МЕТОДИКА

ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИЙ КОФЕИНА В КОФЕ РАСТВОРИМОМ, МОЛОТОМ, ЗЕРНАХ И ЧАЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

jj&uMU mi-99

МИНСК

1996

2

СОДЕРЖАНИЕ

1.    Область применения    3

2.    Нормы погрешности измерений    3

3.    Средства измерений, вспомогательные    устройства, реактивы и 4

материалы

3.1 .Средства измерений    4

3.2.    Вспомогательные устройства    5

3.3.    Материалы и реактивы    5

4.    Метод измерения    6

5.    Требования безопасности    6

6.    Требования к квалификации оператора    6

7.    Условия выполнения измерений    6

8.    Подготовка к выполнению измерений    6

8.1.    Подготовка измерительной аппаратуры    6

8.2.    Приготовление подвижной фазы    7

8.3 Приготовление градуировочных растворов    7

8.4.    Установление градуировочной характеристики    8

8.5.    Построение градуировочного графика    9

8.5.1.    Контроль градуировочного графика    9

8.5.2.    Оперативный контроль градуировочного    графика    10

8.6.    Подготовка анализируемых образцов    10

8.6.1.    Кофе растворимый    10

8.6.2.    Кофе молотый, в зернах    10

8.6.3.    Чай    11

9.    Выполнение измерений    11

10.    Обработка результатов измерений    11

11.    Оформление результатов испытаний    13

12.    Контроль погрешности методики выполнения измерений    13

12.1. Средства контроля погрешности    методики выполнения 14

измерений

12.2.    Порядок проведения контроля сходимости    14

12.3.    Порядок проведения контроля воспроизводимости    15

12.4.    Порядок проведения контроля точности    16

Приложение 1    20

Приложение 2    23

Приложение 3    24

11

вводят в хроматограф, используя кран-дозатор с петлей на 0,02 см³.

8.6.3. Чай. Из средней пробы чая измельченного на кофемолке и просеянного через сито №5, отбирают навеску 1г, помещают в стеклянный стакан или коническую колбу из термоустойчивого стекла, добавляют 170-180 см³ горячей дистиллированной воды и кипятят на плитке в течение 5 мин с момента закипания, периодически перемешивая раствор. Сосуд для кипячения прикрывают предметным стеклом. Раствор охлаждают до комнатной температуры, смывают конденсат с предметного стекла, присоединяя его к раствору, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 200 см³ и доводят до метки водой. Раствор тщательно перемешивают в течение 1 мин и фильтруют через плотный бумажный фильтр (синяя лента). Отбирают 2 см³ фильтрата , переносят в мерную колбу на 100 см³ и доводят до метки водой. Раствор перемешивают и отбирают микрошприцем 0,025-0,ОЗсм³ раствора и вводят в хроматограф, используя кран-дозатор с петлей на 0,02 см³.

9. Выполнение измерений

проводится на жидкостном

0,02см³ 0,8-1,0м л/мин

ODS (С₁₈),

274 нм

Анализ полученных экстрактов кофе хроматографе. Условия хроматографирования: Объем вводимой пробы Скорость потока элюента Колонка хроматографическая Hypersil размером4,0x125мм; зернение частиц 5 мкм Длина волны поглощения

Ширина полосы поглощения    4-28 нм

Время удерживания кофеина    4-5 мин

Определяют площади пиков, используя компьютерную систему обработки сигналов. Проводят анализ двух параллельных проб. Каждую пробу хроматографируют не менее двух раз.

10. Обработка результатов измерений

Массовую долю кофеина (X) в чае, кофе молотом, растворимом и

12

зернах рассчитывают в процентах в пересчете на сухое вещество по формуле :

_х _ С ■ Г, ■ У₂ ■ 100    100

у_п-м ' m~w

С - концентрация кофеина, найденная по градуировочному графику,

мкг/см³

V, - объем исходного экстракта, см³ (200см³);

V₂ - объем конечного экстракта, см³ (100см³);

100 -коэффициент для пересчета процентного содержания кофеина в образце;

V_a - объем аликвоты исходного раствора, см³ (2см³);

М - масса навески, мкг;

W - массовая доля влаги в анализируемом образце, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое значение концентраций кофеина двух параллельных проб. Вычисления проводят до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.

Гарантированный результат анализа представляют в следующем виде:

С = С±АМВИ, где

С = Ц±£г-

2

С| — концентрация кофеина в первой пробе;

С₂ — концентрация кофеина во второй пробе;

С - средняя концентрация, кофеина, найденная по результатам анализов двух параллельных проб.

Допустимые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать:

-для кофе растворимого - 14,4%

-для кофе молотого, в зернах - 17,7%

-для чая - 15,3%

Пределы возможных значений систематической составляющей погрешности измерений при установленных методикой измерений влияющих

13

факторов составляет:

-для кофе растворимого - 14,0%

-для кофе молотого, в зернах - 14,6%

-для чая - 15,3%

Допустимые расхождения между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях при доверительной вероятности р=0,95 не должны превышать следующих величин по отношению к среднему арифметическому значению:

-для кофе растворимого - 34%

-для кофе молотого, в зернах - 38%

-для чая - 40%

11.    Оформление результатов испытаний

Результаты измерений оформляются по форме, установленной действующей в лаборатории системой регистрации данных.

Результаты должны включать следующую информацию:

-наименование (шифр) пробы;

-дату проведения измерений;

-результаты измерений, включая все необходимые данные и промежуточные расчеты;

-данные о построении или контроле градуировочного графика; -результаты параллельных определений;

-окончательный результат измерений;

-значение приписанной или расчитанной погрешности измерения или ее составляющих;

-фамилию оператора.

12.    Контроль погрешности методики выполнения измерений

Контроль погрешности МВИ осуществляется с целью оперативной информации о качестве измерений рабочих проб и для принятия оперативных мер, предупреждающих ухудшение точности результатов.

В процессе внутреннего оперативного контроля определяются

14

показатели сходимости, воспроизводимости и точности.

12.1.    Средства контроля погрешности методики выполнения измерений

В качестве средств контроля в процессе определения показателей качества результатов анализа применяются:

-рабочие пробы - для определения показателей сходимости и воспроизводимости;

-рабочие пробы с добавкой - при определении показателей точности.

Результаты контроля воспроизводимости и точности фиксируются в соответствии с установленной системой регистрации контроля правильности выполнения измерений, результаты контроля сходимости выполняются для каждого анализа и фиксируются в рабочих журналах исполнителей.

12.2.    Порядок проведения контроля сходимости

Контроль сходимости результатов измерений проводится при получении каждого результата измерения, предусматривающего проведение параллельных определений.

Контроль сходимости заключается в сравнении расхождений результатов параллельных определений, полученных при анализе рабочей пробы, с нормативом сходимости - d.

Норматив сходимости d рассчитывается по формуле:

d = Q(p,n)S_xi,

где

d- норматив сходимости;

Q(p,n) — коэффициент, определяемый по статистическим таблицам, исходя из заданной доверительной вероятности Р и числа параллельных определений при анализе рабочей пробы в соответствии с методикой. Для п=2 и Р=0,95 - Q(p,n)=2,77;

S_xi- CKO результата единичного определения.

Сходимость результатов параллельных определений рассчитывается по формуле:

15

d_k=X_im^-X_nm n,

где

d_k -фактическая сходимость параллельных определений;

-Х_{г тах} -максимальный результат из «и» параллельных измерений;

Xi _тт -минимальный результат из «п» параллельных измерений;

Если d_k < d, то сходимость результатов параллельных определений признается удовлетворительной, и по ним может быть рассчитан результат измерений при рабочих измерениях или контрольном измерении.

Если d_k>d, то рабочая или контрольная проба подлежит повторному измерению. При повторном превышении указанного норматива необходимо выяснить причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устранить их.

12.3. Порядок проведения контроля воспроизводимости

Контроль воспроизводимости результатов измерений проводится не реже 2-3 раз в месяц с использованием рабочих проб. Контроль воспроизводимости обязателен при смене партии реактивов, посуды, после ремонта оборудования, существенных изменений условий выполнения измерений.

Контроль воспроизводимости проводится путем сравнения результата контрольной процедуры D_k, равного расхождению двух результатов измерений - первичного и повторного - содержания кофеина в одной и той же рабочей пробе с нормативом воспроизводимости D.

Первичный и повторный результат измерений должен быть получен в разных условиях, например, двумя операторами в один день или одним оператором в два последующих дня и т.д.

D_k рассчитывается по формуле:

D_k -X,-Хг,

где

Х\ - первичный результат измерения рабочей пробы;

X2 - повторный результат измерения рабочей пробы.

16

Величины Ii и 1з должны быть получены с соблюдением условий сходимости.

Норматив воспроизводимости D рассчитывается по формуле:

D = Q(p,m)S-,

где

D —норматив воспроизводимости;

Q(p,m) - коэффициент, определяемый по статистическим таблицам, исходя из заданной доверительной вероятности Р и числа повторных измерений рабочей пробы т. Для т=2 и Р=0,95 - Q(p,m)=2,77;

Sy~ CKO результата измерений при двух параллельных определениях.

Если D_k<D, то воспроизводимость контрольных измерений признается удовлетворительной. В этом случае воспроизводимость результатов измерений рабочих проб, полученных в условиях, соответствующих требованиям МВИ, признается удовлетворительной.

В случае превышения норматива воспроизводимости, когда D_k>D, контроль повторяют. При повторном превышении указанного норматива должны быть выяснены и устранены причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля воспроизводимости.

12.4. Порядок проведения контроля точности

Контроль точности результатов измерений осуществляется с использованием метода добавок. Образцами для контроля точности являются рабочие пробы и эти же пробы с добавкой кофеина.

К пробе с добавкой предъявляются следующие требования:

-добавка должна вводиться в пробу на самой ранней стадии измерений в целях проведения пробы с добавкой через все последующие стадии пробоподготовки и анализа;

Примечание:    в целях уменьшения погрешности за счет

неоднородности распределения вводимой добавки целесообразно рассчитанное количество добавки вносить непосредственно в подготовленную навеску пробы;

17

-количество вводимой добавки должно составлять 50-150% от установленного содержания кофеина в пробе;

-проба с введенной добавкой не должна выходить за верхнюю границу определяемых содержаний кофеина согласно МВИ.

В качестве добавки используются водные растворы кофеина необходимой концентрации. Расчет необходимой концентрации производится исходя из того, что в навеску должно вносится около 10 см³ раствора для получения пробы с добавкой в диапазоне 50-150% ранее установленного содержания кофеина в пробе.

После внесения добавки проба выдерживается 5-10 мин., а затем анализируется в соответствии с МВИ.

Контроль точности проводится по результатам измерений пробы до введения добавки (Х„_р) и после введения добавки кофеина (Х_пр__доб) концентрацией Сдоб, в исходную пробу. Разница (К_к) между найденной (Х_доб⁼Х_пр.добгХ_пр.) и введенной С_доб_ концентрацией добавки не должна превышать по абсолютной величине значения норматива точности К.

Значения К_к и К рассчитываются по формулам:

К_к    доб~Хпр.~Сдоб.\->

где

К_к - рассчитанный параметр точности;

Х_пр,доб. -содержание кофеина в пробе с добавкой;

Х_пр -содержание кофеина в исходной пробе;

Сдоб, -концентрация введенной добавки.

K’-l ,41А - для доверительной вероятности В=0,95;

/<М,19Л -для доверительной вероятности Р=0,90,

где

Д - погрешность МВИ.

В том случае, когда погрешности определения кофеина в исходной пробе и пробе с добавкой различаются более чем на 30%, для расчета норматива точности используется следующая формула:

18

К = 0,84-J(&X_np)² I (A^_r,,._;S    -    для    доверительной    вероятности /-0.90;

- для доверительной вероятности Р=0,95,

где

Л" ^норматив точности;

АХ_пр, -погрешность определения содержания кофеина в исходной

пробе;

АХ_прдо6, -погрешность определения содержания кофеина в пробе с добавкой.

Если для расчета используются относительные значения погрешностей А_отн_, АХ_пр._отн., АХ_{прдоРотн}, то относительное значение К_{к оти}, рассчитывается по формуле:

тт.    _дпб

где

К,.- —абсолютное значение К_к;

С_доб —значение добавки введенной в исходную пробу.

Точность контрольных измерений, а также точность результатов измерений рабочих проб, выполненных в условиях соблюдения требований МВИ, признается удовлетворительной, если |/С_к| <К.

Если [./'Г_к | > К, то точность контрольных измерений признается неудовлетворительной и процедура контроля повторяется с использованием другой рабочей пробы. При повторном получении неудовлетворительных результатов контроля точности, выясняют и устраняют причины, приводящие к неудовлетворительному контролю.

19

Методика разработана в Республиканском научно-практическом центре по экспертной оценке качества и безопасности продуктов питания Министерства Здравоохранения РБ.

- Шуляковская О.В. Зубкевич Л.В. Белышева Л.Л. С кор байте Е.А.

Разработчики Завлаб., к.х.н.

Ст.н.с.

Н.с. техник

20

Приложение 1

(обязательное)

Порядок определения параметров градуировочной характеристики и построения градуировочного графика

Зависимость площади хроматографического пика от концентрации кофеина характерезуется прямой Y = a + bX,    (1)

где

У- экспериментальные данные.(площадь хроматографического пика);

X — концентрация кофеина в растворе; а и Ь — коэффициенты регрессии.

Коэффициенты регрессии расчитываются по формулам:

t^x>²£^Y'-i^x'i^xfi

_{а =} Л-<=!-е!-Щ-    (2)

i=i    (=i

’‘i.xji-i.x.i.r,

b =    —    ,    (3)

j=i    (=i

где

n - число эталонов в серии;

X_t - концентрация кофеина в /'-том эталоне;

Yi - значение площади хроматографического пика для /'-того эталона. Значения у; и X,. заносятся в таблицу:

X, Yi XiYi У 1 выч Yi-YBbI4 (Yi-YBb[4)2 Y0Ki Yi-Y0K (Y,-Y0K)2

Вычисляются значения сумм:

±х,; ±Y,; 2г²; £х,у,; £<г,-г„,У; £« -П.Э;

[=1    /=1 /=1    1=1    [=]    (=1

1. Область применения

Методика предназначена для определения концентраций кофеина в кофе растворимом, молотом, в зернах и чае.

Кофеин относится к классу пуриновых алкалоидов, содержится в кофе и чае в количестве до 5%. По внешнему виду представляет собой белые шелковистые кристаллы или белый кристаллический порошок, без запаха, горького вкуса. Химическое название 1,3,7-метил ксантин. Брутто формула C₈Hi₀N4O₂. Молекулярная масса 194,19 г/моль. Температура плавления 234-237°С. Хорошо растворим в горячей воде, хлороформе. Трудно растворим в спирте. При нагревании возгоняется. Образует двойные соли с органическими кислотами.

Метод определения кофеина в кофе и чае основан на извлечении препарата водой с последующим анализом аликвотной части водного раствора методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в режиме изоКратического разделения на колонке с обращенной фазой (С₁₈) с использованием спектрофотометрического или диодно-матричного детектора.

Нижний предел измерения составляет 0,004 мкг кофеина в анализируемом объеме пробы (0,02см³). Интервал определяемых концентраций составляет 0,1-10%. Присутствующие в экстракте коэкстрактивные вещества определению не мешают.

Время одного определения не превышает 40 мин, включая подготовку образца.

2. Нормы погрешности измерений

При доверительной вероятности р=0,95 относительная суммарная погрешность измерения, границы неисключенных систематических погрешностей, доверительные границы случайной погрешности МВИ в диапазоне определяемых концентраций 0,1-10% приведены в табл.1.

4

Таблица 1.

Кофеинсодержащий продукт Доверительные границы случайной погрешности МВИ, % Неисключенная систематическая составляющая погрешности МВИ, % Относительная суммарная погрешность МВИ, % Кофе растворимый 8,8 14,0 17 Кофе молотый, в зернах 10,7 14,6 19 Чай 11,5 15,3 20

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

ЗЛ.Средства измерений

Жидкостной хроматограф для высокоэффективной жидкостной хроматографии фирмы «Beckman» со спектрофотометрическим или диодно-матричным детектором

Весы аналитические ВЛР-200    ГОСТ 24104-88Е

Микрошприцы для жидкостной хроматографии на

0,05см фирмы Hamilton Кран дозатор с петлей на 0,02см³

Колбы мерные

Стакан химический Пипетки градуированные

6

4.    Метод измерения

Для определения массовой доли кофеина в кофе используется метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, основанный на измерении оптической плотности водного экстракта кофе с использованием спектрофотометрического или диодно-матричного детектора при длине волны 274 нм и ширине оптической полосы 12 нм после изо критического элюирования экстракта на хроматографической колонке ODS (С₁₈).

5.    Требования безопасности

Анализ по данной методике должен выполняться согласно инструкции "Основные правила безопасности работы в химических лабораториях" - М.: Химия, 1979 г и инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа.

6.    Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений могут быть допущены лица, имеющие высшее или среднее специальное образование, изучившие требования безопасности и настоящую методику , прошедшие подготовку для работы в качестве оператора жидкостного хроматографа.

7.    Условия выполнения измерений

При выполнении измерений в лаборатории согласно ГОСТ 15150-69 должны быть соблюдены следующие условия:

-    температура воздуха - 20±5°С;

-    атмосферное давление 84,0-106,7 кПа (630-800 мм рт.ст.);

-    влажность воздуха не более 80% при температуре 25°С;

-    напряжение питающей сети - 220±22 В;

-    частота переменного тока - 50±1 Гц.

8.    Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений должны быть проведены следующие работы: подготовка измерительной аппаратуры, приготовление растворов, построение градуировочного графика, отбор и подготовка проб к анализу.

8.1. Подготовка измерительной аппаратуры

Включают хроматограф согласно инструкции по эксплуатации. Устанавливают рабочие режимы для блока насосов и детектора (см. п.8.4 7

МВИ). Проводят стабилизацию работы хроматографа на рабочих режимах в течение 30-40 мин. Условием стабильности является дрейф нулевого сигнала (не превышающий 1-2% от шкалы регистрации сигнала 0,1-0,05 единиц оптической плотности).

8.2. Приготовление подвижной фазы

Приготовление буферного раствора:    взвешивают    2,36г±0,0001г

уксуснокислого натрия, растворяют в 800см³±50см³ воды, используя стакан химический объемом 1000см³. Измеряют pH раствора с использованием иономера. Устанавливают pH 4,3-4,4 используя раствор уксусной кислоты 1:10. Электроды иономера обмывают небольшим количеством воды. Полученный раствор количественно, обмывая стенки стакана, переносят в мерную колбу объемом 1000см³ и доводят до метки водой. Полученный раствор имеет концентрацию 0,02М.

Буферный раствор используют для приготовления подвижной фазы (системы элюентов), состоящей из 0,02 М раствора ацетата натрия (pH 4,3-4,4) и ацетонитрила в соотношении 85:15 по объему.

Ацетонитрил, пригодный для использования в качестве элюента для жидкостной хроматографии, получают из ацетонитрила марки «ч». Для этого в перегонную колбу вместимостью 2 дм³ помещают 1,5 дм³ ацетонитрила марки «ч» и 30 г КМГ1О4, кипятят с обратным холодильником 1 час и перегоняют с дефлегматором, отбирая фракции по 200 см³. Первую фракцию отбрасывают, остальные фракции собирают. Перегонку прекращают когда в колбе останется 200 -150 см³ раствора. Ацетонитрил для HPLC используют без предварительной подготовки.

8.3 Приготовление градуировочных растворов

Приготовление основного стандартного раствора кофеина. Готовят основной стандартный раствор кофеина концентрацией 2000 мкг/см^э, взвешивая 200 мг кофеина с точностью ±0,15мг и растворяют в мерной колбе на 100 см³ водой.

Приготовление рабочего стандартного раствора кофеина. Из основного стандартного раствора кофеина готовят рабочий стандартный раствор кофеина концентрацией 200 мкг/см^э. Для этого отбирают 10 см³ основного стандартного раствора, переносят в мерную колбу наЮО см³ и доводят водой до метки.

Приготовление градуировочных растворов кофеина. Градуировочные растворы кофеина готовят по схеме, представленной в табл. 1.

Таблица 1.

№ градуировочного раствора	Концентрация кофеина в градуировочном растворе, мкг/см3	Аликвотная часть рабочего стандартного раствора кофеина, мкг/см3
1	0,2	ОД
2	0,5	0,25
3	1,0	0,5
4	2,0	1,0
5	4,0	2,0
6	6,0	3,0
7	8,0	4,0
8	10,0	5,0

Аликвотные части рабочего стандартного раствора кофеина переносят в мерные колбы объемом 100см³ и доводят водой до метки. Каждый градуировочный раствор готовится и хроматографируется не менее трех раз с интервалом в 1 день.

8.4. Установление градуировочной характеристики

Каждый градуировочный раствор хроматографируют по два раза, начиная с самой низкой концентрации, принимая за результат измерения среднее арифметическое двух параллельных измерений. Условия хроматографирования при анализе кофеина:

Объем вводимой пробы    0,02см³

Скорость потока элюента    0,8-1,0мл/мин

Колонка хроматографическая Hypersil ODS (Cig), размером4,0x125мм; зернение частиц 5 мкм

Длина волны поглощения    274 нм

Ширина полосы поглощения    4-28 нм

Время удерживания кофеина    4-5 мин

9

8.5. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика измеряют площади пиков, соответствующие концентрации кофеина в градуировочных растворах. Полученные данные заносят в таблицу и рассчитывают коэффициенты регрессии а и b прямой Т = а + ЬХ методом наименьших квадратов (приложение 1).

Градуировочный график строится с учетом вычисленных значений уравнения Y=a + bX, где

Y- площадь пика кофеина;

X- концентрация кофеина в градуировочном растворе;

а и Ъ- коэффициенты регрессии.

Погрешность градуировочного графика не должна превышать 13%.

8.5.1. Контроль градуировочного графика

Контроль градуировочного графика осуществляется по градуировочным растворам кофеина. Для контроля должны применяться растворы с концентрацией кофеина, входящей в диапазон измерений, но не повторяющие по значениям концентрации, по которым рассчитывались параметры градуировочной прямой. Допустимые расхождения между заданными и установленными по графику значениями концентраций используемых для контроля градуировочных растворов не должны превышать 13%. В противном случае график подлежит повторной перепроверке и, при необходимости, новому расчету параметров градуировочной прямой. График подлежит обязательной проверке при замене партии реактивов и посуды, после ремонта оборудования, но не реже одного раза в месяц.

ю

8.5.2. Оперативный контроль градуировочного графика

Для оперативного контроля градуировочного графика перед началом измерений используется 1-2 градуировочных раствора из диапазона измерений кофеина. Полученные при хроматографировании значения Y не должны отклоняться от градуировочной прямой более чем на величину доверительной границы случайной составляющей погрешности градуировочного графика Е-8,3%.

В противном случае график подлежит повторной перепроверке по

п.8.5.1.

8.6. Подготовка анализируемых образцов

8.6.1.    Кофе растворимый. Навеску средней пробы 2 г помещают в мерную колбу вместимостью 200 см³, растворяют в 170-180 см³ Дистиллированной воды и доводят раствор до метки. Затем раствор тщательно перемешивают в течение 1 мин., отбирают 2 см³ полученного раствора, переносят в мерную колбу на 100 см³ и доводят до метки водой. Раствор перемешивают и отбирают микрошприцем 0,025-0,03см³ раствора и вводят в хроматограф, используя кран-дозатор с петлей на 0,02 см³.

8.6.2.    Кофе молотый, в зернах. Среднюю навеску кофе 2г, отобранную из предварительно измельченного на кофемолке и просеянного через сито №5 образца, помещают в стеклянный стакан или коническую колбу из термоустойчивого стекла, добавляют 170-180 см горячей дистиллированной воды и кипятят на плитке в течение 5 мин с момента закипания, периодически перемешивая раствор. Сосуд для кипячения прикрывают предметным стеклом. Раствор охлаждают до комнатной температуры, смывают конденсат с предметного стекла, присоединяя его к раствору, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 200 см³ и доводят до метки водой. Раствор тщательно перемешивают в течение 1 мин и фильтруют через плотный бумажный фильтр (синяя лента). Отбирают 2 см³ фильтрата переносят в мерную колбу на 100 см³ и доводят до метки водой. Раствор перемешивают и отбирают микрошприцем 0,025-0,03см³ раствора и