ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ
НАЦИОНАЛЬНЫЙ
СТАНДАРТ
РОССИЙСКОЙ
ФЕДЕРАЦИИ
МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫИммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2010
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом мясной промышленности им. В М. Горбатова Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 226 «Мясо и мясная продукция»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 11 декабря 2009 г. № 748-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
© Стандартинформ. 2010
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
II
3 Сущность метода...........................
ГОСТ Р 53514-2009 |
|
Содержание |
1 Область применения..........
2 Нормативные ссылки.......... |
..................................1
..................................1 |
|
4 Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода
5 Отбор проб..............................
6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы. . . .
7 Подготовка к выполнению измерений................
8 Проведение измерений.......................
9 Обработка результатов.......................
10 Требования безопасности.....................
Библиография ..............................
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ
Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка
Meat and meat products. Immune Method (or determination of animal (pork. beef, mutton) proteins mass fraction
Дата введения — 2010—07—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные полуфабрикаты и устанавливает иммунопреципитационный метод опредепения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка.
Стандарт предназначен для идентификации свиного, говяжьего или бараньего белков в составе мясного сырья и мясных продуктов, не подвергнутых тепловой обработке.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 50444-92 Приборы, аппараты и оборудование медицинские. Общие технические условия
ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 9656-75 Реактивы. Кислота борная. Технические условия
ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N, N. N\ N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия
ГОСТ 20903-75 Кюветы прямоугольные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры. Технические требования
ГОСТ 25011-81 Мясо и мясные продукты. Методы определения белка
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия
Издание официальное
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным о текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стагщартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Сущность метода
Метод основан на проявлении особых свойств защитных систем высших позвоночных — вырабатывать новые сывороточные белки (антитела) при введении в организм посторонних для него веществ (антигенов). Используют диагностическую преципитирующую сыворотку к конкретному виду животного белка, вызывающую образование нерастворимого комплекса антиген-антитело.
4 Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода
4.1 Диапазон измерений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка от 1 % до 85 %.
4.2 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.
Таблица 1 |
Наименование показателя |
Диапазон измерений массовой доли. % |
Г раницы относительной погрешности
±6,% |
Предел
повторяемости
Л>т. » |
Продол
воспроизводимости
R, |
Массовая доля животного белка. % |
От 1 до 85 включ. |
30 |
24 |
38 |
|
5 Отбор проб
5.1 Отбор проб — по ГОСТ Р 51447.
5.2 Пробу хранят в холодильнике при температуре от 0 °С до 5 °С до полного завершения испытания в течение суток.
Допускается хранение проб при температуре от минус 20 °С до минус 10 вС в герметичной упаковке в течение одной недели с даты отбора проб на исследование.
6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Спектрофотометр СФ-103 типа «Аквилон», обеспечивающий измерения в диапазоне длин волн от 200 до 900 нм по (1].
Кюветы кварцевые толщиной 1 см по ГОСТ 20903.
Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ; 0.1 мг.
Микроизмельчитель тканей РТ-2 по (2] или гомогенизатор с частотой вращения 8000 — 24000 об/мин.
Центрифуга с регулируемой скоростью вращения до 8000 об/мин.
Пробирки центрифужные по ГОСТ 25336.
Аппарат встряхивающий.
Холодильник бытовой по ГОСТ 26678.
Дозатор липеточный переменного объема по ГОСТ Р 50444 и (3].
Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Воронки стеклянные ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336.
ГОСТ Р 53514-2009
Диагностическая сыворотка по (4J.
Свинина, говядина, баранина с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 18 % по ГОСТ 25011 для использования в качестве контрольного образца.
Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85 % по ГОСТ 25011.
Кислота борная по ГОСТ 9656, ч.
2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (ТРИС) с массовой долей основного вещества 99,9 %.
Соль динатриевая этилендиамин-N. N. N\ N'-тетрауксусной кислоты (трилон Б) по ГОСТ 10652.
чщ.а.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, оборудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.
7 Подготовка к выполнению измерений
7.1 Приготовление растворов
7.1.1 Приготовление концентрированного буферного раствора
Навеску 2-амино-2(гидроксиметил)-1.3-пропандиола (ТРИС) массой 15,0 г и навеску трилона Б массой 1.5 г с помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250 см1 и при перемешивании добавляют 100 — 150 см1 дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добавляют постепенно 5.5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Раствор тщательно перемешивают до растворения осадка.
7.1.2 Приготовление рабочего буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 250 см1 с помощью мерного цилиндра вносят 50 см1 концентрированного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и получают рабочий буферный раствор, содержащий в 1 см1 0,012 г ТРИС. 0,001 г трилона Б и 0.0044 г борной кислоты.
7.2 Приготовление испытуемого экстракта пробы
7.2.1 Навеску пробы массой 5.0 г перемешивают с 5 см1 рабочего буферного раствора в гомогенизаторе в течение 5 мин и выдерживают смесь 1 ч при температуре от 5 °С до 8 °С. периодически встряхивая в течение 5 мин.
7.2.2 Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют верхний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка.
7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей для построения градуировочного графика
Навески по 25,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400.0 г и 100,0 г соевого изолята и навески по 100,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100. 30.15 и 3,5 г соевого изолята.
Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 мин до образования гомогенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси путем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая доля животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего белка равна 1.3 %; 5.0 %; 17,5 %; 41.4 %; 58.5 % и 86,1 %.
Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по ГОСТ 25011.
8 Проведение измерений
8.1 Измерение испытуемых растворов
8.1.1 20 мм1 экстракта пробы смешивают с 400 мм1 рабочего буферного раствора, измеряют фоновое поглощение на спектрофотометре при >. = 405 нм (контроль), затем добавляют 20 мм1 диагностической сыворотки, содержащей антитела, к определяемому виду белка, проводят реакцию осаждения при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического белка измеряют оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см.
8.1.2 Для подтверждения действия диагностической преципитирующей сыворотки на животный белок параллельно проводят анализ контрольного образца, не содержащего определяемый белок.
8.1.3 Для каждого испытуемого раствора проводят два измерения, по результатам которых с помощью градуировочного графика находят средние значения массовой концентрации животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в этих растворах.
8.2 Построение градуировочного графика
Градуировочный график строят по результатам двукратного определения в соответствии с 8.1.1 массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в двухкомпонентных модельных мясорастительных смесях, содержащих животный белок и добавки растительного соевого белка, соответственно в таблицах 2—4.
Таблица 2 |
Оптическая плотность среды (0405) при 405 нм |
0.070 |
0.075 |
0.100 |
0.158 |
0.200 |
0.260 |
Массовая доля свиного белка в образце С. % от общего белка |
1.3 |
5.0 |
17.5 |
41.4 |
58.5 |
86.1 |
|
Таблица 3 |
Оптическая плотность среды (0405) при 405 им |
0.065 |
0.085 |
0.110 |
0.135 |
0.155 |
0.175 |
0.200 |
0.225 |
0.250 |
0.275 |
Массовая доля говяжьего белка в образце С. % от общего белка |
1 |
10 |
20 |
30 |
40 |
50 |
60 |
70 |
80 |
90 |
|
Таблица 4 |
Оптическая плотность среды (0405) При 405 нм |
0.060 |
0.090 |
0.115 |
0.130 |
0.160 |
0,170 |
0.190 |
0.230 |
0.260 |
0.280 |
Массовая доля бараньего белка в образце С. % от общего белка |
11 |
110 |
220 |
330 |
440 |
550 |
660 |
770 |
880 |
990 |
|
9 Обработка результатов
9.1 Массовую долю животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка бж, %, относительно массовой доли общего белка, вычисляют по формуле
6Ж = — 100, (1)
где С — среднеарифметическое значение массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в испытуемой пробе. %;
6, — массовая доля общего белка в анализируемом образце, определенная методом Кьельдаля, %.
9.2 За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое из двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:
1(2|С, - С2|У(С, + С2)] • 100 iron,. (2)
где С, и С2 — результаты параллельных определений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка, определенные по градуировочному графику. %; готм — предел повторяемости, приведенный в таблице 1.
Результат вычислений округляют до целого числа.
4
10 Требования безопасности
10.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
10.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004. и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
10.3 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.
5
[1) ТУ 4434-010-18294344—2002
[2) ТУ 64-1-1505—79
[3] ТУ 64-1-3329—81
[4] ТУ 42 КВС 13—74
Библиография
Спектрофотометры СФ-101. СФ-103 Микроизмельчитель тканей РТ-2 Доза юры пилеточные
Сыворотка, лреципитирующая белки сыворотки крови свиньи, мелкою рогатого скота, крупного рогатою скота, раавор для диагностических целей (per. № ФСР 2007/00346 от 11.07.07)
УДК 637.5.045:633.34:537.3:006.354 ОКС 67.120.10 Н19
Ключевые слова: стандарт, мясо, мясные продукты, иммунопреципитационный метод, животный белок, свиной белок, говяжий белок, бараний белок, соевый изолят, лреципитирующая сыворотка, диагностическая сыворотка
7
1