Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовой концентрации L-яблочной кислоты в виде свободной кислоты или соли

Введен впервые. Переиздание

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определение, обозначения и сокращения

4 Сущность метода и реакции

5 Реактивы

6 Аппаратура

7 Проведение испытания

8 Выражение результатов

9 Точность определения

10 Отчет об испытании

Приложение А Статистические результаты кругового испытания

Приложение Б Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51239-98 (ДИН 1138-94)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ Метод определения L-яблочной кислоты

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

ГОСТ Р 51239-98

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ГК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность*

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 декабря 1998 г. № 462

3    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН 113S—94 «Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение L-яблочной кислоты. Спектрофотометрическое определение НЛДФ (никотинамидадениндинукдеотида)» с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2. 5. 7, 8 и 9 и пункты 6.1 и 6.5)

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован it распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Госстандарта России

II    120

Страница 3

ГОСТ Р 51239-98 (ДИН 1138-94)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения L-яблочной кислоты

Fruit and vegetable juiccs. Determination of L-malic acid content

Дата введения 1999—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовой концентрации L-яблочной кислоты в виде свободной кислоты или соли.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

3    Определение, обозначения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями: массовая концентрация L-яблочной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и

сокосодержащих напитках: Массовая концентрация L-яблочной кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в г/дм}.

3.2    В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:

НАД — {J-никотинамндаденнндинуклеотнд;

НАДН — р-никотннамидаденнндинуклеотнд (восстановленная форма):

ГОГ — глутаматоксалоанетаттрансаминаза;

L-МДГ — L-малатдегидрогеназа:

Е — международная единица, определяющая количество (активность) фермента, которое служит катализатором для превращения при 25 ‘С 1 мкмоля вещества в минуту.

4    Сущность метола и реакции

Метод |L 2| основан на ферментативном преобразовании L-яблочной кислоты в оксалоацетат под действием НАД в присутствии L-МДГ, смешении равновесия реакции путем связывания образовавшегося оксалоацетата L-глутаматом в присутствии ГОТ и спектрофотомегрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДН, эквивалентной массовой концентрации L-яблочной кислоты в пробе |1. 2|.

L-МДГ

оксалоацетат + L-глугамат

L-аспартат + а-кетоглутарат.


L-яблочная кислота + НАД*


оксалоацетат + НАДН + Н+,


(1)


(2)


Иллание официальное

121

1

Страница 4

ГОСТ Р 51239-98

5    Реактивы

5.1    Общие требования

При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения L-яблочной кислоты при условии, что качество реагентов не ниже указанного в настоящем стандарте.

Препараты глнцилглицина, L-глутаминовой кислоты и НАД должны содержать не менее 90 % основного вещества.

5.2    Г л и и и л г л и ц и н о в ы й буферный раствор активной кислотности 10.0 pH

4,75 г глнцилглицина и 0,88 г L-глутаминовой кислоты растворяют в 50 см5 дистиллированной волы по ГОСТ 6709. Устанавливают активную кислотность раствора равной 10.0 pH приблизительно 4.6 см5 раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации с (NaOH) = 10 моль/дм3. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 60 см5. Буферный раствор устойчив при температуре 4 ‘С 3 мес.

5.3    Раствор НАД

0,420 г НАД растворяют в 12 см3 дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4 *С 1 мес.

5.4    Суспензия фермента ГОТ

Раствор глутаматоксалоацетаттрансаминазы массовой концентрации 0.002 г/см1, содержащий L-аспартат и а-кетоглутарат в качестве субстрата, смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с ((NH.,),S04) = 3,2 моль/дм5. Удельная активность суспензии ГОТ состаачяет не менее 400 Е/см5. Суспензия устойчива при температуре 4 ‘С 12 мес.

5.5    Суспензия фермента L-МДГ

Раствор L-малатдегидрогеназы массовой концентрации 0,005 г/см5 смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с ((NH4);S04) = 3,2 моль/дм3. Удельная активность суспензии L-МДГ составляет не менее 6000 Е/см5. Суспензия устойчива при температуре 4 "С 12 мес.

6    Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1—6.4.

6.1    Дозаторы пипеточиые объемами доз 100, 50 и 25 см' и относительной погрешностью дозирования т\ % |3| или пипетки градуированные номинальной вместимостью 2,0; 1.0; 0,5; 0.2; 0,1 и 0,02 см5 и допускаемой относительной погрешностью ±1 %.

6.2    Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334. 340 или 365 нм.

6.3    Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оатавленные длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.4    Спектрофотометр или фотометр фотохтектрическнй для измерений при длинах волн 334. 340 или 365 нм, допускаемой абсолютной погрешностью измерений ко:>ффициента пропускания т\ %.

6.5    Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 20 г и допускаемой погрешностью ±0,0001 г.

7    Проведение испытания

7.1 Подготовка пробы к испытанию

Как правило, пробы не нуждаются в особых методах подготовки к испытаниям. Результаты испытания по настоящей методике выражают в граммах на кубический дециметр.

Испытания концентрированных продуктов проводят после их разбавления дистиллированной водой до получения значения относительной плотности разбавленного продукта согласно рецептурам натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. При этом относительную плотность разбавленной пробы выражают в граммах на кубический дециметр.

Результаты испытаний концентрированного продукта могут быть также выражены в граммах на килограмм. При расчете результата испытаний учитывают массу пробы концентрированного продукта и фактор разбавления.

При испытании продуктов высокой вязкости и/или с очень большим содержанием мякоти результаты испытаний выражают в граммах на килограмм продукта.

Продукты с мутной взвесью перед испытанием хорошо перемешивают.

122

2

Страница 5

ГОСТ Р 51239-98

Сильно окрашенные продукты рекомендуется разбавить в большей степени, чем указано ниже. При этом пробы с очень низкой концентрацией L-яблочной кислоты рекомендуется предварительно осветлить путем центрифугирования.

Пробу разбавляют дистиллированной водой до получения значения массовой концентрации L-яблочной кислоты в интервале от 0.02 до 0.35 г/т1. Допускается использование при проведении испытания окрашенной разбавленной пробы.

7.2 Определение

7.2.1    Общие требования

Определения проводят при постоянной температуре в интервале от 20 до 25 "С. Допускается проводить определения при постоянной температуре в интервале от 25 до 37 *С при условии получения равноценных результатов.

Абсорбционный максимум НЛДН находится при длине ваты 340 им. При использовании спектрофотометра переменной длины волны все измерения проводят в максимуме поглощения света НЛДН. При использовании спектрофотометра с ртутной лампой измерения проводят при длинах волн 334 или 365 нм.

Дая дозирования буферных растворов, а также растворов проб, ферментов и коферментов используют только градуированные пипетки или автоматические дозаторы.

7.2.2    Контрарный раствор

13 фотометрическую кювету вносят 1.00 см3 буферного раствора по 5.2, 0.20 см3 раствора НАД по 5.3, 1.50 см3 дистиллированной воды и 0,01 см3 суспензии ГОТ по 5.4. Смесь перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора относительно оптической плотности воздуха — (Л,)*.

7.2.3    Раствор пробы

В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1.00 см5 буферного раствора по 5.2. 0.20 см3 раствора НАД по 5.3, 1.40 см3 дистиллированной воды, 0,01 см3 суспензии ГОТ по 5.4 и 0,1 см3 подготовленной пробы. Смесь перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора относительно оптической плотности воздуха — (/1|)пр.

7.2.4    Ферментативная реакция и количественное определение

В каждую из кювет с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по 0.01 см3 суспензии L-МДГ по 5.5 и перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. По окончании реакции (через 5—10 мин) измеряют оптические плотности растворов относительно оптической плотности воздуха — (Лг)11р и (Л2)к. Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний прибора через 2 мин.

8 Выражение результатов

8.1    В ферментативных реакциях, лежащих в основе данного метода, образующийся в кювете НЛДН приводит к изменению оптической плотности раствора (Д/1), а его массовая концентрация пропорционатьна массовой концентрации L-яблочной кислоты в пробе.

ДЛ = (А-АХ-(Л~А\ •

8.2    Массовую концентрацию L-яблочной кислоты в пробе р. г/см1, вычисляют в соответствии с законом Ламберта-Бера по формуле

М V. F    (4,

Р1- кйкнюи -М'

где Л/ — молярная масса L-яблочной кислоты, 134.09 г/моль;

К, — общий объем раствора в кювете, см3;

F — фактор разбавления по 7.1;

е — молярный коэффициент поглощения НЛДФН. дм' ммоль-1 см~

-    при длине волны 340 нм — 6,3,

-    при длине волны 365 нм — 3,4 (ртутная лампа),

-    при длине волны 334 нм — 6,18 (ртутная лампа):

5 — толщина поглощающего слоя в кювете, см;

V, — объем пробы, см!.

123

3

Страница 6

ГОСТ Р 51239-98

Если нет отклонений от объемов, указанных в 7.2.3. то

р-3,647 #1.    <5>

8.3    При использовании имеющихся в продаже наборов реактивов численный коэффициент (3,647) в уравнении (5) может быть иным из-за изменения общего объема раствора (К,) в кювете.

8.4    За результат испытаний принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, округленное до сотых долей.

9 Точность определения

9.1    Сходимость

Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать более чем в 5 % случаев значения показателя сходимости г. г/дм1, рассчитываемого по формуле

г = 0,014+0,030 р„    (6)

где р, — среднеарифметическое результатов двух параллельных определений.

9.2    Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях. не должно превышать более чем в 5 % случаев значения показателя воспроизводимости R, г/дм3, рассчитываемого по формуле

R = 0.032+0,070 р2.    (7)

где р, — среднеарифметическое результатов двух измерений.

10 Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    информация, которая необходима для идентификации пробы (вилы пробы, ее происхождение, описание);

-    ссылка на настоящий стандарт;

-    дата и способ отбора пробы (если возможно);

-    дата доставки пробы;

-    результаты испытаний и наименования единиц измерений, в которых они приводятся;

-    дата испытания:

-    информация о выполнении условий воспроизводимости метода;

-    замечания об особенностях проведения испытания;

-    особые условия проведения испытания, которые не учтены настоящим стандартом, но могли бы оказать влияние на результаты испытания.

124

4

Страница 7

ГОСТ Р 51239-98

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Статистические результаты кругового испытания

Проведенное в соответствии с |4| круговое испытание дало следующие характеристики точности метода, приведенные в таблице А.1.

Испытание проводилось иод руководством Отдела пищевой химии Института Макса фон Псттенкофера Федерального министерства здравоохранения, т. Берлин, ФРГ.

Год проведения кругового испытания — 1983.

Число участвовавших лабораторий    — 24.

Количество проб    — 4.

Таблица АЛ

Наименование величины, характеризующей

Значение величины для пробы

круговое испытание

А

В

с

I)

Число лабораторий, оставшихся после исключения тех. в которых полученные результаты были забракованы

22

20

21

23

Число исключенных лабораторий

2

4

3

1

Число принятых результатов

110

99

104

119

Среднеарифметическое <р,>. г/дм*

1,26

2.54

7,22

8,92

Срсднеквадратическос отклонение результатов определений Ц.), т/дм3

0.0232

0.0284

0,0652

0.1142

Относительное срсднеквадратическос отклонение результатов определений (RSDJ, %

3.36

1.12

0,90

1.28

Показатель сходимости (/•), т/дм1

0,06

0.08

0,18

0.32

Срсднеквадратическос отклонение результатов измерений (хх), г/дм*

0.04X6

0.0675

0.1876

0,2350

Относительное срсднеквадратическос отклонение результатов измерений (RSDK), %

3.86

2.66

2.60

2.63

Показатель воспроизводимости (Л), г/дм5

0,14

0.19

0.52

0.66

Примечания

1    Установлена линейная 'зависимость между г. R и среднеарифметическими.

2    Характер проб:

-    А — апельсиновый сок;

-    В — стандартный раствор;

-    С — яблочный сок;

-    D — вишневый нектар.

125

5

Страница 8

ГОСТ Р 51239-98

ПРИЛОЖЕНИЕ Ь (справочное)

Ьиб.жо! рафия

|1| Bcstimmung dcr L-Aepfclsacurc: Enzymatisch: Nr. 21. 1985.— In: Analyscn/[Sammlung| Internationale Fmclit-saft-Union. — Loscblattausgabe. stand 1989. Zug: Schwcizerisehcr Obstverband |2J Untersuchung von Lcbensmittcln: Bcstimmung von L-Acpfclsacurc (L-Malat) in Fruchtsaeftcn: L31.00-IS, 1984—11. In: Amtliche Sammlung von Untersucliungsverfahren nach § 35 LMBG: Vcrfahrcn /ur Probcnahmc und Lntcrsuchung von Lcbcnsmittcln. Tahakcrzeugnissen. kosmctischcn Mittcln und Bedartgcgenstacnden/Bun-desgcsundheitsamt. Loseblattausgabc, Stand 31.12.1991. Bd. I. — Berlin. Kocln: Bcuth Vcrlag GmbH |3| ТУ 64—13329—81 Дозаторы пипеточные

|4| ИСО 5725—86 Точность методов испытания. Определение повторяемости н воспроизводимости для метода стандартного испытания с помощью межлабораторных испытаний

ОКС 67.080    Н59    ОКСТУ 9109

Ключевые слона: фруктовый сок; овощной сок; нектар; сокосодержашнй напиток; L-яблочная кислота; спектрофотометрия

126

6