ИНФОРМАЦИОННО-ИЗДАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР ГОСКОМСАНЭПИДНАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Сборник

важнейших официальных материалов по санитарным и противоэпидемическим вопросам

Всеми томах

Под общей редакцией кандидата медицинских наук В. А/. П одольского

ТОМ V

Санитарные правила и нормы (СанПиН),

гигиенические нормативы и перечень методических указаний и рекомендаций по гигиене питания

МП”Рарог" Москва 1992

283

УТВЕРЖДАЮ Заместитель глаамого государственного санитарного врача СССР А.ИЛАИЧЕМКО N427 -87 31 марта 1987г.

ДОПОЛНЕНИЕ К ДОКУМЕНТУ “ВРЕМЕННЫЕ ГИГИЕНИЧЕСКИЕ НОРМАТИВЫ И МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГИСТАМИНА В

РЫБОПРОДУКТАХ”

Необходимость дополнения документа колориметрическим методом определения гистамина обусловлена недостаточной оснащенностью лабораторий рыбоперерабатывающих предприятий спсктрофлуори-метрамн, которые требуются для осуществления контроля гистамина в рыбопродуктах флуоримстричс-ским методом. Калориметрический метод выделения, идентификации и количественного определения гистамина в рыбных продуктах прсдпалэгаст использование широко распространенных отечественных калориметров шли спектрофотометров и прост в использовании.

МЕТОД

выделения, идентификации и количественного определения гистамина в рыбопродуктах

(колориметрический метод)

1. Сущность метода

В основе калориметрического метода определения гистамина лежит измерение величины абсорбции окрашенного производного, полученного при взаимодействии гистамина с диазореактивом. Предел обнаружения метода — 10 мг/кг, относительное стандартное отклонение при определении гистамина в интервале концентраций 20—175 мг/кг изменяется от 0,08 до 0.25. Степень извлечения добавленного к образцу стандарта гистамина — 94—99%.

2. Аппаратура, материалы, реактивы

Баня водяная.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-80 с допускаемой погрешностью взвешивания ±0.001 г.

Весы лабораторные общего назначения 5-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания I кг по ГОСТ 24104-80 с допускаемой погрешностью взвешивания ±01 г.

Воронки В-100-150-ХС; В-$5-50-ХС по ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные ВД-3-250-29/32 ХС по ГОСТ 25336-82.

Калбы конические К*-1-100-29/32 ТС по ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные 1-100-2 или 2-100-2 по ГОСТ 1770-74.

Колориметр фотоэлектрический по ГОСТ 12083-78 со светофильтром с Л- 490± 10 нм или спектрофотометр СФ-26 (или другой аналогичный).

Микроразмсльчмтсль тканей РТ-2 по МРТУ 64-1-1505—63.

Мясорубка по ГОСТ 4025-83.

Пипетки 4-1 -1 или 5- М. 7-1 -5 или 7-2-5; 7-1-10 или 7-2-10 по ГОСТ 20292-74.

Пробирки мерные П-2-10 или П-2-15 по ГОСТ 1770-74.

Термометр 0- 100-С по ГОСТ 2045-71.

Халодкльник бытовой.

Шкаф лабораторный сушильный.

Цилиндры мерные 1 -50 или 2-50 по ГОСТ 1770-74.

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919-83.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76. н-бутанал по ГОСТ 6006-78, ч.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Гистамин или гидрохлорид гистамина.

Кислота саляная по ГОСТ 3118-77, х. ч., раствор 3.75 г/дм* (0,1 и раствор).

Кислота трихлоруксусная по ТУ 6-09-1926—77, раствор 50 г/дм' (5%-ный раствор).

Натрий азотистокислый по ГОСТ 4197-74, ч.д.а., раствор 50 г/дм' (5%-ный раствор).

Натрия пироокись по ГОСТ 4328-77, чи.а., метеор 200 г/дм' (5 н раствор).

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166-76. х.ч., прокаленный.

Натрий углекислый по ГОСТ 83-79, х.ч.,раствор 40 г/дм' (4%-ный раствор).

Паранитроанилик, ч.д.а.

Этилзцстат по ГОСТ 22300-76. ч.д.а.

284

3. Подготовка к испытанию.

3.1.    Приготовление раствора паранитроанилина

Паранитроанилин очищают путем перекристаллизации в воде. Для этого растворяют его в горячей дистиллированной воде и охлаждают раствор до комнатной температуры. Выпавшие кристаллы отфильтровывают и высушивают при 80*С в течение 10—15 мин, 0,1 г паранитроанилина растворяют в 100 сн* 0,1 н соляной кислоты. Хранят раствор в холодильнике до момента употребления.

3.2.    Приготовление диазорсактива

Диаэоосактив получают непосредственно перед использованием путем смешивания 10 ем* раствора 1 г/дм¹ паранитроанилина в 0,1 н соляной кислоте и 1 ем¹ раствора 50 г/дм' азотистокислого натрия и охлаждают до 0*С.

3.3.    Приготовление н-бутанола, насыщенного водой

Для приготовления н-бутанола, насыщенного водой, встряхивают 50 см' н-бутанола и 20 ем¹ дистиллированной воды в делительной воронке. После разделения фаз отделяют верхний бутанольный слой.

3.4.    Подготовка проб к анализу

Отбор проб проводится по ГОСТ 7631-85 “Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний” и ГОСТ 87.56.0-70 “Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию".

Образцы доставляют в лабораторию сразу же после отбора проб. В случае длительной транспортировки (более I ч) рыба-сырсц должна транспортироваться в охлажденном состоянии, а мороженая — в замороженном состоянии. Исследование образцов должно проводиться в день доставки их в лабораторию. При отсутствии такой возможности образцы должны храниться при температуре нс выше —8*С нс более трех суток.

Доставка и хранение образцов консервов и другой продукции должны проводиться с соблюдением режимов, предусмотренных НТД (действующими инструкциями и стандартами).

3.5.    Экстракция

Навеску 10 г (с точностью до 0,01 г) приготовленного образца помещают в сосуд микроразмсльчитсля тканей, добавляют 25 ем' 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и перемешивают 5 мин. Полученную смесь переносят в плоскодонную коническую колбу на 100 см^А ополаскивают сосуд смесителя дважды 5—10 см' 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты; растворы объединяют. Колбу снабжают воздушным холодильником и выдерживают на водяной бане при 60’С в течение 15 мин. Охлажденную смесь переносят количественно в цилиндр, доводят до 50 см' 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты и фильтруют через складчатый бумажный фильтр (фильтрат 1).

3.6.    Построение калибровочной кривой

Готовят стандартные растворы гистамина с концентрацией 5,10,20 и 40 мкг/см' в 5%-ной тоихлорук-сусной кислоте. Для приготовления основного раствора гистамина с концентрацией 40 мкг/емМ.О мг гистамина помещают в мерную колбу вместимостью 100 см', растворяют в 5%-ной трихлоруксусной кислоте и доводят объем до метки. Рабочие растворы гистамина с концентрациями 20,10,5 мкг/см'получают путем разбавления 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты основного раствора в 2,4 и 8 раз соответственно. Основной раствор гистамина хранят в холодильнике неделю, рабочие растворы готовят в день проведения анализа.

5 см' каждого стандартного раствора помещают в пробирки с притертыми пробками, добавляют 1 см' 20%-ного раствора гидроксида натрия и вносят в раствор при перемешивании безводный углекислый натрий до получения насыщенного раствора. Добавляют 5 см'н-бутанола, насыщенного водой, и энергично встряхивают пробирки в течение 30 с. После разделения фаз отбирают пипеткой или шприцем 3 сьг верхнего бутанольного слоя и переносят в другую пробирку с притертой пробкой, содержащую 3 см' 0,1 н рзство-ра соляной кислоты. Встряхивают содержимое пробирки в течение 30 с. После разделения фаз отбирают 2 см' нижнего водного слоя, переносят в другую пробирку, добавляют 2 см' 4%-ного раствора углекислого натрия и выдерживают 5 мин при 0*С. Приливают к охлажденному раствору 2 см' холодного свежеприготовленного диазорсактива, встряхивают и вновь выдерживают 5 мин при 0'С. Добавляют 4 см' этилацетата и энергично встряхивают в течение 30 с. После разделения фаз сухой пи пет к ой отбирают верхний слой ипсрсносятв пробирку, содержащую безводный сульфат натрия (раствор окрашенного производного в этилацетатс должен быть прозрачным). Измеряют величину абсорбции раствора при 495 нм в кювете толщиной 1см. В качестве раствора сравнения используют этилацетат. На основании полученных данных строится калибровочная кривая зависимости величины абсорбции от концентрации гистамина в растворе.

4. Проведение испытаний

285

Если образцы содержат гистамина более 200 мг/кг, необходимо разбавить полученный фильтрат 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты.

Для определения концентрации гистамина в экстракте используется калибровочная кривая.

5. Обработка результатов

Содержание гистамина в образце продукта Г (мг/кг) вычисляют по формуле:

Где с — концентрация гистамина, найденная по калибровочной кривой, мкг/см*;

У — объем экстракта, cm^j (50 смЪ;

м — навеска образца продукта, г (10 г);

Ф - фактор разбавления ( Ф - У фильтрата ^УДтриклорукс.к-ты,

Вычисление проводят до единиц. За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение результатов трех параллельных определений. Допустимое расхождение между результатами параллельных определений нс должно превышать 50% по отношению к среднему арифметическому значению.

Определение гистамина проводится в отдельных видах рыб и рыбных продуктах в пунктах выработки продукции.

Периодичность контроля лабораториями санэпидстанций устанавливается нс реже 1 раза в квартал. Содержание гистамина в экспортных и импортных консервах определяется в каждой партии отраслевыми лабораториями. В случае нарушения температурного режима хранения консервов проводится внеочередной контроль.

1

см' фильтрата 1, полученного по п. 3.5, помещают в пробирку и проводят процедуру, описанную в п. 3.6, начиная с добавления раствора гидроокиси натрия.