Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение концентраций действующих
веществ пестицидов в воде, почве, зелёной
массе, зерне и соломе зерновых культур,
ботве и корнеплодах свеклы
Сборник методических указаний
по методам контроля
МУК 4.1.3021-12; 4.1.3043-12
Москва 2013
1. Разработаны сотрудниками
ГНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» Россельхозакадемии.
2. Введены в действие с
момента утверждения.
3. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Погрешность измерений. 3
2. Метод измерений. 3
3. Средства измерений, реактивы,
вспомогательные устройства и материалы.. 3
4. Требования безопасности. 5
5. Требования к квалификации
операторов. 5
6. Условия измерений. 5
7. Подготовка к определению.. 5
8. Отбор проб и хранение. 7
9. Проведение определения. 7
10. Обработка результатов анализа. 9
11. Проверка приемлемости
результатов параллельных определений. 9
12. Оформление результатов. 10
13. Контроль качества результатов
измерений. 10
14. Разработчики. 11
|
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
3 июля 2012 г.
Дата введения: с момента утверждения
|
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение концентраций флуксапироксада в
воде,
почве, зелёной массе, зерне и соломе зерновых культур
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические
указания
Свидетельство о
метрологической аттестации от 11.10.2011 № 01.5.04.035/01.00043/2011.
Настоящие методические указания
устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения
массовой концентрации флуксапироксада в воде - в диапазоне концентраций 0,001 -
0,005 мг/дм3, в почве и зерне - в диапазоне концентраций 0,005 -
0,05 мг/кг, в зеленой массе - 0,02 - 0,1 мг/кг, соломе - 0,05 - 0,25 мг/кг.
Название действующего
вещества по номенклатуре ICO:
флуксапироксад.
Название действующего
вещества по номенклатуре IUPAC: ( ±
)3-(дифторметил)-1-метил-М(3¢,4¢,5¢-трифтор[1,1¢-бифенил]-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбоксамид.
Структурная формула:
Брутто формула: C18H12F5N3O.
Молекулярная масса: 381.
Химически чистое вещество
представляет собой кристаллический порошок бежевого цвета без запаха.
Температура плавления: >
157 °С.
Давление пара 1,1×10-7 мРа.
Коэффициент распределения в
системе н-октанол-вода КowlgP > 3,0 (20
°С).
Растворимость в воде (мг/дм3,
20 °С): 3,88.
Растворимость в органических
растворителях (г/дм3, 20 °С): ацетон ® 250; ацетонитрил, дихлорметан, этилацетат ® 100; метанол - 53,4; толуол - 20,0.
Гидролитически стабилен в
водных растворах при рН 4 - 9.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная - ЛД50
> 2000 мг/кг массы тела. Острая кожная - ЛД50 > 2000 мг/кг
массы тела. Острая ингаляционная - ЛК50 (4 ч) > 5,1 мг/л.
Раздражающее действие - кролики: кожа - не раздражает; глаза - не раздражает.
Сенсибилизация - не обладает.
Область применения
Фунгицид для обработки
вегетирующих растений против комплекса болезней зерновых культур.
1. Погрешность измерений
При соблюдении всех
регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной
методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при
доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в
табл. 1, для соответствующих
диапазонов концентраций.
Таблица 1
Метрологические параметры
Объект анализа
|
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)
|
Показатель повторяемости (относительное
среднеквадратическое отклонение повторяемости), sr, %
|
Показатель внутрилабораторной прецизионности, sRл, %
|
Показатель воспроизводимости, sR, %
|
Показатель точности* (границы относительной
погрешности),
± d, %
|
Вода
|
0,001 - 0,005
|
5
|
7
|
9
|
17
|
Почва
|
0,005 - 0,05
|
7
|
9
|
12
|
23
|
Зерно
|
0,005 - 0,05
|
7
|
9
|
12
|
23
|
Зеленая масса
|
0,02 - 0,1
|
6
|
7
|
10
|
20
|
Солома
|
0,05 - 0,1
|
7
|
10
|
12
|
22
|
0,1 - 0,25
|
6
|
8
|
10
|
18
|
* Соответствует
расширенной неопределенности Uотн. при
коэффициенте охвата k = 2
|
Таблица
2
Полнота извлечения флуксапироксада,
стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п
= 20, Р = 0,95
Анализируемый объект
|
Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3)
|
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3)
|
Среднее значение определения, %
|
Стандартное отклонение, S
|
Доверительный интервал среднего результата, ± %
|
Вода
|
0,001
|
0,001 - 0,005
|
95,9
|
2,3
|
1,1
|
Почва
|
0,005
|
0,005 - 0,05
|
87,2
|
7,3
|
3,6
|
Зерно
|
0,005
|
0,005 - 0,05
|
86,8
|
7,3
|
3,6
|
Зеленая масса
|
0,02
|
0,02 - 0,1
|
88,5
|
9,4
|
4,4
|
Солома
|
0,05
|
0,05 - 0,25
|
82,1
|
9,9
|
4,7
|
2. Метод измерений
Методика основана на:
определении флуксапироксада методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после
его твердофазной экстракции из воды или жидкостной экстракции из образцов
почвы, зеленой массы и соломы ацетонитрилом в присутствии ацетатного буфера,
насыщенного сульфатом магния, и обеспечивающего разделение водной и
органической фаз; очистке ацетонитрильного экстракта с помощью дисперсионной
твердофазной экстракции при одновременном удалении воды безводным сульфатом
магния. При анализе зерна используют «Набор для пробоподготовки по методу QuEChERS Interlab VetexQ для обычных овощей, фруктов и зерна (кат.
№ IL-5056)» с дополнительной очисткой на
патронах с силикагелем.
Идентификация флуксапироксада
проводится по времени удерживания, количественное определение - методом
абсолютной калибровки.
Избирательность метода
обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
3. Средства измерений,
реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ-детектором, снабженном
дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки
|
Номер в Госреестре средств
измерений 42816-09
|
Весы аналитические ВЛА-200
|
ГОСТ 24104-2001
|
Весы технические ВЛКТ-500
|
ГОСТ 24104-2001
|
Колбы мерные на 10, 25, 50,
100 см3
|
ГОСТ
23932-90
|
Микродозаторы одноканальные
«BIOHIT» переменного объема от 200 до 1000 мм3
и от 1 до 5 см3, Финляндия
|
Номер в Госреестре средств
измерений 36152-07
|
Пипетки градуированные
|
ГОСТ
29227-91
|
Цилиндры мерные на 50 и 100
см3
|
ГОСТ
23932-90
|
Примечание. Допускается
использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими
характеристиками.
3.2.
Реактивы
Ацетон, осч
|
ТУ 6-09-3513-86
|
Ацетонитрил для ВЭЖХ,
«В-230НМ» или хч
|
ТУ 6-09-3534-87
|
Вода для лабораторного
анализа (бидистиллированная, деионизованная)
|
ГОСТ Р 52501-2005
|
н-Гексан, хч
|
ТУ 6-09-3375-78
|
Кислота ортофосфорная, хч
|
ГОСТ 6552-80
|
Кислота уксусная, ледяная
|
ГОСТ 61-69
|
Магний серно-кислый
безводный, хч
|
ГОСТ 4523-67
|
Набор для пробоподготовки
по методу QuEChERS
Interlab VetexQ для обычных
овощей, фруктов и зерна (кат. № 1L-5056)
|
|
Натрий уксусно-кислый, ч
|
ГОСТ 199-68
|
Силикагель, Merck 1.09385.1000
|
|
Смесь № 1: этилацетат-гексан
в соотношении 1:4 по объему
|
|
Смесь № 2:
этилацетат-гексан в соотношении 1:1 по объему
|
|
Подвижная фаза для ВЭЖХ:
смесь ацетонитрила и 0,005 М Н3РО4 в соотношении 50:50
|
|
Уголь активированный БАУ-А
|
ГОСТ 6217-4-74
|
Флуксапироксад с
содержанием основного вещества 99,7 % (BAS 700 F)
|
|
Этилацетат, хч
|
ГОСТ 1138-84
|
Примечание. Допускается
использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не
требующих дополнительной очистки растворителей.
3.3. Вспомогательные устройства
и материалы
Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (100´2,1) мм, 1,7 мкм (Waters)
|
|
Аналитическая колонка ACQUITY UPLC Shield RP18 (100´2,1) мм, 1,7 мкм (Waters)
|
|
Аппарат для встряхивания и Multi Reax (фирмы Heidolph, Германия)
|
ТУ 64-1-1081-73
|
Воронки лабораторные
В-75-110
|
ГОСТ
25336-82
|
Колбы круглодонные на шлифе
вместимостью 25 см3
|
ГОСТ
9737-93
|
Патроны Диапак С16
(БиоХимМак СТ), 0,4 г (номер по каталогу 21.0040)
|
|
Патроны Диапак С (БиоХимМак
СТ), 0,4 г (номер по каталогу 22.0300)
|
|
Пробирки полипропиленые
центрифужные с крышками объемом 15 и 50 см3
|
|
Ротационный вакуумный
испаритель фирмы BUCHI, мод. R 205 (Швейцария)
|
|
Фильтры бумажные «красная
лента»
|
ТУ 6.091678-86
|
Центрифуга ОПн-8УХЛ4.2 или
5804R (фирмы Eppendorf AG, Германия)
|
ТУ 5.375-4261-76
|
Шприц медицинский с
разъемом Льюера
|
ГОСТ 22090
|
Примечание. Допускается
применение оборудования иных производителей с аналогичными или лучшими
техническими характеристиками.
4.
Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений
необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими
реактивами по ГОСТ
12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с
электроустановками по ГОСТ
12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на
жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение лаборатории
должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям
пожарной безопасности по ГОСТ
12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ
12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК
(ОБУВ), установленных ГН
2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.
Организация обучения
работников безопасности труда - по ГОСТ
12.0.004-90.
5. Требования к
квалификации операторов
Измерения в соответствии с
настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с
руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и
подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам
контроля погрешности измерений по п. 13.
6. Условия измерений
При выполнении измерений
выполняют следующие условия:
• процессы приготовления
растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5)
°С и относительной влажности не более 80 %;
• выполнение измерений на
жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической
документацией к прибору.
7. Подготовка к определению
7.1. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку
(Acquity ВЕН С18 и Acquity Shield RP18) кондиционируют в потоке подвижной фазы
(0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.
7.2. Приготовление растворов
7.2.1. Раствор 0,005
М ортофосфорной кислоты: (0,5 ± 0,01) г 98 %-й ортофосфорной кислоты помещают в
мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и
доводят объем до метки.
7.2.2. Для приготовления
подвижной фазы смешивают
ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50 по
объёму, используя мерные цилиндры.
7.2.3. Приготовление элюента
№ 1: в колбе на
100 см3 смешивают 80 см3 н-гексана и 20 см3
этилацетата, используя мерные цилиндры.
7.2.4. Приготовление элюента
№ 2: в колбе на 100 см3 смешивают 50
см3 н-гексана и 50 см3 этилацетата, используя мерные
цилиндры.
7.3. Приготовление основного и градуировочных
растворов
7.3.1. Основной раствор
с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску флуксапироксада (50 ± 0,5)
мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в
ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
7.3.2. Приготовление градуировочных
растворов (анализ на колонке Acquity ВЕН С18).
Градуировочные растворы с
концентрациями флуксапироксада 0,02; 0,04; 0,06; 0,08 и 0,1 мкг/см3
готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь
ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50).
7.3.2.1. Раствор № 1 с
концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3
вносят 1 см3 основного раствора и доводят до метки подвижной фазой
(5 мкг/см3). В другую мерную колбу вместимостью 100 см3
переносят 2,0 см3 полученного раствора. Объем вновь доводят до метки
подвижной фазой (0,1 мкг/см3).
7.3.2.2. Раствор № 2 с
концентрацией 0,08 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3
помещают 8,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной
фазой.
7.3.2.3. Раствор № 3 с
концентрацией 0,06 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3
помещают 6 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной
фазой.
7.3.2.4. Раствор № 4 с
концентрацией 0,04 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3
помещают 4 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной
фазой.
7.3.2.5. Раствор № 5 с
концентрацией 0,02 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3
помещают 2 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной
фазой.
7.3.3. Приготовление градуировочных
растворов (анализ на колонке Acquity Shield RP18).
Градуировочные растворы с
концентрациями флуксапироксада 0,01, 0,02, 0,05, 0,1 и 0,2 мкг/см3
готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор
подвижной фазы (смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в
соотношении 50:50).
7.3.3.1. Раствор № 1 с
концентрацией 5,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3
вносят 1 см3 основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.
7.3.3.2. Раствор № 2 с
концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3
вносят 4,0 см3 раствора № 1 и доводят до метки подвижной фазой.
7.3.3.3. Раствор № 3 с
концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3
вносят 2,0 см3 раствора № 1 и доводят до метки подвижной фазой.
7.3.3.4. Раствор № 4 с
концентрацией 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3
помещают 5 см3 раствора № 3 и доводят объем до метки подвижной
фазой.
7.3.3.5. Раствор № 5 с
концентрацией 0,02 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3
помещают 2 см3 раствора № 3 и доводят объем до метки подвижной
фазой.
7.3.3.6. Раствор № 6 с
концентрацией 0,01 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3
помещают 1 см3 раствора № 3 и доводят объем до метки подвижной
фазой.
Основной раствор можно
хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца,
градуировочные растворы - в течение суток.
При изучении полноты
определения флуксапироксада в воде, почве, зерне, зеленой массе и соломе
зерновых культур используют ацетонитрильные растворы вещества, приготовленные
из основного раствора методом последовательного разбавления по объему
ацетонитрилом.
7.4. Построение градуировочного графика
Дня установления
градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация флуксапироксада в
растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов
(не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по
диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят
график зависимости среднего значения площади пика от концентрации
флуксапироксада в градуировочном растворе.
Методом наименьших квадратов
рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной
регрессии:
C = KS, где
S - площадь пика градуировочного раствора.
Градуировку признают
удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается
не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику
необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или
элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате
контроля градуировочного коэффициента.
Градуировочную зависимость
признают стабильной при выполнении следующего условия:
где
С - аттестованное значение массовой концентрации флуксапироксада в
градуировочном растворе;
Ск - результат контрольного измерения массовой концентрации
флуксапироксада в градуировочном растворе;
lконтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (lконтр. = 10 % при Р = 0,95).
8. Отбор проб и хранение
Отбор проб производится в
соответствии с «Унифицированными
правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и
объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от
21.08.79 № 2051-79), а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие
требования к отбору проб»; ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые.
Отбор проб зерна»; ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб». Пробы зерна и
соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой
упаковке при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы
подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света.
Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую
почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями
диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.
9. Проведение определения
9.1. Определение флуксапироксада
в воде
Через патрон Диапак С16 пропускают
50 см3 воды. Фильтрат отбрасывают. Флуксапироксад элюируют 3 см3
ацетона. Элюат упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при
температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 см3
подвижной фазы. 10 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф.
9.2. Определение флуксапироксада в
зеленой массе и соломе зерновых культур
В полипропиленовую
центрифужную пробирку вместимостью 50 см3 помещают 10 г измельченной
зеленой массы или 4 г соломы, прибавляют 10 см3 воды, 10 см3
ацетонитрила, 0,1 см3 ледяной уксусной кислоты, 4 г безводного
магния серно-кислого и 1 г натрия уксусно-кислого. Пробирку плотно закрывают
пробкой, встряхивают на аппарате в течение 15 мин и центрифугируют при скорости
8000 об./мин в течение 10 мин. Супернатант декантируют и количественно
переносят в другую тефлоновую центрифужную пробирку. Если супернатант
декантировать не удается, то массу фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный
фильтр «красная лента». Измеряют объем супернатанта или фильтрата и прибавляют
к нему силикагель и безводный магний серно-кислый из расчета 50 мг силикагеля,
150 мг магния серно-кислого на 1 см3 супернатанта. При работе с
образцами зеленой массы или соломы к супернатанту также прибавляют
активированный уголь из расчета 7,5 мг на 1 см3 супернатанта.
Пробирку плотно закрывают пробкой, встряхивают на аппарате 15 мин и
центрифугируют при скорости 8000 об./мин в течение 10 мин. Количественно
отбирают с помощью шприца верхний ацетонитрильный слой, переносят его в мерную
колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки водой. 10 мм3
полученного раствора вводят в хроматограф.
9.3. Определение флуксапироксада в
почве
В полипропиленовую
центрифужную пробирку вместимостью 50 см3 помещают 10 г просеянной
почвы, прибавляют 3 см3 воды для смачивания пробы, через 2 мин
прибавляют 10 см3 воды, 10 см3 ацетонитрила, 0,1 см3
ледяной уксусной кислоты, 4 г безводного магния серно-кислого и 1 г натрия
уксусно-кислого. Пробирку плотно закрывают крышкой, встряхивают на аппарате в
течение 15 мин и центрифугируют при скорости 4000 об./мин в течение 10 мин.
Отбирают 5 см3 верхнего ацетонитрильного слоя и переносят его в
полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 15 см3,
содержащую 250 мг силикагеля и 750 мг безводного магния серно-кислого. Пробирку
плотно закрывают крышкой, встряхивают на аппарате 10 мин и центрифугируют при
скорости 4000 об./мин в течение 10 мин. Аликвоту 2 см3 переносят в
круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе,
остаток очищают на патроне Диапак С.
9.4. Определение флуксапироксада
в зерне
В полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью
50 см3 помещают 10 г измельченного зерна, добавляют 15 см3
воды, 10 см3 ацетонитрила и содержимое влагонепроницаемого пакета из
«Набора для пробоподготовки по методу QuEChERS Interlab VetexQ для
обычных овощей, фруктов и зерна (кат. № IL-5056)».
Пробирку плотно закрывают, встряхивают на аппарате в течение 15 мин,
центрифугируют при скорости 4000 об./мин в течение 10 мин. Отбирают 5 см3
верхнего ацетонитрильного слоя и переносят в полипропиленовую центрифужную
пробирку из набора вместимостью 15 см3, содержащую сорбент. Пробирку
плотно закрывают, встряхивают на аппарате в течение 15 мин, центрифугируют при
скорости 4000 об./мин в течение 10 мин. Аликвоту 2 см3 переносят в
круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе,
остаток очищают на патроне Диапак С.
9.5. Очистка на патроне
Диапак С
9.5.1. Кондиционирование
патрона Диапак С
Патрон с силикагелем Диапак С
промывают 2 см3 элюента № 2, затем 3 см3 гексана.
9.5.2. Дополнительная очистка проб
почвы и зерна на патронах Диапак С
Сухой остаток, полученный по
пп. 9.4 или 9.5 растворяют в 1 см3 гексана, наносят на
предварительно кондиционированный патрон, колбу ополаскивают 1 см3
гексана и так же наносят на патрон. Патрон промывают 6 см3 элюента №
1, элюат отбрасывают. Флуксапироксад элюируют 3 см3 смеси № 2, элюат
собирают, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, остаток
растворяют в 1 см3 подвижной фазы и 10 мм3 вводят в
хроматограф.
9.6. Условия хроматографирования
9.6.1. Условия анализа
проб воды, зеленой массы и соломы
Ультраэффективный жидкостный
хроматограф «ACQUITY» фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором,
автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (2,1´100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки (30 ± 1) °С. Подвижная фаза: смесь
ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50. Скорость
потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 230
нм. Объем вводимой пробы 10 мм3. Время удерживания флуксапироксада
(4,8 ± 0,1) мин.
9.6.2. Условия анализа проб почвы
и зерна
Ультраэффективный жидкостный
хроматограф «ACQUITY» фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором,
автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY SHIELD RP 18 (2,1´100) мм, 1,7 мкм (Waters).
Температура колонки (30 ± 1) °С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М
ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин.
Рабочая длина волны УФ-детектора 230 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3.
Время удерживания флуксапироксада (5,0 ± 0,1) мин.
Линейный диапазон
детектирования сохраняется в интервале концентраций (0,01 - 0,2) мкг/см3.
10. Обработка результатов
анализа
Количественное определение
проводят методом абсолютной калибровки. Содержание флуксапироксада в воде,
почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых (X, мг/кг)
вычисляют по формуле:
где
Sx - площадь пика флуксапироксада на хроматограмме испытуемого
образца, мм2 (AU);
К - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения
соответствующей градуировочной зависимости;
V - объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
Р - навеска анализируемого образца, г;
F - полнота извлечения флуксапироксада, приведенная в табл. 2, %.
Содержание остаточных
количеств флуксапироксада в образце вычисляют как среднее из двух параллельных
определений.
Образцы, дающие пики большие,
чем стандартный раствор флуксапироксада с концентрацией 0,2 мкг/см3,
разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
11.
Проверка приемлемости результатов параллельных определений
За результат анализа
принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений,
расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:
где (1)
X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r - значение предела повторяемости (r = 2,8sr).
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела
повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление
результатов
Результат анализа
представляют в виде:
мг/кг при вероятности Р
= 0,95, где
- среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг;
D - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
где
d - граница относительной погрешности методики (показатель точности в
соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае, если содержание
компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат
анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе «менее
нижней границы определения» (например: менее 0,005 мг/кг*, где «*»
- 0,005 мг/кг - предел обнаружения флуксапироксада в почве и зерне зерновых).
13.
Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и
воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ
Р ИСО 5725-1 - 6-2002
«Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность
результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один
из градуировочных растворов.
13.2. Плановый
внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится
с применением метода добавок.
Величина добавки Сд
должна удовлетворять условию:
где
, () - характеристика погрешности (абсолютная погрешность)
результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце
(расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой,
соответственно), мг/кг; при этом:
Dл = ± 0,84D, где
D - граница абсолютной погрешности, мг/кг:
где
d - граница относительной погрешности методики (показатель точности в
соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры Кк
рассчитывают по формуле:
, , Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений
(признанных приемлемыми по п. 11)
содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация
добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К
рассчитывают по формуле
Проводят сопоставление
результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (K).
Если результат контроля
процедуры удовлетворяет условию
(2)
процедуру анализа признают
удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При
повторном невыполнении условия (2)
выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают
меры к их устранению.
13.3. Проверка приемлемости
результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между
результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно
превышать предел воспроизводимости (R):
где (3)
X1, Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном
концентраций), %.
14. Разработчики
Долженко В.И., Цибульская
И.А., Журкович И.К., Черменская Т.Д., Комарова А.С. (ГНУ Всероссийский НИИ
защиты растений Россельхозакадемии).