МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде

Сборник № 25

Москва 1997 г.

ФЕДЕРАЛЬНЫ”' HJInrllU    1, Утверждено

ГМГ UP НМ U ^Ли U - !V»"U и l ЦП    Министерством здравоох-

РОСПОТРШАДЗО.’А    p2?Z,

....._... п IQ-д к?6159-91

It)*, Г. МОСКВА. 6АРШ_13

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ 2-ЛМИНО-4-ДИМЕТИЛАМИНО-6-ХЛОР-1,3,5,-ТРИАЗИНА В ВОЗДУХЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ.

1. Краткая характеристика вещества.

CsHiN»ci М.м. 173,61

2-амино-4-димстиламино-6-хлор-1,3,5-триазин (АДXT) - метаболит и полупродукт синтеза грямекся.Белое кристаллическое вещество без запаха с Тпл 210-211° С. Растворимость в воде - 0,049% (25® С), ацетоне - 1,94%, хлороформе - 0,34%.

ОБУВ для воздуха рабочей зоны 1,5 мг/м*.

2. Методика измерения концентраций АДХТ в воздухе рабочей зоны.

2.1.    Основные положения.

2.1.1.    Принцип метода.

Метод основан на использовании тонкослойной и газожидкостной хроматографии с применением пламенно-ионизационного детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр, в хлороформ и на полисорб.

2.1.2.    Избирательность метода.

Измерению не мешают другие триазины - полупродукты производства производных сульфанилмочевин.

2.1.3.    Метрологическая характеристика метода.

Нижний предел измерения АДХТ в хроматографируемом объеме пробы 1 мкг (ТСХ) и 0,01 мкг(ГЖХ).

Нижний предел измерения АДХТ в воздухе 0,01 мг/м'.

Разработчики: Чмиль В.Д., Бродская Н.М., Киреева Л.В., Шутова Т.В., УкрНИИ! ИН ГОКС, г. Киев.

Диапазон измеряемых концентраций АДХТ в воздухе от 0,01 до 2 мг/м*. Данные по метрологической характеристике методики представлены в таблице.

Суммарная погрешность измерения нс превышает 12,0%.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, 2 часа (ГЖХ) и 3 часа (ТСХ).

Таблица

Метрологическая характеристика измерения концентрации 2-амино-4-димстиламино-6 хлор - 1,3,5 - трназина (АДХТ) в воздухе хроматографическими методами._

Метод измерения Предел измерения, мг/м' Процент определения,% Средняя квадратичная ошибка определения, мкг Доверительный интервал (Р=0,95) ГЖХ 0,01 65 ±и ±0,8 (п, =4, ш=4) ТСХ 0,01 90 ±0,5 ±0,4 (□« =6, ш=4)

2.2.    Реактивы, растворы и материалы.

Ацетон, чда, ТУ 6-08-3513-75.

Бензол, чда, ГОСТ 5955-75.

Натрий сернокислый б/в, ч, ГОСТ 4106-76.

Этиловый эфир уксусной кислоты, чда, ГОСТ 1277-75.

Серебро азотнокислое, чда, ГОСТ 1277-75.

Бромфеноловын синий, чда, ТУ 6-09-37-9-83.

Лимонная кислота, осч, ТУ 6-09-584-75.

Силикагель КСК №2, ГОСТ 3956-76, ТУ 6-09-2523-72.

Силикагель ЛС 5/40 ц для тонкослойной хроматографии с 13% гипса (Хсмапол, ЧССР). Пластинки для тонкослойной хроматографии “Силуфол R” (Хемапол, ЧССР).

Калий йодистый, чда, ГОСТ 4232-74.

Крахмал растворимый, чда, ГОСТ 10163-76.

Калий марганцовокислый, чда, ГОСТ 20490-75, 3%-иый водный раствор. Хлористоводородная кислота, хч, ГОСТ 18290-72, 12%-ный водный раствор.

Кальций сернокислый, чда, ГОСТ 3210-66.

Кальций хлористый, ч, ГОСТ 4460-77.

Азот особой чистоты, ГОСГ 9293-74.

Хроматон N-AW,0,!6-0,20 мм с 5% ХЕ-60, промытый кислотой и си л цитированный ДМСХ.

Хромосорб W-HP, 80/100 меш с 3% OV-17.

Полисорб С, 60/100, ТУ 6-05-24-1313-86.

2.3.    Приборы, аппаратура и посуда.

Газовый хромато|раф с пламенно-ионизационным детектором.

Аспирационное устройство, ТУ 64-1-862-77.

Фильтродержа гели.

Склянка Дрекселя вместимостью 250 мл. дотационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73.

Водяная баня, ТУ 64-22-603-75.

Электроплитка, ТУ 92-275-76.

Поглотители Зайцева с пористой пластинкой, ТУ 25-11-1081-75.

Стеклянные концентрационные трубки (гофрированные).

Стеклянные пластинки, 15 х 15 см.

Сито капроновое, 100/120 меш.

Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок.

Камера для обработки пластинок, ТУ 25-11-430-70.

22

Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-63. Эксикатор, ГОСТ 6471-73.

Сушильный шкаф, ТУ 69-1-1411-76.

Микрошприц емкостью 10 мкл, МШ-10.

Фарфоровая ступка (d=86), ГОСТ 9147-78. Стеклянный водоструйный насос, МРТУ 42961-64. Весы лабораторные ВЛА-200-М.

Колбы мерные, вместимостью 100 мл, ГОСТ 1770-74.

2.4. Отбор пробы воздуха.

Способ I. Воздух с объемным расходом 2 л/мнн аспирируют через последовательно соединенный бумажный фильтр “синяя лента” и склянку Дрекселя, содержащую 70 мл хлороформа и помещенную в охлаждающую смесь льда и хлорида натрия. Для определения 1/2 ПДК достаточно отобрать 4 л воздуха.

Способ 2. При использовании полисорба для поглощения АДХТ воздух с объемным расходом 3 л/мин аспирируют через последовательно соединенные фильтродержатель и концентрационную гофрированную трубку из стекла, содержащую 5 г полисорба.

Пробы можно хранить в холодильнике в течение двух недель.

2.5. Подготовка к измерению.

2.5.1. Приготовление пластинок с тонким слоем силикагеля дляТСХ.

35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100/120 меш, смешивают с 2г сернокислого кальция и 90 мл дистилированной воды в фарфоровой ступке или на аппарате для встряхивания в течение 15 минут. Около 10 г сорбционной массы наносят на стеклянную пластинку 15x15 см, и,покачивая, равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат на воздухе в горизонтальном положении при комнатной температуре 12 часов и затем активируют в сушильном шкафу при 190°С в течение 30 минут. Хранят в эксикаторе над слоем хлористого кальция. При использовании для приготовления пластинок силикагеля Л С 14 г этого силикагеля смешивают с 38 мл дистилированной воды. На одну пластинку наносят 5-7 г сорбционной массы и далее поступают так, как это описано выше.

2.5.2.    Приготовление проявляющих реактипов для ТСХ.

Проявляющий реактив Я»1:

раствор №1 - в мерную колбу на 100 мл помещают 0,25 г йодистого калия и доводят до метки дистиллированной водой;

раствор №2 - 0,75 г растворимого крахмала заваривают я 25 мл дистиллированной воды и затем охлаждают;

пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов №1 и №2.Реактив готовят перед употреблением.

Проявляющий реактив №2:

раствор №1 - в мерную колбу на 100 мл помещают 0,4 г бромфенолового синего и доводят до метки дистиллированной водой;

раствор Я»2 - в мерную колбу на 100 мл помещают 2 г азотнокислого серебра и доводят до метки дистиллированной водой; пластинку обрабатывают смесью (1:1) растворов №1 и №2 и затем 4%-ным водным раствором лимонной кислоты.

Проявляющие растворы при хранении в плотно закрытых склянках без доступа света годны для применения в течение месяца.

2.5.3.    Приготовление стандартного раствора.

Стандартный раствор АДХТ в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 10,0 мг вещества в мерной колбе на 100 мл.

23

2.5.4.    Приготовление хроматографической колонки.

Стеклянную спиральную хроматографическую колонку (длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм) заполняют хромосорбом W-HP с 3% OV-17 под вакуумом и конденционируют при 180° С в течение 8-10 часов в токе азота.

2.5.5.    Построение градуировочного графика для определения АДХТ методом ГЖХ.

Количественный анализ с помощью газовой хромато!рафии АДХТ проводят методом абсолютной калибровки. Для этого градуировочные растворы с содержанием АДХТ 3,4,10 и 15 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора ацетоном.

Градуировочные растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.

2 мкл каждого градуировочного раствора вводят в хроматограф и хроматографируют при следующих условиях (хроматограф “Цвет-106” с пламенно-ионизационным детектором): температура термостата колонок 150° С, температура термостата испарителя 260° С, скорость потока газа-носителя (азот особой чистоты) 40 мл/мин, шкала электрометра 10 . IО-*² а, скорость диаграммной лешгы потенциометра 240 мм/час. Время удерживания АДХТ в этих условиях 6 мин.

Хромато1рафироваиие одного стандартного раствора производят трижды. Измеряют на хроматограммах высоты пика (мм) АДХТ и строят график зависимости высоты пика АДХТ от его концентрации (мкг/мл). Полученные данные обрабатывают по методу наименьших квадратов и получают уравнение калибровочного графика в виде

Н=А + В.х

где Н - высота пика АДХТ на хроматограмме, мм;

X - содержание АДХТ в ацетоне, мкг/мл;

А и В - коэффициенты, которые получают при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.

2.6. Описание измерения.

2.6.1. Измерение АДХТ с помощью тонкослойной хроматографии.

При отборе пробы воздуха но способу 1 фильтр извлекают из фильтродержатсля, переносят в стакан на 100 мл, заливают 30 мл хлороформа и оставляют на 10 минут периодически перемешивая стеклянной палочкой. Хлороформ сливают в круглодонную колбу со шлифом на 250 мл через слой безводного сульфата натрия (10 г), помещенного в воронку, а фильтр промывают двумя порциями хлороформа по 10 мл, сливая эти порции и хлороформ из склянки Дрекселя в ту же колбу, упаривают растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45° С до объема ~ 1 мл. Остаток количественно наносят на хромато1рафическую пластинку с тонким слоем силикагеля (могут быть использованы пластинки, приготовленные в лабораторных условиях и пластинки “Оилуфол R”). На эту же пластинку наносят стандартные количества (1 и 2 мкг) АДХТ в виде раствора в ацетоне и проводят хроматографирование в системе растворителей этилацетат-хлороформ (1:1) в хроматографической камере, насыщенной в течение 2 часов парами подвижных растворителей. Для насыщения стенки камеры обкладываются фильтровальной бумагой, которая пропитывается смесью подвижных растворителей.

После окончания процесса хроматографирования пластинку извлекают из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения АДХТ пластинку обрабатывают смесью №1 и №2 (1:1) проявляющего реактива №2 и затем 4%-ным водным раствором лимонной кислоты. АДХТ обнаруживается в виде синих пятен на желтом фоне с величиной Rf =0,61 ±0,05.

Для повышения надежности идентификации АДХТ хромато|рафирование может быть также проведено в системе растворителей ацетон-бензол (3:2). Для обнаружения АДХТ пластинку предварительно помещают в эксикатор (камера для хлорирования) на 2 минуты, на дне которого наливают смесь (1:1) 3%-ного водного раствора марганцевокислого калия и 12%-ного водного раствора хлористоводородной кислоты (камера насыщается парами хлора через 5-10 минут после помещения в нес растворов

марганцевокислого калия и хлористоводородной кислоты). Затем пластинку вынимают из эксикатора, помещают в вытяжной шкаф на 40 минут для удаления паров хлора н обрабатывают проявляющим реактивом №1. АД XT обнаруживается в виде синих пятен на светло-голубом фоне с величиной Rr =0,82±0,05 (пластинки “Силуфол R").

При отборе пробы воздуха по способу 2 полисорб из концентрационной гофрированной трубки из стекла помещают в бюретку на 25 мл (диаметр 10 мм) с краном на конце и АД XT элюируют 60 мл ацетона со скоростью 1-2 мл/мин. Элюат сушат над безводным сульфатом натрия (5-10 г) в течение 0,5-1,0 часа при периодическом помешивании, удаляют растворитель на ротационном испарителе до объема ~1 мл и далее поступают так, как описано выше.

2.6.2. Измерение АДХТ с помощью газожидкостной хроматографии.

Подготовка проб для измерения проводится так же, как это описано для тоннкослойной хроматографии (п.2.6.1.).

При отборе пробы воздуха по способу I объединенный хлороформный раствор сушат над безводным сульфатом натрия (5-10 г) в течение 0,5-1,0 часа при периодическом перемешивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе при температуре водяной бани 45° С до объема ~0,5 мл. Остаток растворителя током теплого воздуха удаляют досуха и сухой остаток количественно переносят ацетоном (~| мл) в (радуировочную центрифужную пробирку на 10 мл. Током теплого воздуха упаривают содержимое пробирки до 0,2 мл и 2 мкл вводят в хроматограф. Хроматографирование одной пробы проводят дважды, измеряют среднее значение высоты пика АДХТ и по калибровочному графику находят содержание АДХТ. При отборе пробы воздуха по способу 2 остаток ацетона (-1 мл) из круглодонной колбы на 250 мл количественно переносят в |радуировочную центрифужную пробирку на 10 мл и током теплого воздуха упаривают содержимое до 0,2 мл. 2 мкл ацетонового раствора вводят в хроматограф и далее поступают так, как это описано выше.

2.7. Обработка результатов анализа.

2.7.1. Метод ТСХ.

Концентрацию АДХТ в воздухе С мг/м' при измерении с помощью тонкослойной хроматографии вычисляют по формуле:

А . К)?

<:= v 2о

где А - количество АДХТ в анализируемом объеме пробы, мг;

Vjo - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям,

л.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям проводят по следующей формуле:

Vw* Vi(273 +20). Р (273 + I). 101,33 где Vi - объем воздуха, отобранный для анализа, л;

Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм.рт.ст).

1- температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Количественную оценку АДХТ на хроматограммах проводят путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен пробы и стандартных растворов АДХТ или по величине площади пятен по формуле:

. д,

A=Aj - S? - Si (Si - S)

где A,S - количество (мкг) и площадь (мм*) пятна АДХТ в анализируемой пробе;

25

Ai ,Aj , Si , Si - количество (мкг) и площадь (мм²) пятен стандартных растворов АДХТ с большим и меньшим содержанием по сравнению с анализируемой пробой.

Величину площади пятен определяют, накладывая на пластинку прозрачную бумагу или кальку, очерчивают контур пятна, переносят его на миллиметровку и подсчитывают число мм² .входящих в контур.

2.7.2. Метод ГЖХ.

Концентрацию АДХТ в воздухе С, мг/м' при измерении газожидкостной хроматографии вычисляют по формуле:

С=(Н - А). 1(Р . V В. \го

где Н - высота пика АДХТ на хромато(рамме анализируемой пробы, мм (среднее значение из двух параллельных определений);

V - общий объем ацетонового раствора пробы АДХТ, мл;

А и В - коэффициенты, которые получают при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.

3. Требования безопасности.

Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе в химических лабораториях.

26