Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

11 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ Р 51278-99 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Устанавливает метод определения количества бактерий, дрожжевых и плесневых грибов в зерновых и бобовых культурах и в продуктах их переработки (мука, крупа, отруби и т. д.).

  Скачать PDF

Действие завершено 15.02.2015

Оглавление

Введение

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определения

4 Сущность метода

5 Разбавитель, питательные среды и другие продукты

6 Лабораторное оборудование и стеклянная посуда

7 Отбор проб

8 Подготовка анализируемой навески

9 Проведение анализа

10 Обработка результатов

11 Отчет об анализе

Показать даты введения Admin

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ЗЕРНОВЫЕ, БОБОВЫЕ И ПРОДУКТЫ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ

Определение количества бактерий, дрожжевых и плесневых грибов

1—98/223


Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом зерна и продуктов его переработки (ВНИИЗ)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 2 «Зерно, продукты его переработки и маслосемсна*

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 13 мая 1999 г.

N? 163

3    Настоящий стандарт, кроме раздела 2, представляет собой аутентичный текст ИСО 7698 : 1990 «Зерновые, бобовые и продукты их переработки. Подсчет бактерий, дрожжевых и плесневых грибов»

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

© ИПК Издательство стандартов. 1999

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России

ГОСТ Р 51278-99

Содержание

Введение.................................................................. 1

1    Область применения....................................................... 1

2    Нормативные ссылки...................................................... 1

3    Определения.............................................................2

4    Сущность метода..........................................................2

5    Разбавитель, питательные    среды    и другие продукты...............................2

6    Лабораторное оборудование    и    стеклянная посуда.................................3

7    Отбор проб..............................................................4

8    Подготовка анализируемой навески...........................................4

9    Проведение анализа.......................................................4

10    Обработка результатов.....................................................5

11    Отчет об анализе.........................................................6

П1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ЗЕРНОВЫЕ, БОБОВЫЕ И ПРОДУКТЫ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ

Определение количества бактерий, дрожжевых и плесневых грибов

Cereals, pulses and derived products.

Enumeration of bacteria, yeasts and moulds

Дата введения 2000—01—01

Введение

Определение количества бактерий, дрожжевых и плесневых грибов в зерновых и бобовых культурах, а также в продуктах их переработки дает возможность определить содержание в них микроорганизмов и (или), в зависимости от цели, дает возможность определить природу присутствующей микрофлоры. Цель анализа — определение качества партии продукта с точки зрения гигиенических требований, изучение динамики развития микрофлоры для оценки эффективности одного из типов хранилищ или оценки влияния физической или химической обработки продукта на микрофлору.

При анализе измельченных продуктов кусочки грибницы также принимают во внимание, но подсчитывают главным образом споры грибов, особенно в том случае, сели присутствующие виды грибов являются интенсивно спорулируюшими. Такой метод является эффективным способом контроля за развитием микроорганизмов (в зерновых и бобовых культурах, а также в полученных из них продуктах) особенно в серии последовательных проб при условии, что будет проведена идентификация тех видов, которые позволяют проследить за эволюцией микрофлоры. При исследованиях результаты, полученные при помощи такого подсчета, соответствуют тем результатам, которые получены по технологическим критериям (например кислотное число жира, всхожеегь).

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения количества бактерий, дрожжевых и плесневых грибов в зерновых и бобовых культурах и в продуктах их переработки (мука, крупа, отруби и т. д.).

Стандарт разработан с учетом международных стандартов:

ИСО 7954—84, который даст общее направление таких исследований и ИСО 7218—85, где приводят подробные описания лабораторных методов для микробиологических исследований.

Примечание — Из-за особых свойств дрожжевых и плесневых грибов их подсчет страдает определенными неточностями.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ ИСО 2170-97 Зерновые и бобовые. Отбор проб размолотых продуктов

ГОСТ 25336-82 Посула и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26972-86 Зерно, крупа, мука, толокно для продуктов детского питания. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835—1—81) Посула лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования

ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950—79) Зерновые. Отбор проб зерна

Издание официальное

3    Определения

В настоящем стандарте применяются следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    бактерии: Мезофильные микроорганизмы, аэробные или факультативно анаэробные, которые при ЗО'С развиваются внутри и на поверхности агаризованной среды в условиях, которые описаны в этом стандарте.

3.2    дрожжевые грибы: Мезофильные аэробные микроорганизмы, которые развиваются при 25 1 2С на грибной агаризованной среде в условиях, описанных в этом стандарте, либо:

а)    на поверхности этой среды в виде матовых или блестящих круглых колоний, которые обыкновенно имеют правильный контур и более или менее выпуклую поверхность, либо

б)    внутри среды в виде округлых, линзообразных колоний.

3.3. плесневые грибы: Мезофильные аэробные гифальные микроорганизмы, которые на поверхности грибной агаризованной среды и в условиях, описанных в этом стандарте, обычно развиваются в виде плоских или пушистых разрастающихся колоний часто с окрашенными плодоносящими или спорообразующими структурами.

4    Сущность метода

4.1    Готовя! в двух повторностях чашки, залитые каждой из двух специфических питательных сред согласно 5.3.1 и 5.3.2, которые содержат определенное количество маточной суспензии.

В тех же условиях осуществляют посев в другие чашки последовательных десятичных разведений маточной суспензии.

4.2    Аэробную инкубацию чашек содержащих авизованную среду для подсчета бактерий (5 3.1), проводят при 30 1С в течение 3 дней.

Аэробную инкубацию чашек, содержащих авизованную среду для подсчета дрожжевых и плесневых фибов (5.3.2), проводят при 25 1С в течение 3, 4 или 5 дней.

4.3    Расчет количества бактерий по количеству колоний в отобранных чашках с агаризованной средой (5.3.1).

Расчет количества дрожжевых и (или) плесневых фибов по количеству колоний в отобранных чашках с агаризованной средой (5.3.2).

5    Разбавитель, питательные среды и другие продукты

5.1    Основные компоненты

Чтобы обеспечить воспроизводимость результатов, рекомендуется использовать для приготовления разбавителя и питательных сред основные обезвоженные компоненты или полностью обезвоженные среды Также могут быть использованы коммерческие готовые реактивы. При этом необходимо строго соблюдать инструкцию изготовителя.

Используемые химикаты должны иметь такую степень чистоты, коюрая пригодна для анализа.

Используемая вода должна быть дистиллированной или деионизированной. Эта вола должна быть свободна от таких веществ, которые могли бы сдерживать рост микроорганизмов (бактерий, дрожжевых и плесневых фибов) в условиях проведения этого анализа.

Если разбавитель и питательные среды не используют тотчас же после изготовления, то их лолжны. если нет особых указаний, хранить в темном месте при температуре от 0 до 5 1С нс более одного месяца, в условиях, не оказывающих влияния на изменение их состава.

5.2    Разбавитель

Раствор пептона в растворе хлорида натрия должен соответствовать ГОСТ 26972

Примечание — Для того, чтобы повысить гомогенность споровых суспензий, можно добавить такое поверхностно-активное средство, как сорбитоьый эфир олеиновой кислоты (фирменное название Твин 80) в пропорции 0.033 г на один литр разбавителя.

5.3    Питательные среды

5.3.1 Агаризовапная среда для подсчета количества бактерий

Состав: триптон1 — 5.0 г; обезвоженный дрожжевой экстракт — 2.5 г; безводная глюкоза — 1.0 г; агар — от 9 до 18 г1\ вода — 1000 см3.

Примечание— Если требуется предотвратить развитие дрожжевых грибов, к питательной среде могут быть добавлены ингибиторные средства, такие как актидион (ииклогсксимид) или натамикин (пимарицин) в количестве 0,1 г/дм5.

ГОСТ Р 51278-99

Приготовление

Растворяют компоненты или полностью обезноженную среду в воде при кипячении. В случае необходимости регулируют показатель pH таким образом, чтобы после стерилизации он составил 7,0 при 25 'С.

Разливают эту среду в пробирки согласно 6.9 по 15 см3 на одну пробирку, или в колбы, или сосуды (6.9) подходящей емкости таким образом, чтобы среда занимала приблизительно половину объема такой колбы или сосуда.

Стерилизуют эту среду в автоклаве согласно 6.1 при температуре (121 ± I) *С в течение 20 мин.

Если приготовленную среду используют сразу, то се охлаждают перед использованием в водяной бане согласно 6.7 при температуре (45 ± 0,5) *С.

Если приготовленную среду не используют сразу мосле ес приготовления, то перед началом микробиологических анализов, чтобы избежать задержек при разливе агариэоваиной среды, ее следует расплавил, в кипящей водяной бане, а затем охладить перед использованием в водяной бане согласно 6.7 при температуре (45 у 0,5) *С.

5.3.2 Агаризованная среда для подсчета количества дрожжевых и плесневых грибов (агаризовачная среда с дрожжевым экстрактом, глюкозой и хлорамфениколпм)

Состав: дрожжевой экстракт — 5,0 г; глюкоза (С6Н,206) — 20 г; хлорамфеникол (СИН|2С12 N205) - 0,1 г; агар — от 9 ло 18 г*; вода — 1000 см3.

Приготовление авизованной среды

Растворяют компоненты в кипящей воде. Если необходимо, регулируют pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял 6,6 мри 25 *С.

Разливают среду по сосудам (6.9) соответствующей емкости.

Стерилизуют среду в автоклаве (6.1) при температуре (121 t I) *С в течение 15 мин.

Если среду используют сразу после ес приготовления, ес охлаждают в водяной бане (6.7) при температуре (45 т 0,5) *С.

Если же приготовленная среда нс будет использована сразу после приготовлении, то перед началом микробиологических анализов, чтобы избежать задержки при разливе агаризонанной среды, ее полностью расплавляют в кипящей водяной бане, затем охлаждают перед использованием в водяной бане (6.7) при температуре (45 ± 0.5) *С.

Примечание — Хлорамфеникол может быть заменен океитстраииклином (С22Н^2Оп) В этом случае готовит основную среду так, как это описано выше, но нс лобанлнют хлорамфеникол Разливают среду по 100 см3 и стерилизуют. Готовят 0.1 %-ный раствор окситетрациклина i ядро хлорида в воде и стерилизуют его после фильтрования. Непосредственно перед использованием добавляют асептически 10 см3 раствора к 100 см3 основной срслы, которая была расплавлена, и сохраняют при температуре (45 t 0.5) 'С.

6 Лабораторное оборудование и стеклянная посуда

Примечание — Оборудование одноразового использования является приемлемой заменой стеклянной посуде многоразового использования, если такое оборудование имеет соответствующую спецификацию

Пользуются обычным микробиологическим лабораторным оборудованием, которое перечислено ниже.

6.1    Оборудование для сухой стерилизации (термостат) или для паровой стерилизации (автоклав), причем автоклав может либо работать отдельно, либо являться частью общего оборудования для приготовления и распределения питательной среды.

Оборудование, которое вступает в соприкосновение с растворителем, питательной средой или пробой, особенно если это оборудование пластмассовое*V должно быть простсрилизовано. за исключением тех случаев, когда оборудование поставляется стерильным. Стерилизация должна производиться одним из следующих методов:

а)    стерилизация в термостате (6.1) при температуре от 170 до 175 *С нс менее I ч;

б)    стерилизация в автоклаве (6.1) при температуре (121 ± 1) *С не менее 20 мин.

6.2    Оборуд о ва и и е для смешивания

Для смешивания желательно использовать один из следующих видов оборудования:

а) ротационный смеситель, желательно с верхним приводом, имеющий частоту вращения от 8000 до 45000 мин *, со стеклянными или металлическими сосудами, желательно оснащенными крышками, устойчивыми к условиям, при которых проводится стерилизация;

* В соответствии с инструкциями фирмы-изготовителя.

** Используется оборудование из термостойких пластмасс.

б) смеситель перистальтического типа (фирменное название «стамэйкср») со стерильными пластмассовыми мешками.

Примечание — Сосуды или пластмассовые мешки должны иметь достаточную емкость для того, чтобы дать возможность хорошо перемешать навеску с достаточным количеством разбавителя. Вместимость сосуда должна быть приблизительно вдвое больше, чем емкость пробы вместе с разбавителем

6.3    Мешалка вихревого типа, предназначенная для перемешивания содержимого в пробирках, колбах и сосудах (разбавленного раствора первоначальной суспензии).

6.4    Термостаты, способные поддерживать температуру на уровне (30 + 1) *С и (25 ± I) *С.

6.5    Чашки Петри диаметром от 90 до 100 мм.

6.6    Градуированные пипетки, откалиброванные только для бактериологическою использования, вместимостью 10 и I см3, с делениями, градуированными на 0,5 и 0.1 см3 соответственно, и имеют вытекающее отверстие or 2 до 3 мм по ГОСТ 29227.

6    7 Водяная баня или подобное устройство, температуру которого можно контролировать на уровне (45 ± 0,5) *С.

6.8    Потенциометр точностью до ± 0.1 pH при температуре 25 *С.

6.9    Пробирки размером 20 х 200 мм. или колбы, или сосуды емкостью 0,5 и I дм3 но ГОСТ 25336

7    Отбор проб

Отбор проб проводят п соответствии с требованиями ГОСТ Р 50436 или ГОСТ И СО 2170

Масса лабораторной пробы должна быть больше, чем масса навески для анализа, приведенной в таблице I. чтобы иметь возможность повторить этот анализ, если возникнет такая необходимость

Если анализ отобранных проб проводят не сразу, то эти пробы хранят при температуре приблизительно 10 *С не более 48 ч. Этот момент отражается в отчете об анализе. Нс допускается, чтобы отобранные пробы при хранении были заморожены.

8    Подготовка анализируемой навески

Перед тем, как произвести отбор анализируемой навески, необходимо тщательно перемешать лабораторную пробу.

Примечание — В исследуемых с помощью настоящего стандарта продуктах микроорганизмы часто имеют неравномерное распределение по всему объему анализируемой пробы. Поэтому желательно использовать не менее 3, а лучше 5 анализируемых навесок

9 Проведение анализа

9.1 Анализируемая навеска

Анализируемую навеску, масса которой определена в таблице 1, взвешивают с точностью до 0.1 г и помешают:

а)    в сосуд ротационного смесителя (6.2а) для продуктов категории 1 или

б)    в пластмассовый мешок смесителя с фирменным названием «стамэйкер» (6.26) для продуктов категории 2, или

в)    в плоскодонную стеклянную колбу емкостью 500 или 750 см3 в соответствии с ГОСТ 26972.

Г а б л и н а 1

1

Категория

Продукт

~ '

Масса анализируемой навески, г

Количество разбавителя.

см»

1 "i

Зерно или семена

40

360

2

Зернопролукты (мука, отруби)

крупа.

20

180

9.2 Приготовление маточной суспензии (исходного разведения)

К анализируемой навеске добавляют соответствующий объем разбавителя, который приведен в таблице 1, и оставляют на 30 мин. затем либо-

а) используют ротационный смеситель (6.2а), чтобы число его оборотов достигло от 15000 до 20000 в минуту. При использовании смесителя с меньшим числом оборотов время не должно превышать 2.5 мин, либо;

ГОСТ Р 51278-99

G) используют смеситель «сгамэйкер» (6.2.6) в течение 2 мин;

в) при отсутствии указанного оборудования действуют в соответствии с ГОСТ 26972.

9.3    Приготовление разведений

Разведения готовят в соответствии с требованиями ГОСТ 26972.

Перед тем. как проводят отбор аликвотной порции суспензии для посева, содержимое пробирки гомогенизируют с помощью мешалки вихревого типа (6.3) или тщательно перемешивают вручную.

9.4    Посев

9.4.1    Берут четыре стерильных чашки Петри согласно 6.5. С помощью стерильной пипетки переносят в каждую чашку 1 см3 маточной суспензии (разведение 10 -1 согласно 9.2).

9.4.2    Берут еще четыре стерильных чашки Петри. Используя другую стерильную пипетку, переносят в каждую чашку 1 см3 разведения 10 2 согласно 9.3.

Повторяют эту процедуру, используя последующие разведения с учетом требований, изложенных в 9.6.1 и 9.6.2.

9.4.3    В каждой группе из четырех чашек в две из них наливают приблизительно 15 смагариэованной среды (5.3.1), а в две другие чашки наливают приблизительно 15 см3 агаризованпой среды (5.3.2).

Тщательно и осторожно перемешивают посевной материал и питательную среду и оставляют для застывания, причем чашки должны стоять на холодной горизонтальной поверхности.

Также готовят две контрольные чашки, одна из которых должна содержать приблизительно 15 см3 агаризованпой среды (5.3.1), а другая — приблизительно 15 см3 агаризованпой среды (5.3.2), для проверки их стерильности.

9.5    Инкубация

9.5.1    Бактерии

Переворачивают чашки с агаризованпой средой (5.3.1) и помещают их в термостат (6.4), температура в котором поддерживается на уровне (30 t 1) *С, на 3 дня.

9.5.2    Дрожжевые и плесневые грибы

Чашки с агаризованпой средой (5.3.2) в прямом или перевернутом положении помещают в термостат (6.4), температура в котором поддерживается на уровне (25 ± 1) *С. на 5 дней.

9.6    Оценка результатов анализа

9.6.1    Подсчет колоний бактерий

Исследуют чашки после периода инкубации, установленного согласно 9.5.1.

Подсчитывают число колоний в каждой чашке с агаризованпой средой (5.3.1), содержащие не более 300 колоний. Необходимо, чтобы одна их этих чашек содержала, по крайней мере. 15 колоний.

9.6.2    Подсчет колоний дрожжевых и (ши) плесневых грибов

Подсчитывают число колоний в каждой чашке спустя три. четыре и пять дней инкубации. После 5 дней сохраняют те чашки, в которых содержится менее 150 колоний. Если некоторые части этих чашек слишком заросли плесневыми грибами или трудно сосчитать хорошо изолированные колонии, то используют те результаты, которые получены после 4 или 3 дней инкубации. В этом случае в отчете о результате анализа должен быть указан инкубационный период в 3 или 4 дня.

Различия между колониями дрожжевых и плесневых грибов устанавливают с помощью микроскопа.

В сомнительных случаях необходимо учитывать, что колонии дрожжевых фибов обыкновенно состоят из яйцевидных или сферических клеток, в то время как у плесневых видны волокна фибницы.

10 Обработка результатов

10.1    Вычисления

10.1.1    Подсчитывают количество микроорганизмов, го есть бактерий, дрожжевых и (или) плесневых фибов на один фамм продукта по следующей формуле

--Ц£.-    (1)

(я, + 0,1л2) d

где I С — сумма колоний во всех чашках, которая подсчитана в двух последовательных разведениях; d — разведение, в котором были получены первые подсчеты (например. 10-2);

я, — количество чашек, в которых проведены подсчеты в первом разведении;

я2 — количество чашек, в которых проведены подсчеты во втором разведении.

5

10.1.2    Округляют результат, который получен в 10.1.1 до двух значащих цифр. Если число, которое нужно окр>тлить, равно 5 без дальнейших значащих цифр, его округляют так, чтобы получилось четное число, например- 28500 округляют до 28000. а 11500 — округляют до 12000

10.1.3    Выражают этот результат в виде числа между 1.0 и 9.9, умноженного на 10*. где х — соответствующая степень.

Если в чашках из маточной суспензии (9.4.1) колонии отсутствуют, тогда количество микроорганизмов (то есть бактерий) дрожжевых и (или) плесневых грибов на один грамм продукта должно быть внесено в отчет как ♦менее 10*.

10.2    Пример вычисления

Подсчет дрожжевых и (или) плесневых грибов дал следующие результаты (две чашки Петри на разведение были подвергнуты инкубации):

10“2 раствор: 105 и 97 колоний;

10    3 раствор: 18 и 23 колонии;

Z С _.    103»    97    »    18»    23    243_    -    11045    (2)

(я, ♦ O.litj) d |2 - (0.1 к 2)| * 10 J * 0.022

Округление результата в соответствии с 10.1.2 дает 11000.

Таким образом, определенное количество дрожжевых и плесневых грибов на грамм продукта равно 1.1 х КН.

10.3    Точность (допустимые расхождения)

По статистическим соображениям, в 95 % всех случаев доверительные уровни для этого метода варьируются от t 16 до ♦ 52 %. На практике могут наблюдаться даже более значительные вариации, в особенности между результатами, которые получены разными микробиологами.

11    Отчет оГ» анализе

Отчет об анализе должен отражать использованный метод, инкубационный период и полученные результаты, должен ясно показывать использованный метод вычислений. В этом отчете также должны быть упомянуты любые рабочие детали, которые нс указаны в этом стандарте или которые рассматриваются как необязательные вместе с любыми случайными деталями, которые могут оказан» влияние на результаты.

Отчет об акали те должен включать н себя всю ту информацию, которая необходима для полной идентификации пробы. 4

УДК 631.53.02 : 633.85 : 001.4 : 006.354    ОКС 67.060    Н39    ОКСТУ 9109

Ключевые слова: бактерии, дрожжевые фибы, плесневые фибы, микроорганизмы, разбавитель, питательная среда, колонии, агаризованная среда, экстракт, стерилизация, маточная суспензия 5

1

Эго название в настоящее время применяется только некоторыми изготовителями сред. Может использоваться любой другой продукт расшенления, который дает такие же результаты.

2

В соответствии с инструкциями фирмы-изготовителя.

3

4

5