Стр. 1
 

12 страниц

304.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на натуральное коровье молоко-сырье, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое молоко и устанавливает микробиологические рецепторные методы определения наличия антибиотиков

ГОСТ Р 51600-2010 заменяет ГОСТ Р 51600-2000 в части разд. 1, 2, 3, 4 (микробиологические методы); ГОСТ Р 53774-2010 заменяет ГОСТ Р 51600-2000 в части разд. 5 и 6 (рецепторные методы). ГОСТ Р 51600-2000 заменен полностью. Данные о замене ГОСТ Р 51600-2000 опубликованы в ИУС № 6-2010

Действие завершено 01.01.2011

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Чашечный метод с Вас.stearothermophilus

   3.1 Сущность метода

   3.2 Аппаратура, реактивы и материалы

   3.3 Отбор проб

   3.4 Подготовка к анализу

   3.5 Проведение анализа

   3.6 Обработка результатов

   3.7 Метрологические характеристики

4 Метод с индикатором бромкрезолпурпуром

   4.1 Сущность метода

   4.2 Аппаратура, материалы и реактивы

   4.3 Отбор проб

   4.4 Подготовка к анализу

   4.5 Проведение анализа

5 Рецепторные методы

   5.1 Рецепторный метод с 3,3,5,5-триметилбензидином и диметилсульфоксидом

      5.1.1 Сущность метода

      5.1.2 Аппаратура, материалы и реактивы

      5.1.3 Отбор проб

      5.1.4 Подготовка к анализу

      5.1.5 Проведение анализа

      5.1.6 Обработка результатов

      5.1.7 Метрологические характеристики

   5.2 Рецепторный метод с коллоидным золотом

      5.2.1 Сущность метода

      5.2.3 Аппаратура, материалы и реактивы

      5.2.4 Подготовка к анализу

      5.2.5 Проведение анализа

      5.2.6 Обработка результатов

   5.3 Метрологические характеристики

6 Требования безопасности

Приложение А (справочное) Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51600-2000

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО

Методы определения наличия антибиотиков

Издание официальное

Страница 2

ГОСТ Р 51600-2000

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ГУ ВНИИВСГЭ), Институтом питания РАМН и Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 «Молоко и молочные продукты»

2    ПРИНЯ Т И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 26 апреля 2000 г. № 127-ст

3    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4    ИЗДАНИЕ (февраль 2010 г.) с Изменениями № 1,2. утвержденными в феврале 2006 г.. январе 2008 г. (ИУС 4- 2006.4- 2008)

& ИПК Издательство стандартов, 2000 © СТЛНДАРТИНФОРМ. 2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федератьного агентства по техническому регулированию и метрологии

II

Страница 3

ГОСТ Р 51600-2000

Г ОС уД АРСТВЕННЫЙ СТАНДАР Г РОССИЙСКОЙ ФЕДЕ Р А Ц И И

МОЛОКО

Методы определения наличия антибиотиков

Milk.

Methods for determination of the antibiotics indication

Дата введения 2001—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на натуральное коровье молоко — сырье, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое молоко (далее - молоко) и устанавливает микробиологические и рецепторные методы определения наличия антибиотиков.

Раздел 1 (Измененная редакция, Изм. № 1, 2).

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 427- 75 Линейки измерительные металлические. Технические условия

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 9225-84 Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 23454- 79 Молоко. Методы определения ингибирующих веществ

ГОСТ 24065-80 Молоко. Методы определения соды

ГОСТ 24066-80 Молоко. Метод определения аммиака

ГОСТ 24067-80 Молоко. Метод определения перекиси водорода

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

3 Чашечный метод с Вас. stearothermopliilus

3.1    Сущность метода

Метод основан на способности антибиотиков, содержащихся в молоке, диффундировать в агаровую среду со спорами тест-микроба и препятствовать его росту1, что приводит к образованию прозрачных юн ингибиции. Наличие любого антибиотика в молоке устанаачивают по диаметру зоны ингибиции.

3.2    Аппаратура, реактивы и материалы

3.2.1    Аппарату ра, реактивы и материалы по ГОСТ 9225 и указанные в 3.2.2—3.2.16.

3.2.2    Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

3.2.3    Центрифуга частотой вращения 3000 мин 1 и разделяющим фактором 750 м/с2.

Издание официальное

I

Страница 4

ГОСТ Р 51600-2000

3.2.4    Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

3.2.5    Колба коническая по ГОСТ 25336, вместимостью 250 см5.

3.2.6    Линейка по ГОСТ 427, пределом измерения 150 мм или аппарат Микрофаг5МО-1.

3.2.7    Пробойник диаметром 10 мм или сверло пробочное № 4.

3.2.8    Пипетка градуированная по ГОСТ 29227, 2-го класса точности, вместимостью 25 см\

3.2.9    Гидролизат кормовых дрожжей.

3.2.10    Диски со стрептомицином.

3.2.11    Оптический стандарт мутности ОСО 42-28-29—86.

3.2.12    ПрепаратСКИВ.

3.2.13    Стандарт стрептомицина РСО 9347-194-00494189 -99.

3.2.14    Тест-микроб Вас. stearothermophilus ВКМВ-510, выпускаемый Институтом биохимии и физиологии микроорганизмов РАН.

3.2.15    Фуксин основной, спиртовой раствор концентрации 50 г/дм5.

3.2.16    Экстракт дрожжевой.

Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указанных.

3.3 Отбор проб

3.3.1    Отбор проб - по ГОСТ 9225.

3.3.2    Пробы молока до испытания допускается хранить в холодильнике при температуре (5 ±1) *С не более 24 ч.

3.3.3    Лнализ>' подлежат пробы молока, давшие положительный результат по ГОСТ 23454 и отрицательный - по ГОСТ 24065, ГОСТ 24066 и ГОСТ 24067.

3.4 Подготовка к анализу

3.4.1    Подготовка посуды и материалов

3.4.1.1    Всю новую посуду, предназначенную для микробиологических исследований, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты объемной доли 1 %-2 %) в течение 15 мин, затем ополаскивают дистиллированной водой.

Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при температуре (160±5) *С в течение 2 ч или в автоклаве при (121 ±2) ‘С в течение (30±1) мин с последующим подсушиванием.

Чашки Петри, пипетки и цилиндры стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Пробирки и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками и обертывают бумагой. Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.

3.4.2 Приготовление питательных сред

3.4.2.1    Для получения спор Вас. stearothermophilus ВКМВ-510 используют питательную среду следующего состава: дрожжевой экстракт - 10.0 г, пептон - 20.0 г, глюкоза - 0,5 г. дистиллированная вода - до 1000,0 см3.

В мерную колбу вместимостью 1000 см5 помешают все компоненты питательной среды, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, доводят объем раствора водой до метки и устанавливают pH среды по рН-метру, равный (7,1±0,1). Разливают раствор в колбы по 200,0 см* и стерилизуют его при температуре (121+2) *С в течение (15± 1) мин.

3.4.2.2    Для проведения анализа готовят агаровую среду следующего состава: гидролизат кормовых дрожжей — 1.0 г, пептон — 0,4 г. хлористый натрий — 0,1 г, агар—1,6 г, дистиллированная вода-до 100.0 см1.

В колбу вместимостью 200 см' вносят 100 см5 дистиллированной воды и все компоненты среды, перемешивают до полного растворения и нагревают до кипения. Затем охлаждают до температуры (55±5) ‘С, устанавливают pH среды по рН-метру. равный (7,3±(),1), и стерилизуют при температуре (121 ±2) 'С в течение (15±1) мин.

3.4.2.3    Для проведения анализа допускается применять питательные среды указанного в 3.4.2.1 и 3.4.2.2 состава промышленного изготовления.

3.4.3    11олучение спор тест-микроба

3.4.3.1 Среду по 3.4.2.1 засевают 2—3 см3 18-20-часовой тест-культуры Вас. stearoihemiophilus ВКМВ-510, выращенной в пробирках с этой же средой, тщательно перемешивают и помешают в термостат температурой (55± 1) *С на 3 сут.

После окончания инкубации из посевов делают мазки, окрашивают их спиртовым раствором

2

Страница 5

ГОСТ Р 51600- 2000

основного фуксина 50 г/дм’ и микроскопируюг.

При наличии в поле зрения 90 %—95 % свободных сформировавшихся спор колбы с посевами помешают на 16—18 ч в холодильник для осаждения. Надосадочиую жидкость из колбы сливают, а осадок pan ива юг по стерильным центрифужным пробиркам и прогревают в водяной бане при температуре внутри пробирок (67±2) *С в течение (30±1) мин. Пробирки центрифугируют 20—30 мин. Осадок отмывают стерильной дистиллированной водой (не менее трех раз) до получения прозрачной жидкости над ним.

Взвесь спор вторично прогревают при температуре (67±2) *С в течение (30± 1) мин. Полученную взвесь переносят в бактериологические пробирки и хранят в холодильнике не более 2 мес.

3.4.4    Притотоазение засеянной агаровой среды

3.4.4.1    В пробирки отбирают взвесь спор тест-микроба по 3.4.3.1 и разводят стерильной дистиллированной водой до получения суспензии спор, визуально соответствующей 10 единицам по оптическому стандарту мутности.

3.4.4.2    К 100 см3 расплавленной и охлажденной до (60±2) "С среды no 3.4.2.2 добавляют 2,5 см1 водного раствора глюкозы массовой долей 40 % и 4 см5 суспензии спор по 3.4.4.1. Смесь среды и спор тщательно перемешивают и рапивают градуированной пипеткой по (11±1) cx*J в чашки Петри, установленные на строго горизонтальной поверхности стола.

3.4.4.3    Чашки засевают непосредственно перед употреблением.

В некоторых случаях чашки хранят в холодильнике при температуре (5± I) ‘С не более 2 сут. 11еред использованием их прогревают в термостате при (55±1) *С в течение (20±1) мин.

3.4.5    Приготовление обезжиренного стерильного молока

3.4.5.1    Обезжиренное стерильное молоко получают из цельного молока кислотностью 16—18 Т, предварительно проверенного на отсутствие ингибирующих веществ по ГОСТ 23454. В пробирки разливают обезжиренное молоко по 10 см3 и стерилизуют при I05 Па (1 атм) в течение (10+1) мин.

Допускается использовать препарат СКИВ.

3.4.6    Приготовление контрольного разведения стрептомицина активностью 2.5 мкг/см’ (Ед/г)

3.4.6.1    Контрольное разведение стрептомицина используют для проверки активности роста тест-микроба.

3.4.6.2    Контрольное разведение стрептомицина готовят в фосфатных буферных растворах.

Состав раствора 1: двузамещенный фосфорнокислый калий - 2.0 г, однозамешенный фосфорнокислый калий — 8,0 г, дистиллированная вода - до 1000,0 см3.

В мерной колбе вместимостью 1000 см' растворяют компоненты в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем водой до метки. Устанавливают pH раствора по pH-метру, равный (6,1+0.1), и стерилизуют при температуре (112±2) ’С в течение (30±1) мин. Срок хранения раствора - не более 30 сут при температуре (5±1) *С.

Состав раствора 2: двузамещенный фосфорнокислый калий - 16.73 г, однозамешенный фосфорнокислый калий — 0,523 г, дистиллированная вода — до 1000,0 см3.

В мерной колбе вместимостью 1000 см5 растворяют компоненты в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем водой до метки. Устанавливают pH раствора по pH-метру, равный (7.9+0.1). и стерилизуют при температуре (112±2) ’С в течение (30±1) мин. Срок хранения раствора — не более 30 сут при температуре (5±1) "С.

3.4.6.3    Контрольное разведение готовят из основного раствора стрептомицина активностью 500 мкг/см3, который получают растворением 5 мг стандарта антибиотика, взвешенного с отсчетом показания весов до 0.1 мг, в буферном растворе 1 поЗ.4.6.2. Объем буферного раствора составляет 0,01 активности антибиотика.

11 р и м е р: При активности стандарта стрептомицина 760 мкг/мг навеску антибиотика (5 мг) растворяют в 7,6 см3 буферного раствора 1 и получают основной раствор активностью 500 мкг/см3.

Основной раствор антибиотика хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой не более 30 сут при температуре (5±1) *С.

Из основного раствора в трех пробирках готовят серию разведений антибиотика. В первую пробирку наливают 1 см*' буферного раствора 2 по 3.4.6.2 и I см3 основного раствора, во вторую - 9 см* буферного раствора 2 и I см3 раствора из первой пробирки, в третью — 9 см3 стерильного обезжиренного молока по 3.4.5 и 1 см3 раствора из второй пробирки. Активность антибиотика в разведениях составляет соответственно 250; 25 и 2,5 мкг/см3. Разведение антибиотика в молоке активностью 2,5 мкг/см3 является контрольным.

Контрольное разведение стрептомицина используют в течение рабочего дня.

3

Страница 6

ГОСТ Р 51600-2000

3.4.6.4 Взамен контрольного разведения стрептомицина для проверки активности роста тест-микроба могут быть использованы диски со стрептомицином по 3.2.10.

3.4.7    Подготовка проб молока к анализу

Каждую пробу молока наливают по 5-10 см' в чистую стерильную пробирку, прогревают в течение (Ю±1) мин на водяной бане при температуре внутри пробирки (87±2) 'С и охлаждают в холодной воде до температуры 18 %—25 *С.

3.5 Проведение анализа

3.5.1    Непосредственно перед исследованием молока на поверхности агаровой среды, разлитой в чашки Петри по 3.4.4. пробойником или пробочным сверлом вырезают семь лунок диаметром 10 мм. Шесть лунок располагают по окружности чашки на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии

28 мм их центров от центра чашки. Седьмую лунку вырезают в центре чашки (рисунок I) только в случае использования контрольного разведения антибиотика.

3.5.2    В центральную лунку вносят 0.05 см5 контрольного разведения антибиотика по 3.4.6.3 или в центре чашки на поверхность засеянной агаровой среды помешают диск со стрептомицином по 3.2.10. В лунки, расположенные по окружности чашки, вносят по 0,05 см ’ исследуемых проб молока по 3.4.7.

3.5.3    Чашки Петри выдерживают при комнатной температуре в течение (20±1) мин. затем их помешают в термостат крышками вверх и инкубируют при температуре (55± I) *С в течение 4 ч. Чашки в термостате размешают в один ряд.

Рисунок I — Схема вырезания лунок а агаровой среде

3.6 Обработка результатов

3.6.1    Результаты анализа оценивают непосредственно после инкубирования. Чашки просматривают в проходящем свете от любого источника света.

Диаметры зон ингибиции роста тест-культуры, образуемых испытуемым образцом молока и контрольным разведением антибиотика, измеряют линейкой или на аппарате Микрофот 5ПО-1 по краям окружностей зон.

3.6.2    При отсутствии зон ингибиции контрольного разведения стрептомицина исследования повторяют с использованием вновь приготовленных засеянных чашек по 3.4.4 и контрольного разведения антибиотика по 3.4.6.

3.6.3    При отсутствии антибиотиков в молоке диаметр зоны ингибиции должен быть менее 12 мм. а при их наличии — 12 мм и более.

3.7    Метрологические характеристики

3.7.1 Наименьшие пределы определения антибиотиков представлены в таблице 1.

Таблица !

Наименование

антибиотика

Наименьший предел определении. Ед/r (иы/г)"

Наименование

антибиотика

Наименьший предел определения. Ед/г (мкг/t)1'

Бензнлпенициллин

0.005

Эритромицин

0.05

Стрептомицин

0.5-1.0

Нсоминин

0.25

Тетрациклин

0.1

Мономшши

0,25

Окси тетрациклин

0.1

Лсвомнцстин

2.5

Хлортетрациклнн

0,05

Олсаняомииин

2.5

11 1 мкт активного вещества равен 1 Ед активности.

4 Метод с индикатором бромкрезолпурпуром

4.1 Сущность метола

Метод основан на изменении окраски агаровой среды со спорами Вас. siearothermophilus var. calidolactis С953 от фиолетовой до желтой при отсутствии в исследуемом молоке антибиотиков и других ингибирующих веществ и сохранении окраски — при их наличии.

4

Страница 7

ГОСТ Р 51600- 2000

4.2 Аппаратура, материалы и реактивы

4.2.1    Термостат или блок термостатируемых ячеек, позволяющий поддерживать температуру от 30 'С до 70 "С с допускаемыми отклонениями ±0,5 *С от заданной.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

4.2.2    Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

4.2.3    Ампулы «Delvotest* SP* герметично укупоренные, вместимостью 1,0 см’с агаровой средой, содержащей споры Вас. stearothennophilus var. calidolaciis и индикатор бромкрезолпурпур. собранные в блоки.

4.2.4    Среда питательная таблетированная «Delvotest* SP*, фасованная в бутылочки из темного стекла с навинчивающимся колпачком.

4.2.3, 4.2.4 (И)меиенная редакция, Изм. № 1).

4.2.5    Шприц-дозатор автоматический вместимостью 1,0 см\ настроенный на объем пробы 0,1 см\

4.2.6    Наконечники пластмассовые одноразовые, вместимостью 0,1 см’.

4.2.7    Пинцет.

4.2.8    Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже указанных.

4.2.9    Ампулы «Delvotest* SP-NT* или «Delvotest* SP MINI-NT*, герметично укупоренные, вместимостью 1,0 см1 с агаровой и питательной средой, содержащей споры Вас. stearothennophilus var. calidolactis и индикатор бромкрезолпурпур, собранные в блоки.

(Введен дополнительно, Изм. № 1).

4.2.10    Тестовый набор «Сорап Test'»* - комплект, включающий герметично укупоренные пробирки. собранные в блоки, и содержащие споры Вас. stearothennophilus var. calidolactis, помещенные в агаре питательными веществами и индикатором бромкрезолпурпуром; пипетки мерные вместимостью 0,1 см’ одноразового использования и цветовую шкалу |3|.

4.2.11    Пипетки вместимостью 0,1 см3 для отбора образцов молока для исследования по ГОСТ 29169.

4.2.10, 4.2.11 (Введены дополнительно, Изм. № 2).

4.3    Отбор проб

4.3.1    Отбор проб и подготовка их к анализу - по ГОСТ 9225.

4.3.2    Допускается хранить пробы в холодильнике в течение 24 ч при температуре (6±2) 'С.

4.4    Подготовка к анализу

4.4.1    Подготовка к анализу ампул по 4.2.3 и бутылочек но 4.2.4

Стеклянную бутылочку с питательными таблетками вынимают из холодильника и выдерживают в течение 20 мин при температуре от 15 до 25 *С.

(Измененная редакция, Изм. № 1).

4.4.2    Осторожно, не повреждая упаковки, отрезают от блока необходимое число ампул или пробирок (с учетом контрольной пробы) и маркируют. Оставшиеся ампулы или пробирки хранят в холодильнике при температуре (6 ± 2) *С.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

4.4.3    Отвинчивают колпачок бутылочки и помешают его на стол вниз донышком. Пинцетом вынимают капсулу с силикагелем и поролоновый уплотнитель. Насыпают в колпачок необходимое количество таблеток питательной среды. Поролоновый уплотнитель и капсулу с силикагелем помешают в бутылочку.

4.4.4    Подготовка к анализу ампул или пробирок - по 4.2.9 или 4.2.10.

Осторожно, не повреждая упаковки, отрезают от блока необходимое число ампул или пробирок (с учетом контрольной пробы) и маркируют. Оставшиеся ампулы или пробирки хранят в холодильнике при температуре (6 ± 2) *С.

(Измененная редакция, Изм. № 2).

4.5 Провеление анализа

4.5.1    Проведение анализа с использованием ампул «Delvotest® SP*, «Delvotest<8> SP-NT* или • Delvotest® SP MINI-NT»

4.5.1.1    Соединительной частью шприца прокалывают укупорку ампул по 4.2.3 или 4.2.9.

4.5.1.2    В каждую открытую ампулу по 4.2.3 пинцетом помещают по одной таблетке питательной среды «Delvotest® SP->, взятой из колпачка бутылочки по 4.4.3. Затем бутылочку плотно закрывают колпачком и хранят при температуре (20 ± 2) "С.

5

Страница 8

ГОСТ Р 51600-2000

4.5.1.3    Шприцем-дозатором отбирают 0,1 см’ анализируемого молока и вносят в каждую ампулу по 4.5.1.2 или 4.2.9. Для каждой пробы анализируемого молока используют новый наконечник. Оставшееся молоко сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре (6±2) *С.

4.5.1.4    Ампулы помещают в термостат и выдерживают при температуре (64.0±0,5) *С в течение 3 ч.

4.5.2 Проведение аначиза с использованием тестового набора «Сорап Test®»

4.5.2.1    Одноразовой мерной пипеткой отбирают 0.1 см; анализируемого молока и вносят в пробирку с приоткрытой фольгой по 4.2.10. Оставшееся молоко сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре (6 ± 2) ‘С.

4.5.2.2    Пробирки с анализируемым молоком закрывают фольгой и помешают в блок термостати-руемых ячеек и выдерживают при температу ре (64.5 ± 0,5) 'С в течение 3 ч.

4.5.2.3    Контрольное определение проводят в соответствии с 4.5.1, 4.5.2. В ампулу или пробирку вносят 0,1 см’ предварительно восстановленного по ГОСТ 23454 препарата СКИ В.

4.5—4.5.2.3 (Измененная редакция, Изм. № 2).

4.6    Обработка результатов

4.6.1    Ампулы или пробирки извлекают из термостата или бюка термостатнруемых ячеек и определяют цвет содержимого.

4.6.2    Желтый цвет содержимого ампул или пробирок с контрольным и анализируемыми образцами молока свидетельствует об отсутствии в молоке ингибирующих веществ. Фиолетовое кольцо на поверхности содержимого ампулы (размером не более 1 мм) не учитывают.

4.6.3    Фиолетовый цвет содержимого ампул или пробирок с анализируемым образцом молока свидетельствует о наличии в молоке ингибирующих веществ.

4.6.1    —4.6.3 (Измененная редакция, Изм. № 2).

4.6.4    Вывод о наличии в молоке антибиотиков делают после дополнительных исследований молока по ГОСТ 24065 - ГОСТ 24067 и при получении отрицательных результатов.

4.7    Метрологические характеристики

4.7.1    Наименьшие пределы определения антибиотиков предстаплены в таблице 2.

Таблица 2

Наименование

аитибиошка

Наименьший предел определении. Ел/» (mki/i), с испольм>паннем

Наименование

Наименьший предел определения, Ед/r |мкг/»>. с испольюваинем

Сорап Test* (СИ-ЛТК)

Delvotcil-Jn SI* NT. Delvotesl*

SP MINI-NT

ant и6ио7Нка

Сорап Тей» (СНАТК)

Detvolexit SP NT. Delvoleuft SP MINI NT

D Н -Стрс птомицин

<1.0

Оксациллин

0,005

0.010

Амоксициллин

0.002

0.003

Окситстрацикл и н

0.25

0.400

Ампициллин

<0.002

0.003

Пенициллин

0.001

Бензилпенициллин

0.0025

Спектиномицин

>0.3

Ген гам кии н

0.1

0.400

Спирами цн и

>0,2

Дайсон

0,002

-

Стрептомицин

<1.0

Дигндрострепгомнцин

-

2.500

Сульфаниазин

0.05

Диклоксаииллин

0.01

0,010

Сульфадиметоксин

0.05

Доксициклин

0.15

Сульфадоксин

0,1

Клоксаииллин

0.01

0.020

Сульфаметазин

0.1

Левомииетин (хлор-амфеникол)

7.500

Сульфамстокса юл

<0,05

Сульфаиометозин

<0,05

Линкомииин

0.300

Сульфатиозал

0,05

Ыафциллин

0,005

0,010

Тетрациклин

0,25

0.300

Нсомицин

0,5

0,400

Тиамфсникол

>0.1

6

Страница 9

ГОСТ Р 51600- 2000

Окончание таблицы 2

Наименование

Наименьший предел определении. En/i (мкг/i), с нсполыопаннем

Наименование

Наименьший iipcne.t определения. Пл/i (мкг/г), с исполыован нем

антибиотика

Copan Tcst8 (СИ-ЛТК)

Delvo«eu>/ SP NT. DclvoteM 4 SP MINI-NT

аншбиотика

Copan Tcs№ (СН ЛТК)

Delvotcxtfi SP NT. Delvotcicfe SP MINI NT

Тилозин

0.05

0.100

Цсфаисраюн

0,025

0,060

Тилмнкозин

0.75

Цсфапирин

0.0025

0.005

Тримстроприм

0.1

Цефацетрил

0.020

Хлорамфсникол

>S,0

Цсфкуином

0.03

Хлортетрациклин

0,25

0.300

Цсфтиофур

0.05

-

Цефаюлин

0.05

Цсфуроксим

0.06

Цсфалсксин

>0.045

0.060

Эритромицин

>0,2

0,250

Цефалониум

0.025

0,015

(Измененная редакция, Изм. № 2).

5 Рецепторные методы

5.1    Рецепторный метод с 3,3,5,5-триметилбензнднном и диметнлсульфоксидом

5.1.1    Сущность метода

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамно-го типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного окрашенного комплекса при взаимодействии с молоком, содержащим антибиотики.

Наличие или отсутствие пенициллина и антибиотиков бета-лактамного типа (ампициллина, ие-фапирина, амоксиииллниа. цефтиофура, клоксациллина, диклоксациллина, цефапониума. цефатек-сина, нафциллина, иефазолина. цефкуинома, цефацетрила, оксациллина. цефаперазона) устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства «Snap®*.

5.1.2    Аппаратура, материалы и реактивы

5.1.2.1    Термостат, позволяющий поддерживать температу ру (45 ± 5) 'С.

5.1.2.2    Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

5.1.2.3    Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

5.1.2.4    Tecr-набор Бета-лактам «Snap'*, одноразовый комплект в герметичной упаковке, включающий пробирку «Snap'* с 3,3,5,5-триметилбензидином. укупоренную; пипетку мерную вместимостью 0.4 cmj; индикаторное устройство «Snap' * с диметнлсульфоксидом по [ 11.

Тест-набор Бета-лактам «Snap®* хранят в холодильнике при температуре от 0 "С до 7 С. Необходимое число комплектов для работы в течение суток допускается хранить при температуре (20 ± 2) "С.

5.1.3    Отбор проб

5.1.3.1    Отбор проб — по ГОСТ 9225. Пробы хранят в холодильнике в течение 24 ч при температуре (6 ± 2) *С.

5.1.4    Подготовка к анализу

5.1.4.1    Термостат нагревают до температуры (45 ± 5) *С и выдерживают при згой температуре не менее 5 мин.

5.1.4.2    Вскрывают упаковку тест-набора Бета-лактам «Snap"*, проверяют положение шарика реактива в пробирке по 5.1.2.4. Шарик реактива при заполнении пробирки молоком должен находиться на ее дне. При необходимости шарик реактива устанавливают встряхиванием пробирки на ее дно.

5.1.5    Проведение анализа

5.1.5.1 Мерную пипетку по 5.1.2.4 наполняют анализируемым молоком до метки.

7

Страница 10

ГОСТ Р 51600-2000

5.1.5.2    Анализируемое молоко из пипетки выливают в пробирку. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива. Пробирку и индикаторное устройство пометают в термостат и выдерживают при температуре (45 ± 5) *С в течение 5—6 мин.

5.1.5.3    Вынимают подогретое индикаторное устройство из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливки анализируемым молоком находилась слева от оператора.

5.1.5.4    Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

5.1.5.5    Ирм появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до упора для изменения тока жидкости и промывки пористого материала раствором антибиотиков. Включение индикаторного устройства сопровождается характерным щелчком клавиши.

5.1.5.6    Индикаторное устройство повторно помещают в термостат, выдерживают при температуре (45 ± 5) 'С в течение 4 мин и извлекают из термостата. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата.

5.1.6    Обработка результатов

5.1.6.1    Сравнивают цвет контрольной зоны в индикаторном окне с цветом зоны анализируемого молока.

5.1.6.2    Контрольная зона должна быть синего цвета. Если изменение цвета контрольной зоны после проведения процедур по 5.5.4—5.5.6 не произошло, то определение повторяют с новым тест-набором Бета-лактам «Snap**.

5.1.6.3    Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны - пенициллин или антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке отсутствуют.

Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о наличии в анализируемом молоке пенициллина или антибиотиков бета-лактамного типа.

5.1    —5.1.6.3 (Измененная редакция, Изм. № I, 2).

5.2    Рецепторный метод с коллоидным золотом

5.2.1    Сущность метода

5.2.1.1    Метод основан на проведении реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактам-ноготипа со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.2.2    Аппаратура, материалы и реактивы

5.2.2.1    Термостат или блок термостатируемых ячеек, позволяющий поддерживать температуру (47.5 ± 0,5) *С.

5.2.2.2    Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

5.2.2.3    Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

5.2.2.4    Тест-набор «Beta Star' » |4|. включающий флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом: полоски хроматографической бумаги с юной исследуемого молока и контрольной зоной; шприц-дозатор вместимостью 0,2 см3 с наконечниками.

5.2.3    Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 9225. Пробы хранят в холодильнике в течение 24 ч при температуре (6 ± 2) -С.

5.2.4    Подготовка к анализу

5.2.4.1    Термостат или блок термостатируемых ячеек нагревают до температуры (47.5 ± 0,5) *С и выдерживают при этой температуре fie менее 5 мин.

5.2.4.2    Флакон встряхивают для осаждения содержимого в нем на дно.

5.2.5    Проведение анализа

5.2.5.1    Шпрнием-дозатором с наконечником отбирают 0,2 см’ анализируемого молока и переливают во флакон по 5.2.4.2. Флакон закрывают крышкой и встряхивают до полного растворения сухих веществ без образования пены.

5.2.5.2    Помешают флакон в термостат или блок термостатируемых ячеек по 5.2.2.1.

8

Страница 11

ГОСТ Р 51600- 2000

5.2.5.3    Не менее чем через 3 мин термостатирования во флакон, находящийся в термостате или в блоке термостатируемых ячеек, помешают входящую в комплект полоску хроматографической бумаги.

5.2.3.4    Хроматографирование проводят в течение 2 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона.

5.2.6 Обработка результатов

5.2.6.1    Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся после проведения процедуры по 3.2.5.4 в виде линий на полосках хроматографической бумаги.

5.2.6.2    'Зона на верхней части полоски является контрольной. Если ее окрашивания не произошло после выполнения требований по 5.2.5.3, 5.2.5.4, то повторяют все процедуры в соответствии с 5.2.

5.2.6.3    Зона исследуемого молока расположена под контрольной зоной. Большая или равная интенсивность цвета контрольной зоны, а также отсутствие окраски зоны образца является признаком наличия антибиотиков бета-лактамного типа в молоке.

5.2.6.4    Меньшая интенсивность цвета контрольной зоны, по сравнению с шгтенсивностыо цвета зоны под ней, яапяется признаком отсутствия антибиотиков.

5.2.6.5    Контрольное определение проводят в соответствии с 5.1 и 5.2. В ампулу или пробирку вносятО.1 см1 предварительно восстановленного по ГОСТ 23454 препарата СКИВ.

5.2—5.2.6.5 (Введены дополнительно, Изм. .\е 2).

5.3 Метрологические характеристики

Наименьшие пределы определения антибиотиков бета-лактамного типа представлены в таблице 3.

Таблица 3

Наименование активно!ика

Наименьший предел определении. Ед/г (мкг/i). с исполмопаннем

Наименоианис

антибиотика

Наименьший предел определения. Пл/t (мкг/г). с исполыованием

Беталакгам

•Snap-*»»

Beta Star»

Беталактам

•Snapft*

Beta Star?.'

Амоксициллин

0.007

0,002

Цсфазолин

0.02

-

Ампициллин

0.005

0,002

Цефалексин

0,025

Ди клоксацилли н

0,02

0.005

Цсфнлониум

0.04

0,007

Клоксаииллин

0.03

0,005

Цефаперазон

0.01

0,005

Ыафциллин

0.07

0.008

Цсфапирин

0.011

0.008

Оксациллин

0,04

0.005

Цсфацетрил

0.05

Пенициллин

0,003*

Цсфкуином

0,02

Пенициллин G

0,002

Цсфтиофур

0.006

0,075

• 0,003 икг активного вещества равно 0,005 Ед активности.

(Измененная редакция, Изч. 1, 2).

6 Требования безопасности

1*аботу со споровой культурой тест-микроба в лаборатории проводят в соответствии с санитарными правилами по |2|.

Раздел 6 (Введен дополнительно, Изм. № 1).

9

Страница 12

ГОСТ Р 51600-2000

ПРИЛОЖЕНИИ А (справочное)

Библиография

|1| Тест-набор Ьста-ллктам «Snap»». Россия. ООО «ЗИП-И Диагностике».

(2) СП 1.2.731—99 Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности н гельминтами. |3| Тестовый набор «Сорап Test®* Дания, CHR HANSEN. Российское представительство: Россия. 105318 Москва, ул. Щербаковская. 53. корп. 17, 3 этаж, ООО «Хр. Хансен».

|4) Тест-набор -Bela StarS» Дания, CHR HANSEN. Российское представительство: Россия, 105318 Москва. ул. Щербаковская. 53, корп. 17. 3 этаж, ООО «Хр. Хансен*.

ПРИЛОЖЕНИЕ А (Измененная редакция. Him. К" 1, 2).

УДК 637.11:543.06:006.354    ОКС 67.100.10    HI9    ОКСТУ 9209

Ключевые слова: молоко, ингибирующие вещества, антибиотики, тест-микроб, зона ингибицин, антибиотики бета-лактамного типа, сульфаниламидные препараты

Редактор II.В. Таланояа Технический редактор В.II. Пруса копа Корректор 11.11. Гавришук Компьютерная верстка А.II. }o.mmapcaou

Подписано и печать 25.04.2010. Формат 60x84'/,- Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офсет нам. Уел. печ.Л. 1.40. Уч.-над. л. 1Л0. Тира* 110 ЧК». Зак.45.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ«.123995 Москва. Гранатный пер.. 4. www.goslinfo.ni    infcwl    goslin    fo.ru

Набрана в Калужской типографии с1анлартов Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» - тип. •Московский печатник». 10S062 Москва. Лялин пер.. 6.