ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ
НАЦИОНАЛЬНЫЙ
СТАНДАРТ
РОССИЙСКОЙ
ФЕДЕРАЦИИ
ПРЕМИКСЫМетод определения содержания витамина К3
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2009
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0 — 2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы»
3 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 8 декабря 2008 г. № 364-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены наспюящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
© Стандартинформ. 2009
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
II
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРЕМИКСЫ
Метод определения содержания витамина К3
Premixes.
Method for determination of vitamin K3
Дата введения — 2010—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на премиксы и устанавливает фотометрический метод определения витамина К3.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ Р 51419-99 (ИСО 6498—98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб
ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 1942-86 1,2-Дихлорэтан технический. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Издание официальное
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Диапазоны измерений содержания витамина К3 и метрологические характеристики метода
Диапазоны измерений содержания витамина К3 и значения показателей повторяемости, воспроизводимости и точности при вероятности Р= 0.95 приведены в таблице 1.
Таблица 1 |
Диапазон измерений, г/т |
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратичное отклонение повторяемости) <*„ % |
Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратичное отклонение воспроизводимости) о#. % |
Показатель точности (границы относительной ГЧХрСЦ.нОСТИ) i 6. % |
От 0до 100 8ХЛЮЧ. |
4.8 |
7.1 |
14 |
Св. 100 до 500 » |
2.9 |
5.1 |
10 |
» 500 »1000 » |
2.7 |
4.9 |
9.6 |
|
4 Требования техники безопасности
4.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018 и электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.
4.2 Помещение, в котором проводится выполнение измерений, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу с реактивами необходимо проводить в вытяжном шкафу.
4.3 При работе с концентрированными кислотами и щелочами необходимо использовать резиновые перчатки.
5 Отбор и подготовка проб к выполнению анализа
5.1 Отбор проб — поГОСТ 13496.0.
Допускается отбирать пробы премиксов, упакованных в бумажные мешки, мешочным щупом с последующим заклеиванием отверстия.
5.2 Подготовка пробы канализу — по ГОСТ Р 51419.
6 Определение содержания витамина К3
Сущность метода заключается в извлечении витамина К3 из исследуемой пробы этиловым спиртом. реэкстракции 1.2-Дихлорэтаном и фотометрировании продукта цветной реакции его с (2.4-Динитрофенил )-гидразином при длине волны 635 нм.
6.1 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более г 0.0001 г.
Фотоэлектроколориметр с рабочим спектральным диапазоном от 315 до 980 нм с основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1 % или спектрофотометр типа СФ.
Аппарат для встряхивания жидкости типа АВУ-1.
Центрифуга лабораторная ЦЭ-2 с числом оборотов 3000 об/мин.
Баня водяная с регулятором нагрева.
ГОСТ Р 53027-2008
Колбы конические Км-2-(250)-(34.40) ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1(2)-2-25(100) по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 2(3)-1(2)-2-0.5(1.0:2.0:5.0:10:25) по ГОСТ 29227.
Пипетки с одной меткой 1(2)-2-2(10,20.25,50) по ГОСТ 29169.
Цилиндры 1 (3)-50( 100) по ГОСТ 1770.
Воронки лабораторные В-36(56.75>*50(80.110) ХС по ГОСТ 25336.
Воронки делительные ВД-1-250 ХС по ГОСТ 25336.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 или фильтры «красная лента» по техническому документу И].
Аммиак водный по ГОСТ 3760.
(2.4-Динитрофенил)-гиДразин по техническому документу (2).
Спирт этиловый по ГОСТ Р 51652.
Кислота соляная по ГОСТ 3118.
Витамин К3 менадион (2-метил-1,4-нафтохинон) фирмы Supelko
1,2-Дихлорэтан по ГОСТ 1942.
Натрий углекислый по ГОСТ 83. раствор с массовой долей углекислого натрия 10 %.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Примечания
1 Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метроло-тическими и техническими характеристиками, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.
2 Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
6.2 Подготовка к выполнению анализа
6.2.1 Приготовление раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина
80 мг (2.4-Динитрофенил) - гидразина, взвешенногос погрешностью не более г 0.01 мг. помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют при нагревании до 70 °С на водяной бане в 80 см3 этилового спирта, охлаждают до комнатной температуры, добавляют 2 см3 соляной кислоты и доводят содержимое в колбе до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают.
6.2.2 Приготовление раствора этилового спирта с массовой долей 40 %
В стеклянную емкость вносят 40 см3 этилового спирта, приливают 56 см3 дистиллированной воды, перемешивают.
6.2.3 Приготовление стандартного раствора витамина К3
Навеску витамина К3 массой 10 мг. взвешенную с погрешностью не более г 0,1 мг. переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, приливают до метки этиловый спирт с массовой долей 40 % и тщательно перемешивают.
Затем 10 см3 полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки этиловым спиртом с массовой долей 40 % и перемешивают.
25 см3 полученного раствора отбирают в делительную воронку вместимостью 250 см3, добавляют 50 см3 1,2-Дихлорэтана, 20 см3 раствора углекислого натрия с массовой долей 10 % и перемешивают в течение 0.5—1.0 мин. Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1,2-Дихлорэта-на (нижнюю), переносят в другую делительную воронку, добавляют 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают 0,5 мин. После перемешивания раствор снова отстаивают до фазоразделения и фазу, содержащую 1,2-Дихлорэтана, фильтруют через бумажный беззольный фильтр. Получают стандартный раствор витамина К3. в 1 см3 которого содержится 5 мкг витамина К3.
6.2.4 Построение градуированного графика
В десять мерных колб вместимостью по 25 см3 приливают стандартный раствор витамина К3 (см. 6.2.3) в объемах, указанных в таблице 2.
Таблица 2 — Растворы сравнения |
Наименование показателя |
Номера колб |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
Обьем стандартного раствора, см5 |
0.5 |
1.0 |
2.0 |
3.0 |
4.0 |
5.0 |
6.0 |
7.0 |
8.0 |
9.0 |
Масса витамина К,, мкг/25 см3 |
2.5 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
35 |
40 |
45 |
|
В каждую из десяти колб приливают по 7.5 см3 раствора (2.4-Динитрофенил)-гидразина и помещают их в водяную баню одновременно с испытуемыми и контрольным растворами (см. 6.2.5) на 2 ч при температуре (70 ± 2) °С. периодически перемешивая содержимое колб. После этого растворы в колбах охлаждают до комнатной температуры, приливают в каждую колбу по 7,5 см1 смеси этилового спирта и водного аммиака в объемном соотношении 1:1, перемешивают, доводят объемы в колбах до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают и измеряют оптические плотности растворов сравнения в порядке возрастания их концентраций на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625 ± 25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора.
По полученным данным строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значения оптической плотности растворов сравнения, на оси абсцисс — содержание витамина К3 в мкг/25 см3 раствора.
6.2.5 Приготовление контрольного раствора
5 см31.2-Дихлорэтана отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см3, приливают 7,5см3 раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина. Колбу помещают в водяную баню одновременно с испытуемыми пробами и растворами сравнения, далее проводят ту же самую обработку, что и с испытуемой пробой по 6.3.2 и 6.3.3.
6.3 Проведение анализа
6.3.1 Навеску премикса массой от 5 до 10 г. взвешенную с погрешностью не более г 0.01 г, помещают в колбу вместимостью 250 см3, приливают 100 см3 этилового спирта с массовой долей 40 %. встряхивают на аппарате в течение 15 мин и центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин. Центрифугат фильтруют для устранения случайно оставшихся взвешенных частиц. Отбирают от 5 до 25 см3 фильтрата. в зависимости от предполагаемого содержания витамина К3 в испытуемом образце премикса, в делительную воронку вместимостью 250 см3, приливают 50 см3 1.2-Дихлорэтана и 20 см3 раствора углекислого натрия с массовой долей 10 % и перемешивают в течение 0.5—1.0 мин.
Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1.2-Дихлорэтана, в полном объеме переносят в другую делительную воронку, приливают в нее 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают 0,5 мин.
После этого раствору снова дают отстояться до фазоразделения и фазу, содержащую 1,2-Дихлор-этана. фильтруют через бумажный беззольный фильтр.
6.3.2 5 см2 1,2-Дихлорэтанового экстракта испытуемых проб отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см3, приливают 7.5 см1 раствора (2,4-Динитрофенил )-гидразина (см. 6.2.1), колбу помещают в водяную баню и выдерживают ее 2 ч при температуре (70 г 2) °С. периодически перемешивая содержимое колбы.
6.3.3 По истечении указанного времени содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, приливают 7,5 см3 смеси этилового спирта и водного аммиака в объемном соотношении 1:1. доводят объем в колбе этиловым спиртом до метки, тщательно перемешивают и измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625 г 25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора (см. 6.2.5).
7 Обработка результатов анализа
7.1 Содержание витамина К3 в премиксе X. г/т, вычисляют по формуле
у _ cvv2
mvp j-106’
где с — масса витамина К3, найденная по градуировочному графику, мкг; v — объем спиртового экстракта, см3; v2 — объем 1,2-Дихлорэтана, взятый для экстракции, см1;
106 — коэффициент перевода микрограмм в граммы; т — масса навески премикса, г;
V, — объем фильтрата спиртового экстракта, взятый для экстрагирования 1.2-Дихлорэтаном, см3; v3 — объем 1,2-Дихлорэтанового экстракта, взятый для окрашивания, см3;
10® — коэффициент перевода граммов в тонны.
7.2 Вычисления выполняют с точностью до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.
ГОСТ Р 53027-2008
8 Оформление результатов анализа
При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения, начиная со взятия навески испытуемой пробы. Если расхождение между результатами параллельных определений не превышает допустимое |Х, — Х2| £ 0.01гХ (X,. Х2. X — результаты первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое значение соответственно), то среднеарифметическое значение принимают за результат анализа. 8 противном случае получают еще два результата определений и вычисляют окончательный результат анализа пробы по ГОСТ Р ИСО 5725-6 (подраздел 5.2).
Значения предела повторяемости (г) и предела воспроизводимости (R) приведены в таблице 3.
Таблица 3 |
Диапазон измерений, г/т |
Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений) г, % |
Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R. % |
От Одо 100 ВКЛЮЧ. |
13 |
20 |
Св. 100 » 500 » |
8 |
14 |
» 500 » 1000 » |
8 |
14 |
|
По полученному результату анализа и значению относительной погрешности (6) (см. таблицу 1) рассчитывают абсолютную погрешность по формуле
Д=0.016Х, (4)
где X — среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.
Результат анализа представляют в виде (X ± Д), %. Допускается представление результата в виде (X ; д„). %, где ДП — значение характеристики погрешности результатов анализа, установленное при реализации методики в конкретной лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов анализа, при условии дл £ д.
Библиография
[1) ТУ 6-09-1678—86 Филыры обеззоленные («белая, красная, синяя ленты»)
(2) ТУ 6-09-2394—77 (2.4-Динитрофенил)-гидразин 2
УДК 636.085.55:006.354 ОКС 65.120 С19 ОКСТУ9209
Ключевые слова: премиксы, витамин К3, метод, оптическая плотность, спектрофотометр, фотоэлектроколориметр
Редактор Л В Коретт/кова Технический редактор В Н Прусакова Корректор B E Нестерова Компьютерная верстка И А Налейкиной
Сдано в набор 24 12 2008 Подписано в печать 16 02 2009 Формат 60 * 84 Бумата офсетная Гарнитура Ариал Печать офсетная Услпечл. 0.93 Уч-издлО.60 Тирах 223 экз За* 82
ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995 Москва. Гранатный пер . 4 Mwwgosbnforu infc>@gosbnfo ru Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип «Московский печатник», 105062 Москва. Лялин пер . 6
1
2