Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

19 страниц

396.00 ₽

Купить ГОСТ Р 52147-2003 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на белково-витаминно-минеральные и амидо-витаминно-минеральные добавки и устанавливает хроматографические методы определения ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холекальциферола) (витамина D), токоферола-ацетата (витамина Е)

  Скачать PDF

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определения

4 Диапазоны измерений содержания витаминов и характеристики погрешности измерений

5 Требования техники безопасности

6 Подготовка проб к испытанию

7 Определение содержания ретинола-ацетата (витамина А) и токоферола-ацетата (витамина Е) фотометрическим методом

8 Определение содержания ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холекальциферола) (витамина D), токоферола-ацетата (витамина Е) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

9 Контроль точности испытаний

Приложение А Хроматограммы экстрактов витаминов A, D, Е

Приложение Б Библиография

Показать даты введения Admin

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

БЕЛКОВО-ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫЕ И АМИДО-ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫЕ ДОБАВКИ

Методы определения содержания ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холекальциферола) (витамина D), токоферола-ацетата (витамина Е)

И панне официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»);

Всероссийским научно-исследовательским и технологическим институтом птицеводства (ВНИТИП);

Всероссийским научно-исследовательским институтом кормов им. В.Р. Вильямса (ВНИИК)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ГК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 3 декабря 2003 г. N? 342-ст

3    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

© И ПК Издательство стандартов. 2004

Настоящий стандарт нс может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального излания без разрешения Госстандарта России

II

ГОСТ I» 52147-2003

Содержание

1    Область применения.......................................................1

2    Нормативные ссылки.......................................................I

3    Определения.............................................................2

4    Диапазоны измерений содержания витаминов и характеристики погрешности измерений. . . 2

5    Требования техники безопасности.............................................2

6    Подготовка проб к испытанию...............................................3

7    Определение содержания ретинола-ацетата (витамина А) и токоферола-ацетата (витамина Е)

фотометрическим методом..................................................3

8    Определение содержания ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холе катыш-

ферола) (витамина !)). токоферола-ацетата (витамина Е) метолом высоко аффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)..............................................8

9    Контроль точности испытаний...............................................II

Приложение А Хроматограммы экстрактов витаминов A. D. Е........................13

Приложение Б Библиографии.................................................14

III

II Л Ц И О Н Л л Ь II Ы Й СТАНДАРТ РОСС И Й С К О Й ФЕДЕРАЦИ И

БЕЛ КОВО-ВИТАМ И111IO- М И11Е PAJIЫIЫ Е И AM ИДО- ВI ПАМ ИНН О- М И11ЕРАЛ ЫIЫ Е ДО БАВКИ

Методы определения содержания ретинола-ацетата (витамина А), эргока.1ышфсрола (хо.н*ка.1Ы1ифсро.1а) (вигамина D), токоферола-ацетата (витамина Е)

Protcin-vitamin-mincral and amide-vitamin-mincral additives.

Methods for the determination of retinol-acetate (vitamin A), argocalcifcrol (holccalcifcrol) (vitamin D>,

tokoferol-acetate (vitamin E)

Дата в веления 2005—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на бслково-витаминно-минсральныс и амило-витаминно-минеральные добавки и устанавливает хроматографические методы определения ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холекалышферола) (вигамина D). токоферола-ацетата (вигамина Е)

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобсэопасностъ статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Элсктробс зопасность. Общие требования и номенклатура средств шииты

ГОСТ 1770-74 Посула мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4147-74 Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия ГОСТ 4166-76 Натрии сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 9147-80 Посула и оборудование фарфоровые. Технические условия ГОСТ 9736-91 Приборы электрические прямого преобразования для измерения нсэлсктри-чсских величин. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия ГОСТ 19627-74 Гидрохинон (паралиоксибензол). Технические условия ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посула и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

И ианиг официальное

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посула лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1 — XI) Посула лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

3    Определении

В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями.

3.1    С одержание витамина Л: Содержание ретинола-ацетата, определенное в соответствии с настоящим стандартом и выраженное в международных единицах в 1 кг испытуемой пробы (МЕ/кг). I ME витамина А соответствует 0,344 мкг ретинола-а пега га.

3.2    Содержание витамина Е: Содержание токоферола-ацетата, определенное в соответствии с настоящим стандартом и выраженное в миллиграммах в I кг (мг/кг) испытуемой пробы.

3.3    Содержание витамина I): Содержание >ргок;иытферола (витамина 1)т) иди холскалышфс-рола (витамина Dj). определенное в соответствии с настоящим стандартом и выраженное в международных единицах в I кг испытуемой пробы (МЕ/кг). 1 ME витамина D соответствует 0.025 мкг эргокалышферола (холскалышферола).

4    Диапазоны измерений содержания витаминов и характеристики

погрешности измерений

Диапазоны измерений содержания витаминов и характеристики погрешности измерений приведены в таблице 1.

Таблица 1

Наименование витамина н его единица итмерения

Вид хроматографии

Днапаюи измерений содержании витамина

Гранины относительной погрешности. %, (А)

Р - 0.95

Витамин А. тыс. МЕ/кг

Колоночная

От 5.0 до 50 включ.

± 25

Св. 50 .100 .

± 20

. 100 . 300 .

± 15

вэж

От 5.0 до 100 включ.

± 20

Св. 100 . 300 »

± 15

Витамин П. мк/кг

Колоночная

От 10 ло 500 включ.

±20

Св. 500 .1000 .

± 15

вэж

От 10 до 100 включ.

± 20

Св. 100 . 1000 .

± 15

Витамин 1). тыс. МЕ/кг

ВЭЖ

От 5.0 ло 20 включ.

±20

Св. 20 . 50 .

± 15

5 Требования техники безопасности

5.1    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и ГОСТ 12.1.018 и элсктробсзопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на

5.2    Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить в вытяжном шкафу.

5.3    При работе с газовыми баллонами необходимо руководствоваться НД |1|.

ГОСТ I» 52147-2003

6    Подготовка проб к испытанию

6.1    Отбор проб — по ГОСТ 13496.0.

6.2    И змельчение пробы

6.2.1    Оборудование:

мслышиа лабораторная электрическая, обеспечивающая измельчение пробы до прохода остатка через сито с отверстиями диаметром 1 мм;

сито с отверстиями диаметром I мм.

6.2.2    Из средней пробы исследуемого продукта методом квартования выделяют часть пробы массой нс менее 100 г и измельчают на лабораторной мельнице до такого состояния, чтобы весь продукт проходил через сито с отверстиями диаметром I мм без остатка. Размолотую пробу тщательно перемешивают.

7    Определение содержания ретинола-ацетата (витамина Л)

и токоферола-ацетата (витамина Е) фотометрическим методом

Сущность метода заключается в омылении образна волно-спиртовым раствором гидроокиси калия, экстракции витаминов лиэтиловым эфиром, разделении витаминов хроматографией на колонке с окисью алюминия и количественном определении витаминов фотометрическим методом.

7.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные высокого класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Спектрофотометр типа СФ-26, С'Ф-46 со спектральным диапазоном работы 186—1100 нм. основной погрешностью измерений коэффициента пропускания нс более I %. градуировкой длин волн в ультрафиолетовой (УФ) области — не более 0.1 нм.

Фотоэлсктроколоримстр с пределом измерений оптической плотности от 0 до 2. основной погрешностью измерений нс более I % и светофильтром длиной волны к = (520 ± 25) нм.

Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

Баллон с азотом рабочим давлением от 40 до 60 кг/см2 (от 4 до 6 МПа) |1|.

Испаритель ротационный диапазоном измерения рабочего давления от 7 до 760 мм рт. ст. (от 9 I02 до 10 104 Па) или насос водоструйный по ГОСТ 25336.

Баня водяная с регулятором нагрева.

Термометр жидкостный по ГОСТ 28498.

Печь муфельная электрическая, обеспечивающая поддержание температуры от 0 до .800 ’С с погрешностью ± 10 'С но ГОСТ 9736.

Секундомер |2|.

Чашки выпарительные фарфоровые диаметром 123 мм по ГОСТ 9147.

Шиппы для тиглей муфельные.

Лампа ультрафиолетовая со светофильтрами Я. = 260—350 нм.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры от 0 ”С до 110 ‘С с погрешностью ± 2 °С |3|.

Холодильники стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336.

Колбы конические со шлифом Кн-1-100(250)-24/29 по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 1(2)-50(100, 200)-2 по ГОСТ 1770.

Воронки делительные вместимостью 250, 500 см' по ГОСТ 25336.

Цилиндры мерные 1(2. 2а. 3. 4. 4а)-25(100, 250)-2 по ГОСТ 1770.

Воронки для фильтрования ВФ- 1-56(75)ХС по ГОСТ 25336.

Пипетки с одной отметкой 1-2-0.50.2) по ГОСТ 29169.

Пипетки градуированные 1(2. 3. 5)-1(1а. 2. 2а)-2-().5( I. 2. 5) по ГОСТ 29227.

Пробирки мерные с притертыми пробками Г1-1(2)-5( 10)-0.1(0.2)ХС по ГОСТ 1770.

Склянки из темного стекла.

Колбы с тубусом вместимостью 250 см ' по ГОСТ 25336.

Колбы круглолонные К-1-100(250)-14/23(19/26) по ГОСТ 25336.

Колонки стеклянные для хроматографии размером 10 х 200 мм.

Эксикатор по ГОС Т 25336. заправленный хлористым кальцием, прокаленным при температуре 250—300 °С в течение 2 ч.

3

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 ши фильтры |4|.

Вата обезжиренная, готовят по ГОСТ 4517.

Палочки деревя н и ыс.

Витамин Е фармакопейный |5|.

Спирт этиловый абсолютированный |6| или приготовленный по ГОСТ 4517.

Железо хлорное, раствор массовой долей около 0.2 % в абсолютированном этиловом спирте.

Калия гидроокись по ГОСТ 24363, раствор массовой долей 50 %.

Натрий сернокислый по ГОСТ 4166. безводный.

Алюминия окись, безводная |7|.

Эфир петролейный. фракция (40—70) *С. не содержащая ненасыщенные и ароматические углеводороды.

Эфир ли этиловый фармакопейный, не содержащий псроксилныс соединения (испытание на отсутствие псроксилных соединений — по ГОСТ 4517).

Пирогаллол или гидрохинон по ГОСТ 1%27.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ I* 51652.

о-фенантролин или ос, ос'-лнпиридил. раствор массовой долей около 0.5 % в абсолютированном этиловом спирте.

Кислота аскорбиновая |8|.

Фенолфталеин |9|, спиртовый раствор массовой долей I %.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

П р и м е ч а и и я

1    Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также материалов и реактивов по качеству не ниже вьниеука эанных.

2    Все реактивы должны быть квалификации х. ч. или ч. д. а.

7.2 Подготовка к испытании»

7.2.1    Приготовление раствора хлорного железа массовой долей около 0.2 % в абсолютированном спирте.

Навеску реактива массой 0.2 г растворяют в 99.8 см' абсолютированного этилового спирта.

Раствор хранят в холодильнике в склянке из темного стекла не более 7 сут.

7.2.2    Приготовление раствора о-фенантролина или ос. ос'-липнрнлила массовой долей окаю 0.5 % в абсолютированном этиловом спирте

Навеску реактива массой 0.500 г растворяют в 99.5 см' абсолютированного этилового спирта.

Раствор хранят в холодильнике в склянке из темного стекла не базее 7 сут.

7.2.3    Приготоатенне безводного сернокислого натрия

Реактив высушивают в сушильном шкафу при температуре (105 ± 2) ‘С в течение 3 ч. хранят в склянке с притертой пробкой.

7.2.4    Пригогоазение окиси алюминия

Реактив прокаливают в муфельной печи при температуре (400 ± 10) *С в течение 4 ч. охлаждают до комнатной температуры в эксикаторе. К 97 г реактива лобаазяют 3 см' дистиллированной волы и тщательно переметивают.

После отстанашия в течение не менее 3 ч реактив годен к использованию.

Реактив хранят в склянке с притертой пробкой.

7.2.5    Пригогоазение раствора «-токоферола массовой концентрации I мг/см

Навеску токоферола-ацетата массой 0.1120 г в расчете на содержание чистого вещества помешают в круглодонную колбу со ш.31к|юм вместимостью 250 см' лобаазяют от 100 до 200 мг аскорбиновой кислоты. 50 см ' этилового спирта и 10 см' раствор;! гидроокиси калия массовой долей 50%. Колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают в водяной бане при температуре (85 ± 2) ‘С в течение 25 мин. Затем содержимое колбы быстро охлаждают под струей водопроводной воды до комнатной температуры, переносят в делительную воронку вместимостью 250 см', приливают по 50 см' дистиллированной волы и лиэтнлового эфира, вегряхиваюг и отстаивают до разделения слоев.

Пекле расслаивания нижний волно-спиртовый слой сливают в коническую колбу, а эфирный стой остаазяют в делительной воронке. В коническую казбу приливают 50 см1 лиэтнлового эфира, встряхивают, отстаивают и пекле расслаивания верхний эфирный слой присоединяют к эфирному эксгракгу в делительной ве>ре>нке. а к волно-спиртовому слою в конической колбе снова приливают 50 см ' лиэтнлового эфира и проводят экстракцию, как было указано выше. После расслаивания эфирный слой из конической колбы снов;! присоединяют к экстракту в делительной вореэнкс.

ГОСТ I* 52147-2003

Объединенные эфирные экстракты промывают дистиллированном водой порциями по 30 ем’ ло исчезновения розовой окраски промывных вол по реакции с фенолфталеином. Промытый экстракт переносят в коническую колбу вместимостью 250 см’. пропуская его через бумажный фильтр и слой безводного сернокислого натрия (10—15 г). Посте окончания фильтрации сернокислый натрий три раза промывают порциями (по 20—30 см’) лиэтилового эфира. Эфир отгоняют в водяной бане при температуре не выше 50 “С в токе азота или пол вакуумом, используя водоструйный насос или роторный испаритель.

К сухому остатку приливают 10—15 см' абсолютированного этилового спирта, количественно переносят раствор в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем в колбе ло метки этим же спиртом и тщательно перемешивают.

7.2.6 Приготовление раствора а-токоферола массовой концентрации 20 мкг/см’

I см' раствора а-токоферола массовой концентрации I мг/см’ переносят в мерную колбу вместимостью 50 см’, доводят объем в колбе абсолютированным спиртом до метки и тщательно перемешивают.

В полученном растворе проверяют массовую концентрацию а-токоферола и его чистоту, снимая спектр в пределах 260—310 нм на спектрофотометре в кювете толщиной поглощающего свет слоя I см относительно абсолютированного этилового спирта. Чистый «-токоферол имеет симметричный пик максимумом поглощения при длине волны 292 нм.

/>| о6 loo ‘



Q=


Массовую концентрацию «-токоферола в растворе Q, мкг/см’. вычисляют по формуле

где I) — оптическая плотность раствора при длине волны 292 нм;

I06 — коэффициент пересчета граммов в микрограммы;

Е \    — оптическая плотность раствора «-то кофе раза в абсолютированном этиловом спирте массо

вой концентрации I г в 100 ем’ при длине волны 292 нм и толщине поглощающего свет слоя 1 см (азя а-токоферола £■]*, = 75).

7.2.7    Построение градуировочного графика для определения токоферола-ацетата (витамина Е)

В пять мерных пробирок вместимостью по 5 см' приливают 0,5; 1,0; 2,0; 3.0 и 4.0 см' раствора

а-токоферола массовой концентрации 20 мкг/см’. В первые четыре пробирки добавляют 3.5; 3.0; 2.0 и 1.0 см' абсолютированного этилового спирта. Затем в пробирки добавляют по 0.5 см ’ раствора о-фенантролина и по 0.5 см’ раствора хлорного железа, перемешивают. Ставят опытную пробу в темное место на 5 мин для развития окраски. По истечении времени измеряют оптические плотности испытуемых растворов в порядке возрастания их концентрации на фотоэлектрокол ори метре в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм при длине волны (520 ± 25) нм относительно абсолютированного этилового спирта. Одновременно проводят контрольное испытание на реактивы без внесения «-токоферола.

По полученным данным сгроят градуировочный график, откладывая на оси ординат значения разности оптической плотности испытуемых растворов и контрольного раствора, на оси абсцисс — содержание а-токоферола. мкг/5 см’ (10. 20. 40. 60 и 80 мкг/5 см’)

7.2.8    Приготовление элюирующих растворов

7.2.8.1    Приготовление раствора I

В мерную колбу вместимостью 100 см’ вносят 6 ем’ лиэтилового эфира и объем жидкости в колбе доводят ло метки петролейным эфиром, перемешивают.

7.2.8.2    Приготовление раствора II

В мерную колбу вместимостью 100 см’ вносят 12 см’ лиэтилового эфира и обз»см жидкости в колбе доводят до метки петролейным эфиром, перемешивают.

7.2.8.3    Приготовление раствора III

В мерную колбу вместимостью 100 см’ вносят 30 см’ лиэтилового эфира и объем жидкости в колбе доводят до метки петролейным эфиром, перемешивают.

7.3    Мровелсч1ие испытаний

Из-за высокой чувствительности витаминов к ультрафиолетовому свету и воздуху все процедуры. связанные с анализом, следует завершить в течение одного рабочего дня, избегая воздействия натурального и интенсивного флуоресцентного света.

5

7.3.1    Омыление и экстракции

Навеску исследуемого продукта массой 4.00—5.00 г помешают в круглолонную колбу со шлифом вместимостью 250 см\ приливают 50 см ' этилового спирта. 10 см' раствора гидроокиси калия массовой долей 50 % и добавляют 40—50 мг пирогаллола иди гидрохинона (на кончике скальпеля).

Колбу соединяют с обратным холодильником, помешают в водяную баню и нагревают при температуре (85 ± 2) *С в течение 25 мин, периодически перемешивая содержимое колбы. После этого содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры.

Затем в колбу приливают 20—25 см' дистиллированной воды. 50 см' лиэтилового эфира, перемешивают, жидкую часть сливают в делительную воронку вместимостью 500 ем1, сохраняя осадок в колбе. Экстракцию витаминов лиэтиловым эфиром проводят трижды по 7.2.5.

При образовании устойчивой эмульсии в делительную воронку добавляют 20 см' этилового спирта.

В объединенный эфирный экстракт добавляют несколько кристаллов бугилокентолуола и промывают его дистиллированной водой порциями по 100 см ' до исчезновения розовой окраски промывных вол по реакции с фенолфталеином. Затем экстракт переносят в круглолонную колбу, пропуская его через бумажный фильтр со слоем безводного сернокислого натрия (30—50 г). Делительную воронку и фильтрующий материал промывают 40 см' лиэтилового эфира. Эфир выпаривают досуха в водяной бане при температуре нс выше 50 *С в токе азота из и пол вакуумом на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 4 см' петролейного эфира.

Примечание — Допускается для экстракции применять петролейнмй эфир.

7.3.2    Подготовка хроматографической колонки

В нижнюю часть колонки помешают кусочек ваты, затем активированную окись алюминия, уплотняя ее постукиванием по колонке деревянной палочкой до высоты сорбента 7 см. Сверху помешают слой безводного сернокислого натрия высотой I см.

В колбу с тубусом вставляют резиновую пробку, через сквозное отверстие которой проходит утонченный конец хроматографической колонки. Через колонку при вакууме, создаваемом с помощью водоструйного насоса, пропускают петролейный эфир до полного смачивания слоя окиси алюминия (около 15 см').

Промывание колонки проводят со скоростью одна капля в секунду, не допуская при этом высыхания верха колонки и присасывания воздуха.

7.3.3    Хроматографическое разделение ретинола и «-токоферола

4 см' раствора экстракта испытуемого продукта, полученного по 7.3.1. помешают в колонку, подготовленную по 7.3.2. не допуская высыхания верха колонки. Промывают колонку 15 см' элюирующего раствора I. Эгу фракцию отбрасывают.

«-токоферол элюируют от 15 до 25 см раствора II. контролируя продвижение витамина в УФ свете (а-то кофе рол имеет голубоватое свечение).

Элюат количественно переносят в коническую колбу вместимостью 50 см'.

К колонке присоединяют другую колбу с тубусом и элюируют ретинол 30—35 см' раствора III. также контролируя продвижение витамина в УФ-свстс (ретинол имеет желто-зеленое свечение). Элюат количественно переносят в коническую колбу вместимостью 50 ем' и выпаривают досуха в водяной бане при температуре не выше 50 ’С в токе азота или под вакуумом.

Сухой остаток растворяют в 5—50 см ’ абсолютированного этилового спирта в зависимости от предполагаемого содержания витамина А.

7.3.4    Оптическую плотность полученного раствора ретинола измеряют на спектрофотометре при длине волны 326 нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно абсолютированного этилового спирта.

7.3.5    Проведение цветной реакции с раствором а-токоферола

Собранный и перенесенный в коническую колбу элюат а-токоферола выпаривают досуха на водяной бане при температуре нс выше 50 'С в токе азота или под вакуумом. Остаток растворяют в 10 см' абсолютированного этилового спирта. Ориентируясь на рецептуру добавки, берут 0.2—3.5 см' раствора и переносят в кювету толщиной поглощающего свет слоя 10 мм или в мерную пробирку вместимостью 5 см', добавляют соответственно от 3.8 до 0,5 см' абсолютированного этилового спирта, 0.5 см' раствора о-фенантролина и 0.5 см' раствора хлорного железа. Опытную пробу ставят в темное место на 5 мин для развития окраски. По истечении времени измеряют оптическую плотность испытуемого расгвора на фотоэлсктроколориметре при длине волны (520 ± 25) нм относительно абсолютированного этилового спирта.

6

ГОСТ I» 52147-2003

Одновременно проводят контрольное испытание на реактивы бет внесения «-токоферола. 7.4 Обработка и оформление результатов

7.4.1 Содержание ретинола-ацетата X. МЕ/кг. в испытуемой пробе вычисляют по формуле

х_ 18.3 УР 10* 1.15 т

где 18.3 — массовая концентрация раствор;! ретинола в абсолютированном этиловом спирте, имеющего оптическую плотность, равную I. при длине волны 326 нм и толщине поглощающего свет слоя I см. МЕ/см3;

У— объем элюата (5—50), ем3;

I) — оптическая плотность раствора;

К)3 — коэффициент пересчета граммов в килограммы: т — масса навески, г;

1.15 — коэффициент пересчета ретинола в ретинол-ацетат.

7.4.2 Содержание токш|>срола-ацстата А", т/кг, в испытуемой пробе вычисляют по <|юрмулс

(3)

^ АМа'1.1

т У, И) '

где А — масса а-токоферола. найденная по градуировочному графику, мкг:

У — объем раствора элюата (10). см3;

10' — коэффициенты пересчета микрограммов в миллиграммы и граммов в килограммы;

1.1 — коэффициент пересчета «-токоферола в ацетатную форму;

т — масса навески, г;

У, — объем раствора, взятый для проведения цветной реакции (0.2—3.5). см'.

7.4.3    Результат вычисляют до третьей значащей цифры и округляют до двух значащих цифр.

7.4.4    При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения, начиная со взятия навески испытуемой пробы. Если расхождение между результатами параллельных определений не превышает допустимое |Af| — ЛУ й 0.01 dX. где Х\. Л> и X — ре зультат первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое значение соответственно, то среднеарифметическое значение принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют.

Если расхождения между параллельными определениями вновь превышают регламентируемые допуски, выясняют и устраняют причины плохой сходимости результатов анализа.

Значения d приведены в таблице 2.

Т а б л и и а 2

Наименование витамина и елннниа иэчерения

Вид

хроматографии

Лиапаюн иэмерсний массовой доли витамина

Значение норматив;! контроля. Чг, Рш 0,95

сходимости d. п " 2

вое про и нюлимости 1). т - 2

Витамин А. гые.

Колоночная

От 5.0 ло 50 нключ.

20

35

МЕ/кг

Св. 50 • 100 •

15

25

. 100 . 300 .

10

20

ВЭЖ

От 5.0 до 100 включ.

15

25

Св. 100 . 300 .

10

20

Витамин Е. мг/кг

Колоночная

От 10 ло 100 включ.

15

30

Св. 100 - 500 .

10

25

. 500 . 1000 .

10

20

ВЭЖ

Ог 10 ло 100 включ.

12

28

Св. 100 . 1000 .

8

20

Витамин I). тыс.

ВЭЖ

От 5.0 ло 20 включ.

20

30

МЕ/кг

Св. 20 . 50 .

12

22

7