Государственное санитарно-эпндсмно.кн ичсское нормирование _Российской Федерации_
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение вредных веществ в биологических средах
Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.2116—06
Издание официальное
Москва • 2008
Федеральная сдужба по напору в сфере защиты нрав ноз ребшедей н G.iaioiio.ivmiih че.ювека
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение вредных веществ в биологических средах
Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.21*16—06
и приливают 5 см3 реагента для экстракции (раствор камфары в бутила-цстате). Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин. после отстаивания эфирный экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денату рации белка 10 мин.
Полученный центрифугат хроматографируют и проводят количественное определение анализируемого соединения в подготовленной пробе по калибровочному графику . Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб мочи. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 7.5).
9. Вычисление результатов измерений
На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию 2-хлорфснола в моче.
За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений А'**,*. А'тш. расхождение между которыми нс должно превышать значения предела повторяемости гп (табл. 3).
Расчет концентраций 2-хлорфснола ведут по формуле:
X = А [' . где
J 1 * J/2
А - количество компонента, найденное по калибровочному графику. мкг;
У,кст. - объем экстрагента, см3;
Vt - объем экстрагируемой мочи, см3;
V2 - объем хроматографируемой пробы, см3.
Результат измерений представляют в виде ( X ± Д) мкг/см3, J где
А' - средний результат анализа, мкг/см3.
г X + X
при условии: Xт1Х - Хтп < — — —. где
к . НЮ 2
Хтах - максимальный результат из 2-х параллельных измерений: Хтт - минимальный результат из 2-х параллельных измерений; г„ - значение предела повторяемости. %:
Д - характеристика погрешности, мкг/см3 при Р = 0,95, равная:
8- относительное значение характеристики погрешности. %.
МУК 4.1.2109—06
10. Внутренний контроль качества результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость. внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335—2003 «ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».
Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, нс превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.
Таблица 2
Диапазон измсрсний, значении показа гелей точности, повторяемости, воспроизводимости
|
11аимсновапис определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/см3 |
Показатель повторяемости (относительное средне-юзадрагическое отклонение повторяемости), <7г,% |
Показатель военро-и зводимости (ошо-сителыюе среднеквадратическое отклонение Boci |роизводи мости)
<Tr. ,%
Х( |
1 Указатель точности Пронины относительной iioipciiuiocni
при вероятности
Р = 0,95), ± 6, % |
|
2-Хлорфенол, от 0,05 до 1,80 вкл. |
11,7 |
12,3 |
23,0 |
|
|
Таблица 3 |
|
Значения продетой повторяемоети н воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95 |
|
11аименование определяемого компонента и диапазон измерений^ мкг/см3 |
Продет повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных OI 1ределе! шй), гт% |
Предел внутрилабораторной 1зос-производимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях),
%/,% |
|
2-Хлорфенол, от 0,05 до 1,80 вкл. |
22,3 |
28,4 |
|
10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики Контроль стабильности градуировочного графика проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений, определяют содержание исследуемого соединения в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и измеренным значением концентраций нс превышает 5 %.
10.2. Контроль повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении образцов одной и той же рабочей пробы, с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов, в течение возможно минимального интервала, нс должно превышать значения предела повторяемости г„ (табл. 3).
Повторяемость результатов параллельных измерений признают удовлетворительной, если
гп - значение предела повторяемости. %:
Л mu* - максимальный результат из 2-х параллельных измерений:
Хтт - минимальный результат из 2-х параллельных измерений.
Если условие нс выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.3. Контроль воспроизводимости
Внутренний контроль воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разнос время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т. д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
МУК 4.1.2109—06
Х} - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, мкг/см3;
Х2- средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, полученный в других условиях, мкг/см3;
Яду - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости. % (табл. 3).
Расхождение между результатами измерений .V, и Х2. полученных в разных условиях, нс должно превышать значений показателя воспроизводимости Ryt при доверительной вероятности Р = 0.95. указанных в табл. 3.
Если условие нс выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.4. Оперативный контроль точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольной процедуры, равного разности между результатом контрольного измерения содержания 2-хлорфснола в пробе
с известной добавкой (X1). в рабочей пробе без добавки (X) и величиной добавки Г (добавка должна составлять нс менее 40 % от содержания 2-хлорфснола в рабочей пробе) с нормативом точности К.
Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
[*' -X- С;| = Кк . ГДС
л - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных измерений, мкг/см3;
X - средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений. мкг/см3;
С0 - величина добавки к пробе, мкг/см3.
К = 0.84 J(—-X)2+(— X1)2 V 100 100
94
МУК 4.1.2109—06
Качество контрольной процедуры признают удовлетворительной при выполнении условия: А* £ К.
При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, устраняют их и процедуру контроля повторяют.
Периодичность ВКК регламентируется в Руководстве по качеству лаборатории.
Литература
1. Бандман А. Л.. Войтенко Г. А.. Волкова Н. В.и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Г ало ген производные углеводородов: Справ, изд. /Под рсд. В. А. Филова и др. Л.: «Химия». 1990.
Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т. С. Уланова. Т. В. Нурисламова. Н. А. Попова).
95
Определение вредных веществ в биологических средах: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2008.—183 с.
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 11.07.06 №2).
2. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 9 августа 2006 г.
3. Введены впервые.
ЬКК 28.072
< Роспотребнадзор, 2008
< Федеральный центр iтн ненм и
эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008
МУК 4.1.2102-4.1.2116—06Содержание
Измерение массовой концешрации селена в моче методом атомко-
абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2102—06............................................4
Определение массовой концентрации ванадия в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии с электротермической
атомизацией: МУК 4.1.2103—06........................................................................14
Определение массовой концентрации меди, магния, кадмия в пробах мочи
методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2104—06..................25
Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах
волос методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2105—06 37
Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии:
МУК 4.1.2106—06................................................................................................50
Определение массовой концентрации фенола в биосредах (моча)
газохроматографическим методом: МУК 4.1.2107—06....................................63
Определение массовой концентрации фенола в биосредах (кровь)
газохроматографическим методом: МУК 4.1.2108—06....................................74
Определение массовой концентрации 2-хлорфенола в биосредах (моча)
газохроматографическим методом: МУК 4.1.2109—06....................................85
Определение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах мочи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:
МУК 4.1.2110—06................................................................................................96
Измерение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:
МУК 4.1.2111—06..............................................................................................ПО
Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, гетрахлормешна. хлорбензола в биосредах (кровь)
газохроматографическим методом: МУК 4.1.2112—06..................................125
Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана в биосредах (моча) методом газохроматографического
анализа равновесного пара: МУК 4.1.2113—06...............................................137
Определение массовой концентрации хлороформа. 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана, хлорбензола в биосредах (моча)
газохроматографическим методом: МУК 4.1.2114—06..................................149
Определение массовой концепграции хлороформа, 1,2-дихлорэтана,
тетрахлорметана в биосредах (кровь) методом газохромато1рафического
анализа равновесного пара: МУК 4.1.2115—06...............................................162
Определение массовой концентрации стирола в пробах крови методом
высокоэффективной жидкостной хромаго1рафии: МУК 4.1.2116—06.........174
МУК 4.1.2109—06
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в c(j>cpc защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
9 августа 2006 г.
Дата введения: 1 сентября 2006 г.
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение массовой концентрации 2-хлорфенола в биосредах (моча) газохроматографическим методом
Методические указания _МУК 4.1.2109—06_
1. Область применения
Методические указания по определению концентраций химических веществ в биологических средах предназначены для использования Федеральной службой по надзору в с(|>срс защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.
Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием органических соединений в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.
Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «ГСОЕИ. Методики выполнения измерений». ГОСТ Р 1.5-92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов». Методика анализа обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации 2-хлорфенола в моче в диапазоне концентраций: от 0.05 до 1.80 мкг/см3 с погрешностью 23.0 % при доверительной вероятности 0.95.
2-Хлорфенол Молекулярная масса 128.56
С1С*Н,ОН
85
2-Хлорфснол - бесцветная жидкость с резким неприятным запахом. Температура кипения - 175 °С. Кумулятивные свойства выражены умеренно. Вызывает нарушения функции почек и печени, при периодическом попадании на кожу - новообразования |1).
Методика основана на предварительном концентрировании анализируемого соединения из биологического материала (моча) экстракцией бутилацетатом и последующем газохроматографическом анализе экстракта.
Выполнение измерений массовой концентрации 2-хлорфснола выполняют методом газовой хроматографии с использованием детектора электронного захвата.
Определению нс мешают хлороформ, тстрахлорметан и другие хлорфенолы (температура кипения 3-хлорфснола - 214 °С) в количествах. нс превышающих верхнюю границу измеряемой концентрации 2-хлорфенола.
Длительность анализа одной пробы мочи, включая экстракцию -40 мин.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства,
При выполнении измерений применяют следующие средства измерений. вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химрсактивов с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками.
Хроматограф газовый с детектором электронного захвата
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические Разновесы Г2-210 Секундомер «Агат»
Микрошприцы МШ-10 Линейка измерительная Лупа измерительная
Колбы мерные, вместимостью 25. 50. 100 и
1 000 см3
Пипетки мерные 5. 10 см3
МУК 4.1.2109—06
3.2. Вспомогите, iьн ые устройства
Хроматографическая колонка стеклянная длиной 1.5 м и внутренним диаметром 3 мм
Бидистиллятор стеклянный БС ТУ 25-11.1592—81
Редуктор кислородный ТУ 26-05-236—73
Центрифуга СМ-4. 3 ООО об./мин
Воронка делительная ГОСТ 23932-90
3.3. Материалы Азот газообразный ГОСТ 9293-74
3.-4. Реактивы 3 % ХЕ-60 на хроматонс N-cyncp фракции 0.16 0.20 мм - неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки (производство Г ермании)
2-хлорфенол, ч Натрия хлорид, хч Соляная кислота, хч Бутилацетат, ч Камфара <|)арм.
Серная кислота, осч Калия дихромат, чда Ацетон, осч
3.5. Растворы
Раствор калия дихромата. 3 %-й Раствор камфары, 20 %-й Соляная кислота раствор (1:3)
4. Требования к безопасности
4.1. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004—85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007—76.
4.2. При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях» (Утверждены М3 СССР 20.12.82) и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением» (Утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87).
87
МУК 4.1.2109—06
4.3. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.
4.4. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5. Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе и в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие метод в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности.
6. Условия измерений
6.1. При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:
• температура воздуха (20 ± 5) °С;
• атмосферное давление 630—800 мм рт. ст.;
• влажность воздуха не более 80 % при температуре 25 °С.
6.2. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, подготовка хроматографической колонки, приготовление аттестованных смесей, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка посуды
Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3 %-м растворе дихромата калия в серной кислоте (3 г дихромата калия на 100 см3 концентрированной серной кислоты), отмьггь в проточной водопроводной воде, ополоснуть бидистнллированной водой и просушить при температу ре 120 °С.
7.2. Подготовка хроматографической колонки
Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой
МУК 4.1.2109—06
проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой, устанавливают в хроматограф и. нс подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 30 cmV.mhh при температуре 250 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору. записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
7.3. Приготовление растворов и реактивов
6.3.1. Раствор соляной кислоты (1: 3). В мерный стакан объемом 100 см3. содержащий 75 см3 бидистиллированной воды, вводят 25 см3 соляной кислоты (р= 1.19). Раствор переносят в стеклянную склянку с притертой пробкой.
(у3.2. Раствор камфары 20 %-й. Растворяют 2 г кристаллической камфары в 10 см3 бутилацетата. Раствор хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой нс более 1 месяца.
6.3.3. Реагент для экстракции. К 100 см3 бутилацетата прибавляют 0.4 см3 20 %-го раствора камфары.
7.4. Приготовление аттестованных смесей
Для построения градуировочного графика собирают мочу, нс содержащую определяемого компонента, и готовят серию аттестованных растворов.
Исходный аттестованный раствор. В мерную колбу объемом 100 см3. содержащую 50 см3 мочи, вводят 2 мм3 2-хлорфснола и заполняют колбу до метки мочой. Весовое содержание определяемого вещества в исходном аттестованном растворе составляет (с учетом плотности) 25.27 мкг/см3. Срок хранения -12 ч.
7.5. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристик) устанавливают методом абсолютной калибровки. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм*) от массы 2-хлорфснола (мкг) и строится по 5 сериям рабочих аттестованных растворов. Каждую серию, состоящую их 5 рабочих аттестованных растворов, готовят в мерных колбах объемом 50 см3. В колбу объемом 50 см3, содержащую 30 см3 мочи, добавляют исходную аттестованную смесь для градуировки в соответствии с табл. 1. Затем объем в колбе доводят мочой до метки.
89
|
Таблица 1
Рабочие аттестованные растворы для установления градуировочном характеристики при определении концентрации 2-х.юрфено. ia |
|
11омер смеси для градуировки |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
2-Хлорфенол, |
|
|
|
|
|
|
объем исходного аттестованного раствора (25,27 мкг/см3), см3 |
0,1 |
0,5 |
1,0 |
2,0 |
3,5 |
|
Содержание 2-хлорфенола, мкг/см' |
0,05 |
0,25 |
0,5 |
1,0 |
1,77 |
|
Для построения градуировочной характеристики 2-хлорфеиола аттестованный раствор в объеме 50 см3 помещают в делительную воронку объемом 250 см3, добавляют 30 г высали вате ля (хлорид натрия), подкисляют раствором соляной кислоты (1 : 3) до pH 2 и приливают 5 м3 реагента для экстракции (раствор камфары в бутилацстатс). Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин. после отстаивания эфирный экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка К) мин.
В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 2 м3 каждого экстракта аттестованного раствора и анализируют в условиях: температу ра термостата колонок - 110 °С; температу ра испарителя - 170 °С: температура детектора - 250 °С: расход газа-носителя (азот) - 30 см3/мин: скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч: время удерживания 2-хлорфенола - 1 мин.
На полученной хроматограмме определяют площади пиков 2-хлор-фенола и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику . Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.
7.6. Отбор проб
Отбор проб мочи в объеме не менее 200 см3 производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике нс более 12 ч после отбора пробы.
8. Выполнение измерений
Для определения 2-хлорфенола мочу в объеме 50 см3 помещают в делительную воронку объемом 250 см3, добавляют 30 г высаливатсля (хлорид натрия), подкисляют раствором соляной кислоты (1 : 3) до pH 2
