государственный стандарт

РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Определение остатков пестицидов с применением ГХ-МС и/или ЖХ-МС/МС после экстракции/разделения ацетонитрилом и очистки с применением дисперсионной ТФЭ. Метод QuEChERS

ПРАДУКЦЫЯ ХАРЧОВАЯ РАСЛ1ННАГА ПАХОДЖАННЯ

Вызначэнне астаткау пестыцыдау з прымяненнем ГХ-МС i/або ЖХ-МС/МС пасля экстракцьм/раздзялення ацэтажтрылам i ачыстк1 з прымяненнем дысперсшнай ТФЭ. Метад QuEChERS

(EN 15662:2008, ЮТ)

Издание официальное

Настоящий государственный стандарт СТБ EN 15662-2017 идентичен EN 15662:2008 и воспроизведен с разрешения CEN/CENELEC, Avenue Mamix 17, В-1000 Brussels. Все права по использованию европейских стандартов в любой форме и любым способом сохраняются во всем мире за CEN/CENELEC и его национальными членами, и их воспроизведение возможно только при наличии письменного разрешения CEN/CENELEC в лице Государственного комитета по стандартизации Республики Беларусь.

(дБ

УДК 664.012.1:543.393(083.74)(476)    МКС 67.050 КП 06    ЮТ

Ключевые слова: продукция пищевая растительного происхождения, определение остатков пестицидов. газовая и жидкостная хроматография, экстракция, разделение, очистка, метод QuEChERS

Предисловие

Цели, основные принципы, положения по государственному регулированию и управлению в области технического нормирования и стандартизации установлены Законом Республики Беларусь «О техническом нормировании и стандартизации».

1    ПОДГОТОВЛЕН республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт метрологии» (БелГИМ)

ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь

2    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 20 марта 2017 г. № 19

3    Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 15662:2008 Foods of plant origin-Determination of pesticide residues using GC-MS and/or LC-MS/MS following acetonitrile extraction/partitioning and clean-up by dispersive SPE- QuEChERS-method (Продукты пищевые растительного происхождения. Определение остатков пестицидов с применением GC-MS и/или LC-MS/MS после экстракции/разделения ацетонитрилом и очистки с применением дисперсионной SPE. Метод QuEChERS).

Европейский стандарт разработан техническим комитетом по стандартизации CEN/TC 275 «Анализ продуктов питания. Горизонтальные методы» Европейского комитета по стандартизации (CEN).

Перевод с английского языка (ел).

В стандарт внесено следующее редакционное изменение: наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования европейского стандарта с целью применения обобщающего понятия в наименовании стандарта в соответствии сТКП 1.5-2004 (04100).

Степень соответствия - идентичная (ЮТ)

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

© Госстандарт, 2017

Настоящий стандарт не может быть воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта Республики Беларусь

Издан на русском языке

Продолжение таблицы 3

Группа продукции Вид продукции Типичное содержание воды, г/100 г Количество добавляемой воды из расчета на 10 г анализируемой части пробы, г Количество добавляемой воды из расчета на 5 г анализируемой части пробы, г Примечания Абрикосовый нектар 85 Вишня 85 Мирабель 80 Нектарин 85 Персик 90 Персик сушеный 20 8.5 (см. 5.1.6) Слива 85 Слива сушеная 20 8.5 (см. 5.1.6) Ягоды Ежевика 85 Черника 85 Смородина 85 К смеси буферных солей, описанной в 3.12, добавляют 600 мкл раствора NaOH в концентрации 5 моль/л Бузина 80 Крыжовник 90 Виноград 80 Малина 85 К смеси буферных солей. описанной в 3.12, добавляют 200 мкл раствора NaOH в концентрации 5 моль/л Изюм 20 8.5 (см. 5.1.6) Земляника 90 Прочие фрукты Ананас 85 Банан 75 2.5 Инжир сушеный 20 8.5 (см. 5.1.6) Киви 85 Манго 80 Используют дисперсионную ТФЭ с GCB, как указано в 3.16 и 5.4.3 (смесь 1) Папайя 90 Овощи Корнеплоды и клубнеплоды Свекла 90 Морковь 90 Используют дисперсионную ТФЭ с GCB. как указано в 3.16 и 5.4.3 (смесь 1) Сельдерей 90 Хрен 75 2.5 Корневая петрушка 90 Редис 95 Скорцонера 80 Картофель 80

Продолжение таблицы 3

Г руппа продукции Вид продукции Типичное содержание воды, г/100 г Количество добавляемой воды из расчета на 10 г анализируемой части пробы, г Количество добавляемой воды из расчета на 5 г анализируемой части пробы, г Примечания Луковые растения Чеснок 60 7.0 Лук репчатый 90 Лук порей 85 Лук-шалот 80 Шнитт-лук 85 Используют дисперсионную ТФЭ с GCB, как указано в 3.17 и 5.4.3 (смесь 2) Плодовые овощи Баклажан 90 Огурец 95 Дыня 90 Перец сладкий 90 Для красного сладкого перца используют дисперсионную ТФЭ с GCB. как указано в 3.17 и 5.4.3 (смесь 2) Тыква 95 Для интенсивно окрашенных сортов используют дисперсионную ТФЭ с GCB, как указано в 3.16 и 5.4.3 (смесь 1) Томат 95 Цуккини 95 Капуста Брокколи 90 Брюссельская капуста 85 Цветная капуста 90 Пекинская капуста 95 Листовая капуста 90 Кольраби 90 Краснокочанная капуста 90 Савойская капуста 90 Белокочанная капуста 90 Листовые овощи и пряные травы Салат-латук, разные виды 95 Для интенсивно окрашенных сортов используют дисперсионную ТФЭ с GCB, как указано в 3.16 и 5.4.3 (смесь 1) Цикорий- эндивий 95 Кресс-салат 90 Используют диспер-сионную ТФЭ с GCB, как указано в 3.17 и 5.4.3 (смесь 2) Маш-салат 85 Петрушка 80 Руккола 85 Шпинат 90

Окончание таблицы 3

Группа продукции Вид продукции Типичное содержание воды, г/100 г Количество добавляемой воды из расчета на Юг анализируемой части пробы, г Количество добавляемой воды из расчета на 5 г анализируемой части пробы, г Примечания Стеблевые ово-щи Спаржа 95 Сельдерей 95 Лук-порей 85 Ревень 95 Артишок 85 Бобовые растения Фасоль, горох, Чечевица (сухие) <10 10 Фасоль (незрелая) 75 2.5 Прочее Злаки Злаки (крупа, мука и т. п.) 10 10 При необходимости дополнительно вводят стадию вымораживания или добавляют 25 мг сорбента С18 на 1 мл экстракта при дисперсионной ТФЭ для удаления липидов (см. 5.4.1) Кофейные зерна <10 10 (для ферментированной пробы берут 2 г) Для ферментированной пробы добавляют по 75 мг сорбента PSA из расчета на 1 мл экстракта на этапе дисперсионной ТФЭ Чай <10 Сухие травы и специи <10 10 (для ферментированной пробы берут 20 Грибы 90 Вино 90

5.3 Второй этап экстрагирования и разделение

Добавляют приготовленную смесь буферных солей (3.12) к суспензии, полученной в 5.2. Закрывают пробирку, и непосредственно после этого энергично встряхивают в течение 1 мин, а затем центрифугируют в течение 5 мин при ускорении более 3000 д.

Примечание - При работе с продукцией, которая имеет высокий уровень кислотности, такой как лимон,

лайм, смородина и малина, используют смести буферных солей с добавлением NaOH, как указано в 3.12.

В присутствии воды магния сульфат склонен образовывать комки, которые быстро твердеют. Чтобы избежать этого, непосредственно после добавления смеси солей центрифужную пробирку энергично встряхивают в течение нескольких секунд. Экстрагирование всей партии в течение 1 мин может выполняться параллельно после добавления буферных солей ко всем пробам.

Пестициды, с кислотными группами (например, феноксиалкановые кислоты) взаимодействуют с аминосорбентами, такими как PSA. Следовательно, если такие пестициды входят в область анализа, их определение (предпочтительно средствами ЖХ-МС/МС ЭСИ с регистрацией отрицательных ионов) должно осуществляться непосредственно на сыром экстракте, после центрифугирования, но

перед очисткой (5.4). Для этого помещают одну аликвоту сырого экстракта в виалу и проводят анализ ЖХ-МС/МС. Типичные усповия проведения анализа ЖХ-МС/МС для кислых пестицидов приведены в приложении А.

5.4 Очистка

5.4.1    Удаление коэкстрагированного жира, парафинов, сахаров (например, для злаков и цитрусовых)

Аликвоту фазы с ацетонитрилом (5.3) равную 8 мл переносят в центрифужную пробирку (4.5) и оставпяют на ночь в морозильной камере (для муки достаточно 2 ч); при этом основная часть жиров и парафинов твердеет и выпадает в осадок. После кратковременного центрифугирования (если требуется) отбирают 6 мл отстоявшегося холодного экстракта для дисперсионной ТФЭ в соответствии с 5.4.2.

Примечание - Вымораживание также помогает частично удалить некоторые другие экстрагированные из пробы вещества, ограниченно растворимые в ацетонитриле, такие как сахара Кроме того, экстрагированные жиры и парафины, присутствие которых способно снизить надежность результатов ГХ анализа, могут быть удалены с применением сорбентов с обращенной фазой на силикатной основе (типы ODS, С18) Для этого на этапе дисперсионной ТФЭ применяют 25 мг OOS вместе с 25 мг PSA и 150 мг магния сульфата на миллилитр используемого экстракта На пестициды, а также рекомендованные внутренние стандарты и стандарты для контроля качества (см таблицу 1) операции, описанные выше, влияния не оказывают

5.4.2    Очистка с использованием аминосорбента («дисперсионная ТФЭ» с PSA)

Аликвоту фазы с ацетонитрилом согласно 5.3 или 5.4.1 равную 6 мл помещают в попипропипено-вую центрифужную пробирку однократного применения (4.5), уже содержащую 150 мг PSA (3.14) и 900 мг магния сульфата (3.6). Закрывают пробирку, энергично встряхивают в течение 30 с. а затем центрифугируют (в течение 5 мин при ускорении более 3000 д). После этого немедленно отделяют и подкисляют прозрачный экстракт, как описано в 5.4.4.

Требуется 150 мг магния супьфата и 25 мг PSA из расчета на 1 мп экстракта.

Примечание - Целесообразнее всего помещать в центрифужные пробирки сорбенты для дисперсионной ТФЭ заблаговременно до начала процесса экстракции, выполняемого на одной партии проб Применение делителя проб (4.12) существенно облегчает выполнение данной задачи

5.4.3    Очистка с использованием смеси аминосорбента и GCB («дисперсионная ТФЭ» с PSA + GCB)

Для проб с высоким содержанием каротинодов (например, для сладкого перца, моркови) или хлорофилла (например, шпината, маш-салата, рукколы, листовой капусты, виноградных листьев и большинства разновидностей салата-латука, за исключением салата «айсберг» и римского салата), дисперсионная ТФЭ выполняется с применением комбинации PSA и GCB.

Аликвоту фазы с ацетонитрилом, как описано в 5.3, равную 6 мл помещают в центрифужную пробирку (4.5). в которой уже содержится 150 мг PSA (3.14), а для экстрагирования моркови и разновидностей салата-латука 900 мг сорбционной смеси 1 (3.16) либо для экстрагирования красного сладкого перца, шпината, маш-салата или рукколы 900 мг сорбционной смеси 2 (3.17). Закрывают пробирку и энергично встряхивают в течение 2 мин, а затем центрифугируют (например, в течение 5 мин при ускорении более 3 000 д). После этого немедленно изолируют и подкисляют прозрачный экстракт, как описано в 5.4.4.

Требуется 25 мг PSA и. в зависимости от характера пробы. 150 мг сорбционной смеси 1 или 2 из расчета на 1 мл экстракта.

Примечание - Целесообразнее всего помещать в центрифужные пробирки сорбенты для дисперсионной ТФЭ до начала процесса экстракции, выполняемого на одной партии проб Применение делителя проб (4 12) существенно облегчает выполнение данной задачи

5.4.4    Стабилизация экстракта

Помещают равную 5 мл аликвоту экстракта, очищенного, как описано в 5.4.2 или 5.4.3, в виалу с завинчивающейся крышкой для хранения (4.10). избегая попадания в нее частиц сорбента, и немного подкисляют путем добавления 50 мкл 5 %-го раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле (3.13). Переносят экстракт с отрегулированным уровнем pH в виалы автоматического пробоотборника и используют для газового и жидкостного хроматографического анализа. Неизрасходованный экстракт хранят в холодильнике для возможного дальнейшего применения.

Требуется 10 мкл раствора муравьиной кислоты (3.13) из расчета на 1 мл.

5.5    Определение

Инжектируют экстракты пробы, полученные в соответствии с 5.4.4 (либо, в случае с кислыми пестицидами. используют сырые экстракты, как описано в 5.3), и стандартные растворы (3.22) в газовый или жидкостный хроматограф в соответствующей последовательности. Этот процесс может включать в себя брекетинг (ограничивание) экстрактов пробы с использованием градуировочных растворов.

Измерения могут выполняться с применением различных измерительных приборов, их параметров. а также хроматографических колонок. Некоторые примеры параметров приборов и хроматографических колонок перечислены в приложении А. Доказано, что их применение обеспечивает необходимые условия для получения удовлетворительных результатов.

Сведения о соответствующих условиях ЖХ-МС/МС измерений см. [5]. Требования к экспериментальным условиям ГХ-МС измерений описаны в (3]. В то же время индивидуальная настройка используемого прибора в соответствии с особенностями анализируемых соединений обычно обеспечивает лучшую чувствительность.

5.6    Испытания на интерференцию и степень извлечения

Приготавливают холостые растворы и выполняют испытания на извлечение с применением добавок на различных соответствующих уровнях. Хроматограмма холостого раствора не должна содержать значительных мешающих пиков в интервале времени удержания аналитов.

6 Оценка результатов

6.1 Идентификация и количественное определение

Определение принадлежности аналита. присутствующего в экстракте пробы, может выполняться по ряду параметров. К ним относятся:

1)    время удержания искомого аналита (RT) или. что более предпочтительно, его отношение к времени удержания ISTD (Rt^/Rt^io)). полученному в том же анализе;

2)    форма пика аналита;

3)    при использовании МС или МС/МС детектирования - относительная распространенность фиксируемых масс (как правило, достаточно двух SRM-переходов для МС/МС и трех ионов - для МС).

Значения параметров, которые были получены для аналита. подлежащего идентификации в экстракте пробы, сравнивают со значениями, которые были получены для пестицидов, содержащихся в градуировочном растворе (растворах). Если для подтверждения принадлежности аналита необходимо обеспечить более высокий уровень достоверности, могут потребоваться дополнительные меры, такие как изменение условий, в которых проводится хроматографическое разделение, либо оценка дополнительных m/z или SRM-переходов. Более подробные сведения о необходимых критериях подтверждения см. в руководствах ЕС по контролю качества, описанных в документе (1). В таблице 1 приведен перечень ISTDs, доступных для применения. Использование более одного ISTD позволяет получить некоторое количество дополнительной информации.

Для контроля линейности и определения функции калибровки для каждого активного вещества применяют стандартные растворы (3.22.1 или 3.22.2), как описано в 6.2. Предпочтительным является использование матричной калибровки, однако в первом приближении определение уровня остатков пестицидов в пищевой продукции или подтверждение их отсутствия может выполняться со стандартными растворами в чистом растворителе (3.22.1). Указанные растворы могут быть пригодны и для целей количественного определения, если предварительные эксперименты показали, что связанные с их использованием эффекты подавления или усиления не оказывают существенного влияния на получаемые результаты. После выявления значимых остаточных концентраций пестицидов (например, в случае предполагаемого превышения максимально допустимого остаточного уровня) проводят более точное их определение используя матричную калибровку (3.22.2) или метод стандартных добавок (6.3).

Примечание 1 - Отклик для искомых аналитов, содержащихся в экстрактах пробы, изменяется под влиянием матрицы по сравнению с откликом для стандартных растворов в чистом растворителе.

Примечание 2 - Диапазон калибровки должен согласовываться с остаточными концентрациями пестицидов.

подлежащих количественному определению Соответственно, может потребоваться построение по результатам калибровочных измерений более чем одного калибровочного графика.

Настоящий стандарт предписывает использование ISTD для целей идентификации и количественного определения. Тем не менее, количественное определение возможно и без внутреннего

стандарта. В этом случае объем фазы с ацетонитрилом (5.3) принимают равным объему ацетонитрила, добавляемому к пробе, как указано в 5.2.3 (10 мл).

При использовании внутренних стандартов важно иметь в виду, что любое смещение сигнала ISTD будет оказывать непосредственное влияние на расчетное значение концентрации аналитов. В идеальной ситуации смещение сигнала ISTD должно наблюдаться только по причине несовпадения значений объемов, что должно обеспечивать высокую точность выполняемых измерений. Однако существуют и иные, нежелательные факторы, которые также могут оказывать влияние на сигналы ISTD, внося таким образом погрешности в результаты количественного определения аналита. Потери ISTD в процессе разделения или очистки приводят к завышенной оценке содержания аналита. Поэтому такие потери следует свести к минимуму. Эксперименты показали, что выход ISTD очень высок, поэтому погрешность вносимая в получаемые для аналита результаты в связи с потерями ISTD остается пренебрежимо малой по сравнению с погрешностями из других источников. Специфическое подавление сигнала ISTD, потенциально возможное при выполнении ЖХ-МС анализа и обусловленное совместным элюированием компонентов матрицы, также приводит к завышенной оценке содержания аналита, тогда как относительное усиление сигнала ISTD, характерное для ГХ анализа ввиду присутствия коэкстрактивных веществ, извлекаемых из матрицы, заставляет получать заниженные значения его концентрации. Таким образом, в качестве внутренних стандартов в ГХ анализе должны использоваться соединения, практически не подверженные феномену усиления под влиянием матрицы. В ЖХ-МС анализе выраженность влияния со стороны матрицы зависит от того, содержит ли экстракт продукта специфические компоненты, которые элюируются вместе с ISTD и оказывают воздействие на процесс его ионизации.

В любом из описанных случаев необходим обязательный контроль качества, для того чтобы гарантировать пренебрежимо малый размер погрешности, связанной с применением внутреннего стандарта. Принимаемые для этого меры могут включать в себя использование резервных ISTD и стандартов для контроля качества, которые могут вводиться на других уровнях аналитического процесса (например, добавляться к окончательному экстракту) и могут быть полезны для выявления не связанных с несоответствием объема смещений ситала ISTD. Особенно эффективным для целей контроля качества является наблюдение за интенсивностью сигнала ISTD в каждой пробе в пределах одной последовательности. При обнаружении значительного смещения сигнала выполняют количественное определение с использованием резервного ISTD или без использования ISTD. В последнем случае крайне необходимо обеспечить точную передачу и уравнивание объемов жидкостей для стандартных растворов и для экстракта пробы.

6.2 Расчет концентрации остатков пестицидов без использования стандартных добавок Используемые переменные:

- концентрация внутреннего стандарта в растворе ISTD ClSID м кг/мл - концентрация пестицидов в градуировочной смеси _ой та Cp«i м кг/мл - концентрация внутреннего стандарта в градуировочной смеси cal та ^ISTD м кг/мл - концентрация пестицида в окончательном экстракте ытрю ^oesl м кг/мл - концентрация внутреннего стандарта в окончательном экс м кг/мл тракте °ISTD - масса анализируемой части пробы IT r - объем ISTD, добавляемый к анализируемой части пробы VISTD МЛ - площадь пика пестицида, полученного на градуировочной cal п« як (импульсы) смеси pr*« - площадь пика ISTD, полученного на градуировочной смеси cal irtx ^(STD (импульсы) - площадь пика пестицида, полученного в окончательном экс A™* (импульсы) тракте [»>4 - площадь пика ISTD, полученного в окончательном экстракте sample Asio (импульсы) - отношение площади пиков, полученных в градуировочной смеси PFf*m (безразмерная величина) - отношение площади пиков, полученных в окончательном экстракте рдьатр* (безразмерная величина) - наклон калибровочного графика a* (безразмерная величина) - отклонение калибровочного графика be*. (безразмерная величина)

требует знания приблизительного уровня содержания остатков пестицидов w_H по результатам предварительного анализа.

Для пробы с расчетным уровнем содержания остатков пестицидов, равным w_w = 0,8 мг/кг, (используемая масса пробы Юг) может быть применена схема пипетироваиия, приведенная в таблице 4. Количество аналита в пробе рассчитывают на основе графического представления, как показано на рисунке 1, посредством линейной регрессии.

Примечание - В случае если уровни загрязнения wr отличаются, необходимо применять соответствующим образом скорректированные концентрации стандартного раствора аналита и/или более соразмерные объемы стандартного раствора аналита и растворителя

Таблица 4 - Примерная схема лилстирования при использовании стандартных добавок

Добавки Виала 1 Виала 2 Виала 3 Виала 4 Объем экстракта пробы (V*) 500 мкл (=0.5 г пробы) 500 мкл (=0.5 г пробы) 500 мкл (=0.5 г пробы) 500 мкл (=0.5 г пробы) ISTD Уже содержится Уже содержится Уже содержится Уже содержится Добавляемый объем (l/^**1) соответствующего разведения основного раствора пестицида (например 4 мкг/мл) - 50 мкл 100 мкл 150 мкл _ , ш но. Результирующая масса ) пестицида. добавляемого в каждую виалу 0.2 мкг 0.4 мкг 0.6 мкг Объем растворителя 150 мкл 100 мкл 50 мкл - Окончательный объем 650 мкл 650 мкл 650 мкл 650 мкл

Y- частное площади пика аналита и площади пика ISTD.

X - абсолютное значение добавленной массы аналита    в    мкг.

|xj - абсолютное количество аналита в экстракте пробы (в мкг) перед добавлением стандартного раствора (у = 0);

у - отрезок (с) наклон кривой (ft)'

Рисунок 1 - Схематическое представление внутренней калибровки с использованием метода стандартных добавок

Расчеты выполняются с использованием уравнения (6) и графика регрессии, показанного на рисунке 1.

^{WR =} i*V^*ln,'^M,a    <⁶>

где с - отрезок калибровочного графика рассматриваемого аналита, отсекаемый на оси У;

b - наклон калибровочного графика рассматриваемого аналита (1/мкг);

V - количество ацетонитрила, добавляемое по 5.2.3 (мл);

V# - объем аликвот, использованных для реализации подхода с применением стандартных добавок (мл);

л?₃ - исходная масса пробы (г).

6.4 Надежность метода

В рамках координированных межлабораторных исследований с целью валидации данного метода было проведено несколько экспериментальных работ по изучению извлечения вещества (уровень содержания добавок от 0.01 до 0.25 мг/кг) из соответствующих репрезентативных проб продукции. Обеспечиваемый при этом выход обычно составлял от 70 % до 110 % . а относительное стандартное отклонение для повторных анализов не превышало 10%. Результаты указанных валидационных испытаний представлены в таблице В.1 (приложение В).

В таблице В.2 (приложение В) показаны сводные результаты исследований по определению уровня выхода, самостоятельно выполнявшихся различными лабораториями в рамках процедуры валидации метода и текущего контроля качества.

Уровень пределов обнаружения и определения, получаемых в соответствии с данным методом, напрямую зависит от целого ряда параметров, включая вид рассматриваемых пестицидов и проб, а также чувствительность и селективность, которые обеспечиваются оборудованием в имеющихся условиях. Использование самого современного оборудования в большинстве случаев позволяет успешно проводить анализ пестицидов с уровнем содержания около 0.01 мг/кг (что. как правило, соответствует самому низкому значению максимально допустимого уровня.

7    Подтверждающие испытания

Подтверждение количественных результатов представляет собой анализ еще одной части пробы и выполняется, если результаты первого анализа позволяют предположить недопустимый уровень содержания остатков пестицидов. Более подробная информация о порядке подтверждения принадлежности аналита содержится в указаниях ЕС по контролю качества, которые приведены в (1).

8    Прецизионность

Сведения о межлабораторных сличениях для контроля прецизионности метода в соответствии с положениями ISO 5725-1 и ISO 5725-2 обобщены в приложении В. Значения, полученные по результатам таких сличений, могут быть неприменимы к диапазонам концентрации и матрицам, отличным от указанных в приложении В.

9    Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать, по меньшей мере, следующую информацию:

-    все данные, необходимые для идентификации пробы;

-    ссылку на настоящий стандарт;

-    результаты испытаний и единицы, в которых они выражаются;

-    дату и время отбора пробы (если известны);

-    дату поступления пробы в лабораторию;

-дату проведения испытаний;

-    любые дополнительные замечания, сделанные в ходе испытаний;

-    сведения о выполнении любых операций, не предусмотренных методом либо рассматриваемых как необязательные, которые могли оказать влияние на полученные результаты.

Приложение А

(справочное)

Примеры экспериментальных условий

Подтверждена приемлемость следующих рабочих условий ГХ или ЖХ-МС.

А.1 Система ГХ-МСД

DB 5 MS. 30 м * 0,25 мм * 0,25 мкм, сшитый 5 %-ный фенил-метил-силикон

Гелий, постоянный расход 2 мл/мин

2    мин при температуре 40 °С 30 Х/мин до 220 X

5 Х/мин до 260 X 20 Х/мин до 280 X (15 мин)

280 X

3    мкл (термопрограммируемый инжектор-испаритель (PTV) с режимом продувки растворителя)

0,8 мин при температуре 50 X

720 Х/мин до 300 X. удерживание в течение 5 мин. охлаждение до

280 X, удерживание в течение 10 мин

Расход в отводящем потоке: 20 мл/мин до 0.5 мин

Расход в продувающем потоке: 47,4 мл/мин, начиная с 2 мин

Система экономии газа: 20 мл/мин. начиная с 6 мин

А.2 Система ВЭЖХ 1

поддающихся ЖХ:

Zorbax XDB С18, длина 150 мм, внутренний диаметр 2,1 мм, размер частиц 3.5 мкм

Раствор аммония формиата в воде, с = 5 ммоль/л Раствор аммония формиата в метаноле, с = 5 ммоль/л 40 X 5 мкл

Таблица А.1 - Значение расхода и градиент элюирования

Время, мин Расход, мкл/мин Подвижная фаза Ai. % Подвижная фаза В,, % 0 300 50 50 20 300 0 100 25 300 0 100 26 300 50 50 30 300 50 50

А.З Система ВЭЖХ 2

Для полярных соединений (например, с logKow < 0,5), которые показывают низкое время удержания на колонках с обращенной фазой:

Phenomenex Aqua, длина 150 мм, внутренний диаметр 2 мм, с наполнителем 125 А С18, размер частей 3 мкм Раствор аммония формиата в воде, с = 5 ммоль/л

Раствор аммония формиата в метаноле, с = 5 ммоль/л

40 X

_ГОСУДАРСТВЕННЫЙ    СТАНДАРТ    РЕСПУБЛИКИ    БЕЛАРУСЬ_

ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ Определение остатков пестицидов с применением ГХ-МС и/или ЖХ-МС/МС после экстракции/разделения ацетонитрилом и очистки с применением дисперсионной ТФЭ Метод QuEChERS

ПРАДУКЦЫЯ ХАРЧОВАЯ РАСЛ1ННАГА ПАХОДЖАННЯ Вызначэнне астаткау пестыцыдау з прымяненнем ГХ-МС i/або ЖХ-МС/МС пасля экстракцьй/раздзялення ацэтажтрылам i ачыстм з прымяненнем дысперсшнай ТФЭ Метад QuEChERS

Foods of plant origin Determination of pesticide residues using GC-MS and/or LC-MS/MS following acetonitrile extraction/partitioning and clean-up by dispersive SPE - QuEChERS-

method

Дата введения 2017-09-01

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Применение настоящего стандарта может быть сопряжено с использованием опасных материалов, методов и оборудования. Настоящий стандарт не ставит своей задачей рассмотрение всех проблем безопасности, связанных с его применением. Пользователь стандарта берет на себя ответственность за установление соответствующей практики в части соблюдения правил гигиены и требований техники безопасности, а также за оценку применимости действующих законодательных ограничений до начала использования документа.

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на метод анализа остатков пестицидов в пищевой продукции растительного происхождения, такой как фрукты (в том числе сухофрукты), овощи и крупы, а также в продукции их переработки. Приемлемость рассматриваемого метода была подтверждена в рамках широких совместных исследований, которые проводились на различных видах продукции и классов пестицидов.

2    Принцип

Для экстракции гомогенной пробы используют ацетонитрил. Пробы с содержанием влаги менее 80 % требуют добавления воды перед первоначальной экстракцией, так чтобы общее содержание воды в них соответствовало приблизительно 10 г. После добавления магния сульфата, натрия хлорида и буферных солей лимонной кислоты смесь интенсивно взбалтывают и центрифугируют, добиваясь разделения фаз. Аликвоту органической фазы очищают путем дисперсионной твердофазной экстракции (Д-ТФЭ), применяя сыпучие сорбенты, а также магния сульфат для удаления остатков воды. После очистки с использованием аминосорбентов (например, первично-вторичного аминосорбен-та (primary secondary amin sorbent - PSA) экстракты подкисляют, добавляя небольшое количество муравьиной кислоты, чтобы повысить стабильность некоторых неустойчивых к щелочам пестицидов при хранении экстракта. Конечный экстракт может быть непосредственно использован при выполнении анализа для определения содержания пестицидов средствами газовой и жидкостной хроматографии. Количественное определение может осуществляться с применением внутреннего стандарта, который добавляется к экстракту после первого добавления ацетонитрила. Структура метода кратко представлена блок-схемой в приложении С.

Издание официальное

Вводимый объем    3    мкл. с автоматическим разбавлением 3 мкл мобильной фазы А в процес

се инжектирования

А.4 Система ВЭЖХ 3

Zorbax XDB С18, длина 150 мм. внутренний диаметр 2,1 мм. размер частиц 3,5 мкм

Раствор уксусной кислоты в воде, р = 0,1 мл ледяной уксусной кисло-ты/л

Раствор уксусной кислоты в ацетонитриле, р = 0,1 мл ледяной уксусной кислоты на литр 40 °С 5 мкл

Таблица А.З - Значение расхода и градиент элюирования

Время, мин Расход, мкл/мин Подвижная фаза Аг. % Подвижная фаза Вг. % 0 300 80 20 20 300 0 100 22 300 0 100 22,1 300 80 20 30 300 80 20

А.5 Система ВЭЖХ 4

Для всех соединений, поддающихся ЖХ:

Насос ВЭЖХ    НР1100 Binary Pump (G1312А)

Автоматический пробоотборник НР1100 (G131 ЗА)

Программа инжектора    ввод    5    мкл подвижной фазы А₃

ввод 1 мкл пробы промывка иглы ацетонитрилом ввод 2 мкл подвижной фазы А₃ ввод 1 мкл пробы промывка иглы ацетонитрилом ввод 2 мкл подвижной фазы А₃ ввод 1 мкл пробы промывка иглы ацетонитрилом ввод 2 мкл подвижной фазы А₃ ввод 1 мкл пробы промывка иглы ацетонитрилом ввод 5 мкл подвижной фазы А₃ Колонка    Phenomenex    Aqua 5 р С18 125А, 50 мм * 2 мм

Подвижная фаза Аз (3.29)    Метанол/вода    2    +    8    (V/V)    с    5    ммоль/л    аммония    формиата

3 Реактивы

3.1    Общие положения и требования безопасности

Если не указано иное, используют реактивы с подтвержденной степенью чистоты «чистый для анализа». Принимают все необходимые меры, чтобы не допустить возможного загрязнения воды, растворителей, сорбентов, неорганических кислот и т. д.

Замечание. В настоящем стандарте упоминается ряд торговых наименований продукции и оборудования, доступных в продаже и пригодных для выполнения описанных в стандарте операций. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не дает оснований рассматривать указанные изделия в качестве рекомендованных CEN. Использование аналогичных им изделий допускается, если может быть доказано, что они обеспечивают получение аналогичных результатов.

3.2    Вода, чистая для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

3.3    Ацетонитрил, чистый для ВЭЖХ.

3.4    Метанол, чистый для ВЭЖХ.

3.5    Аммония формиат.

3.6    Магния сульфат, безводный, зернистый, например Fluka No. 63135.

Для удаления фталатов реактив можно выдержать в муфельной печи при температуре 550 °С (например, оставив на ночь).

3.7    Сульфат магния, безводный, тонкомолотый порошок

Для удаления фталатов реактив можно выдержать в муфельной печи при температуре 550 °С (например, оставив на ночь).

3.8    Натрия хлорид

3.9    Динатрия гидро ген цитрат полуторагидрат.

3.10    Тринатрия цитрат дигидрат.

3.11    Натрия гидроксида раствор, концентрация вещества с = 5моль/л. Растворяют 2 г натрия гидроксида приблизительно в 5 мл воды и разбавляют до объема 10 мл.

3.12    Смесь буферных солей для повторной экстракции и разделения

Взвешивают (4,0 ± 0,2) г магния сульфата ангидрида (3.6), (1,00 ±0,05) г натрия хлорида. (1,00 ± 0,05) г тринатрия цитрата дигидрата и (0,50 ± 0,03) г динатрия гидрогенцитрата полуторагид-рата и помещают в чашку (4.11). Эти количества указаны из расчета приблизительно на 10 мл воды, содержащихся в пробе.

Для проб с высоким уровнем кислотности (pH < 3) значение pH. полученное после добавления буферных солей, обычно составляет менее пяти. Чтобы обезопасить от распада соединения, неустойчивые к кислотам, значение pH можно увеличить путем добавления раствора натрия гидроксида (3.11) из расчета 5 моль/л. Для лимона, лайма и смородины добавляют 600 мкл, а для малины 200 мкл раствора натрия гидроксида непосредственно в раствор солей.

Примечание - Рекомендуется заранее приготавливать достаточное количество смеси буферных солей таким образом, чтобы последовательная экстракция могла выполняться быстро и без прерываний. Процесс

приготовления смесей солей значительно упрощается при использовании делителя проб (4.12) Количества

солей, указанные выше, следует применять для частей проб, содержащих приблизительно по 10 г воды

3.13    Раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле, объемная доля <р = 5 мл муравьиной кис-лоты/100 мл.

Разбавляют 0,5 мл муравьиной кислоты (массовая доля w> 95 %) ацетонитрилом (3.3) до объема 10 мл.

3.14    Первично-вторичный аминосорбент

Например, Bondesil-PSA® 40 мкм Varian No. 12213023 ¹⁾.

Допускается использование иных аминосорбентов, однако при этом могут потребоваться дополнительные исследования для подтверждения их эквивалентности, в частности это касается потерь аналита и значения pH в конечных экстрактах.

3.15    Графитированный угольный сорбент (graphitised carbon black sorbent - (GCB), например Supelco Supelclean Envi-Carb® SPE Bulk Packing. No.57210U

¹¹ Bondesil-PSA® - продукция, поставляемая Vanan, Inc (Palo Alto. CA, USA). Envi-Carb - продукция, поставляемая Supelco Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не дает оснований рассматривать указанные изделия в качестве рекомендованных CEN Использование аналогичной продукции допускается, если может быть доказано, что они обеспечивают попучение тех же результатов

Допускается использование иных графитированных угольных сорбентов, однако при этом могут потребоваться дополнительные исследования для подтверждения их эквивалентности, в частности это касается потерь аналита.

3.16    Сорбционная смесь 1, смесь GCB (3.15) и тонкомолотого порошка магния сульфата безводного (3.7), 1 + 59 массовых долей.

Интенсивно смешивают оба компонента до получения визуально однородной смеси.

3.17    Сорбционная смесь 2. смесь GCB (3.15) и тонкомолотого порошка магния сульфата безводного (3.7), 1+19 массовых долей.

Интенсивно смешивают оба компонента до получения визуально однородной смеси.

Примечание - Настоятельно рекомендуется приготавливать сорбционные смеси 1 (3 16) и 2 (3.17) заранее и

хранить их в емкостях с плотно закрывающимися крышками Для очистки экстракта в соответствии с 5.4.3

навеску предварительно приготовленной сорбционной смеси 1 или 2 помещают в центрифужные пробирки (4 4)

3.18    Сорбент С-18 (октадецилсилил-модифицированный силикагель), сыпучий материал, 50 мкм.

3.19    Раствор внутреннего стандарта и стандартный раствор для контроля качества на основе ацетонитрила, р - в диапазоне от 10 до 50 мкг/мл.

В таблице 1 представлен список потенциально допустимых внутренних стандартов (internal standard - ISTDs) и стандартов для контроля качества (quality control - QC). которые могут быть использованы для данного метода. Предлагаемые значения концентрации Cistd. приведенные в списке, указаны для растворов ISTD. добавляемых на первом этапе экстрагирования (5.2). Необходимо при-

cal те

готовить соответствующее разведение такого раствора для использования при приготовлении стандартных растворов. Подробнее см. в 3.22.

Таблица 1 - Потенциально допустимые внутренние стандарты (ISTDs) и стандарты для контроля качества (ОС)

Log Р (коэффициент распределения октанол /вода) Ре ко- гх жх Наименование соединения Атомы хлора мендо-ванная концентрация Cistd [мкг/мл]в> эзд АФД мед ЭИ (♦) мед ХИ(-) мс/мс ЭСИ (♦) мс/мс ЭСИ (-) Потенциально допустимые внутренние стандарты ПХБ 18 5,55 3 50 +++ - ++ +♦+ - - ПХБ 28 5,62 3 50 ++♦ - ++ +++ - - ПХБ 52 6,09 4 50 +++ - ++ +++ - - Трифенилфосфат 4,59 - 20 - +++ +++ - +++ - Т рис-(1,3-дихлори-золропил)-фосфат 3,65 6 50 +++ +++ ++♦ +++ +++ + Трифенилметан 5,37 - 10 - - +++ - - - Бис-нитрофенил-мочевина (никарбазин) 3,76 - 10 - - - - - +♦+ Потенциально допустимые стандарты для контроля качества (могут содержаться в тех же смесях, что и прочие ISTDs. используемые или добавляемые на различных этапах анализа для обнаружения или локализации источников погрешности) ПХБ 138 01 6,83 6 50 +++ - ++ +♦+ - - ПХБ 153 7.75 6 50 +++ - ++ +++ - - Антрацен (или его аналоги nod10)e) 4,45 - 100 - - ++ - - - *’ Примерные значения концентрации растворов ISTD для добавления к испытуемым пробам согласно 5.2, с использованием ацетонитрила в качестве растворителя Ь) Выход ПХБ 138 и 153 падает по мере роста количества липидов в пробе, выход этих двух соединений, пре- вышающий 70 % сигнализирует о том, что при разделении удалось избежать недопустимых потерь даже для наиболее липофильных пестицидов с| Выход антрацена, превышающий 70 %, свидетельствует о том, что при проведении дисперсионной ТФЭ с GCB удалось избежать недопустимых потерь пестицидов с высокой аффинностью к углероду.

3.20    Основной раствор пестицидов

Приготавливают отдельные основные растворы аналитических стандартов со значениями концентрации. достаточными для получения комплексных рабочих растворов пестицидов (3.21). используемых при приготовлении стандартных растворов.

Основные растворы обычно хранят при температуре не выше минус 18 °С. В процессе хранения стабильность основных растворов регулярно контролируют [2]. В некоторых случаях добавление к растворам кислот или щелочей может быть полезно для повышения их стабильности и увеличения допустимого срока хранения. Каходый раз перед отбором аликвоты из такого раствора следят за повторным растворением осадка, который мог в нем образоваться.

3.21    Рабочие растворы пестицидов

Ввиду широкой области применения описываемого метода и в связи с низкой устойчивостью при изменении уровня pH. присущей некоторым пестицидам, для охвата всего рассматриваемого спектра веществ может потребоваться больше одного рабочего раствора, каждый из которых должен содержать один или несколько пестицидов. Их приготавливают путем смешивания определенных объемов соответствующих основных растворов пестицидов (3.20) и разбавления их в нужной пропорции ацетонитрилом. Концентрация пестицидов в этих растворах должна быть достаточной для приготовления соответствующих стандартов на основе матрицы (см. 3.22.2) при умеренном разбавлении экстракта холостой пробы (например, менее 20 %).

Рабочие растворы пестицидов обычно хранят при температуре не выше минус 18 °С. В процессе хранения стабильность пестицидов, содержащихся в данных растворах, регулярно контролируют (2). В некоторых случаях добавление к растворам кислот или щелочей может быть полезно для повышения их стабильности и увеличения допустимого срока хранения.

3.22    Стандартные растворы (градуировочные смеси)

3.22.1    Стандарты, приготовленные на чистом растворителе

Стандарты на чистом растворителе приготавливают путем смешивания известных объемов рабочих растворов (О- ^ ³²¹) ^и Р^аств°Р^а внутреннего стандарта ISTD (1^™\ см. 3.19) и добавления ацетонитрила до достижения нужного обьема.

Объем применяемого раствора ISTD (V^_T™*) зависит от обьема приготавливаемого стандартного раствора ^m,x) и должен быть таким, чтобы гарантировать концентрацию ISTD, близкую к достигаемой в испытуемых растворах пробы (5.3, 5.4).

Пример - Если приготавливается 1 мл стандарта с растворителем, то объем добавляемого раствора ISTD должен содержать количество ISTD (т^С*™‘ =    *    V^™),    в 10раз меньшее по массе,

чем количество ISTD, добавляемое к анализируемым частям пробы в 5.2.3, еде для экстракции используется 10 мл ацетонитрила. Таким образом, этого должно быть достаточно для разбавления концентрированного раствора внутреннего стандарта (в данном случае С_вго = 0,1 » Свто)- Впоследствии тот жо самый пипоточный объем может применяться для введения внутренних стандартов в пробы при использовании метода добавок, а также для приготовления стандартных растворов. В таблице 2 показаны примерные значения массы ISTD, добавляемого к анализируемым частям пробы (5.2.3) и стандартным растворам (3.22).

Подготовка множественных стандартных растворов, охватывающих широкий диапазон концентраций, позволяет построить соответствующую калибровочную кривую (см. 6.2).

Примечание - Концентрация пестицида 1 мкг/мл коррелирует с уровнем остаточного загрязнения 1 мг/кг при

исследовании пробы массой 10 г (например, проб с содержанием воды >30 %) или 2 мг/кг при использовании пробы массой 5 г (например, круп).

3.22.2    Стандарты, приготовленные на основе матрицы

Стандарты на матрице приготавливают тем же способом, что и стандарты на растворителе, однако вместо чистого ацетонитрила используют экстракты холостых проб (получаемых, как описано в 5.1 -5.4, но без добавления ISTD). Для уменьшения погрешностей, обусловленных влиянием матрицы в процессе хроматографического исследования, лучше всего выбирать для анализа сходную по природе продукцию (например, яблоки для проб яблок, морковь для проб моркови и т. п ). Если степень разбавления экстракта холостой пробы после добавления рабочих растворов пестицидов превышает 20 %, может потребоваться корректировка его объема во избежание возникновения погрешностей, связанных с неодинаковым эффектом усиления под влиянием матрицы для экстракта пробы и стандарта, приготовленного на матрице.

Стабильность пестицидов в стандартах, приготовленных на матрице, может быть ниже, чем в стандартах, приготовленных на чистом ацетонитриле, и нуждается в более тщательной проверке.

Таблица 2- Соотношение массы ISTO, добавляемых к анализируемым частям пробы и к стандартным растворам (градуировочным смесям)

Обьем стандартного раствора. miSTO ^ISTD * MSTO 1 10 2 5 5 2 10 1 Примечание - Значения, приведенные в настоящей таблице, даны из расчета на обьем экстракта пробы, приблизительно равный 10 мл (например, после добавления 10 мл ацетонитрила, как описано в 5 2 3) Холостая проба, служащая для приготовления стандарта, приготовленного на матрице, должна быть экстрагирована тем же способом, что и анализируемая проба

3.23    Холодная вода (<4 °С).

3.24    Сухой лед.

3.25    Подвижная фаза А,: раствор аммония формиата в воде, с = 5 ммоль/л.

3.26    Подвижная фаза В,: раствор аммония формиата в метаноле, с = 5 ммоль/л.

3.27    Подвижная фаза А₂: раствор уксусной кислоты в воде, <р = 0.1 мл ледяной уксусной кислоты/л.

3.28    Подвижная фаза В₂: раствор уксусной кислоты в воде, ф = 0.1 мл ледяной уксусной кислоты/л.

3.29    Подвижная фаза Aj: метанол/вода 2 + 8 (I/IV) с 5 ммоль/л аммония формиата.

3.30    Подвижная фаза В₃: метанол/вода 9 + 1 (VIV) с 5 ммоль/л аммония дюрмиата.

4 Оборудование

Обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее:

4.1    Оборудование для подготовки образцов, например «Stephan UM 5 universal».

4.2    Высокоскоростное диспергирующее устройство

Диаметр диспергирующих элементов должен соответствовать размеру горлышек используемых центрифужных пробирок (4.4).

4.3    Автоматические пипетки, приспособленные для дозирования объемов от 10 до 100 мкл, от 200 до 1000 мкл и от 1 до 10 мл.

Примечание - В качестве альтернативы вместо последних перечисленных могут использоваться градуированные стеклянные пипетки вместимостью 10 мл

4.4    Центрифужные пробирки с завинчивающимися крышками. 50 мл.

Пример

a)    центрифужные пробирки вместимостью 50 мл из политетрафлуорэтилена с завинчивающимися крышками или

b)    одноразовые полипропиленовые центрифужные пробирки вместимостью 50 мл с завинчивающимися крышками.

4.5    Полипропиленовые центрифужные пробирки однократного применения с завинчивающимися крышками, 10 мл или 12 мл.

4.6    Дозатор растворителя для дозирования ацетонитрила порциями по 10 мл. применяется согласно 5.2.3.

4.7    Центрифуги, приспособленные для работы с центрифужными пробирками, предусмотренными методикой (см. 4 4 и 4.5). и обеспечивающие ускорение не менее 3000 д.

4.8    Воронка для сыпучих веществ, соответствующая размеру горлышек центрифужных пробирок.

4.9    Инжекционные виалы, 1.5 мл. пригодные для использования с автоматическим пробоотборником для ГХ и ЖХ, при необходимости - с микровставками.

4.10    Стеклянные виалы с завинчивающимися крышками, например 20 мл. для хранения излишков конечного экстракта, если требуется.

4.11    Пластиковые чашки (складывающиеся в стопку). 25 мл. для хранения порций смеси буферных солей (3.12).

4.12    Дозатор проб, для автоматического дозирования солей и сорбентов на порции

Например, высокоточные системы порционирования Retsch/Haan, РТ 100. или Fritsch/kJar-Oberstein, Laborette 27. или Burkle/LOnrach. Repro^2>. Их применение не является обязательным, однако в случаях, когда приходится иметь дело с большим количеством проб, рекомендуется прибегать к их использованию. Примечание - Первые две из перечисленных систем больше подходят для деления на порции смеси буферных солей (3.12), тогда как BUrkle Repro предназначена для работы с малыми количествами твердых веществ и гораздо лучше приспособлена для порционирования смеси PSA (3 14)/магния сульфата (3 6). востребованной для нужд «дисперсионной ТФЭ» (5 4 2). Полипропиленовые пробирки вместимостью 10 мл. выпускаемые Simport Canada. 17 * 84 мм. арт № Т550-ЮАТ ⁷⁵ (4 5). идеально подходят для использования вместе с Burkle Repro

4.13    Вибрационное устройство, например Vortex (применяется при анализе выхода веществ).

4.14    Система ЖХ-МС/МС, оборудованная устройством электроспрей ионизации (ЭСИ) (см. приложение А).

4.15    Система ГХ-МС. оборудованная соответствующими детекторами, например МС. МС/МС, времяпролетным детектором (TOF), и термопрограммируемым инжектором-испарителем с режимом продувки растворителя (см. описание оборудования для ГХ-МС в приложении А).

5 Процедура

5.1    Подготовка и хранение проб

5.1.1    Общие требования

Необходимо убедиться в том, что применяемый порядок обработки и хранения проб не оказывает существенного влияния на остаточные количества веществ, которые содержатся в испытуемой пробе (иногда ее также называют «аналитической пробой»). Кроме того, при обработке испытуемой пробы необходимо следить за тем. чтобы она была достаточно однородной, что должно гарантировать приемлемый уровень изменчивости между ее частями. При наличии сомнений в том, что отдельно взятая исследуемая часть аналитической пробы в достаточной мере представляет эту пробу в целом, анализ следует выполнять на других, возможно более крупных, частях пробы, чтобы обеспечить наилучшее приближение к истинному значению. Высокая степень измельчения пробы должна способствовать более полной количественной экстракции анализируемых остатков.

5.1.2    Лабораторная проба

Анализу не подлежат лабораторные пробы, которые подверглись полному или чрезмерно сильному разложению или порче. По возможности лабораторные пробы следует обрабатывать непосредственно после поступления и. во всяком случае, до того, как в них произойдут какие-либо значительные физические или химические изменения. Если лабораторная проба не может быть своевременно обработана, ее следует хранить в надлежащих условиях, позволяющих сохранить ее свежей и избежать порчи. Как правило, срок хранения необработанных лабораторных проб не превышает трех дней с момента поступления. Пробы, подвергавшейся сушке или иному подобному воздействию, должны быть обработаны в срок, не превышающий их заявленный срок годности.

5.1.3    Частично приготовленные испытуемые пробы

Для получения частично приготовленной испытуемой пробы берут только ту часть лабораторной пробы, которая наиболее подвержена загрязнению. Другие части растений не удаляют.

Сокращение лабораторной пробы должно выполняться таким образом, чтобы получить ее репрезентативные части (например, путем деления на четыре доли и выбора противоположных четвертей). При работе с пробами продукции, состоящими из небольших одиночных элементов (например, мелких плодов, таких как ягоды, бобовые, злаки), перед взятием навески частично приготовленной испытуемой пробы ее тщательно перемешивают. Если же проба составлена из крупных элементов, то для анализа отбирают клинообразные фрагменты (например, арбуза) или поперечные срезы (например, огурца), включающие часть кожицы (наружной поверхности), от каждого из таких элементов (2).

⁷¹ Высокоточные дозаторы проб РТ 100. Laborette 27. Repro и Т550-10АТ являются примерами серийно выпускаемых устройств, подходящих для выполнения таких операций Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не дает оснований рассматривать указанные изделия в качестве рекомендованных CEN

5.1.4    Испытуемая проба

Каждая частично приготовленная проба должна быть полностью очищена от предметов, которые могут затруднить процесс гомогенизации. Так, в случае с косточковыми плодами из них удаляют косточки. Изъятые из пробы части растений отмечают в специальном списке. Следят за тем, чтобы не допустить потерь сока или мякоти. Полученный материал рассматривают как испытуемую пробу. Расчет содержания остатков пестицидов выполняют исходя из первоначальной массы испытуемой пробы (включая косточки).

Если испытуемая проба остается недостаточно однородной или качество экстрагирования остатков пестицидов может существенно пострадать от присутствия в пробе крупных частиц, проводят интенсивное измельчение пробы, используя для этого соответствующие средства. При обычной температуре окружающей среды такая операция возможна, если она не стимулирует отделение значительного количества мякоти и сока или интенсивное разрушение исследуемых пестицидов. Измельчение проб, находящихся в замороженном состоянии, существенно уменьшает потери химически нестабильных пестицидов и обычно позволяет достигнуть минимального размера частиц и максимального уровня гомогенности. Если нарезать образцы крупными дольками (например, 3«3см) при помощи ножа и поместить их в морозильную камеру (например, на ночь при температуре минус 18 *С). это облегчит их последующую гомогенизацию. Ускорить и усовершенствовать обработку проб помогает также криогенный размол (с применением сухого льда или жидкого азота), при котором значение температуры не поднимается выше 0 °С. Что касается овощей и фруктов, криогенный размол представляется особенно эффективным при гомогенизации продукции с прочной кожицей (например, томатов и винограда) по сравнению с перемалыванием их при обычной температуре окружающей среды. Если принимать во внимание тот факт, что пестициды несистемного действия преимущественно скапливаются на кожице плодов, криогенный размол существенно снижает изменчивость результатов для отдельных частей пробы. При обработке испытуемых проб в условиях низких температур избегают конденсации влаги, вызванной повышенной влажностью. Остаточным количествам диоксида углерода позволяют испариться, так чтобы их вклад в вес пробы был пренебрежимо малым.

5.1.5    Анализируемая часть пробы

Из измельченной испытуемой пробы отбирают отдельные части, размер каждой из которых должен быть достаточным для однократного выполнения анализа. Эти части пробы подлежат немедленному исследованию. Если провести анализ на месте не представляется возможным, испытуемую пробу или отобранные ее части замораживают до того времени, как они снова будут востребованы. В случаях, когда отдельные части отбираются из испытуемой пробы, хранившейся в замороженном виде, эту пробу перед делением на части снова перемешивают, чтобы восстановить ее гомогенность.

5.1.6    Гомогенизация сушеных фруктов и продукции с аналогичными характеристиками (содержание воды менее 30 %)

К 500 г сушеных фруктов добавляют 850 г холодной воды (3.23) и гомогенизируют полученную смесь (по возможности с добавлением сухого льда).

5.2 Первый этап экстрагирования

5.2.1    Взвешивание

Помещают репрезентативную анализируемую часть (т_а) измельченной гомогенной пробы в центрифужную пробирку вместимостью 50 мл (4.4). При работе с овощами и фруктами в центрифужную пробирку помещают навеску (10 ±0.1) г (т^ пробы. Для сушеных фруктов, гомогенизированных как описано в 5.1.6, используют навеску 13,5 г, что соответствует 5 г (т_а) пробы. Для проб с низким содержанием влаги (злаков и меда) используют навеску (5 ± 0,05) г (т^ гомогенизированной пробы. Для ферментированной продукции и сильноэкстрагируемых специй берут навеску (2 ± 0,03) г (mj пробы.

5.2.2    Добавление воды

К пробам с содержанием воды ниже 80 % добавляют такое количество холодной воды (3.23), чтобы общее содержание воды в пробирке составляло приблизительно Юг. Сведения о типичном содержании воды в разной продукции и о количестве воды, добавляемом к соответствующим анализируемым частям пробы см. в таблице 3.

Примечание - К гомогенизированной продукции, полученной, как описано в 5.1.6, воду не добавляют

5.2.3    Добавление растворителя и ISTD

Добавляют 10 мл ацетонитрила и определенное количество раствора ISTD    например

100 мкл), содержащее одно или несколько соединений, перечисленных в таблице 1. с заданными примерными значениями концентрации (Cistd)-

5.2.4    Экстрагирование

Закрывают пробирку и энергично встряхивают в течение 1 мин. Если степень измельчения пробы недостаточна или остатки пестицидов недостаточно эффективно экстрагируются из матрицы, время экстракции может быть увеличено (например, до 20 мин с использованием механического шейкера) либо может применяться высокоскоростной диспергатор (например. Ultra-Turrax). Рабочий элемент диспергатора погружают в смесь пробы с ацетонитрилом; измельчение продолжается в течение от 2 до 5 мин на высокой скорости. При использовании любого из упомянутых способов необходимо удостовериться. что это не приводит к значительному разрушению исследуемых пестицидов. Поскольку добавление раствора ISTD уже выполнялось, ополаскивать рабочий элемент диспергатора не требуется. Тем не менее, он подлежит тщательной чистке перед повторным применением на другой пробе во избежание перекрестного загрязнения.

Необходимо следить за тем. чтобы в диспергаторе использовались рабочие элементы, легко проходящие через горлышки центрифужных пробирок (4.4).

Пробы экстрагируют в замороженном состоянии или в процессе оттаивания (за исключением сухих проб с содержанием воды менее 20%). Если пробы экстрагируют при обычной температуре окружающей среды, необходимо позаботиться о том. чтобы при экстрагировании не происходило значительного разрушения исследуемых пестицидов.

Таблица 3 - Содержание воды в некоторых видах пищевой продукции и количество добавляемой к ним воды

Г руппа продукции Вид продукции Типичное содержание воды, г/100 г Количество добавляемой воды из расчета на 10 г анализируемой части пробы, г Количество добавляемой воды из расчета на 5 г анализируемой части пробы, г Примечания _Фрукты Цитрусовые Цитрусовые соки 90 Грейпфрут 90 К смеси буферных солей, описанной в 3.12. добавляют 600 мкл раствора NaOH в концентра-ции 5 моль/л (применяется только для лимона/лайма). При необходимости дополнительно вводят стадию вымораживания для удаления парафинов; см. 5.4.1 (применяется для всех цитрусовых) Лимон/ лайм 85 Апельсин 85 Цедра апельсиновая 75 2.5 Мандарин 90 Семечковые Яблоко 85 Яблоко сушеное 30 8.5 (см. 5.1.6) Яблочное пюре 80 Яблочный сок 90 Груша 85 Айва 85 Косточковые Абрикос 85 Абрикос сушеный 30 8.5 (см. 5.1.6)