрий фосфорно-кислый двузамещенный. Технические условия ГОСТ 13928-84 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовки их к анализу

ГОСТ 17206-96 Агар микробиологический. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов

Издание официальное

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Настоящий экспресс-метод устанавливает качественное определение (обнаружение) антибиотиков в пищевых продуктах, основанное на подавлении антибиотиком дегидрогеназной активности тест-культур в жидкой питательной среде.

4    Средства измерения, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы

4.1    Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания + 0,01.

4.2    Баня водяная с обогревом, поддерживающим температуру до 100 °С.

4.3    Термометр стеклянный жидкостный (нертутный) по ГОСТ 28498, с диапазоном измерения до 100 °С, ценой деления шкалы 1 °С.

4.4    Мясорубка или гомогенизатор.

4.5    Ножницы.

4.6    Чашки Петри по ГОСТ 25336.

4.7    Пробирки по ГОСТ 25336.

4.8    Центрифуга со скоростью вращения не менее 3000 об/мин.

4.9    Агар микробиологический по ГОСТ 17206.

4.10    Мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА).

4.11    Метиленовый синий, индикатор (0,5 %-ный водный раствор).

4.12    Глюкоза 40 %-ный раствор.

4.13    Тест-культуры

5    Проведение исследования

5.1    Отбор проб продукции

Отбор проб — по ГОСТ Р 53430, ГОСТ 13928, ГОСТ 26668, ГОСТ 26669, ГОСТ 26809.

5.1.1    Подготовка проб к исследованию

5.1.1.1    Молоко и сливки жидкие (в сыром или пастеризованном виде)

Сырое молоко исследуют непосредственно в день отбора проб. До начала анализа пробы молока и сливок хранят в холодильнике при температуре (4 + 1) °С. Затем отбирают пробу для анализа (не менее 10 см3) и помещают ее в пробирку.

5.1.1.2    Сухие молочные продукты (сухое молоко, сухие сливки, сухие детские молочные продукты, изготовленные на основе коровьего молока)

Непосредственно перед исследованием продукт подвергают восстановлению в кипяченой воде при температуре не более (45 + 1) °С. Пробу тщательно перемешивают, она не должна содержать нерастворенных частиц или комков. Из восстановленного продукта отбирают пробу для анализа в объеме не менее 10 см3 и переносят ее в пробирку.

2

ГОСТ Р 53912-2010

5.1.1.3    Яйца, меланж

Яйца или меланж, предназначенные для исследования, предварительно нагревают на водяной бане при температуре (65 ± 1) °С в течение 10—15 мин до коагуляции белка, затем содержимое яиц или меланж тщательно перемешивают и отбирают пробу для анализа массой не менее 10 г.

5.1.1.4    Мясо и субпродукты

Мясо и субпродукты (печень, почки, язык и т. д.) скота и птицы, предназначенные для исследования, измельчают ножницами или при помощи мясорубки или гомогенизатора, затем 10 г пробы мышечной ткани помещают в чашку Петри и дают стечь тканевому соку. Тканевый сок в объеме не менее 10 см3 переносят в пробирку.

5.1.2    Термическая обработка проб пищевых продуктов

Перед проведением исследования пробирку с пробой, отобранной по 5.1.1, помещают в водяную баню с температурой (60 + 1) °С. Время прогревания 30 мин отмечают от момента достижения постоянной температуры внутри пробирки.

5.1.3    Тест-культуры для определения антибиотиков

Тест-культурами служат вегетативные формы спорообразующих и неспорообразующих культур: Bacillus subtilis, вар. 6633; Bacillus subtilis, вар. L2; Bacillus mycoides 537; Micrococcus luteum ATCC 9341, обладающих высокой чувствительностью к антибиотикам.

Для пенициллина и стрептомицина используют следующие тест-культуры — Bacilus subtilis, вар. 6633; Basilus mycoides 537 и Micrococcus luteum ATCC 9341, для тетрациклина — Bacillus subtilis, вар. L2.

Музейные штаммы вегетативных форм тест-культур хранят в пробирке со столбиком полужидкого 0,4 %-го питательного агара.

5.1.3.1    Приготовление тест-культур

Вначале тест-культуру рассеивают на чашки Петри с 2 %-ным мясо-пептонным агаром для получения отдельных колоний. Чашки ставят на (20 + 3) ч в термостат при температуре (37 + 1) °С. После чего мелкие колонии отсевают в пробирки с 2 %-ным мясо-пептонным скошенным агаром и вновь инкубируют в термостате при температуре (37 + 1) °С в течение (20 + 3) ч.

Микробную взвесь готовят путем смыва физиологическим раствором суточной культуры со скошенного агара. Важно, чтобы смыв культур был абсолютно гомогенным и не содержал комочков.

Срок хранения полученной взвеси в холодильнике при температуре (4 + 1) °С — 7 дн.

5.1.3.2    «Рабочая доза» тест-культур

«Рабочая доза» тест-культуры — наибольшее разведение суспензии, вызывающее обесцвечивание метиленового синего в определенное время в термостате при температуре (37 ± 1) °С. При этом учитывают, что время обесцвечивания метиленового синего обратно пропорционально количеству клеток тест-культуры в смыве. Время постановки реакции равно одному часу. Оно выявляет в суспензиях различной плотности одну и ту же клеточную нагрузку для каждой тест-культуры. «Рабочую дозу» тест-культур устанавливают по дегидрогеназной активности клеток.

5.1.3.3    Приготовление «рабочей дозы» тест-культуры

Полученную взвесь тест-культуры (5.1.3.1) титруют путем последовательных разведений в 1 см3 питательного бульона в соотношении 1:2. Пробирки с тест-культурой встряхивают и помещают на 3 ч в термостат при температуре (37 + 1) °С. Затем для создания условий, близких к анаэробным, в каждую пробирку вносят по 2 см3 растопленного и охлажденного до температуры (45 ± 1) °С 1 %-ного питательного агара с метиленовым синим и глюкозой (оба ингредиента асептично вносят в растопленный 1 %-ный питательный агар из расчета: на 100 см3 среды 0,4 см3 0,5-ного водного раствора метиленового синего и 1 см3 40 %-ного раствора глюкозы). Пробирки встряхивают и вновь инкубируют в термостате при температуре (37 + 1) °С в течение 1—2 ч, после чего учитывают результат (таблица 1).

Таблица 1 — Определение «рабочей зоны» тест-культур

Тест-культура

Время,

ч

Учет интенсивности клеточного дыхания

Разведение тест-культуры (5.1.3.3)

1:2

1:4

1:8

1:16

1:32

1:64

1:128

1:256

1:512

1:1024

B.subtilis, вар. 6633

1

+

+

+

+

+

+

+

+

_

_

B.subtilis, вар. L2

1

+

+

+

+

+

+

+

+

+

-

Окончание таблицы 1

Тест-культура

Время,

ч

Учет интенсивности клеточного дыхания

Разведение тест-культуры (5.1.3.3)

1:2

1:4

1:8

1:16

1:32

1:64

1:128

1:256

1:512

1:1024

В.mycoides 537

i

+

+

+

+

+

+

+

-

-

-

Micrococcus luteum ATCC 9341

i

+

+

+

+

+

+

-

-

-

-

Примечание (+) — полное обесцвечивание метиленового синего, (-) — отсутствие обесцвечивания.

Дыхательные ферменты бактериальных клеток тест-культур восстанавливают метиленовый синий в анаэробных условиях, и содержимое пробирок, имеющее синий цвет, обесцвечивается. Разведение тест-культуры в последней пробирке с обесцвеченным метиленовым синим (+) принимают за «рабочую дозу». Функциональная активность дегидрогеназ тест-культур стабилизируется через сутки после получения смыва, который хранится в холодильнике в течение одной недели. Поэтому «рабочую дозу» первый раз определяют через сутки, а затем — через три дня.

Максимальное разведение тест-культур, вызывающее полное обесцвечивание метиленового синего и выявленное через один час инкубации в термостате при температуре 37 °С, принимают за «рабочую дозу».

В среднем, «рабочую дозу» тест-культур определяют:

для Bacillus subtil is, вар. 6633 в разведении 1:256;

-    Bacillus subtillis, вар. L2    »    1:512;

-    Bacillus mycoides 537    »    1:128;

-    Micrococcus luteum ATCC 9341    »    1:64.

6 Определение антибиотиков в анализируемой пробе

6.1    Подготовленные к исследованию анализируемые пробы по 5.1.1 в объеме 0,5 см3 вносят в пробирки с таким же (0,5 см3) объемом мясо-пептонного бульона и тщательно перемешивают. Во все пробирки добавляют 0,5 см3 взвеси, содержащей двойную «рабочую дозу» тест-культуры (5.1.3.3).

Последняя пробирка не содержит испытуемого субстрата и служит контролем ферментативной активности тест-культуры.

Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 3-часовую экспозицию тест-культуры с испытуемым субстратом.

После этого в каждую пробирку вносят по 2 м3 растопленного и охлажденного до температуры (45 +1) °С мясо-пептонного агара с метиленовым синим и глюкозой. Содержимое пробирок смешивают и вновь инкубируют в термостате при температуре (37 + 1) °С в течение 1—2 ч.

6.2    Учет результатов определения антибиотиков

6.2.1    При отсутствии в испытуемых пробах антибиотика дыхательные ферменты бактериальных клеток тест-культур не нарушаются и восстанавливают (т. е. обесцвечивают) в анаэробных условиях метиленовый синий.

6.2.2    В контрольной пробирке, где отсутствует анализируемая проба, также происходит обесцвечивание в течение 1—2 ч наблюдения в термостате при температуре (37 + 1) °С (контроль ферментативной активности бактериальных клеток тест-культуры).

6.2.3    При наличии антибиотика в анализируемой пробе дыхательные ферменты бактериальных клеток блокируются, метиленовый синий не восстанавливается, цвет остается синим.

4

ГОСТ Р 53912-2010

7 Требования, обесцвечивающие безопасность

При выполнении работ необходимо соблюдать следующие требования:

-    помещение лаборатории должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021;

-    содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005;

-    безопасность при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007;

-    требования безопасности при работе в микробиологической лаборатории с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) по документу, утвержденному в установленном порядке;

-    требования техники безопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.

5

УДК 637.11:543.06:006.354    ОКС 65.160    Н09    ОКСТУ 9209

Ключевые слова: пищевые продукты, качественное определение, экспресс-метод, антибиотики, тест-культура, «рабочая доза», пробы

Редактор М.Е. Никулина Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор М.В. Бучная Компьютерная верстка Л.А. Круговой

Сдано в набор 24.08.2011. Подписано в печать 06.09.2011. Формат 60 х 84^. Гарнитура Ариап. Уел. печ. л. 0,93. Уч.-изд. л. 0,73. Тираж 211 экз. Зак. 824.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.rn    info@gostinfo.rn

Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 117418 Москва, Нахимовский проспект, 31, к. 2.