Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

11 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ Р 51940-2002 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовой концентрации D-яблочной кислоты

  Скачать PDF

Переиздание (по состоянию на июль 2008 г.)

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определение, обозначения и сокращения

4 Сущность метода

5 Реактивы

6 Аппаратура

7 Проведение испытания

8 Выражение результатов

9 Точность определения

10 Отчет об испытании

Приложение А Медленнотекущие реакции

Приложение Б Статистические результаты кругового испытания

Приложение В Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения D-яблочной кислоты

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

ГОСТ Р 51940-2002

Предисловие

I РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом нишевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом но стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропро-мышленной продукции на безопасность»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 сентября 2002 г. № 348-ст

3    Настоящий стандарт за исключением раздела 2 и пунктов 3.2. 5.3—5.5. 6.1. 6.5 и 6.6 представляют собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН ЕН 12138—97 «Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение D-яблочной кислоты. Спектрофотометрическое определение НАД»

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России

© ИНК Издательство стандартов. 2002 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2008 Переиздание (по состоянию на июль 2008 г.)

Страница 3

ГОСТ Р 51940-2002

Содержание

1    Область применения...................................................... 1

2    Нормативные ссылки..................................................... 1

3    Определение, обозначения и сокращения...................................... 1

4    Сущность метода.........................................................2

5    Реактивы...............................................................2

6    Аппаратура.............................................................2

7    Проведение испытания....................................................3

8    Выражение результатов....................................................4

9    Точность определения.....................................................4

10    Отчет об испытании......................................................5

Приложение А Медленнотекущие реакции........................................6

Приложение Б Статистические результаты круговою испытания.......................7

Приложение В Библиография.................................................7

III

Страница 4

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метол определения 1)-яблочной кислоты

Fruit and vegetable juices.

Method for determination of D-malic acid content

Дата введения 2003-10-01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодер-жащие напитки и устанавливает метод определения массовой концентрации D-яблочной кислоты.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 9262-77 Кальция гидроокись. Технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общею назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пинетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из нишевого сырья. Технические условия

3    Определение, обозначения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением: массовая концепт рання D-яблочной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовая концентрация D-яблочной кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в граммах на кубический дециметр.

3.2    В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:

НАД — р-никотанамидаденнндинуклеотид;

НАДИ — р-ннкотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма;

• С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104 —2001.

И панне официальное

Страница 5

D-МДГ — D-малатдегндрогеназа;

Е — международная единица. определяющая количество (активность) фермента, который служит катализатором для превращения 1 мкмоля вещества в минуту при 25 *С.

4    Сущность метода

Метод основан на ферментативном преобразовании |1. 2| D-яблочной кислоты в оксалоацетат иод действием НАД в присутствии D-МДГ и спектрофотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДН. эквивалентного массовой концентрации D-яблочной кислоты в пробе. Оксалоацетат в конце реакции распадается на пируват и углекислый газ.

В ходе анализа протекает следующая ферментативная реакция:

D-МДГ

D-яблочная кислота + НАД* <    >    пируват    +    СО,    +    НАДН    +    Н*    (1)

В связи с тем. что фермент D-МДГ не обладает абсолютной специфичностью, при испытаниях проб, содержащих наряду с D-яблочной L-винную кислоту, для связывания последней воздействуют гидроокисью кальция и этиловым спиртом.

5    Реактивы

5.1    Общие требования

При проведении анализа используют реактивы х.ч., ч.д.а. и дистиллированную воду но ГОСТ 6709.

Препараты НАД должны содержать не менее 90 % основного вещества.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения D-яблочной кисюты и отдельные реактивы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.

5.2    Стандартный набор состоит из трех реактивов.

5.2.1    Реактив 1 — HEPES-буфер (4- (2-гндроксиэтил)-1-пиперазин-этансульфоновая кислота) объемом 30 см' и активной кислотностью 9.0 pH. содержащий стабилизаторы |3|.

5.2.2    Раствор реактива 2 — НАД

Флакон, содержащий 0.21 г лиофильно высушенного НАД |3|. растворяют в 4 см' дистиллированной воды.

5.2.3    Раствор реактива 3 — D-МДГ удельной активностью около 13 Е/см'

Одну из трех содержащихся в наборе порций лиофильно высушенной D-МДГ |3| растворяют в 0.6 см' дистиллированной волы.

5.3    Кальция гидроокись по ГОСТ 9262.

5.4    Спирт этиловый по ГОСТ Р 51652 массовой долей основного вещества 96 %.

5.5    Калия гидроокись по ГОСТ 24363.

6    Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, а также:

6.1    Дозаторы пипеточные объемами доз 0.02; 0.05; 0.10; 0.50; 1.0; 2.0; 5.0 и 10 см' и относительной по1решностью дозирования ±1 % |4| или пипетки градуированные но ГОСТ 29227. номинальной вместимостью 0.02; 0.1; 0.2; 0.5; 1.0 и 2.0 см3. 2-го класса точности.

6.2    Кюветы фотометрические из оптическою стекла или пластмассы толщиной поглощающею стоя I см дли измерений при длинах волн 334. 340 или 365 нм.

6.3    Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 10 до 15 см для перемешивании содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.4    Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический для измерений при длинах волн 334. 340 или 365 нм. допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания ±1 %.

6.5    Весы лабораторные общею назначения по ГОСТ 24104. наибольшим пределом взвешивания 20 г, 2-го класса точности.

2

Страница 6

ГОСТ Р 51940-2002

6.6    Колбы мерные по ГОСТ 1770 номинальной вместимостью 50 см '.

6.7    Фильтры мембранные диаметром пор 0.2 мкм.

7 Проведение испытания

7.1    Подготовка пробы к испытанию

7.1.1    Стандартная методика

Как правило, пробы нс нуждаются в особых методиках подготовки к испытаниям. Результаты испытаний, выполненных в соответствии с настоящей методикой, выражают в миллиграммах на к>бический дециметр.

Испытания концентрированных продуктов проводят после их разбавления дистиллированной водой до получения значения относительной плотности разбавленного продукта согласно рецептуре натуральною сока, нектара или сокосодержащего напитка. При этом относительную плотность разбавленной пробы выражают в граммах на кубический дециметр.

Результаты испытаний концентрированного продукта могут быть также выражены в миллиграммах на килограмм. При расчете результата испытаний учитывают массу пробы концентрированного продукта и фактор разбавления.

При испытании продуктов высокой вязкости и/или с очень большим содержанием мякоти результаты выражают в миллиграммах на килограмм продукта.

Продукты с мутной взвесью перед испытанием хорошо перемешивают и осветляют путем центрифугирования.

Сильно окрашенные продукты разбавляют дистиллированной водой.

7.1.2    Модицированная методика (иля проб с высокой концентрацией винной кислоты)

К 25 см' сока, нектара или сокосодержащего напитка добавляют 0.125 г сухой гидроокиси кальция и 5 см' этилового спирта. Пробу перемешивают 2 мин. Активную кислотность раствора устанавливают равной 7—8 pH. добавляя сухую гидроокись калия. Раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см\ Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой. При проведении ферментативного определения используют прозрачную осветленную пробу. При необходимости раствор осветляют по 7.1.1.

7.2    Испытание

7.2.1    Общие требования

Испытание проводят при постоянной температуре от 20 до 25 "С. Допускается проводить испытание при постоянной температуре от 25 до 37 ’С при условии получения равноценных результатов.

При использовании спектрофотометра с переменной длиной волны измерения проводят при длине волны 340 нм. при использовании спектрофотометра на ртутной лампе — при длине волны 334 или 365 нм.

Буферные растворы, растворы проб, ферментов и коферментов дозируют фадуированными пипетками или автоматическими дозаторами.

Для контроля точности результатов определения используют стандартный раствор D-яблочной кислоты.

7.2.2    Контрольный раствор

В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1,00 см' HEPES-буфера по 5.2.1; 0.10 см’ раствора НАД по 5.2.2 и 1.80 см5 дистиллированной воды, перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. Раствор выдерживают 6 мин и измеряют оптическую плотность относительно оптической плотности воздуха — А.

7.2.3    Раствор пробы

В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1.00 см’ HEPES-буфера по 5.2.1; 0.10 см5 раствора НАД по 5.2.2; 1.70 см' дистиллированной воды и 0,10 см' подготовленной пробы, перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. Раствор выдерживают 6 мин и измеряют оптическую плотность относительно оптической плотности воздуха — AUtp.

7.2.4    Ферментативная реакция и количественное определение

В кюветы с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по 0.05 см' раствора D-МДГ по 5.2.3 и перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. Через 20 мин измеряют оптические плотности растворов относительно оптической плотности воздуха — Аъ,р и Л>к. Показания прибора проверяют повторным считыванием оптических плотностей через 5 мин. Если оптические плотности растворов увеличиваются с течением времени, то окончательные значения оптических плотностей определяют методом экстраполяции на момент внесения раствора D-МДГ по 5.2.3.

3

Страница 7

Примечание — При появлении поСючных. гак называемых «медленнотекущих», реакции расчет окончательных значений оптической плотности проводят по методике, приведенной в приложении А.

8 Выражение результатов

Разность измеренных величин оптических плотностей ДА вычисляют по формуле

ДА = (А, - А, ) - (А, - Ах )к.    (2)

Массовую концентрацию D-яблочной кислоты в пробе р. мг/дм3. вычисляют в соответствии с законом Ламберта—Бсра по формуле

М У, F1000 е б Р, 1000

АЛ .

тле Л/ — молярная масса D-яблочной кислоты, г/моль (А/= 134.09 г/моль);

У, — общий объем раствор;! в кювете, см3;

F — фактор разбавления по 7.1.1 или 7.1.2;

£ — молярный коэффициент поглощения НАДН. дм3'-ммоль-1 см-1:

-    при 340 нм — 6.3;

-    при 365 нм — 3.4 (ртутная лампа);

-    при 334 нм — 6.18 (ртутная лампа);

6 — толщина поглощающего слоя в кювете, см;

V2 — объем пробы, см3.

При отсутствии отклонений от объемов, указанных в 7.2. формула принимает вил

р = 3.956 ■

FAA

(3)

(4)

При использовании имеющихся в продаже отдельных реактивов численный коэффициент (3.956) в формуле (4) может быть иным из-за изменения общего объема раствора в кювете (Pj).

За результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, округленное до 0.1 мг/дм3.

9 Точность определения

Характеристики точности метода вычислены по статистическим результатам кругового испытания (приложение Б).

9.1 Сходимость

Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать более чем в 5 % случаев значения показателя сходимости г, мг/дм3. вычисляемою по формуле

г = 2.03 + 0.044 р„    (5)

где р[ — среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений массовой концентрации D-яблочной кислоты, мг/дм3.

9.2 Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях. не должно превышать более чем в 5 % случаев значения показателя воспроизводимости R. мг/дм3. вычисляемого по формуле

R = 6.46 + 0.108 р2.    (6)

где р 2 — среднеарифметическое значение результатов двух измерений массовой концентрации D-яблочной кислоты, мг/дм3.

4

Страница 8

ГОСТ Р 51940-2002

10 Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    информация, которая необходима для идентификации пробы (вид пробы, данные изготовителя. описание пробы);

-    обозначение настоящего стандарта;

-    дата и способ отбора пробы (есш возможно);

-    дата доставки пробы;

-    результаты испытания и наименования единиц измерений, в которых они приводятся;

-    дата испытания;

-    информация о выполнении условий сходимости метода:

-    замечания об особенностях проведения испытания;

-    особые условия проведения испытания, которые не учтены настоящим стандартом, но могли бы оказать нлияние на результаты испытания.

5

Страница 9

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(сираночное)

Медленно к-кмине реакции

Мсллсннотскущис реакции возникают вследствие присутствия н матрице пробы ферментов, нс указанных н стандарте, а также вследствие взаимодействия побочных компонентов матрицы с реактивами, участвующими н ферментативной реакции.

При проведении запланированной ферментативной реакции оптическая плотность через 10—20 мин принимает постоянное значение, которое зависит от скорости специфичной ферментативной реакции. При появлении мсдяеннотскущсй реакции оптическая плотность раствора пробы в кювете меняется с течением времени.

В случае возникновения мсллсннотскушсй реакции проводят повторные определения оптической плотности раствора пробы в кювете через каждые 2—5 мин. Посте выполнения 5—6 повторных определений и при условии достижения постоянной) изменения оптической плотности за единицу времени (Д4/Д/ • const) фотометрические измерения прекращают.

По полученным данным строят график зависимости оптической плотности А от времени /.

Для определения окончательного значения оптической плотности, используемого при расчете массовой концентрации испытуемого вещества, экстраполируют кривую на момент внесения фермента в реакционную систему (/0. рисунок А.1). Для получения достоверных результатов испытания пробы разность конечного (Aft и начальною (А,) значений оптических плотностей должна был» нс менее 0.040.

6

Страница 10

ПРИЛОЖЕНИЕ Б (справочное)

ГОСТ Р 51940-2002

Статистические результаты кругового испытания

При проведении в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-2 крушных испытаний получены следующие характеристики точности метода, приведенные в таблице Б.1, и установлена линейная зависимость сходимости и воспроизводимости от среднеарифметического массовой концентрации D-яблочной кислоты.

Испытание проведено под руководством Международной федерации производителей фруктовых соков (г. Париж, Франция).

Гол проведения кругового испытания — 1991.

Число участвовавших лабораторий — 24/18.

Количество проб    —    3 (с добавкой D-яблочной кислоты).

Таблица Б.1

Величина, характеризующая круговое испытание

Значение для пробы сока

апельсинового

яблочного

виноградного

(красного)

Число лабораторий, оставшихся после исключения тех. в которых полученные результаты были забракованы

19

24

15

Число исключенных лабораторий

5

3

Число принятых результатов

77

101

61

Среднеарифметическое значение (р,). мг/дм3

80.3

98.2

514,4

Среднеквадратичное отклонение результатов определений С*р. мг/дм3

1.62

2.64

8.75

Относительное среднеквадратичное отклонение результатов определений (RSDр. %

2.0

2.7

1.7

Сходимость (/•). мг/дм3

4.5

7.5

24.8

Среднеквадратичное отклонение результатов измерений (зл). мг/дм3

4.90

6.53

21.84

Относительна среднеквадратичное отклонение результатов измерений (RSDK), %

6.1

6.8

4,3

Воспроизводимость (Я). мг/дм3

13.7

18.5

61.9

ПРИЛОЖЕНИЕ В (справочное)

Библиография

11| Enzymatische Bestimmung dcr D-Apfclsacurc (D-Malic acid enzymatic method): Official Journal of the European Communities, L272. Volume 33. pages 106—108. published 3.10.1990 |2| Bcstimmung dcr D-Apfclsacurc; Enzymatisch: Nr. 64. 1994. — In: Analyscn/|Samnilung| Internationale Frucht-saft — Union. — Loseblattausgabe. Stand 19%. Zug: Schwcizcrischcr Obstvcrband |3| Bochringer Mannheim. Mclhodcn dcr cn/.ymaiischen BioAnalytik und Lebensmittelanalytik mil Test-Combina-tionen. 1995 |4| ТУ 64-13329—81 Дозаторы пнпсточныс

7

Страница 11

УДК 664.863.001.4:006.354    ОКС    67.160.20    Н59    ОКСТУ 9109

Ключевые слова: фруктовый сок. овощной сок. нектар, сокосодержащий напиток. D-яблочная кислота, спектрофотометрия

Редактор Л. В. Каретникова Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор Р.А. Ментона Компьютерная не рока Н.Л. Ни н-икинои

Подписано н печать 12.08.2008. Формат 60 х 84 '/*• Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Усллкчл. 1,40. Уч.-издл. 0,75. Тираж 90 экз. Зак. 1026.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ.. 123995 Москва. Гранатный пер.. 4. wwu.gostinfo.ro    info4tgostinfo.ro

Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ. на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник». 105062 Москва. Лялин пер., 6.