Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дикамбы в кукурузном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2459—09

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств дикамбы в кукурузном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009—14 с.

1.    Разработаны сотрудниками Всероссийского НИИ защиты растений (В. И Долженко, П. А. Тарарин, Т. А. Маханысова, С. И. Редок).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г, № 3).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.

4.    Введены в действие с 29 апреля 2009 г.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

© Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

МУК 4.1,2459- 09

стыо 5,0 см³ и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре + 40 °С.

1.8.2.    Метилирование дикамбы.В пробирку с сухим остатком добавляют 2,0 см³ свежеприготовленного по п. 1.6.5 эфирного раствора диазометана. Пробирку закрывают пробкой и ставят на 12—14 ч (на ночь) в холодильник с температурой + 4—6 °С. После этого этиловый эфир в пробирках упаривают в токе азота досуха и сухой остаток растворяют в 0,5 см³ изооктана.

Газохроматографический анализ на содержание дикамбы проводят по п. 1.8.3.

1.8.3.    Условия хроматографирования. Газовый хроматограф с ДЭЗ.

Колонка хроматографическая кварцевая капиллярная длиной 30 м,

внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой ВР-50 (типа OV-17), толщина слоя 0,5 мкм.

Температура колонки: программирование от 80 °С (1 мин) до 280 °С (25 мин) со скоростью 8,0 °С/мин.

Температура испарителя: 240 °С.

Температура детектора: 300 °С.

Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) - 2,0см³/мин, дошшштшп» ного газа (азот в/ч) к ДЭЗ - 40 см³/мин.

Количество вводимой в хроматограф аликвоты: 1 мкл.

Время удерживания дшсамбы (в виде производного): 14,75 ± 0,05 мин.

Предел детектирования: 0,05 нг.

Линейный диапазон детектирования: 0,1—0,8 нг.

1.8.4.    Обработка результатов анализа. Содержание дикамбы рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:

Н₀хт

X - содержание дикамбы в пробе, мг/кг,

Н\ - высота (площадь) пика анализируемого вещества, мм (мм²), Н₀ - высота (площадь) пика стандартного вещества, мм (мм²),

А - концентрация стандартного раствора дикамбы, мкг/см³,

Г- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³, т - масса (г) аналитической пробы.

11

МУК 4.1.2459—09

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2х|ЛГ,-ЛГ₂|хЮ0

X_h Х₇ - результаты параллельных определений, мг/кг;

/’—значение предела повторяемости (г = 2>8а_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения продела попторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ. Результат анализа представляют в виде;

(X ± А) мг/кг при вероятности Р - 0,95, где

X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приесмемыми, мг/кг;

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

д = <5 х —, где 100

<5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,005 мг/кг»

2. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Плановый внутрилабораториый оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки Садолжна удовлетворять условию:

МУК 4.1.2459—09

±А_я-(±Д_я~,) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом;

А_д = ±0,84 А, где А - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

л г ^Х

А = 5 х —, где 100

3 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %. Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К_к^Х'~Х -С,,где

Х\ X , С_д- среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К*) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

(2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)

13

МУК 4.1.2459—09

2х1лГ. - Jf.IxlOO „ _{Г11Л    П}ч

—I ¹ -Ц-:£Л.где    (3)

X_hX] - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл.1), %.

3. Требования техники безопасности

При проведении работы необходимо соблюдать требования безо-ппипости, установленные для работ с токсичными, едкими, легковос-П1ШМОШИОЩИМИСЯ веществами, ГОСТ 12.1005-88.

При выполнении измерений с использованием хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.

4. Требования к квалификации оператора

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специаписи-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.

5. Разработчики

Долженко В. И., Тарарин П. А., Маханькова Т. А., Редкие С. И. (ГПУ ВНИИ защиты растений).

14

Определение остаточных количеств дикамбы в кукурузном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4 Л .2459—09

Технический редактор А. В. Терентьева

Подписано в печать 31.07.09 Формат 60x88/16    Печ.    л.    1,0

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, ВадковскиЙ пер., д 18/20

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел./факс 952-50-89

МУК 4.1.2459 09

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты upun потребителей и благополучия чслошжи, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

2 февраля 2009 г.

Дата введения: 29 апреля 2009 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дикямбы в кукурузном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2459—09

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения остаточных количеств дикамбы в масле кукурузы в диапазоне концентраций 0,005— 0,04 мг/кг.

Название по номенклатуре ICO: дикамба.

Название по номенклатуре ШРАС: 3,6-dichloro-o-anisic acid. Структурная формула:

СО.ОН

осн₃

CI

Химически чистое вещество: кристаллы белого цвета,

МУК 4.1.2459—09

Температура плавления: 114—116 °С.

Растворимость (г/кг) при 25 °С: в воде - 6,5, этаноле - 922, ацетоне

-    810, дихлорметане - 260, толуоле - 130.

В обычных условиях дикамба и ее препараты устойчивы, с основаниями дикамба образует хорошо растворимые в воде соли.

Краткая токсикологическая характеристика

Дикамба и ее метаболиты малотоксичны для теплокровных, LD₅₀ для крыс - 2 ООО—3 ООО мг/кг.

Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов - 0,02мг/дм³, Г1ДК в почве - 0,25 мг/кг, МДУ в зерне хлебных злаков, кукурузе, просе

-    не допускается.

Область применения препарата

Гербицид для борьбы с однолетними и некоторыми многолетними двудольными сорными растениями на посевах зерновых культур.

1. Определение дикамбы в кукурузном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии

LL Принцип метода

Метод основан на извлечении остаточных количеств дикамбы из анализируемого объекта органическими растворителями, проведении очистки экстракта перераспределением в системе несмепшвающихся растворителей и метилировании дикамбы диазометаиом. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки с применением капиллярной газожидкостной хроматографии и использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ).

1.2. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р - 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4

МУК 4.1.2459—09

Таблица 1 Метрологические параметры для дикямбы

Объект анализа Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости, аг,% Предел повторяемости, г, % Предел воспроизводи мости, Л,% Масло кукурузы 0,005—0,04 50 3,7 10,8 12,5

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (и = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2 Полнота извлечения веществе, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для дикамбы

Объект анализа Метрологические параметры, Р = 0,95, п - 20 Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определямых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, Sf% Доверительный интервал среднего результата^ Масло кукурузы 0,005 0,005—0,04 78,7 3,8 5,3

1.3. Избирательность метода Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование капиллярной колонки и селективного детектора позволяет устранять влияние ко-экстрактивных веществ на результаты анализа.

1.4. Реактивы, растворы, материалы Аналитический стандарт дикамбы

Азот газообразный высокой чистоты    ТУ 301 -07-25—89

Ацетон, осч    ТУ    2633-004-П 291058 94

Ацетонитрил для хроматографии, хч    ТУ 6-09-4326—76

5

МУК 4.1.2459—09

Вата медицинская

Вода дистиллированная

н-Гексан, хч

Дихлорметан, хч

Изооктан эталонный

Калия гидроокись, чда

Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда

Натрий хлористый, чда

/V-Нитрозометилмочевина, хч

Серная кислота, осч

Смесь н-гексан:этиловый эфир,

50 : 50, по объему

Фильтры бумажные, «красная лента»

Фильтры бумажные, «белая лента»    ТУ 2642-001 -42624157—98

Фильтры бумажные, «синяя лента»    ТУ 2642-001 -42624157—98

Эфир этиловый (серный)    ОСТ 84-2006—88

1.5. Приборы, аппаратура, посуда

Газовый хроматограф с ДЭЗ Колонка хроматографическая кварцевая капиллярная длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой

Аппарат для встряхивания или аналогичный Весы аналитические типа ВЛА-200 Весы лабораторные типа ВЛКТ-500 Воронки делительные емкостью 250 и 500 см³ Воронки химические конусные Индикаторная бумага универсальная Колбы-концентраторы емкостью 250 см³ Колбы плоскодонные емкостью 100 и 300 см³

Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 50,

100 см³    ГОСТ    1770—74

Колпачки алюминиевые

для герметизации флаконов

6

МУК 4.1.2459—09

Мельница электрическая; лабораторная или аналогичная Микрошприц МШ-10 Насос водоструйный Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 см³ Приспособление для обжима колпачков на флаконах

Пробирки мерные со шлифом емкостью

5,0 см³

Стаканы химические на 100,200 и 500 см³

Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.

Установка для упаривания растворителей в токе азота Установка ультразвуковая «Серьга» УЗМ002 или аналогичная

Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых)

емкостью 5,0 см³    ТУ 64-2-10—87

Электроплитка    ГОСТ 14919-83

1.6. Подготовка к определению 1.6 Л. Подготовка и очистка растворителей. Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см³ растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре + 40 °С до объема 1,0 см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

1,6.2. Приготовление стандартных растворов. Основной раствор дикамбы с содержанием 100 мкг/см³ готовят растворением в ацетоне 0,01 г аналитического стандарта дикамбы в мерной колбе емкостью 100 см³. Раствор хранят в холодильнике при температуре + 4—6 °С не более трех месяцев.

7

МУК 4.1.2459—09

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,8, 0,4, 0,2 и 0,1 мкг/см³ готовят из основного стандартного раствора дикамбы последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре + 4—6 °С не более месяца. В модельных опытах при изучении полноты извлечения дикамбы используют ацетоновые растворы стандартного вещества.

Для приготовления калибровочных растворов в мерные пробирки со шлифом емкостью 5,0 см³ вносят по 1,0 см³ рабочих растворов дикамбы с концентрациями 0,1, 0,2, 0,4 и 0,8 мкг/см³. Растворитель в пробирках упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование дикамбы по п. 1.6.3.

1.6.3.    Метилирование дикамбы. В пробирки с сухим остатком добавляют по 2,0 см³ свежеприготовленного по п. 1.6.5 эфирного раствора диазометана. Пробирки закрывают пробками и ставят на 12— 14 ч (на ночь) в холодильник с температурой +4—6 °С. После этого этиловый эфир в пробирках упаривают в токе азота досуха и сухой остаток растворяют в 1,0 см³ изооктана.

1.6.4.    Построение калибровочного графика. Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа (п. 1.8.3) вводят по 1 мкл приготовленных по п. 1.6.3 растворов, содержащих дикамбу (в виде производного) в концентрациях 0,1, 0,2, 0,4 и 0,8 мкг/см³. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (мм²) от концентрации дикамбы в рабочем растворе в мкг/см³.

1.6.5.    Приготовление эфирного раствора диазометана (из расчета метилирования экстрактов 2-х проб). N-Нитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 2,0—3,0 см³ и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. Этиловый эфир объемом 4,0 см³ вносят в другой флакон емкостью 5,0 см³, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 мин.

После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр.диам. - 1,5—2,0 мм), одним

8

МУК 4.1.2459—09

концом погружая ее в этиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50 % водный раствор гидроокиси калия (~ 0,3 см³) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазомстаиом окрашивается в ярко желтый цвет.

Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо проводить в работающем вытяжном шкафу.

/. 7. Отбор, первичная обработка и хранение проб Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051—79 от 21.08.1979 года, а также в соответствии с ГОСТ 8808-91 «Масло кукурузное, ТУ».

Для исследовательских целей допускается получение масла в лаборатории из проб измельченного зерна методом экстракции органическим растворителем при температуре не выше + 40 °С. Пробы масла хранят при + 4—6 °С в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре не более 30 суток.

1.8. Проведение определения

1.8.1. Экстракция дикамбы. Аналитическую пробу масла массой

10,0 ±0,1 г растворяют в 50 см³ н-гексана (насыщенного ацетонитрилом) в плоскодонной колбе емкостью 100 см³ и после этого гексановый раствор масла переносят в делительную воронку емкостью 250 см³. Колбу промывают 50 см³ ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и переносят его в воронку. Содержимое воронки встряхивают в течение 2 мин. После 5-ти минутного отстаивания нижний ацетонитрильный слой сливают в колбу-концентратор емкостью 250 см³. Плоскодонную колбу промывают 25 см³ ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и также переносят в воронку (250 см³). Содержимое воронки встряхивают в течение 2 мин, отстаивают 5 мин и нижний ацетонитрильный слой объединяют с предыдущим. Верхний гексановый слой отбрасывают.

9

МУК 4.1.2459—09

Колбу-концентратор с объединенным ацетонитрильным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель досуха при температуре 50 °С. Сухой остаток растворяют в 20 см³ ацетона. К раствору добавляют 200 см³ дистиллированной воды,

2,0 см³ 5,0 % водного раствора серной кислоты и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре + 4—б °С в течение 4—5 ч. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 см³. В воронку добавляют 10 % водный раствор гидроокиси калия до pH 9—10, 10 см³ насыщенного водного раствора хлористого натрия и, после перемешивания, 75 см³ дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин, После 15-ти минутного отстаивания нижний дихлорме-тановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта с использованием 50 см³ дихлорметана повторяют. Далее в воронку добавляют 40 см³ насыщенного водного раствора хлористого натрия и, после перемешивания, 75 см³ н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-ти минутного отстаивания нижний ацетоно-водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 см³, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 см³. В воронку добавляют 75 см³ смеси гексан-этиловый эфир (50: 50) и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0—1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 250 см³. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50см^э смеси гексан-этиловый эфир (50 ; 50). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре + 40 °С до объема 3—5 см³. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом емко-