Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Устанавливает метод определения содержания патулина в яблочных соках, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок, с помощью тонкослойной хроматографии

стандарт принят с правом досрочного введения

Оглавление

1 Область применения

2 Сущность метода

3 Реактивы

4 Приборы и лабораторное оборудование

5 Отбор проб

6 Проведение испытаний

   6.1 Приготовление испытуемого раствора

   6.2 Колоночная хроматография

   6.3 Тонкослойная хроматография

   6.4 Определение количества патулина в экстракте

7 Обработка результатов

8 Точность метода

   8.1 Сходимость результатов

   8.2 Воспризводимость результатов

9 Протокол испытания

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51440-99 (ИСО 8128-2-93)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОК ЯБЛОЧНЫЙ,

СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

Метод определения содержания патулина с помощью тонкослойной хроматографии

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

ГОСТ Р 51440-99

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овоше-сушнльной промышленности (ВНИИКОП)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 «Продукты переработки плодов и овошей*

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 595-ст

3    Стандарт содержит аутентичный текст международного стандарта ИСО 8128—2:1993 «Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Определение содержания патулина. Часть 2. Метод тонкослойной хроматографии», кроме приложения «Библиография*

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России

© И11К Издательство стандартов, 2000 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2008 Переиздание (по состоянию на июль 2008 г.)

Страница 3

ГОСТ Р 51440-99 (ИСО 8128-2-93)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОК ЯБЛОЧНЫЙ, СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

Метод определения содержания патулина с помощью тонкослойной хроматографии

Apple juicc, apple juicc concentrates and dnnks containing apple juice.

Method for determination of patulin content using thin-layer chromatography

Дата введения 2001—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулина в яблочных соках, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок. с помощью тонкослойной хроматографии.

Предел обнаружения патулина настоящим методом состаааяст 25 мкг/дм’ при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 50 см1.

2    Сущность метода

Патулин экстрагируют из исследуемой пробы смесью этнлаиетата с хлороформом (3:2 по объему). Экстракт очищают на колонке с силикагелем. Количественный и качественный анализ экстракта проводят с помошыо двумерной тонкослойной хроматографии (ТСХ) при проявлении пятен раствором гидрохлорида гидразона З-метил-2-бензотиазолина (МБТГ).

3    Реактивы

Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации «для хроматографии*.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — При работе с бензолом и хлороформом следует соблюдать особую осторожность, поскольку эти растворители токсичны и взрывоопасны.

3.1    Растворители: этилацетат. хлороформ и толуол.

3.2    Подвижные фазы для двумерной ТСХ:

бензол/метанол/уксусная кислота (массовой долей S0 %) (19:2:1 по объему);

толуол/этилацетат/муравьиная кислота (массовой долей 90 %) (5:4:1 по объему).

3.3    Силикагель для колоночной хроматографии с размером частиц от 0,063 до 0,2 мм.

3.4    Элюирующий раствор: смесь толуола с этилацетатом (75:25 по объему).

3.5    Стандартный раствор иатулина (С7Нь04)

3.5.1 Приготовление стандартного раствора патулина

Навеску патулина массой 10,0 мг. взятую с точностью до 0,1 мг, растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см3 в этилацетате (3.1). Объем содержимого в колбе доводят до отметки этилацетатом.

Пипеткой переносят 10,0 см3 приготовленного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см3, объем содержимого в колбе доводят до отметки этилацетатом. Массовая концентрация патулина в приготовленном стандартном растворе состаачяет около 10 м кг/см1.

Издание официальное

1

Страница 4

ГОСТ Р 51440-99

Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 нм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.

3.5.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулина

Концентрацию стандартного раствора патулина (3.5.1) ppt, мгк/см\ рассчитывают по формуле

_ A U Н*)1) С    (1)

Р‘ “    АУ ,

где Л — оптическая плотность стандартного раствора патулина;

Л’7б ~ молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм, дм1 моль-1 • см-‘ (Л27(, = 14600);

М — молярная масса патулина. г/моль:

С — постоянная прибора (обычно С= 1).

3.6 Приготовление раствора гидрохлорида МБТГ

Навеску моногидрата гидрохлорида гндразона З-метил-2-бенэотиазолнна (МБТГ) массой 0,5 г растворяют в 100 см' воды.

Приготовленный раствор хранят в холодильнике. Срок годности раствора — 3 сут.

4    Приборы и лабораторное оборудование

Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия конце1гтрации 10 г/см'.

Обычное лабораторное оборудование, в частности, следующее:

4.1    Хроматографическая колонка длиной 300 мм. внутренним диаметром 22 мм, с резервуаром вместимостью 250 см3 и запорным краном, снабженная с выходного конца пористым стеклянным диском.

4.2    Оборудование для ТСХ: стеклянные хроматографические камеры, длинноволновая ультрафиолетовая лампа (360 нм) и устройство для опрыскивания.

4.3    Флюороденситометр.

4.4    Пластинки для ТСХ размером 20x20 см, покрытые силикагелем (3.3) толщиной слоя 0.25 мм, без флюоресцентного индикатора.

4.5    Сушильный шкаф с принудительной вентиляцией, пригодный для работы при (130±1) ‘С.

5    Отбор проб

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.

6    Проведение испытаний

6.1    Приготовление испытуемого раствора

При испытании концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Дать-нейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.

Пробу объемом 50 см* экстрагируют порцией смеси этнлацетага с хлороформом (3:2 по объему) объемом 50 см3 в течение не менее 1 мин. Экстракцию повторяют еще два раза той же смесыо новыми порциями объемом по 50 см\ Экстракты объединяют и фильтруют на воронке с пористым стеклянным фильтром через слой безводного сульфата натрия толшнной I см, фильтрат собирают в отгонную колбу вместимостью 250 см3.

Экстракт упаривают на ротационном испарителе под вакуумом досуха, остаток количественно переносят в мерный цилиндр вместимостью 100 см3, ополаскивая колбу четырьмя порциями эти-лаиетата объемом по 5 см3. Объем содержимого в цилиндре доводят сначала до 25 см3 этил ацетатом, затем до 100 см5 толуолом.

6.2    Колоночная хроматография

В основание колонки (4.1) помешают ватный тампон. В колонку вносят 25 см3 толуола и

2

Страница 5

ГОСТ Р 51440-99

суспензию 15 г силикагеля (3.3) о 40 cmj толуола. После оседания силикагеля в колонку вносят 15 г безводного сульфата натрия и дают растворителю стечь до верхней кромки насыпного слоя. В колонку вносят экстракт из исследуемой пробы, после чего растворителю дают стечь до верхней кромки насыпного слоя, элюат отбрасывают. В колонку вносят 200 см* элюирующего раствора (3.4) и проводят элюирование при скорости потока около 5 см3/мнн, элюат собирают в градуированный цилиндр. Собранный элюат упаривают приблизительно до объема 2 см'.

Сконцентрированный элюат количественно переносят в пробирку вместимостью 20 см1 с помощью четырех порций этилаиетата объемом около 4 см5 каждая и упаривают досуха в токе азота. Остаток немедленно растворяют в 0,5 см3 этилаиетата, так как патулнн не стабилен.

6.3 Тонкослойная хромат(ирафия

Пластинки для ТСХ. предварительно покрытые силикагелем (4.4), активируют при температуре 110 "С в течение 2 ч. С помощью капиллярной пипетки или микрошприца на пластинку в точку, находящуюся на расстоянии 2 см от левого края и 2 см от нижнего края, наносят ап и квотную часть очищенного экстракта из пробы (6.2) объемом 0.020 см3. В точку, находящуюся на расстоянии 2 см от правого края и 2 см от нижнего края пластинки, наносят 0.005 см3 стандартного раствора патулина (3.5). В точку, находящуюся на расстоянии 2 см от левого края и 2 см от верхнего края пластинки, наносят также 0.005 см3 стандартного раствора патулина. В точку, находящуюся на расстоянии 2 см от левого края пластинки и 4 см от верхнего края пластинки, наносят 0.010 см3 стандартного раствора патулина (см. рисунок 1).

Направление!!-

*v

си

CN

НН

1

СУ

12

Размеры в сантиметрах Рисунок 1 — Двумерная тонкослойная хроматография

Хроматограмму развивают в направлении / (рисунок 1), используя подвижную фазу бензол/метанол/уксусная кислота (3.2), до прохождения фронтом растворителя расстояния 14 см. Пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе, после чего развивают хроматограмму в направлении // (рисунок I), используя подвижную фазу толуол/этилаиетат/муравьиная кислота (3.2). до прохождения фронтом растворителя расстояния 14 см. Пластинку вынимают из камеры и высушивают при комнатной температуре. Пластинку опрыскивают раствором гидрохлорида МБТГ (3.6), после чего высушивают в течение 15 мин в сушильном шкафу (4.5) при температуре 130 *С.

6.4 Определение количества патулина в экстракте

Количество патулина в экстракте определяют сравнением интенсивности флюоресценции пятна патулина из экстракта с пятнами патулина из стандартного раствора при облучении пластинки длинноволновым ультрафиолетовым светом. Пятно патулина из экстракта ищут на пересечении перпендикулярных линий, соединяющих пятна патулина из стандартного раствора. Если интенсивность флюоресценции пятна патулина из 0.020 см3 экстракта выше интенсивности флюоресценции пятен патулина из стандартного раствора, экстракт разводят этилацетатом и повторяют процедуру

3

Страница 6

ГОСТ Р 51440-99

ТСХ-анализа по 6.3. Если интенсивность флюоресценции пятна патулина из экстракта сравнима с интенсивностью флюоресценции одного из пятен патулина из стандартного раствора, то концентрация патулина в анализируемой пробе состаатяет 25 м к г/дм5 либо 50 мкг/дм3 соответственно.

При проведении анализа описанным методом достигается полное отделение патулина от оксиметнлфурфурола (ОМФ). поэтому последний не влияет на результаты анализа.

7 Обработка результатов

Содержание патулина в продукте рр, мкг/дм1, вычисляют по формуле

где К) - конечный объем, до которого доведен очищенный экстракт, см3;

— объем экстракта из пробы, нанесенный на пластинку, см3;

Уг — объем стандартного раствора патулина (3.5), соответствующий пятну той же интенсивности флюоресценции, что и пятно патулина из экстракта, см3; рр1 — концентрация патулина в стандартном растворе, мкг/ см5;

50 — объем пробы, взятый для экстракции, см3.

8 Точность метода

8.1    Сходимость результатов

г = 33.4 мкг/дм3: 5, = 29.4 мкг/дм5,

где г — предел сходимости;

s, — среднее квадратическое отклонение сходимости.

8.2    Воспроизводимость результатов

R = 41,0 мкг/дм3; s, = 35,8 мкг/дм3.

где R — предел воспроизводимости;

sr - среднее квадратическое отклонение воспроизводимости.

9 Протокол испытаний

В протоколе испытаний указывают:

-    метод испытаний:

-    результат испытаний;

-    окончательный результат с оценкой сходимости, если была проверена сходимость результатов.

Также следует отметить особенности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несущественные, с побочными обстоятельствами, способными повлиять на результат испытаний.

Протокол испытаний должен содержать информацию, необходимую для полной идентификации образца.

4

Страница 7

ГОСТ Р 51440-99

УДК 664.863.001.4:006.354    ОКС    67.160.20    Н59    ОКСТУ    9109

Ключевые слова: яблочный сок, концентрированный яблочный сок, напитки, содержащие яблочный сок, патулин. определение содержания, тонкослойная хроматография

5

Страница 8

Редактор Л/.//. Максимола Технический редактор Н.С. Г'ришаиола Корректор Л/.С. Кабатава Компьютерная верстка В. И. Грищенко

Подписано в печать 18.08.2008. Формат 60жВ4'/«- Бумага офсстиая. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Уел. печ. л. 0.93.

Уч.-ии. л. 0.S7. Тираж S9 яи. Зак. 1059.

ФГУП «СТАНДАРТЫ НФОРМ». 123995 Москва. Гранатный пер.. 4 wv»w.go*linro.TU infoOgoMinfo.ru Набрано но ФГУП .СТЛНДАРТИНФОРМ. на ПЭВМ.

Отпечатано и филиале ФГУП «СТАНДАРТННФОРМ» — тип. «Московский печатник». 105062 Москиа. Лялин пер.. 6.