Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

15 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ Р 52471-2005 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Настоящий стандарт устанавливает иммуноферментный метод определения содержания микотоксинов (афлатоксин В1, роридин А, охратоксин А, стеригматоцистин, Т-2 токсин, зеараленон, фумонизин В1) в кормах.

Настоящий стандарт распространяется на зерновые корма, зернобобовые кормовые культуры, искусственно высушенные и грубые корма, продукцию комбикормовой промышленности (комбикорма полнорационные, комбикорма-концентраты), сырье для производства кормов и кормовые добавки, за исключением кормовых добавок минерального происхождения и продукции органического синтеза

  Скачать PDF

Рекомендуется использовать ГОСТ 31653-2012 (ИУС 12-2012)

Действие завершено 01.07.2013

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины, определения, обозначения и сокращения

4 Сущность иммуноферментного метода определения

5 Прецизионность метода

6 Требования к условиям выполнения измерений

7 Средства измерений и вспомогательное оборудование

8 Реактивы, материалы, посуда

9 Подготовка к выполнению определения

10 Определение микотоксинов

11 Обработка результатов измерений

12 Контроль точности результатов измерения

13 Требования безопасности

Приложение А (обязательное) Сведения по комплектации тест-систем

Приложение Б (рекомендуемое) Форма для записи результатов

Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов анализа

Библиография

Показать даты введения Admin

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

ГОСТР

52471-

2005

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА

Иммуноферментный метод определения микотоксинов

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2006

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» Россельхозакадемии

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 декабря 2005 г. № 489-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет

© Стандартинформ. 2006

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 52471-2005

Содержание

1    Область применения...................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................1

3    Термины, определения, обозначения и сокращения...............................2

4    Сущность иммуноферментного метода определения..............................2

5    Прецизионность метода.................................................3

6    Требования к условиям выполнения измерений..................................4

7    Средства измерений и вспомогательное оборудование.............................4

8    Реактивы, материалы, посуда.............................................4

9    Подготовка к выполнению определения.......................................5

10    Определение микотоксинов.............................................7

11    Обработка результатов измерений.........................................9

12    Контроль точности результатов измерения....................................9

13    Требования безопасности...............................................9

Приложение А (обязательное) Сведения по комплектации тест-систем...................10

Приложение Б (рекомендуемое) Форма для записи результатов.......................10

Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов анализа.................11

Библиография........................................................11

III

ГОСТ P 52471—2005

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА

Иммуноферментный метод определения микотоксинов

Feedstuffs.

Immu noenzyme method of mycotoxin determination

Дата введения — 2007—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает иммуноферментный метод определения содержания мико-токсинов (афлатоксин В,, роридин А, охратоксин А. стеригматоцистин, Т-2 токсин, зеараленон. фумони-зин В,) в кормах

Настоящий стандарт распространяется на зерновые корма, зернобобовые кормовые культуры, искусственно высушенные и грубые корма, продукцию комбикормовой промышленности (комбикорма полнорационные, комбикорма-концентраты), сырье для производства кормов и кормовые добавки, за исключением кормовых добавок минерального происхождения и продукции органического синтеза.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 8.563-96 Методики выполнения измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р 51088-97 Наборы реагентов для клинической лабораторной диагностики. Общие технические условия

ГОСТ 8.315-97 Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов Основные положения

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность Общие требования.

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды Размещение и обслуживание

Издание официальное

ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы Кислота серная. Технические условия ГОСТ 6709-72 Реактивы Вода дистиллированная Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13586.3-83 Зерно Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 13979.0-86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования Г ОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторн ые стеклянн ые. Типы, основн ые параметры и размеры

ГОСТ 27262-87 Корма растительного происхождения. Методы отбора проб ГОСТ 27668-88 Мука и отруби Приемка и методы отбора проб

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины, определения, обозначения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 8 563. ГОСТ Р ИСО 5725-1ГОСТ Р 51088. а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1    тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.

3.1.2    основной раствор: Раствор реактива, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.

3.1.3    вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно из основного раствора и необходимый для приготовления других типов растворов

3.1.4    рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:

ИФА — иммуноферментный анализ:

ОП — оптическая плотность:

АГ — антиген;

АТ — антитела:

АНС — 8-анилин-1-нафталинсульфокислота:

ФДА — о-фенилендиамин.

4    Сущность иммуноферментного метода определения

Иммуноферментный метод основан на измерении содержания микотоксинов в пробах с помощью непрямого твердофазного конкурентного ИФА рабочих растворов экстрактов (рисунок 1).

Непрямой ИФА основан на способности микотоксинов взаимодействовать со специфичными антителами (АТ) в условиях конкуренции с белковым конъюгатом микотоксина, нанесенным на поверхность ячеек планшета. — твердофазным антигеном (АГ)

Аналитический сигнал (регистрируемое значение оптической плотности), измеряющий степень взаимодействия АТ с АГ. обратно пропорционален массовой концентрации микотоксина в рабочем растворе

2

ГОСТ Р 52471-2005

Рисунок 1 — Основные этапы иммуноферментного метода определения

5 Прецизионность метода

Показатели прецизионности метода определены в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-2. ГОСТ Р ИСО 5725-3 и представлены в таблице 1.

Таблица 1 — Показатели прецизионности метода иммуноферментного определения микотоксинов

Определяемый компонент

Содержание.

мг/кг

Относительное

стандартное

отклонение

повторяемости

Относительное

стандартное

отклонение

промежуточной

прецизионности

SИТОГ) оп.-%

Предел

повторяемости

W*

Предел

промежуточной

прецизионности

^ATOflom* *

Афлатоксин В,

0.002—0.050

15

18

42

50

Роридин А Охратоксин А Стеригматоцистин

0.004—0.100

13

16

36

45

Т-2 токсин Зеараленон

0.020—0.500

12

14

34

39

Фумонизин В-

0.050—5.000

12

14

34

39

Расхождение между результатами двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, может превышать предел повторяемости гне более одного раза из двадцати

Расхождение двух результатов анализа, полученных в условиях промежуточной (внутрилабора-торной) прецизионности (разное время, разные операторы, разное оборудование), может превышать значение предела промежуточной прецизионности /?д Т0Е) не более одного раза из двадцати. 1

6    Требования к условиям выполнения измерений

Измерения проводят в лабораторных условиях при температуре окружающего воздуха (23 ± 5) °С. атмосферном давлении (97 ± 10) кПа, относительной влажности (65 i 15) %. частоте переменного тока (50 ± 5) Гц. напряжении в сети (220 ± 10) В

7    Средства измерений и вспомогательное оборудование

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений и вспомогательное оборудование:

фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерения оптической плотности 0—2.5 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного измерения не более ± 0,005 в комплекте с интерференционным светофильтром для длин волн 490—492 нм (1):

весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ± 0.0002 г;

цилиндры поГОСТ 1770 исполнения 1 вместимостью 25.100.1000 см1: колбы по ГОСТ 1770 исполнения 2 вместимостью 100 см1;

дозаторы пипеточные для объемов дозО,005—0.05:0.02—0.2; 1—5 см1 (2) в комплектах со сменными одноразовыми наконечниками:

микрошприц МШ-10 вместимостью 0.01 см1 (3):

микрошприцы вместимостью 0.1 см1 (кат. №Z 10.895-2) и 0.5 см1 (кат. №Z 10.897-9). фирма «Алдрич»;

шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры (130 ± 5) °С (4); шкаф холодильный любого типа, обеспечивающий среднюю температуру в холодильной камере не выше 10°С[5);

дистиллятор любого типа (6):

калькулятор любого типа с логарифмической функцией.

Допускается использование другого оборудования и средств измерений, позволяющих воспроизводить метрологические характеристики, указанные в данном стандарте Могут быть использованы ГСО состава растворов микотоксинов (ГОСТ 8.315)с аттестованными значениями массовых концентраций и предназначенные для выполнения ИФА

8    Реактивы, материалы, посуда

При выполнении измерений применяют следующие реактивы и материалы:

кислоту серную концентрированную по ГОСТ 4204;

натрий сернистокислый по нормативному документу;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709:

ацетонитрил, ч.д.а [7):

препараты микотоксинов, фирма «Сигма»:

афлатоксина В, (кат. № А 6636).

роридина А (кат № R 7502).

охратоксина А (кат. № 01877).

стеригматоцистина (кат. № S 3255),

Т-2 токсина (кат № Т 4887). зеараленона (кат № Z 2125). фумонизина В1 (кат. № А1147);

тест-системы для непрямого твердофазного конкурентного ИФА в комплектации с реактивами АТ. АГ. ФК. БУФЕР-ОТ, БУФЕР-Р1. БУФЕР-Р2. СУБСТРАТ. ФДА (приложение А), предназначенные для определения микотоксинов:

афлатоксина В, в диапазоне концентраций 0.00004—0.001 мкг/см1 (8). роридина А в диапазоне концентраций 0.00004—0.001 мкг/см1 (91. охратоксина А в диапазоне концентраций 0.00008—0,002 мкг/см* (10). стеригматоцистина в диапазоне концентраций 0.00008—0.002 мкг/см1 (11),

Т-2 токсина в диапазоне концентраций 0.0004—0.01 мкг/см1 (12). зеараленона в диапазоне концентраций 0.0004—0.01 мкг/см1 (13).

ГОСТ Р 52471-2005

фумонизина В, в диапазоне концентраций 0.001—0.1 мкг/см3 [14]; планшет 96-ячеечный полистироловый наборный [15]; пробирки по ГОСТ 1770 исполнения 1 вместимостью 10 см3; колбы по ГОСТ 25336 типа Кн вместимостью 100.500. 1000 см3; воронки по ГОСТ 25336 В-56-80 ХС;

флаконы вместимостью 2 см3. фирма «Сигма» (кат. № Z11. 508-8); бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026; бумагу масштабно-координатную по ГОСТ 334 марки Н-1.

Допускается использовать другие реактивы и материалы по качеству не хуже указанных в данном стандарте

9 Подготовка к выполнению определения

9.1    Подготовка проб

Отбор проб и их подготовка к определению—по методам, указанным в нормативных документах на конкретную продукцию: комбикорма — по ГОСТ 13496.0. зерно — по ГОСТ 13586.3. жмыхи и шроты — поГОСТ 13979.0, мука и отруби — по ГОСТ 27668. искусственно высушенные и грубые корма — по Г ОСТ 27262. Средние пробы следует измельчать до порошкообразного состояния, размол средних проб рассыпных и гранулированных кормов проводить по ГОСТ 13979.0.

При проведении аналитических измерений одновременно используют две параллельные пробы.

9.2    Подготовка лабораторной посуды

Лабораторную стеклянную посуду следует мыть хромовой смесью, многократно промывать водопроводной водой и один раз ополаскивать дистиллированной водой. Высушивать посуду необходимо в сушильном шкафу.

9.3    Подготовка прибора к работе

Подготовку и проверку фотометра проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации и техническим описанием к прибору.

9.4    Приготовление основных и вспомогательных растворов

9.4.1    Приготовление раствора для остановки ферментативной реакции

Навеску 1,26 г безводного сернистокислого натрия помещают в колбу вместимостью 500 см3. Цилиндром вместимостью 100 см3 отмеряют 80.0 см3 воды, вливают в колбу и перемешивают до полного растворения Цилиндром вместимостью 25 см3 отмеряют 20.0 см3 концентрированной серной кислоты, осторожно вливают кислоту в раствор, перемешивают и колбу закрывают пробкой. Хранят при температуре (23 ± 5) °С в вытяжном шкафу. Срок годности — 6 мес.

9.4.2    Приготовление смеси ацетонитрила и воды

Цилиндром вместимостью 1000 см3отмеряют 600 см3 ацетонитрила и переносят в коническую колбу вместимостью 1000 см3. Затем тем же цилиндром отмеряют 100 см3 дистиллированной воды, переносят ее в колбу, смесь перемешивают несколькими вращательными движениями и колбу закрывают пришлифованной пробкой Хранят при температуре (23 ± 5) X. Срок годности — 6 мес.

9.4.3    Приготовление основных растворов микотоксинов

По 1 мг кристаллических микотоксинов количественно переносят в мерные колбы вместимостью 100 см3 смесью ацетонитрила и воды (см. 9.4,2).

Содержимое колб тщательно перемешивают до полного растворения микотоксинов, после чего объем в колбах доводят до метки той же смесью, содержимое колб вновь тщательно перемешивают, переносят в колбы вместимостью 100 см3 и закрывают пробкой Массовые концентрации полученных растворов микотоксинов составляют 0.01 мг/см3 (10 мкг/см3). Основные растворы хранят в холодильнике в колбах, обернутых алюминиевой фольгой Срок годности основных растворов микотоксинов — 1 год.

9.4.4    Приготовление вспомогательных растворов микотоксинов

Вспомогательные растворы микотоксинов хранят в холодильнике во флаконах вместимостью 2 см3, обернутых алюминиевой фольгой. Срок годности вспомогательных растворов микотоксинов — 1 год.

Приготовление вспомогательных растворов микотоксинов из основных растворов проводят по 9.44.1—9.4.4.3.

9 4.4.1 Приготовление растворов афлатоксина В, ироридинаА

Микрошприцем вместимостью 0,01 см3 отмеряют по 0,001 см3основных растворов микотоксинов и переносят их во флаконы вместимостью 2.0 см3 Микрошприцем вместимостью 0.5 см3 добавляют по 2

1.0    см3смеси ацетонитрила и воды (см. 9.4.1). плотно закрывают их крышками, тщательно перемешивают раствор и наносят на флаконы маркировку. Концентрации вспомогательных растворов составляют 0.00001 мг/см3(0.01 мкг/см3).

9.4    4.2 Приготовление растворов охратоксина А и стеригматоцистина

Микрошприцем вместимостью 0.01 см3отмеряют по 0.002 см3основных растворов микотоксинов и переносят их во флаконы вместимостью 2.0 см3. Микрошприцем вместимостью 0.5 см3 добавляют по

1.0    см3 смеси ацетонитрила и воды (см. 9 4.1). плотно закрывают их крышками, тщательно перемешивают раствор и наносят на флаконы маркировку. Концентрации вспомогательных растворов составляют 0.00002 мг/см3 (0.02 мкг/см3).

9.4.4.3 Приготовление растворов Т-2 токсина и зеараленона

Микрошприцем вместимостью 0,01 см3 отмеряют по 0,01 см3 основных растворов микотоксинов и переносят их во флаконы вместимостью 2,0 см3. Микрошприцем вместимостью 0,5 см3 добавляют по 0.99 см3 смеси ацетонитрила и воды (см. 9.4.1), плотно закрывают их крышками, тщательно перемешивают раствор и наносят на флаконы маркировку. Концентрации вспомогательных растворов составляют 0.0001 мг/см3 (0.1 мкг/см3).

9.4.4    4 Приготовление раствора фумонизина В,

Микрошприцем вместимостью 0.1 см3 отмеряют 0.1 см3 основного раствора микотоксина и переносят его во флакон вместимостью 2.0 см3. Микрошприцем вместимостью 0.5 см3 добавляют 0.9 см3 смеси ацетонитрила и воды (см. 9.4.1), плотно закрывают его крышкой, тщательно перемешивают раствор и наносят на флакон маркировку. Концентрация вспомогательного раствора составляет 0,001 мг/ см(1.0 мкг/см3).

9.5    Подготовка рабочего журнала

9.5.1    В рабочем журнале вычерчивают контур, состоящий из двух одинаковых рамок со столбцами по восемь клеток в каждом, число которых соответствует числу полосок планшета, взятых в работу. Целесообразно анализировать число проб, кратное четырем, поскольку в этом случае требуется целое число полосок.

В клетках левой рамки значками 0. КО. К1. К2. КЗ и цифрами, обозначающими номер пробы, указывают расположение вариантов, при этом для вариантов 0 и К1 берут по одной клетке, для остальных—по две и придерживаются хаотического их расположения Клетки правой рамки оставляют свободными. Форма для записи результатов и пример расположения вариантов приведены в приложении Б.

9.5.2    В рабочем журнале вычерчивают таблицу для записи результатов измерений (приложение В).

На масштабно-координатной бумаге вычерчивают перпендикулярные оси координат, наносят на оси абсцисс три разграничительных метки на расстоянии 35 мм друг от друга с цифровыми обозначениями. соответствующими десятичным логарифмам значений массовых концентраций калибровочных растворов микотоксинов К1, К2, КЗ. и общее обозначение оси — lg С. мкг/см3; на оси ординат — девять разграничительных меток на расстоянии 10 мм друг от друга с цифровыми обозначениями от 10 до 90 и общее обозначение оси — ОП/ОП0 х 100, %.

9.6    Подготовка планшета к определению

Для приготовления рабочих растворов реактивов используют дистиллированную воду . Для каждого реактива и раствора используют отдельные сменные наконечники Здесь и далее приведены расходы реактивов на две полоски планшета, для другого числа полосок - смешивав мые объемы пропорционально изменяют.

9.6.1    Приготовление и внесение в ячейки рабочего раствора АГ

Дозатором отмеряют 3.2 см3 воды и вливают в пробирку, затем отмеряют 0.8 см3 реактива БУФЕР-Р1 и добавляют в ту же пробирку сводой. Дозатором отмеряют 0,02 см3 реактива АГ. вливают его в раствор, перемешивают и наносят маркировку АГ. Дозатором отмеряют по 0.165 см3 раствора АГ и вливают во все ячейки.

9.6.2    Инкубация

Ячейки, заполненные раствором АГ, накрывают стеклянной или пластиковой крышкой, соответствующей размеру планшета, и оставляют на 16 ч в холодильной камере холодильного шкафа.

9.6.3    Приготовление рабочего раствора реактива БУФЕР-ОТ

Цилиндром вместимостью 100 см3 отмеряют 57 см3 воды и переносят в коническую колбу вместимостью 100 см3. Дозатором добавляют 3,0 см3 реактива БУФЕР-ОТ. закрывают колбу пробкой, перемешивают. наносят маркировку ОТ. 3

ГОСТ Р 52471-2005

9.6.4 Отмывка

Раствор из ячеек планшета, оставленный для инкубации в холодильной камере на 16 ч. сливают вытряхиванием Дозатором отмеряют по 0.25 см3 раствора ОТ. вливают во все ячейки, оставляют на 2 мин и сливают вытряхиванием Процедуру повторяют еще три раза.

9.7 Экстракция

Навески проб массой 10 г помещают в конические колбы вместимостью 100 см3. Цилиндром вместимостью 100 см3 отмеряют и добавляют к навескам грубых кормов (сено, солома) no 100 см3 смеси ацетонитрила и воды (см 9.4.2). к навескам всех остальных кормов — по 50 см3 этой смеси Колбы закрывают пробками, интенсивно встряхивают 3 — 4 раза круговыми движениями, не допуская разбрызгивания и попадания содержимого на горлышко и пробку, и оставляют на 16 ч при температуре 18 °С—22 °С Затем содержимое колб с навесками проб интенсивно встряхива ют 3 —4 раза и фильтруют в другие колбы через бумажный фильтр, помещенный на воронку.

После окончания фильтрования колбы закрывают и наносят маркировки, соответствующие номерам проб Полученные фильтраты именуются далее экстрактами.

10 Определение микотоксинов

10.1    Приготовление рабочего раствора реактива БУФЕР-Р2

Дозатором отмеряют 9.0 см3воды. переливают в пробирку, добавляют 1.0 см3 реактива БУФЕР-Р2. перемешивают, наносят маркировку Р2.

10.2    Приготовление рабочих растворов экстрактов

Дозатором отмеряют по 0,27 см3 раствора Р2 и вливают их в пробирки Дозатором отмеряют по 0.03 см3 экстрактов, вливают в пробирки, перемешивают и наносят маркировки, соответствующие номерам проб Кратность разбавления экстрактов равна 10. При необходимости может быть использована кратность разбавления экстрактов более 10.

10.3    Приготовление рабочего раствора КО

Рабочий раствор КО используют для дальнейшего разбавления рабочих растворов экстрактов и для приготовления рабочих растворов микотоксинов.

Дозатором отмеряют 1,35 см3 раствора Р2 и вливают его в пробирку Дозатором отмеряют 0,15 см3 смеси ацетонитрила и воды (см. 9.4.2). Раствор перемешивают и наносят маркировку КО.

10.4    Приготовление рабочих растворов микотоксинов

Объемы рабочих растворов не изменяют в зависимости от числа полосок планшета, взятых в работу

10.4.1    Приготовление рабочих растворов афлатоксина B1t роридина А. стеригматоцистина, Т-2 токсина, зеараленона и охратоксина А

Дозатором в одну пробирку отмеряют 0.27 см3 раствора Р2 и в две пробирки — по 0.24 см3 раствора КО. Шприцем вместимостью 0.1 см3 отмеряют 0,03 см3 вспомогательного раствора микотоксина и вливают в первую пробирку, раствор перемешивают и наносят маркировку К1.

Дозатором отмеряют 0.06 см3 раствора К1. вливают во вторую пробирку, раствор перемешивают и наносят маркировку К2.

Дозатором отмеряют 0.06 см3 раствора К2. вливают в третью пробирку, перемешивают и наносят маркировку КЗ.

10.4.2    Приготовление рабочих растворов фумонизина В1

Дозатором в одну пробирку отмеряют 0,27 см3 раствора Р2 и в две пробирки — по 0,27 см3 раствора КО. Шприцем вместимостью 0.1 см3 отмеряют 0.03 см3 вспомогательного раствора микотоксина и вливают в первую пробирку, раствор перемешивают и наносят маркировку К1.

Дозатором отмеряют 0.03 см3 раствора К1. вливают во вторую пробирку, раствор перемешивают и наносят маркировку К2.

Дозатором отмеряют 0.03 см3 раствора К2, вливают в третью пробирку, перемешивают и наносят маркировку КЗ.

Концентрации рабочих растворов микотоксинов, приготовляемых по 10.4. и соответствующие им значения десятичных логарифмов приведены в таблице 2. 4

1

2

3

4