МУК 4.1.3026-12
Измерение концентраций прогексадиона-кальция в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Федеральная сдужЛа по напору в сфере защиты прав потребите, и G.iaioiio.iviiiu недопека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций прогексадиона-кальция в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3026—12

ББК 51.21 ИЗ 7

И37 Измерение концентраций прогсксадиона-кальция в воздухе рабочей юны и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013.—16 с.

1.    Разработаны ФБУН «Федеральный центр гигиены им. Ф. Ф. ')рис-мана» Роспотребнадзора (Т. В. Юдина. 11. Е. Федорова, В. 11. Волкова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 3 июля 2012 г.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

Редактор Л. С. Кучурова Технический редактор Е. В. Ломанова

Подписано в печать 21.02.13 Формат 60x88/16    Печ. л. 1.0

Тираж 200 экз.    Заказ    16

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994. Москва. Вадковский пер., д. 18. стр. 5. 7

Ори шпал- макет подготовлен к почат и тиражирован отделом издательскою обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105. Москва. Варшавское иг. 19а Отделение реализации, тел. факс (495)952-50-89

© Роспотребнадзор, 2013

■<: Федора. 1Ы1ЫЙ цен тр пн иены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013

7.10.2. Подготовка салфеток для проведения смыва

Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 х 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5 %-м раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод. 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

8. Отбор и хранение проб воздуха

Отбор проб осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» и Р 2.2.2006—05 (прилож. 9. обязательное) «Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны», п. 2 «Контроль соответствия максимальным ПДК».

Воздух с объемным расходом 2—5 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр «синяя лента», помещенный в фильтродсржатсль.

Для измерения концентрации вещества на уровне предела обнаружения (0.05 мг/м³) необходимо отобрать 10 дм³ воздуха.

Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре 4—5 °С - 30 дней.

9. Условия проведения смыва

Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб. лицо. шея. грудь, предплечье, голень, кисти рук. включая межпальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (нс менее 200 см²). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 см³ в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в морозильной камере при температу ре -18 °С -60 дней.

10. Выполнение измерений

10.1. Воздух рабочей зоны

Экспонированный фильтр переносят в химический стакан вместимостью 150 см³, заливают 10 см³ смеси 1 %-я уксусная кислота-ацсто-

нитрил (40 : 60. по объему), помещают на встряхиватель на 10 мин. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями этой же смеси объемом 10 см³, выдерживая на встряхивателе по 10 мин.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани нс выше 40 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 5 см подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2). тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.8.1.

10.2. Смывы с кожных покровов

Проб) смыва сливают (через воронку) в колбу дтя упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы дтя упаривания, тщательно отжимают и промывают смесью этанол-0,01 М соляная кислота (60 : 40. про объему) дважды порциями по 15 см³, предварительно ополаскивая смесью емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани нс выше 40 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.8.1.

Проб) вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика прогексадиона. с помощью градуировочного графика определяют концентрацию прогексадиона-кальцня в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (нс более чем в 50 раз).

11. Обработка результатов анализа

11.1. Воздух рабочей юны

Концентрацию вещества в пробе воздуха (.Y). мг/м³. рассчитывают по форму ле:

_v УЧГ Х = ——, где

* t

С - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

1Г-объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; V_t- объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст.. температу ра 20 °С). дм³:

ЯЧРЧ//

Т- температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор). °С; Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.; и - расход воздуха при отборе пробы. дм³/мин;

/ - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0.386 для воздуха рабочей зоны.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми нс превышает предела повторяемости:

J г, где

Xj, Л_7 - результаты параллельных определений, мг/м³; г - значение предела повторяемости (таблица), при этом г = 2.8 а_г. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предел*] повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

11.2. Смывы с кожных пок/ювов

Концентрацию веществ*] в пробе смыв*] X. мкг/смыв. рассчитывают по формуле:

X = С • W, где

С - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику' в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

И -объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³.

Примечание. Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах мопт быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

12. Оформление результатов измерений

Результат количественного анализа представляют в виде:

1)    результат анализа О в мг/м³ или мкг/смыв (с указанием площади смыва в см”), характеристика погрешности />. % (таблица). Р = 0,95 или

2)    (О ± Д) мг/м³ (мкг/смыв. площадь смыва, см²). Р = 0.95. где

О- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми. мг/м³ (мкг/смыв);

Д - граница абсолютной погрешности, мг/м³ (мкг/смыв):

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, таблица). %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание прогексадиона-кальция в пробе воздуха рабочей зоны -менее 0,05 мг/м; в пробе смыва - менее 0,2мкг/смыв»*.

* - 0,05 мг/м³; 0,2 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 10 дм³ воздуха рабочей зоны; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200см) соответственно.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)—2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения нс менее трех образцов растворов для градуировки, содержание прогексадиона-кальция в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0.1 до 1.0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

(0- .У)Ч00 Л

X - концентрация прогексадиона-кальция в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора прогексадиона-кальция. взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики. мкг/см³;

4,0 - погрешность градуировочной характеристики. %.

Если величина расхождения (А) превышает 4 %. делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов про-гсксадиона-кальция, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.8.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Таблица

Значения характеристики погрешности, нормашвов оперативного контроля точности, повторяемости, воспроизводимости

Анали зируе мый объекг Диапазон определяемых кон-цен фаций. мг/м3, мкг/смыв Харак терис тика погреш ности, ±<5,%, Р = 0,95 Норматив оперативного контроля точности. К, мг/м3, мкг/смыв, (Р = 0,95, т - 2) Стандартное отклонение повторяемости, аг, мг/м3, мкг/смыв Предел повторяемости, г. мг/м3, мкг/смыв Предел вое производимое Ш. R, мг/м3, мкг/смыв, (Р = 0,95, т-2) Воздух рабочей зоны 0,05—0,5 мг/м3 17 0,14 • О 0,026 • О 0,07 • 0 0,10 0 Смывы с кожных покронон ОД—2,0 мкг/смыв 17 0,14 • D 0,035 • D 0, 10-5 0,14 • D

О- среднее значение массовой концентрации анализируемого компонента в пробе (мг/м³, мкг/смыв).

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды и смывов с кожных покровов. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха и смывов с кожи должен соответствовать удвоенному объему, необходимому ад я проведения анализа по методике, фиксированная площадь смыва должна быть увеличена в 2 раза. После отбора проб экстракт с фильтра, а также пробу смыва делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы -X. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (величина добавки Х_д должна соответствовать 50—

150 % от содержания компонента в пробе, общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - X. Результаты анализа исходной рабочей пробы (Л) и рабочей пробы с добавкой (X) полу чают в у словиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посу ды, одной партии реактивов и т. д.).

Решение об у довлетворительности процеду ры анализа принимают при выполнении у словия:

\Х-Х-Х_д\<,К, где    (2)

К-0,14 • О (возду х рабочей зоны, смывы с кожи):

X, X - резу льтаты измерений исходной рабочей пробы и пробы с добавкой соответственно, мг/м³ (мкг/смыв):

Х_д - величина добавки, мг/м³ (мкг/смыв):

К - норматив оперативного контроля точности (в соответствии с диапазоном концентраций, таблица), мг/м³. мкг/смыв.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полу ченных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории). нс должно превышать предел воспроизводимости (R):

[\'i ~ Х_:\ <_R. где    (3)

R = 0,10 • D (возду х рабочей зоны);

R = 0.14- О (смывы с кожи);

О = •- (Л/ + Л'?). где X].    -    результаты    измерений    в    у    словиях    вос

производимости (разнос время, разные операторы, разные лаборатории). мг/м³ (мкг/смыв).

R - предел воспроизводимости (таблица ). мг/м³ (мкг/смыв).

Если выполняется условие (3). то воспроизводимость измерений считается у довлетворительной.

При превышении норматива контроля воспроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении у казанного норматива выясняют причины и по возможности их у страняют.

Руководитель Федеральной службы по надзору в c(j>cpc защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

3 июля 2012 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций прогексадиона-кальция в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3№6—12

Свидетельство о метрологической аттестации от 27.02.2012 №0115.27.02.12.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации прогексадиона-кальция в диапазонах 0.05—0,5 мг/м³ и 0,2— 2.0 мкг/смыв соответственно.

Название действующего вещества по номенклату ре ICO: прогскса-дион-кальций.

Название действующего вещества по номенклатуре IUPAC: 3-окси-до-5-оксо-4-пропионилциклогекса-3-ен карбоновая кислота, кальциевая соль.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: СюНюСаСЬ.

Молекулярная масса: 250.3.

Химически чистое вещество представляет собой белый тонкодисперсный порошок без запаха. Температура плавления > 360 °С. Давление паров 1.33 • 10 ⁵ Па (при 20 °С). Растворимость в органических растворителях (при 20 °С, г/дм³): ацетон - 4 • 10"⁵; толуол - 4 • Ю^-6; ди-хлормстан - 4 • 10"⁶; гексан - < 3 • ИГ⁶; метанол - 1 • 10~³; этилацетат -< 1 • 10'⁵. Растворимость в воде при 20 °С (в мг/дм³): 1 602 (pH 5): 786 (pH 7): 665 (pH 9); 174 (pH 6.5). Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода K₀w logP = -2.90. Гидролитически стабилен в водных растворах: DT*) - 89 дней (pH 9): 21 день (pH 7): менее 5 дней (pH 5). В воде стабилен к воздействию солнечного света.

Агрегатное состояние в воздушной среде - аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD*,) для крыс и мышей -

>    5 000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс -

>    2 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс -ЗОЮ мг/м³ (4 ч).

Область применения

Прогсксадион-кальций - регулятор роста растений, используется в качестве средства от полегания мелкозерновых злаков. Также может использоваться как замедлитель роста дерна, земляных орехов и цветов, для ингибирования удлинения новых побегов фруктовых культур.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей ± 25 %. при доверительной вероятности 0.95.

2. Метод измерений

Измерения концентраций прогексадиона-кальция выполняют по свободной кислоте прогексадиону методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование вещества из воздуха осуществляют на бумажный фильтр «синяя лента», экстракцию с фильтров выполняют смесью 1 %-я уксусная кислота-ацетонитрил (40 : 60, по объему). Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 2 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров - 91.7 %. с поверхности кожи -89.0 %.

3. Средства измерении, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерении

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны фирмы «Agilent»

Барометр-анероид М-67 Весы аналитические ВЛА-200 Колбы мерные 2-100-2, 2-500-5 и 2-1 000-2 Меры массы

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1.0; 2.0; 5.0; 10.0 см³ Пробоотборнос устройство ОП 442ТЦ (ЗАО «ОПТЭК». г. Санкт-Петербург)

Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2. цена деления 1 °С. пределы измерения 0—55 °С Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 100. 500 и 1 000 см³

Примечание. Допускается использование средств измерения с ан&тогич-ными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Прогсксадион. аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99.6 %. CAS № 88805-35-0

Прогексадион-кальций. технический продукте содержанием основного вещества 92.1 %.

Reg. № 28542. BAS 125 W. Bach; FW 18483 Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода для лабораторного анализа (бидистилли-рованная или деионизованная)

Калий марганцово-кислый (перманганат калия), хч

Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч. прокаленный

Кислота орто(|юс(|юрная. хч. 85 %

Кислота соляная, хч Кислота уксусная, ледяная Натрий углекислый (карбонат натрия), хч Спирт этиловый (этанол) ректификованный

Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид.

пснтоксид фосфора), хч    ТУ 64)9-4173—85

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы Аппарат для встряхивания типа АВУ-бс или орбитальный шейкер OS-10. диапазон регулировки оборотов 50—200 об./мин. орбита до 10 мм    ТУ 64-1-2851—78

Баня водяная

Бумажные фильтры «синяя лента» обезэо ленные ТУ 26424Х) 14)5015242—07 Бязь хлопчатобумажная белая

Воронка Бюхнера    ГОСТ 9147-80

Воронки конусные диаметром 40—15 мм    ГОСТ 25336-82

Г руша резиновая    ТУ 9398-0054)576-908

Колба Бунзена    ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 150 см³ '    ГОСТ 9737-93

Линейка измерительная    ГОСТ 427-75

Мембраны микропористые капроновые ММК ТУ 94714Ю2-10471723—03 Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Насос водоструйный    ГОСТ 25336-82

Пинцет медицинский нержавеющий    ГОСТ 21241 —89

Стаканы химические с носиком вместимостью 150 см³    ГОСТ 25336-82

Стекловата

Стеклянные емкости вместимостью 100 см³ с герметичной металлической крышкой Стеклянные палочки Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30 Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi. Швейцария Установка для перегонки растворителей Фильтродержатель Холодильник обратный Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм. внутренним диаметром 4.6 мм. содержащая Eclipse XDB С18. зернением 5 мкм Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50—100 мм³

Примечание. Допускается использование других вспомогательных устройств аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным, а также материалов, обеспечивающих нормативы точности при проведении измерений.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76. требования по элсктробсзопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009. а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе нс должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда -поГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исслсдователя. с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерении

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности нс более 80 %;

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка ацетонирила (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ. кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов кислот, растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров и салфеток для отбора проб, отбор проб.

7.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пснтоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пснтоксида фосфора) нс менее 1 ч. после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.2. Подготовка подвижной ((ним для ВЭЖХ

7.2.1.    Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,2% (0,2 %-й раствор). В мерную колбу вместимостью 1 ООО см³ помещают 250—300 см³ бндистиллированной или дсионизо-ванной воды, вносят 2 см³ орто(|юсфорной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

7.2.2.    Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 400 см³ ацетонитрила, добавляют 600 см³ 0.2 %-го раствора орто<|юсфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр и дегазируют.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 0.8 см³/.мин до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов

7.4.1.    Исходный раствор прогексадиона для градуировки (соответствует концентрации прогексадиона-калъция 1 мг/см ). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0.0848 г прогексадиона. растворяют в 50—60 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С в течение месяца.

Растворы № 1—5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.4.2.    Раствор № 1 прогексадиона для градуировки и внесения (соответствует концентрации прогексадиона-калъция 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1 см³ исходного раствора с концентрацией прогсксадиона-кальция 1 мг/см³ (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Градуировочный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С в течение месяца.

7.4.3.    Рабочие растворы № 2—5 прогексадиона для градуировки (соответствуют концентрации прогсксадиона-кальция 0,1—1.0 мкг/см³).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,0; 5.0 и 10.0 ем³ градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.4.2). доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2. тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2—5 с концентрацией прогсксадиона-кальция 0,1; 0,2; 0.5 и 1.0 мкг/см³ соответственно.

Рабочие растворы хранят при температуре 4—6 °С нс более 20 дней.

7.5. Приготовление раствора уксусной кис.юты с массовой долей 1 %

(1 %-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 250—300 см³ бидистиллированной или деионизованной воды, вносят 10 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

7.6. Приготовление раствора соляной кислоты с молярной концентрацией 0,01 моль/дм³ (0,01 Мраствор)

Для приготовления 1 М раствор в мерную колбу вместимостью 1 000 см³, содержащую 300—100 см³ деионизованной воды, помещают 82 см³ концентрированной соляной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

Для приготовления 0.01 М раствора в мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 10 см³ 1 М раствора соляной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

7.7. Приготовление растворов внесения

7.7. /. Исходный раствор прогексадиона-капьция для внесения (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0.0109 г прогсксадиона-кальция (технический продукт, содержащий 92 % основного вещества), растворяют в 40 см³ 1 %-й уксусной кислоты, доводят ацетонирилом до метки, тщательно перемешивают.

7.7.2. Раствор №1 прогексадиона-кальция для внесения (концентрация 10мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора прогсксадина-кальция с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.7.1). разбавляют смесью 1 %-я уксусная кислота-ацетонитрил (40 : 60, по объему) до метки.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внссено-найдсно» и контроля качества результатов измерений методом добавок.

Растворы внесения хранят в холодильнике при температу ре 4—6 °С в течение месяца.

7.8.    Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мЕА • с) от концентрации прогсксадиона-кальция в растворе (мкг/см³). устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам хзя градуировки № 2—5. приготовленным по п. 7.4.3.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.8.1. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков прогсксадиона. на основании которых строят градуировочную зависимость.

7.8.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны.

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4.6 мм. содержащая Eclipse XDB С18. зернением 5 мкм.

Рабочая длина волны: 274 или 235 нм¹.

Температу ра колонки: 25 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-0.2 %-я орто фосфорная кислота (25 : 75. по объему).

Скорость потока элюента: 0.8 см³/мин.

Объем вводимой пробы: 20 мм.

Ориентировочное время выхода прогсксадиона: 8.5 мин.

Линейный диапазон детектирования: 2—20 нг.

7.9.    Подготовка фильтров для отбора проб воздуха

Диаметр бумажного фильтра «синяя лента» должен соответствовать вну треннему диаметру фильтродсржатсля.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25—30 см³, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

7.10.    Подготовка аифеток для проведения смыва

7.10.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5 %

Навеску (25 ± 0.1^ г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

1

Хроматографирование пробы при 2 длинах волн увеличивает надежность идет написании вещества.