Сертификация: тел. +7 (495) 175-92-77
Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения лимонной кислоты в виде свободной кислоты или соли

Введен впервые. Переиздание

Оглавление

1 Областьприменения

2 Нормативные ссылки

3 Определения и сокращения

4 Сущность метода

5 Средства измерений, всопомогательные устройства, реактивы и материалы

6 Отбор и подготовка проб

7 Подготовка к испытанию

8 Проведение испытания

9 Выражение результатов

10 Контроль достоверности полученных результатов

11 Отчет об испытании

Приложение А Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51129-98

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ Метод определения лимонной кислоты

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

ГОСТ Р 51129-98

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств, Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности

ВНЕСЕН Техническим комитетом ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 19 января 1998 г. № 7

3    Разделы настоящего стандарта, за исключением 2: 5; 6; 8,2; 9, представляют собой аутентичный текст европейского стандарта EH 1137—94. «Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение содержания лимонной кислоты (цитрата). Спектрофотометрическое определение никотинамидадениндинуклеотида (НАД)*

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован it распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Госстандарта России

II    112

Страница 3

ГОСТ Р 51129-98

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ Ф Е Д Е Р А Ц И И

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ Метод определения лимонной кислоты

Fruit and vegetable juices.

Method for determination of citric acid (citrate)

Дата введения 1998-07-01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения лимонной кислоты в виде свободной кислоты или соли.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарге использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3652-69 Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Натрий двууглекислый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4529-78 Цинк хлористый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вола дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора

проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овошей, консервы мясные и мясораститель-ные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования

3    Определения и сокращения

3.1.    В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

массовая концентрация лимонной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовая концентрация лимонной кислоты, определенная в соответствии с методикой, установленной настоящим стандартом, выраженная в мг/дм’.

3.2.    В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:

ЦЛ — питратлиаза ЕС 4.1.3.6 111;

МДГ — мал атдегидрогеназа ЕС 1.1.1.37 |1|;

ЛДГ — лактатдегидрогеназа ЕС 1.1.1.27 |1);

НАД — никотинамндадениндинуклеотнд, окисленная форма;

НАДН — никотинамидадениндннуклеодид. восстановленная форма:

Е — стандартная единица, определяет количество (активность) фермента, которое служит ката! и затором при 25 "С для превращения 1 мкмоля вещества в минуту.

Ишанис официальное

113

1

Страница 4

ГОСТ Р 51129-98

4 Сущность метода

Метод основан на ферментативном преобразовании нона цитрата в оксалоанетат с помощью ЦЛ, затем в пнруват, восстановлении их с помощью НАДН в присутствии МДГ и ЛДГ, спектрофотомет-рическом измерении израсходованного НАДН, эквивалентного количеств)' лимонной кислоты.

В ходе анализа при активной кислотности 7,8 pH протекают следующие ферментативные реакции:

ЦЛ

(1)

(2)

(3)

Цитрат-ион -> оксалоанетат + ацетат

мдг

Оксалоанетат + НАДН + Н‘ -> L-малат + НАД"

ЛДГ

Пнруват + НАДН + Н* -> L-лактат — НАД*

5 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

Спектрофотометр, позволяющий проводить исследования при длине волны 340 нм или фотометр фотоэлектрический шириной спектральной полосы не более 10 нм и допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1 %. или спектрофотометр на ртутной лампе, позволяющий проводить измерения при длинах волн 365 или 334 нм.

Кюветы из оптического стекла или полистироловые рабочей длиной 10 мм.

Мономер или pH-метр погрешностью измерения не более 0.05 pH.

Электрод для измерения pH стеклянный.

Электрод сравнения (каломельный).

Пипетка по ГОСТ 29227 типа 3, исполнения 1, 1-го класса точности, вместимостью I и 10 см3.

Дозаторы пипеточные объемом доз 1, 0,2 и 0.02 см\ относительной погрешностью дозирования ± 1 % |2|.

Цилиндр по ГОСТ 1770 вместимостью 100 cmj.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч. д. а., раствор концентрации с (NaOH) = 5 моль/дм3.

Цинк хлористый по ГОСТ 4529, ч. д. а., раствор массовой концентрации т (ZnCl,) = =800 мг/дм4.

Натрий двууглекислый по ГОСТ 4201, ч. д. а.

Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769. ч. д. а., раствор концентрации с ((NH,),S04) = =3,2 моль/дм3.

Кислота лимонная по ГОСТ 3652, раствор массовой концентрации т (С6Н„07) = 400 мг/дм*.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Глицилглицин по НД |3J.

НАДН (динатриевая соль) по НД |3|.

Суспензия МДГ/ЛДГ по НД |3|.

ЦЛ по НД |3|.

Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательные устройства с техническими характеристиками, а также реактивы по качеству не ниже перечисленных в настоящем разделе.

6 Отбор и подготовка проб

Отбор проб — по ГОСТ 26313. подготовка их к испытанию — по ГОСТ 26671.

6.1    Подготовка к анализу фруктовых и овощных соков, нектаров и сокосодержашнх напитков

При высоком содержании лимонной кислоты в пробе продукта ее разводят водой до массовой концентрации лимонной кислоты от 20 до 40 мг/дм3. Полученный раствор используют при проведении анализа. Сильно окрашенные соки подвергают большему разбавлению. Мутные соки перед разведением тщательно перемешивают.

6.2    Подготовка к испытанию концентратов фруктовых и овощных соков, нектаров и сокосодержащих напитков

Концентрат разводят водой до содержания сухих веществ по рецептуре натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. При необходимости пробу разводят повторно в соответствии с 6.1.

2    114

Страница 5

ГОСТ Р 51129-98

7 Полготовка к испытанию

7.1    Приготовление буферного раствора активной кислотностью 7,8 pH

7,13 г глицилглицина растворяют в 70 см3 воды и доводят pH раствора до 7,8 с помощью приблизительно 13 см3 раствора гидроокиси натрия, затем приливают 10 см1 раствора хлористого цинка и объем доводят водой до 100 см3. Буферный раствор устойчив при температуре 4 "С в течение четырех недель.

7.2    Приготовление раствора НАДН

30 мгдинатриевой соли НАДН и 60 мгдвууглекислого натрия растворяют в 6 см3 воды. Раствор устойчив при температуре 4 ’С в течение четырех недель.

7.3    Приготовление суспензии МДГ/ЛДГ

0,1 см3 суспензии МДГ, содержащей 5 мг лиофилизата МДГ в 1 см’ (6000 Е/см3), 0.5 см3 суспензии ЛДГ, содержащей 5 мг лиофилизата ЛДГ в 1 см3 (2750 Е/см') смешивают с 0.4 см’ раствора сульфата аммония. Суспензия МДГ/ЛДГ в растворе сульфата аммония устойчива при 4 *С в течение 1 г.

7.4    Приготовление раствора Ш1

I6S мг лиофилизата цитратлиазы растворяют в 1 см3 ледяной воды (1,25 Е/см3). Раствор устойчив при 4 ”С в течение одной недели, в замороженном состоянии — четырех недель.

8 Проведение испытания

5.1    Проведение ферментативного определения лимонной кислоты

Испытание проводят при температуре от 20 до 25 "С. Допускается проведение анализа при

постоянной выбранной температуре в интервале от 25 до 37 "С.

Для дозирования исследуемой пробы и растворов используют пипетки с делениями или пипеточные дозаторы. Растворы ферментов, коферментов и буфера вносят соответствующими пипеточными дозаторами.

Ферментативное определение лимонной кислоты может быть проведено также с использованием имеющихся в продаже специальных наборов реактивов.

8.1.1    Приготовление пробы

В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1,00 см3 буферного раствора, pH 7.8, 0.1 см3 раствора НАДН. 0,20 см3 раствора исследуемой пробы, 1.80 см3 воды и 0,02 см’ суспензии МДГ/ЛДГ. Смесь перемешивают, выдерживают в течение 5 мин и измеряют в спектрофотометре или фотометре оптическую плотность раствора — (A)npoe* относительно воздуха.

При высоких значениях начальной оптической плотности (более 1.000) готовят новую пробу, используя менее концентрированный раствор НАДН. Рекомендуется также уменьшить объем раствора исследуемой пробы в кювете, компенсируя снижение общего объема в кювете увеличением объема воды.

Если массовая концентрация лимонной кислоты в растворе исследуемой пробы менее 20 мг/дм3, то вносимый пипеткой объем может быть увеличен до 2.00 см3. В этом случае следует снизить объем воды, добавляемой в кювету, для поддержания на постоянном уровне общего объема в кювете. При расчете результатов необходимо учесть измененный объем раствора исследуемой пробы в формуле (5).

8.1.2    Реакция с ферментам и количественный ино.ич

К подготовленному в кювете по 8.1.1 раствору добавляют 0,02 см3 раствора ЦЛ. Содержимое кюветы перемешивают. Через 10 мин измеряют оптическую плотность (/1г)„рос» раствора относительно воздуха. Окончание реакции проверяют путем повторного считывания показаний через 2 мин.

8.2    Контрольное испытание

В кювету вносят 1.00 см3 буферного раствора и 0.1 см3 раствора НАДН. 2.00 см3 воды и 0,02 см3 суспензии ферментов МДГ/ЛДГ, содержимое перемешивают. Через 5 мин измеряют оптическую плотность раствора (Л,)кйцгроЯ1. относительно воздуха.

К подготовленному в кювете раствору добавляют 0.02 см3 раствора ЦЛ. перемешивают, выдерживают в течение 10 мин и измеряют оптическую плотность (^)в01|1ро. относительно воздуха.

115

Страница 6

ГОСТ Р 51129-98

9 Выражение результатов

Основой данного метода яиляется линейная зависимость между количеством окисленного НЛДН и количеством лимонной кислоты. Разность измеренных величин оптических плотностей Д Л вычисляют по формуле

Д А — (At —    “    (Л| •''Мкомгрснь-    (4)

Массовую концентрацию лимонной кислоты в пробе X\ мг/дм3, вычисляют по формуле

М У, ■ F-1000 _ Л    (5)

*Т v, них) АЛ

где Л/ — молярная масса лимонной кислоты (безводная форма), М = 192,1 г/моль;

У, — суммарный объем раствора в кювете, см3;

F— фактор разведения пробы, рассчитываемый как отношение объема разведенной пробы к объему, взятому для разведения;

£ — молярный показатель поглощения НАДН. при    340    нм —    с = 6,3 дм3 •    ммоль*1    • см"1,

при    365    нм —    £ = 3,5 дм5    ммоль*1    • см 1    (ртутная лампа),

при    334    нм —    £ = 6,18 дм3    ммоль’1 см    1    (ртутная    лампа).

/ — рабочая    длина    кюветы, см;

У2 — использованный в анализе объем раствора исследуемой пробы, см3.

Если нет отклонений от объемов, указанных в 8.1.1, то

*=3016    <6>

При использовании имеющихся в продаже наборов реактивов численный коэффициент (3016) в формуле (6) может быть иным из-за изменения суммарного объема раствора в кювете (И,).

При анализе    концентратов    соков, продуктов с    высокой    вязкостью    и/или    очень    большим

содержанием    мякоти    результаты    испытаний могут быть    выражены    как    массовая    доля    лимонной

кислоты в пробе Х{, млн1, по формуле

„ X- 1000    У    (7)

Л'п-т-•

где К— объем разведенного концентрата сока, продукта с высокой вязкостью и/или очень большим содержанием мякоти, см3;

т — масса концентрата сока, продукта с высокой вязкостью и/или очень большим содержанием мякоти, взятых для разведения, г.

За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, округленное до целого значения.

Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать более чем в 5 % случаев значения показателя сходимости d, мг/дм3, рассчитываемого по формуле

d = 0.095 + 0.000025 р,    (8)

где р — среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, мг/дм3.

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях. не должно превышать более чем в 5 % случаев значение показателя воспроизводимости D, мг/дм3, рассчитываемого по формуле

/>= 0,130 + 0,000054 р\    (9)

где р' — среднеарифметическое результатов двух измерений, мг/дм3.

10 Контроль достоверности полученных результатов

Достоверность полученных результатов контролируют с помощью стандартного раствора лимонной кислоты массовой концентрации не более 400 мг/дм3, который испытывают по 8.1—S.2 без предварительного разведения.

116

4

Страница 7

ГОСТ Р 51129-98

Если массовая концентрация лимонной кислоты, определенная в результате испытания, составляет менее 95 % концентрации стандартного раствора, то испытание следует повторить со свежеприготовленными растворами реактивов.

11 Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    обозначение настоящего стандарта:

-    дата и способ отбора проб (если это возможно);

-    дата доставки образца;

-    дата проведения анализа;

-    результаты исследования;

-    обнаруженные в ходе исследования особенности;

-    все рабочие условия, не установленные данным стандартом или касающиеся как необязательных, так и любых других подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.

В отчете должны быть указаны все детали, необходимые для полной идентификации пробы.

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Библиография

|1| Номенклатура ферментов. Рекомендации Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций. М. 1979

|2| ТУ б-1!—13329—SI Дозаторы пипеточные

|3j Boehringer Mannheim. Mcthoden dcr enzimatischen BioAnalvtik und Lebcnsmittckranalytik mil Test-Combina-tionen

117

5

Страница 8

ГОСТ Р 51129-98

ОКС 67.080    Н59    ОКСТУ    9109

Ключевые слова: продукт питания, напиток, фруктовые и овощные соки, ферментативный анализ, определение концентрации, лимонная кислота, спектрофотометрия

118

6