I 'осуди рствснное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах

Методические указания МУК 4.1.2480—09

Издание официальное

Москва • 2009

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.—Юс.

1.    Разработаны ГУ НИИ питания РАМН (академик РАМН В. А. Гутсльян, К. И. Эллер, М. Г. Киселева, Л. Г. Левин, Е. П. Хромченкова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидс-миологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. № 3).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

© Роспотребнадзор, 2009 О Федеральный центр гигиены м зпмде.мнологии Роспотребнадзора, 2009

Определение остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах

Методические указания МУК 4.1.2480—09

Технический редактор А. В. Терентьева

Подписано в печать 31.07.09 Формат 60x88/16    Печ.    л.    0,75

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору и сфере защипа прав iioipcOii гелей и благополучия человека 127994, Москва, Волковский иср.. д 18/20

()рш инал-макс i поди» тилем к нечаш и шрпжнроинн о I делом 1Пда1СЛ1.скою обсснсчепнм Федерального ncmpa гигиены п iiiiijtcMiiniioniii 1'ociioipcOiiiuiiopii 1171 OS. Москва. Нвришвское ш . 19а Oi деление pcuaiijiiiuiH. тел /фикс 952-50-К9

МУК 4.1.2480—09

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

2 февраля 2009 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах

Методические указания МУК 4.1.2480—09

Настоящие методические указания устанавливают методику определения дорамектина в мясе сельскохозяйственных животных и продуктах его переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящиеся в обращении на территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию.

Методические указания могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1. Краткая характеристика препарата

Общепринятое название: дорамектин, ветранал.

Название по номенклатуре ИЮПАК: 25-циклогексил-5-0-диметил-25-ди(1-метил-пропил)авермсктин. CAS: 117704-25-3.

Структурная формула:

3

МУК 4.1.2480—09

С50Н74О14 Мол. масса: 899,11

Физические свойства: белый порошок, без запаха. Хорошо растворим в ацетонитриле.

Торговая марка: эндектоцид «Дектомакс» («Dcctomax»).

Фирма-производитель: «Pfizer».

Форма выпуска: I %-й раствор дорамектина в растительном масле.

Область применения. «Дектомакс» используется в качестве противо-паразитарного средства широкого спектра действия для лечения и профилактики заболеваний крупного рогатого скота, овец и свиней. Средство предназначено для парентерального введения крупному рогатому скоту.

2. Методика определения остаточных количеств

дорамектина в мясе сельскохозяйственных животных и продуктах его переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1.    Принцип метода. Методика основана на определении остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах методом ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием (А^^^ЗбО нм, V,_M -470 нм) после экстракции дорамектина из образца. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2.    Метрологические характеристики метода. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой, по1решность (и её составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р — 0,95 не превышает

4

МУК 4.1.2480—09

значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры методики определении дорамсктина в тканях сельскохозяйственных животных (р = 0,95, п = 10)

Анализируемый объект Мышечная ткань. печень, почки, жир Диапазон загрязнения, мг/кг 0,003—0,1 0.1-2,5 Предел обнаружения, мг/кг 0,001 Среднее значение степени извлечения, % 71,5 84,6 Стандартное отклонение повторяемости, S{, мг/кг (в % от среднего значения) 0,017 (22,6) 0,078 (15,6) Предел повторяемости, г, мг/кг (в % от среднего значения) 0,047 (62,6) 0,217 (43,4) Предел относительной по1рсшности результата анализа, ±б. % 25,5 13,4

2.2. Реактивы Ацетонитрил, квалификации для ВЭЖХ Тетрагидрофуран, квалификации осч Метанол, квалификации для ВЭЖХ н-Гексан, квалификации хч Вода дистиллированная Натрия гидроокись, квалификации осч Аммиак водный (25—30 % NH₄OH) квалификации осч

Триэтиламии, > 99,0 % (Sigma), CAS: 121-44-8 Трифторуксусный ангидрид, > 99,0 % (Sigma)

Дорамектин (UK-67,994), 91,9 %, «Pfizer»

2.3. Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы

Хроматографическая система, состоящая из жидкостного хроматографа высокого давления, дегазатора, спектрофлюориметрического детектора и системы для сбора и обработки хроматографических данных. Колонка для ВЭЖХ, заполненная октадецилси-лика^лем 250 * 4,5 мм, 5 мкм (например,

Phenomenex Luna Cl 8 или аналогичная)

5

Микрошприц объемом 25 мкл для ВЭЖХ (Hamilton, США)

Шприц для инъекций, пластиковый, объемом 25 см³

Виалы стеклянные с закручивающейся

крышкой «для автосамплера» (в крышке

окошко, герметично закрытое резиновой

вкладкой), объемом 2—4 см³

Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С

Весы лабораторные общего назначения

с наибольшим пределом взвешивания

200 г и погрешностью ± 0,0001 г

Ротационный испаритель ИР-1М или аналогичный

Блендер

Баллон со сжатым азотом квалификации «ПНГ» Воронка делительная на 250 см³ Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 1-1000-2

Колбы грушевидные с конусом 14/23

вместимостью 100 см³    ГОСТ    25336

Цилиндры по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см³

Пипетки 4(5)-1-2,4(5)-2-10,4(5)-2-25    ГОСТ    29227

Фильтры беззольные ФО-ФС-15 «красная лента»

и «синяя лента»    ТУ 2642-001 -42624157

Допускается использование приборов и посуды с мезрологическими характеристиками и реактивов квалификацией не ниже указанных в МУК.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ Р 51447-99 «Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб». Для длительного хранения образцы продуктов замораживаются и хранятся при -18 °С до анализа.

Перед анализом образцы тщательно измельчают в гомогенизаторе или блендере.

2.5. Подготовка к проведению измерений

2.5.1. Приготовление подвижной фазы и кондиционирование хроматографической колонки. В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 530 см³ ацетонитрила, 270 см³ тетрагидрофурана, 200 см³ дистиллированной воды, тщательно перемешивают и выдерживают до

МУК 4.1.2480- 09

комнатной температуры. Раствор дегазируют. Хроматографическую колонку кондиционируют до минимального дрейфа базовой линии.

2.5.2.    Приготовление стандартных растворов дорамектина. 0,050 ±0,001 г кристаллического дорамектина количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в 50 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки и тщательно перемешивают. Получают основной стандартный раствор в ацетонитриле с массовой долей дорамектина 0,5 мг/см³.

Для построения градуировочной кривой методом последовательного разбавления ацетонитрилом готовят рабочие стандартные растворы с содержанием дорамектина 0,100, 0,010, 0,001 и 0,0001 мг/см³. Отбирают аликвоты стандартных растворов, упаривают их на ротационном испарителе при температуре не более 40—45 °С. Дорамекгин переводят во флюоресцирующее производное, хроматографируют в трех повторностях (объем пробы 10 мм³). Строят график зависимости средних площадей пиков от концентрации дорамектина в мг/ см³.

Основной и рабочие стандартные растворы дорамектина хранят в стеклянной посуде (мерной колбе) с притертой пробкой в прохладном месте (при температуре около 4 °С). Сроки годности основного раствора 12 месяцев, рабочих - 2 месяца.

2.5.3.    Подготовка образца. Измельченный образец, массой 2,5 г помещают в 20 см³ ацетонитрила, закрывают емкость пробкой или парафильмом, помещают в теплую (40—50 °С) ультразвуковую баню на 20—25 мин. Затем охлаждают, переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют при 5 тыс. об/мин в течение 5 мин. Супернатант декантируют в делительную воронку и обезжиривают двумя порциями гексана по 10 см³. Ацетонитрильный экстракт дорамектина собирают в круглодонную колбу и упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40—45 °С.

2.5.4.    Получение флуоресцирующего производного дорамектина

А) Приготовление раствора аммиака в метаноле.

В виалу (крышка герметичная с резиновой вкладкой, которую можно проколоть иглой) наливают 2—3 см³ метанола, крышку завинчивают. На пластиковый шприц для инъекций надевают иглу, вынимают поршень. Внутрь шприца помещают 4—6 гранул сухого гидроксида натрия, наливают водный аммиак и вставляют поршень. Шприц переворачивают вверх иглой, выделяющийся газ вытесняет из иглы воду, на иглу надевают виалу так, чтобы аммиак барботировал через метанол. Поршень шприца придерживают, насыщение происходит в течение 0,5—

1 мин. Перед каждым анализом рекомендуется готовить свежий раствор аммиака в метаноле.

Б) Получение флуоресцирующего производного дорамектина.

К остатку после упаривания аликвоты стандартного образца или пробы добавляют 0,15 см³ ацетонитрила, 0,1см³ триэтиламина и 0,05 см³ трифторуксусного ангидрида, смесь перемешивают и отдувают в токе азота на водяной бане. К оставшемуся в колбе маслянистому содержимому добавляют 0,25 см³ свежеприготовленного 2М раствора аммиака в метаноле, снова отдувают в токе азота на водяной бане, добавляют к содержимому 0,4 см³ ацетонитрила (объем пробы У_пр = 0,5 см³). Аликвоту раствора образца К_х(от 0,005 до 0,02 см³) вводят в хроматограф.

2.6. Выполнение измерений

Условия хроматографического анализа.

Хроматографическая колонка: колонка для ВЭЖХ, заполненная окта-дсцнпсиликагелсм (например, Phenomenex Luna С18,250 * 4,5 мм, 5 мкм).

Подвижная фаза: ацетонитрил - 53 %, тетрагидрофуран - 27 %, вода - 20 % об.

Скорость подачи элюента: 1,0 см³/мин.

Детектирование: флюориметрическое, = 360 нм, X*. - 470 нм.

Объем вводимой пробы 5—20 мм Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,1—125 нг дорамектина.

8

МУК 4.1.2480—09

Абсолютное время удерживания дорамектина в приведенных условиях - 14,5 ±0,1 мин.

Хроматограмма образца сала, добавка дорамектина составляет 10 мкг/кг.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза, вычисляют среднюю площадь пика, соответствующего дорамектину.

2.7. Обработка результатов измерения

2.1 Л. Калибровка хроматографа и построение градуировочной кривой. Отбирают аликвоты стандартных растворов, упаривают их на ротационном испарителе при температуре не более 40—45 °С. Дорамек-тин переводят во флюоресцирующее производное, хроматографирую г в трех повторностях (объем пробы 10 мм³) (п. 2.6). Строят график зависимости средних площадей пиков от концентрации дорамектина в мг/см³.

Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят при смене колонки и/или предколонки; при замене стандартного образца и/или реактивов; после проведения ремонта; после длительною простоя хромато1рафа (2 недели и более);

2.7.2. Оформление результатов. Содержание дорамектина можно рассчитать по градуировочному графику или методом внешнего стандарта. В последнем случае для расчетов используют стандартный раствор, площадь пика которого наиболее близка к площади пика дорамектина в образце. Для расчета по методу внешнего стандарта используют формулу:

X — 400 ^^ОБР * ^^СТ х ^'^ст х у где Vx*Scr

X- содержание дорамектина в пробе, мг/кг;

С(т~ содержание дорамектина в стандартном растворе, мг/ см³;

S_x- площадь пика дорамектина в анализируемом образце;

Sct- площадь пика стандарта;

Уст~ объем аликвоты стандартного раствора дорамектина, см³;

Уокр-объем образца (0,5 см³);

V_x — объем образца, введенный в хроматограф (0,005—0,02 см³).

9

3. Оперативный контроль результатов измерений

3.1. Контроль повторяемости результатов определения

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

2x1*,-Л^хЮО

-7-с-S О

Wi+Xt)

X/, результаты параллельных определений, мг/кг;

S - предел относительной погрешности (табл. 1), в %.

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

4.Требования техники безопасности

При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности ггри работе с химическими реактивами по ГОСТ

12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

5.Требования к квалификации операторов

Работу по указанной методике могут исполнять высококвалифицированные специалисты в области газожидкостной хроматографии и санитарной химии. Исполнители должны быть проинструктированы об основных мерах техники безопасности при работе с веществами 1—2 класса опасности, органическими растворителями, а также с правилами безопасности при работе в химической лаборатории (п. 3).

6. Условия измерений

Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования, эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с веществами 1—2 класса опасности, органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционной системой согласно ГОСТ 12.4.021.