Сертификация: тел. +7 (495) 175-92-77
Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Устанавливает метод обнаружения и учета предполагаемых колиформных бактерий и Escherichia coli (E. coli) в мясе и мясных продуктах

Введен впервые. Переиздание (январь 2010 г.)

Оглавление

1 Назначение и область применения

2 Ссылка

3 Определения

4 Сущность метода

5 Питательные среды, жидкость для разбавления и реактивы

6 Аппаратура и стеклянная посуда

7 Отбор проб

8 Проведение анализа

9 Обработка результатов

10 Отчет об испытаниях

Приложение (обязательное) Таблица для определения показателя НВЧ при проведении анализа одного образца из партии

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 50454-92 (ИСО 3811-79)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Обнаружение и учет предполагаемых колиформных бактерий и Escherichia coli (арбитражный метод)

Издание официальное

Страница 2

УДК 637.525.001.4:006.354    Группа    1119

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

ГОСТ Р

Обнаружение и учет предполагаемых колиформных бактерий    5П454 О?

и Escherichia coli (арбитражный метод)    311434 yL

Meat and meal products. Detection and enumeration of presumptive coliform bacteria (ИСО 3811-79) and presumptive Escherichia coli (Reference method)

OKC 67.120.10 ОКСТУ 9209

Дата введения 1994—01—01

1    Назначение и область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод обнаружения и учета предполагаемых колиформных бактерий и Escherichia coli (Е. coli) в мясе и мясных продуктах.

2    Ссылки

ГОСТ Р 50455-92 (ИС.О 3565—75) Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод)

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

3    Определения

3.1    Предполагаемые колиформные бактерии — микроорганизмы, ферментирующие лактозу с образованием газа при 30 *С. обнаруженные при проведении анализа в соответствии с указанным методом.

3.2    Предполагаемые Escherichia coli — предполагаемые колиформные бактерии, ферментирующие лактозу с образованием газа при 44 *С и продуцирующие индол из триптофана при 44 “С, обнаруженные при проведении анализа в соответствии с указанным методом.

3.3    Подсчет предполагаемых колиформных бактерий и Escherichia coli. обнаруженных в 1 г мяса или мясных продуктов при проведении анализа в соответствии с указанным методом.

4    Сущность метода

Измельчение испытуемой пробы с последующей гомогенизацией навески в стерильном разбавителе. Приготовление из гомогената десятикратных разведений, из которых делают посев в ряд пробирок с жидкой селективной средой. По количеству пробирок, показывающих образование газа после выдерживания в термостате при температуре 30 "С, определяют наиболее вероятное число предполагаемых колиформных бактерий в 1 г продукта, используя таблицу НВЧ (см. приложение).

Для учета предполагаемых Е. coli делают посев из положительных пробирок (т. е. пробирок, показывающих образование газа) в пробирки с жидкой селективной средой и в пробирки с трнпто-новой водой и выдерживают в термостате при температуре 44 *С. По количеству пробирок, показывающих образование газа в селективной среде и образование индола в триптоновой воде, определяют наиболее вероятное число предполагаемых Е. coli. используя таблицу НВЧ (см. приложение).

Издание официальное

© Издательство стандартов, 1992 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

so

1

Страница 3

ГОСТ Р 50454-92

5 Питательные среды, жидкость для разбавления и реактивы

5.1    Основные материалы

Для получения сопоставительных результатов рекомендуется использовать безводные компоненты питательных сред одинакового качества, химические реактивы аналитического качества или сухие готовые среды. Используемая вода должна быть дистиллированной или. по крайней мере, эквивалентной чистоты.

5.2    Питательные среды

5.2.1 Лактозный бульон с желчью и бриллиантовым зеленым (селективная среда)

Состав:

а — среда двойной    б    —    среда одинарной

концентрации    концентрации

neirTOH    20.0 г    10.0 г

лактоза    20.0 г    10,0 г

бычья желчь (сухая)    40,0 г    20,0 г

бриллиантовый зеленый по ГОСТ Р 50455    0,0266 г    0,0133 г

вода    1000 cmj    1000 см5

11 р и м с ч а н и с — Ввиду того, что готовая среда может не всегда давать ожидаемый результат, ее качество должно быть проверено перед употреблением.

Приготовление. Компоненты или сухую готовую среду растворяют в кипящей воде. Устанавливают pH среды раствором гидроксида натрия или раствором соляной кислоты подходящей концентрации так, чтобы посте стерилизации его значение составляло (7,2±0,1) при 25 "С. Среду по 10 см3 переносят в бактериологические пробирки (16 х 160 мм — для среды одинарной концентрации или 20 х 200 мм — для среды двойной концентрации), в которые помещают трубки Дархема, или во флаконы с завинчивающимися пробками подобной вместимости. Стерилизуют среду при температуре (121±1) ‘С в течение 15 мин. Над жидкостью должно быть видно не менее I см трубки Дархема. При наличии пузырьков их удаляют, наклоняя и постукивая пробирки. Пробирки, содержащие газовые пузырьки, не используют.

5.2.2 Трнптоновая вода

Состав:

триптон ..................................... 10,0 г;

хлорид натрия.................................5,0 г;

вода........................................ 1000 см3.

Приготовление. Компоненты или сухую готовую среду растворяют в горячей воде. Устанавливают pH среды раствором гидроксида натрия или раствором соляной кислоты подходящей концентрации так, чтобы после стерилизации его значение составляло (7,3±0.1) при 25 “С. Среду по 5—10 см* переносят в бактериологические пробирки или флаконы с завинчивающимися пробками аналогичной вместимости и стерилизуют при температуре (121±1) *С в течение 15 мин.

5.3    Жидкость для разбавления

Состав:

пептон...................................... 1,0 г;

хлорид натрия................................. 8,5 г;

вода........................................ 1000 см3.

Приготовление. Компоненты или сухую готовую среду растворяют в кипящей воде. Устанавливают pH раствором гидроксида натрия или раствором соляной кислоты подходящей концентрации так. чтобы после стерилизации его значение состаатяло (7,0±0.1) при 25 *С. Часть жидкости по 100—300 см' переносят в колбы или флаконы с завинчивающимися пробками вместимостью атвое больше объема жидкости. Остаток жидкости переносят в пробирки, маленькие колбы или маленькие флаконы с завинчивающимися пробками так. чтобы после стерилизации каждая содержала по 9.0 см}. Стерилизуют жидкость для разбавления при температуре (121± 1) 'С в течение 15 мин.

5.4    Индольный реактив (реактив Ковача)

Состав:

/7-диметиламинобензальдегид.....................5,0 г;

амиловый спирт...............................25,0 см3;

81 2

Страница 4

ГОСТ Р 50454-92

соляная кислота (р20 1,18—1,19 г/см3)...............25,0 см3.

Приготовление. Альдегид растворяют п спирте при слабом нагревании на водяной бане (около 50—55 "С). Охлаждают и добавляют кислоту. Хранят при температу ре около 4 *С в сосуде из темного стекла. Цвет реактива должен быть от светло-желтого до светло-коричневого.

6    Аппаратура и стеклянная посуда

6.1    Аппаратура

6.1.1    Механическая мясорубка лабораторного типа, стерильная, с решеткой, диаметр отверстий которой не более 4 мм.

6.1.2    Механический смеситель, работающий со скоростью не менее 8000 об/мин и не более 45000 об/мин, со стеклянными или металлическими смесительными стаканами разной вместимости и устойчивыми к условиям стерилизации.

6.1.3    Аппаратура для стерилизации стеклянной посуды, смесительных стаканов, питательных сред и т. п.

6.1.4    Термостат для выдерживания пробирок с посевами при температуре (30±1) ’С.

6.1.5    Водяная баня для выдерживания пробирок с посевами при температуре (44±0,1) 'С.

6.2 Стеклянная посуда

Стеклянная посуда должна бытъ устойчивой к повторной стерилизации.

6.2.1    Колбы и бактериологические пробирки (16 х 160 мм и 20 х 200 мм).

Допускается использовать флаконы с завинчивающимися пробками аналогичной вместимости.

6.2.2    Градуированные пипетки, откалиброванные для бактериологических целей, вместимостью 1.0 и 10,0 см* с ценой деления соответственно 0.1 и I см3 и диаметром выходного отверстия 2—3 мм.

6.3 Стерилизация стеклянной посуды

Стерилизуют стеклянную посуду одним из следующих способов:

влажная стерилизация при температуре (121±1) *С не менее 20 мин;

сухая стерилизация при температуре не менее 170 'С в течение I ч.

7    Отбор проб

Пробу отбирают массой не менее 200 г по ГОСТ Р 51447.

Отобранную пробу можно хранить в лаборатории при температуре 0—5 ‘С не более 1 ч.

8    Проведение анализа

8.1    Предварительная обработка проб

Пробу дважды пропускают через мясорубку, перемешивают и сразу приступают к анализу. При необходимости пробу можно хранить при температуре 0—5 *С не более 1 ч.

8.2    Навеска

Приблизительно 10 г измельченной пробы взвешивают с точностью 0,1 г в стерильном смесительном стакане.

8.3    Приготовление гомогената и разведений

8.3.1    Для приготовления гомогената (исходного разведения) к навеске продукта добавляют жидкость лля разбавления в соотношении 1:9 (по массе) и гомогенизируют на смесителе не более 2.5 мин, при этом число оборотов смесителя должно составлять 15000— 20000.

8.3.2    Последующие операции (8.3.3—8.3.5) выполняют одновременно на двух параллельных поринях гомогената (две серии разведений).

8.3.3    Непосредственно после гомогенизации стерильной пипеткой вместимостью 1 см’ берут 1 cmj гомогената и добавляют его в пробирку, содержащую 9 см3 стерильной жидкости для разбавления, не касаясь пипеткой поверхности раствора.

8.3.4    Жидкости хорошо перемешивают новой стерильной пипеткой путем десятикратного наполнения и выдувания из нее содержимого пробирки. Переносят этой же пипеткой 1 см3 полученного раствора (разведение I0-J) в другую пробирку, содержащую 9 см3 стерильной жидкости для разбавления, не касаясь пипеткой поверхности раствора.

82

3

Страница 5

ГОСТ Р 50454-92

8.3.5 Жидкости хорошо перемешивают новой стерильной пипеткой. Операции повторяют до тех пор, пока не получат разведение 10-А

8.4    Предполагаемые колиформные бактерии

8.4.1    Посев

Переносят новой стерильной пипеткой 6 порций по 1 см5 гомогената (разделяя их на две трехкратные повторности) и в трехкратной повторности по 1 см5 каждого из пяти последующих разведений (8.3.3—8.3.5) двух серий разведений в пробирки, содержащие по 10 см-' селективного бульона одинарной концентрации (5.2.16); начинают посев с наибольшего разведения гомогената и постепенно переходят к наименьшему, предварительно перемешивая содержимое пробирок трехкратным наполнением и выдуванием пипетки.

Если ожидается выявить очень маленькое количество колиформных бактерий, то таким же образом переносят 6 порций по 10 см1 гомогената (две трехкратные повторности) в пробирки с 10 см3 селективного бульона двойной концентрации (5.2.1а), используя стерильную пипетку вместимостью 10 см3.

8.4.2    Инкубирование

Пробирки, приготовленные по 8.4.1, выдерживают в термостате при температуре (30±1) 'С в течение (48±2) ч.

8.4.3    Интерпретация результатов

После выдерживания в термостате пробирки с посевом просматривают и отмечают положительные, то есть те, в которых наблюдается рост и образование газа, заполнившего не менее 1/10 объема трубки Дархема.

8.5    Предполагаемые Escherichia coli

8.5.1    Посев

Используя стерильную пипетку вместимостью 1 см' для каждой пробирки, делают посев 1 капли культуры из положительных пробирок с предполагаемыми колиформными бактериями (8.4.3) в пробирку с 10 см' бульона одинарной концентрации (5.2.16) и в пробирку с 10 см3 триптоновой воды, предварительно подогревая среды до 44 "С.

8.5.2    Инкубирование

Пробирки, приготовленные по п. 8.5.1, выдерживают на водяной бане при температуре (44±0.1) *С в течение 48 ч.

8.5.3    Интерпретация результатов

8.5.3.1    Образование газа

Пробирки, содержащие бульон с посевом, после инкубирования в течение 48 ч просматривают.

Регистрируют как положительные те пробирки, в которых наблюдается рост и образование газа, заполнившего не менее 1/10 объема трубки Дархема.

8.5.3.2    Образование индола

В пробирки, содержащие триптоновую воду с посевом, после инкубирования в течение 48 ч добавляют 0.5 см* индольного реактива, хорошо встряхивают и исследуют по истечении 1 мин.

Красное окрашивание спиртового слоя указывает на присутствие индола.

Регистрируют как положительные те пробирки, в которых образовался иидол.

9 Обработка результатов

9.1    Предполагаемые колиформные бактерии

9.1.1    По количеству положительных пробирок с предполагаемыми колиформными бактериями (8.4.3) для различных разведений рассчитывают наиболее вероятное число (НВЧ) этих микроорганизмов на I г мяса или мясного продукта, как указано в 9.1.2—9.1.4.

9.1.2    Для расчета НВЧ выбирают три последовательных разведения в соответствии с одним из следующих правил:

а)    когда есть разведение, дающее три положительные пробирки, выбирают наибольшее разведение (наименьшей концентрации), дающее три положительные пробирки, и два последующих разведения (концентрацией 1/10 и 1/100 выбранного разведения).

Если последующие разведения оказались недостаточными в сравнении с наибольшим, дающим три положительные пробирки, выбирают три наибольших разведения серии:

б)    когда нет разведения, дающего три положительные пробирки выбирают три наибольших разведения серии;

4

Страница 6

ГОСТ Р 50454-92

в) особый случай — когда более одного из грех разведений, выбранных по правилам, указанным в подпунктах а и б, не дали положительных пробирок.

Выбирают из этих разведений наименьшее (наибольшей концентрации), не даюшее положительных пробирок, и два последующих разведения серии (концентрацией 1/10 и 1/100 выбранного разведения), за исключением того случая, когда положительные пробирки обнаружены на уровне исходного разведения пробы. В последнем случае необходимо выбрать первые три разведения для расчета НВЧ, даже если эти серии включают два разведения, не даюших положительные пробирки.

9.1.3    Для определения значения НВЧ предполагаемых колиформных бактерий на 1 г мяса или мясного продукта умножить показатель НВЧ, приведенный в таблице (см. приложение), на значение, обратное наименьшему разведению.

Если выбранное наименьшее разведение соответствует пробиркам со средой двойной концентрации и посевом 10 см*, показатель НВЧ следует разделить на 10.

9.1.4    Рассчитывают среднее значение результатов, полученных для каждой серии разведений.

9.2    Предполагаемые Escherichia coli

9.2.1 По количеству положительных пробирок с предполагаемыми колиформными бактериями, в которых отмечено образование газа и образование индола, в различных разведениях рассчитывают НВЧ этих микроорганизмов на 1 г мяса или мясного продукта, как указано в 9.1.2—9.1.4 (при этом читать вместо «колиформные бактерии* «Escherichia coli*).

9.3    Запись результатов

Результат записывают как НВЧ пред пап а гае мых колиформных бактерий (или Escherichia coli) на 1 г мяса или мясного продукта.

При значении показателя НВЧ более 100 микроорганизмов на I г, результат выражают как число от 1.0 до 9,9. умноженное на 10 в соответствующей степени (например, среднее число 15000 записывается как 1,5 101). При значении НВЧ от 0,3 до 100. результат выражают в соответствии с расчетом. При значении НВЧ меньше 0.3 при использовании методики для малого количества колиформных бактерий (8.4.1), результат выражают следующим образом: предполагаемые колиформные бактерии (или предполагаемые Escherichia coli) не были обнаружены в 1 г мяса или мясного продукта.

10 Опет об испытаниях

В отчете должны быть указаны используемый метод и полученный результат, а также все условия, не оговоренные в настоящем стандарте или считающиеся необязательными, а также те, которые могли повлиять на результат.

В отчете должны быть приведены все детали, необходимые для полной идентификации пробы.

5

N4

Страница 7

ГОСТ Р 50454-92

ПРИЛОЖЕНИЕ

(обязательное)

ТАБЛИЦА

для определения показателя ПВЧ при проведении аиа.пиа одного обрата из партии

Число положительных пробирок дли трех пыбранных разведений

Показатель

НВЧ

Категория1

Пределы лостонерности. Si

1-е

2-е

3-е

9S

99

0

0

0

<0,3

0

0

I

0

0

1

0

0,3

2

< 0.1

1,7

<0.1

2.3

0

2

0

0

1

0

0

0.4

1

0,1

2,1

<0.1

2,8

1

0

I

0,7

2

0,2

2.7

0,1

3.5

1

1

0

0,7

1

0.2

2.8

<0.1

3.6

1

1

1

0

1

2

0

1,1

2

0.4

3,5

0,2

4.4

1

2

I

0

I

3

0

0

2

0

0

0,9

1

0,2

3.8

<0.1

5.0

2

0

1

1,4

2

0.5

4.8

0,2

6.2

2

1

0

1.5

1

0,5

5.0

0,2

6.4

2

1

1

2,0

2

0,7

6.0

0,4

7.6

2

2

0

2,1

1

0,8

6.2

0.5

7.9

2

2

1

0

2

3

0

0

3

0

0

2

1

<1

13

<1

18

3

0

I

4

1

1

18

<1

23

3

0

2

0

3

1

0

4

1

1

21

<1

28

3

1

1

7

1

2

28

2

36

3

1

2

0

3

2

0

9

1

3

38

1

51

3

2

1

15

1

5

50

3

66

3

2

2

21

2

8

64

5

82

3

2

3

0

3

3

0

20

1

<10

140

<10

190

3

3

1

50

1

10

240

<10

320

3

3

2

110

1

30

480

20

640

3

3

3

>110

6

1

Категория 0 — неприемлемые комбинации пробирок, дающие в нормальных условиях наименьший шанс получения результата. Комбинации, не упомянутые в таблице, также относятся к этой категории. При получении такой комбинации вероятно была допущена ошибка, использован неправильный метод или в продукте присутствует бактериосгатическос вещество.

Категория 1 — наиболее вероятные комбинации пробирок, которые могут быть получены в 95 % случаев.

Категория 2 — наиболее вероятные комбинации пробирок в сравнении с категорией 1. которые могут быть получены в 4 % случаев.