Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пиридата и его метаболита пиридафола в зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Методические указания МУК 4.1.3360—16

Издание официальное

Москва • 2017

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пиридата и его метаболита пиридафола в зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спсктрометрическим детектированием

Методические указания МУК 4.1.3360—16

7.3.2.2.    Раствор № 2 с концентрацией 1,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,1 см* основного раствора пиридафола и доводят до метки ацетонитрилом.

7.3.2.3.    Раствор Ms 3 с концентрацией 100 нг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1,0 см³ раствора пиридата № 1 и 1,0 см³ раствора пиридафола № 2, доводят объем до метки раствором контрольной пробы.

7.3.2.4.    Раствор Ms 4 с концентрацией 50 нг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,5 см³ раствора пиридата № 1 и 0,5 см³ раствора пиридафола № 2, доводят объем до метки раствором контрольной пробы.

7.3.2.5.    Раствор Ms 5 с концентрацией 20 нг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,2 см³ раствора пиридата № 1 и 0,2 см³ раствора пиридафола № 2, доводят объем до метки раствором контрольной пробы.

7.3.2.6.    Раствор Ms б с концентрацией 10 нг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1,0см³ раствора №3 и доводят объем до метки раствором контрольной пробы.

7.3.2.7.    Раствор Ms 7 с концентрацией 5 нг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,5 см³ раствора №3 и доводят объем до метки раствором контрольной пробы.

Основные растворы можно хранить в холодильнике при температуре 0—4°С в течение 3 месяцев, градуировочные растворы — в течение 1 дня.

При изучении полноты определения пиридата и пиридафола в матрицах используют соответствующие растворы в ацетонитриле.

7.4. Построение градуировочного графика

Для каждого из градуировочных растворов регистрируют хроматограммы в условиях, указанных в п. 9.2, и определяют абсолютное время удерживания и площадь пика пиридата и пиридафола (в уел. ед.), соответствующего MRM (379—*207) и MRM (207—>68), соответственно. Одновременно в режиме автоматической обработки данных определяют соотношение площадей пиков для пиридата, соответствующих MRM (379—>351) и MRM (379—И 04) (S351/S104); для пиридафола - MRM (207—126) и MRM (207—104) (S,₂₆/S,o4).

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация пиридата или пиридафола в растворе) в хроматограф вводят по 1 мм³ градуировочных растворов (не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых

МУК 4.1.3360—16

концентраций) в условиях, указанных в п. 9.2. Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости площади пика от концентрации в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии для каждого из веществ:

С = KS, где

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

IC-CJ

100 <А_,, где

С - аттестованное значение массовой концентрации пиридата или пиридафола в градуировочном растворе,

С_к - результат контрольного измерения массовой концентрации пиридата или пиридафола в градуировочном растворе,

Ко,тр - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. {.Контр. = 10 % при Р = 0,95).

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 13634-90 «Кукуруза. Требования при заготовках и поставках» и с ГОСТ 8808-2000 «Масло кукурузное. ТУ». Зерно кукурузы хранят в полотняных мешочках при комнатной температуре. Перед анализом зерно доводят до стандартной влажности и измельчают. Для исследовательских целей допускается получение масла в лаборатории из проб измельченного зерна методом экстракции органическим растворителем при температуре не выше 40 °С. Пробы масла хранят при 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре не более 30 суток.

11

9. Проведение определения

9.7. Определение пиридата и пиридафола в зерне и масле кукурузы Пробу измельченного зерна или масла (10 г) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку объемом 50 см³, добавляют 10 см³ воды, 10 см³ раствора для экстракции (п. 7.2.1) и содержимое влагонепроницаемого пакета из «Набора для пробоподготовки для фруктов и овощей с маслом и воском». Пробирку плотно закрывают, помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 5 мин при скорости 4 000 об./мин. Отбирают 5 см³ верхнего ацетонитрильного слоя и переносят во вторую полипропиленовую центрифужную пробирку из набора вместимостью 15 см³, содержащую сорбент. Пробирку плотно закрывают, помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, центрифугируют при скорости 4 000 об./мин в течение 5 мин. В виалу для хроматографирования отбирают 0,2 см³, добавляют 0,8 см³ фазы А и 1 мм³ вводят в жидкостной хроматограф.

9.2. Условия измерении пиридата и пиридафола

9.2.1. Хроматографические условия измерений Хромато-масс-спектрометр, состоящий из высокоэффективного жидкостного хроматографа и масс-спектрометра с тройным квадруполем.

Аналитическая колонка, заполненная сорбентом С18 (100 х 2,1) мм, 2,2 мкм. Температура колонки (45 ± 1) °С. Скорость потока элюента 0,3 см³/мин. Объем вводимой пробы 1 мм³. Время удерживания пиридата - (5,1 ± 0,1) мин; пиридафола - (1,3 ± 0,1) мин.

Режим элюирования: градиентный:

Время, мин	% А	%В
0	50	50
1	50	50
2	95	5
6	95	5
6,1	50	50
7	50	50

12

МУК 4.1.3360—16

9.2.2. Масс-спектрометрические условия измерений

Тип ионного источника HESI (электроспрей) Режим сканирования Мониторинг заданных реакций (MRM) лиридат пиридафол 379—*207 (количественны Й) 379—*351 (подтверждающий) 379—*104 (подтверждающий) 207—*68 (количественный) 207-* 126 (подтверждающий) 207—*104 (подтверждающий) Параметры работы ионного источника: Напряжение на источнике, V 4500, положительная полярность Температура конуса, °С 250 Скорость потока газа из конуса, дм3/мин 20 Скорость потока распыляющего газа, дм3/мин 40 Температура осушающего газа, °С 250 Скорость потока осушающего газа, дм3/мин 40

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание пиридата или его метаболита пиридафола в пробе (Х_у мг/кг) вычисляют по формуле:

X=S_xK• ^,где

S_x - площадь пика определяемого вещества на хроматограмме испытуемого образца, мм² (AU);

К - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;

V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см³ (1 см³);

Р - навеска анализируемого образца, г (аликвота, равная 0,2 г).

Содержание пиридата в пробах (Х_{пириоат}) вычисляют как сумму концентраций пиридата и его метаболита пиридафола в пересчете на исходное действующее вещество:

Хпириоат ~ Спиридат Спириоафол' 1*83, ГДе

13

Спирит - содержание пиридата в пробе, мг/кг;

Стриоафом ~ содержание пиридафола в пробе, мг/кг.

Содержание остаточных количеств определяемых веществ в образце вычисляют как среднее минимум из трех параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартные растворы с концентрацией 100 нг/см³, разбавляют контрольной пробой, приготовленной по п. 9.1.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X_h Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (г = 2,8ст_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± Д) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где

6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, то результат анализа представляют в виде: «содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,025 мг/кг, где 0,025 мг/кг - предел обнаружения пиридата в масле).

МУК 4.1.3360—16

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки Сэ должна удовлетворять условию:

^с« ^ A,jr + Л,.*-. где

±A,jp (±А_яХ.) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг; при этом:

Д„ = ± 0,84 А, где Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

где

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К_к=Х'-Х-С* где

X', X, С₀ - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

*=К*-⁺<*    о)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля {К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

Iff.!**.    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

15

ББК 51.23 0-62

0-62 Определение остаточных количеств пиридата и его метаболита пиридафола в зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометр ическим детектированием: Методические указания.—

М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2017.—16 с.

ISBN 978—5—7508—1531—9

1.    Разработаны сотрудниками ФГБНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» (В. И. Должснко, А. С. Комарова, В. В. Чсловечкова) и ООО «Инновационный центр защиты растений» (И. А. Цибульская,

Т. Д. Черменская).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 20 мая 2016 г. № 1).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 1 июля 2016 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

Ответственный за выпуск Н. В. Митрохина Редактор

Компьютерная верстка Е. В. Ломановой

Подписано в печать 31.01.17 Формат 60x88/16    Псч. л. 1,0

Тираж 125 экз.    Заказ 5

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделением издательского обеспечения отдела научно-методического обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Реализация печатных изданий, тел./факс: 8 (495) 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2017 ©Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2017

МУК 4.1.3360—16

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

1 июля 2016 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пиридага и его метаболита пиридафола в зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Методические указания МУК 4.1.3360—16

Свидетельство о метрологической аттестации №01.5.04.225/ 01.00043/2015.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения остаточных количеств пиридата и его метаболита пиридафола в зерне и масле кукурузы в диапазоне концентраций 0,025—0,25 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Пиридат

0-3-фенил-6-хлорпиридазин-4-ил 5-октил тиокарбонат (ИЮПАК)

S—СН₂—СН_а—СН₂—СН₂—СН₂—СН₂—CHj—СН₃

C₁₉H₂3C1N₂0₂S Молекулярная масса: 378,9.

3

Химически чистое вещество; представляет собой бесцветные кристаллы.

Температура плавления: 27 °С.

Давление пара при 25 °С: 0,000998 МПа.

Растворимость в воде: 1,5 мг/дм³ (при 20 °С).

Хорошо растворим в большинстве органических растворителей.

Стабильность к гидролизу при 20 °С: DT₅o = 89 часов (pH 5), 59 часов (pH 7), 6 часов (pH 9).

Период полураспада в почве: DT₅₀ = < 2,8 дня.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность LD₅₀ для млекопитающих и для крыс > 10 000 мг/кг. Оказывает раздражающее действие на кожу, не раздражает слизистую глаз.

Область применения препарата: селективный контактный гербицид для борьбы с широколиственными сорняками и однолетними травами, адсорбируется листьями.

Механизм действия-, ингибирование фотосинтеза.

Основным метаболитом пиридата является пиридафол.

Пиридафол

3-фенил-6-хлорпирпидазин-4-ол (ИЮПАК).

Основной метаболит пиридата в

C₁₀H7ClN₂O

Молекулярная масса: 206,6.

Химически чистое вещество; представляет собой бесцветные кристаллы.

Период полураспада в почве: DT*) = 15—35 дней.

В России для пиридата установлены следующие гигиенические нормативы: МДУ в зерне кукурузы 0,05 мг/кг.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р - 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 и 2, для соответствующих диапазонов концентраций.

4

МУК 4.1.3360—16

Метрологические параметры для пиридата

Таблица 1

Анализи руемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности* (границы относительной погрешности (Р = 0,95), ±5, % Показатель повторяемости (средне-квадра-тическос отклонение повторяемости), <тп % Показатель воспроизводимости (средне-квадратическое отклонение воспроизводимости), <*R> % Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), г, % Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), Я, % (Я = 0,95) Зерно кукурузы 0,025— 0,25 22 6 10 17 28 Масло кукурузы 0,025— 0,25 22 6 10 17 28 * Соответствует расширенной неопределенности U^h при коэф( та*=2 жциенте охва-

Метрологические параметры для пиридафола

Таблица 2

Анализи руемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности* (границы относительной погрешности (Р - 0,95), ±6, % Показатель повторяемости (средне-квадратическое отклонение повторяемости), аг, % Показатель воспроизводимости (средне-квадратическое отклонение воспроизводимости), aR, % Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), г,% Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), Я, % (Я = 0,95) Зерно кукурузы 0,025— 0,25 23 8 12 22 34 Масло кукурузы 0,025— 0,25 23 8 12 22 34 * Соответствует расширенной неопределенности £/<*** при коэф< та к = 2 шциенте охва-

5

Таблица 3 Полнота извлечения пирида га, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, л * 20 предел количественного определения, мг/кг диапазон определяемых концентраций, мг/кг полнота извлечения вещества, % стандартное отклонение, % доверительный интервал среднего результата, ±% Зерно кукурузы 0,025 0,025—0,25 86,6 5,97 2,61 Масло кукурузы 0,025 0,025—0,25 89,5 5,50 2,41

Таблица 4 Полнота извлечения пиридафола, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р ~ 0,95, л = 20 предел количественного определения, мг/кг диапазон определяемых концентраций, мг/кг полнота извлечения вещества, % стандартное отклонение, % доверительный интервал среднего результата, ±% Зерно кукурузы 0,025 0,025—0,25 83,5 4,58 2,00 Масло кукурузы 0,025 0,025—0,25 81,8 3,56 1,56

2. Метод измерений

Определение пиридата и пиридафола осуществляется методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием масс-сиектрометрического детектора после их извлечения из образцов ацетонитрилом в присутствии нитратного буфера, насыщенного сульфатом магния и обеспечивающего разделение водной и органической фаз; проводится очистка ацетонитрильного экстракта с помощью дисперсионной твердофазной экстракции (ТФЭ) при одновременном удалении воды безводным сульфатом магния.

Идентификация проводится по времени удерживания, количественное определение — методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа с масс-детектированием.

МУК 4.1.3360—16

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений Хромато-масс-спектрометр, состоящий из:

-    высокоэффективного жидкостного хроматографа;

-    масс-спектрометра с тройным квадруполем Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допускаемой погрешности

0,1 мг    ГОСТ Р 53228-08

Весы технические с пределом взвешивания до

150 г и пределом допускаемой погрешности 0,1 г ГОСТ Р 53228-08

Колбы мерные на 10, 50, 100,1 000 см³    ГОСТ 23932-90

Микродозаторы одноканальные переменного

объема от 100 до 1 000 мм³ и от 1 до 5 см³

Цилиндры мерные на 50 и 100 см³    ГОСТ 23932-90

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил, осч    ТУ 2634-002-54260861—13

Ацетонитрил для масс-спектрометрии

Вода для лабораторного анализа (бидистилли-

рованная, деионизованная)    ГОСТ Р 52501-05

Метиловый спирт (метанол), хч    ГОСТ 6995-77

Набор для пробоподготовки (1 пробирка - 4 г

MgS0₄ + 1 г NaCl + 1 г цитрата натрия + 0,5 г

динатрия цитрата шестиводного; 2 пробирка -

150 мг сорбента для ТФЭ (смесь первичных и

вторичных аминов) + 150 мг С18ЕС (сорбент

С18 с эндкэппингом) + 900 мг MgS0₄)

Пиридат, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99,4 %

Пиридафол, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99 %

Кислота муравьиная для масс-спектрометрии

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

7

3.3. Вспомогательные устройства и материалы Аналитическая колонка, заполненная сорбентом С18 (100 х 2,1) мм, 2,2 мкм Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 и 15 см³ Устройство перемешивающее (50—-200 колебаний в минуту)    ТУ 4389-007-44330709—11

Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 000 об./мин

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требовании безопасности

4.1.    Выполняя измерения, необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07.

Организация обучения работников безопасности труда должна соответствовать ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

МУК 4.1.3360—16

- измерения на жидкостном хромато!рафе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7.1. Кондиционирование колонки Перед началом анализа хроматографическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1—0,2 см³/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Приготовление растворов

7.2.1.    Раствор для экстракции - 1 % раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле: 10 см³ муравьиной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм³ и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.2.2.    Фаза А - 0,1 % раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле: 1 см³ муравьиной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм³ и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.2.3.    Фаза В - 0,1 % раствор муравьиной кислоты в воде: 1 см³ муравьиной кислоты помещают в мерную колбу объемом I дм³ и доводят объем до метки бидистиллированной водой.

7.3. Приготовление основных и градуировочных растворов

7.3.1. Приготовление основных растворов пиридата и пиридафола

7.3.1.1.    Основной раствор пиридата с концентрацией 1,0мг/слг: точную навеску пиридата (50 ± 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.

7.3.1.2.    Основной раствор пиридафола с концентрацией 1,0 мг/см³: точную навеску пиридафола (50 ± 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, растворяют в метаноле и доводят объем до метки тем же растворителем.

7.3.2. Приготовление градуировочных растворов пиридата и пиридафола

Градуировочные растворы с концентрациями 5, 10, 20, 50, 100 нг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя в качестве растворителя контрольную пробу, приготовленную по п. 9.1.

7.3.2.1. Раствор № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,1 см³ основного раствора пиридата и доводят до метки ацетонитрилом.

9