Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение
остаточных количеств
действующих веществ пестицидов
в овощах, цитрусовых, плодовых,
ягодах и орехах
Сборник
методических указаний
по методам контроля
МУК 4.1.2986-12; 4.1.2989-12;
4.1.2993-12;
4.1.2996-12; 4.1.3006-12
Москва 2012
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по
санитарно-эпидемиологическому
нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека (протокол от 22.12.2012
№ 2).
2. Утверждены Руководителем Федеральной
службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека,
Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 19 марта 2012 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
4. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Общие положения. 2
3. Средства измерений, реактивы,
вспомогательные устройства и материалы.. 3
4. Требования безопасности. 4
5. Требования к квалификации
операторов. 4
6. Условия измерений. 5
7. Отбор проб и хранение. 5
8. Подготовка к определению.. 5
9. Проведение определения. 6
10. Обработка результатов анализа. 7
11. Проверка приемлемости
результатов параллельных определений. 7
12. Оформление результатов. 7
13. Контроль качества результатов
измерений. 8
14. Разработчики. 9
|
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
19 марта 2012 г.
Дата введения: с момента
утверждения
|
4.1. МЕТОДЫ
КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств кломазона в капусте
методом капиллярной газожидкостной хроматографии
Методические
указания
МУК 4.1.2986-12
Свидетельство о
метрологической аттестации от 23.09.2011
№ 01.5.04.032/01.00043/2011.
1. Общие положения
Настоящие методические
указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в
капусте массовой концентрации кломазона в диапазоне концентраций 0,01 - 1,0 мг/кг.
Название вещества по ИСО:
кломазон.
Название вещества по ИЮПАК:
2-(2-хлоробензил)-4,4-диметил-1,2-оксазолидин-3-он.
Структурная формула:
Эмпирическая формула: C12H14ClNO2.
Молекулярная масса: 239,7.
Химически чистый кломазон представляет собой
вязкую светло-коричневую жидкость.
Плотность - 1,192 при 20 °С.
Давление паров при 25 °С - 19,2 мПа.
Растворимость в воде - 1,1
г/л.
Растворимость в органических
растворителях: хорошо растворим в ацетоне, ацетонитриле, хлороформе, циклогексаноне, гексане, гептане,
хлористом метилене, метаноле, диметилформамиде, толуоле, диоксане и других
органических растворителях.
Коэффициент распределения в
системе октанол-вода при 20 °С lgP = 2,5.
Кломазон устойчив при
хранении. При комнатной температуре может храниться без потерь в течение года,
при 50 °С в
течение 3 месяцев. В водных растворах период полураспада при солнечном свете
более 30 дней, в почве - 30 - 135 дней (в зависимости от почвенно-климатических условий).
Краткая токсикологическая характеристика
ЛД50
для крыс - 1369 - 2077 мг/кг. ЛД50 для мышей
2350 мг/кг.
Гигиенические нормативы. МДУ кломазона в капусте не установлен.
Область применения
Селективный системный
гербицид, используемый для борьбы со злаковыми и некоторыми двудольными сорными
растениями на посевах сои, кукурузы, рапса, гороха и ряде овощных культур при
довсходовом и послевсходовом внесении. Он хорошо проникает в растение через
корни и листья и подавляет рост и развитие двудольных и злаковых сорняков.
2. Методика определения кломазона в капусте методом
капиллярной газожидкостной хроматографии
2.1. Принцип
метода
Метод определения кломазона в
капусте основан на экстракции пестицида органическим растворителем и очистке на
патроне Диапак С. Количественное определение кломазона проводят методом
газожидкостной хроматографии с капиллярной колонкой и использованием
термоионного детектора.
Идентификация кломазона
проводится по времени удерживания, количественное определение - методом
абсолютной калибровки.
2.2. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая
характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.
Таблица 1
Метрологическая характеристика метода
Диапазон измерений, массовая концентрация, мг/кг
|
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), σr,
%
|
Показатель промежуточной прецизионности (относительное
среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов «время»,
«оператор» в одной лаборатории), σR7, %
|
Показатель воспроизводимости (относительное
среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), σR,
%
|
Показатель точности*
(границы относительной погрешности при вероятности Р = 0,95), ± δ, %
|
Капуста
от 0,01 до 0,1 вкл.
|
8
|
9
|
11
|
22
|
от 0,1 до 1,0 вкл.
|
7
|
8
|
10
|
20
|
* Соответствует расширенной неопределенности Uотн при
коэффициенте охвата k = 2
|
Таблица 2
Полнота
извлечения кломазона, стандартное
отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0,95
Анализируемый объект
|
Предел обнаружения,
мг/кг
|
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг
|
Среднее значение определения, %
|
Стандартное отклонение, S, %
|
Доверительный интервал среднего результата, ±, %
|
Капуста
|
0,01
|
0,01 - 1,0
|
82
|
9,9
|
7,9
|
2.3. Избирательность метода
Избирательность метода
обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные
устройства и материалы
3.1. Средства измерений
Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с
ДТИ или аналогичный
|
|
Весы аналитические типа ВЛА-200
|
ГОСТ 24104-01
|
Весы технические ВЛКТ-500
|
ГОСТ 24104-01
|
Колбы мерные на 10, 100,
1000 см3
|
ГОСТ
23932-90
|
Микрошприц МШ-10
|
ТУ 2-833-106
|
Пипетки градуированные объемом 1, 2, 5 и 10 см3
|
ГОСТ
29227-91
|
Пробирки мерные со шлифом объемом 5,0 см3
|
ГОСТ
23932-90
|
Цилиндры мерные на 50 и 100 см3
|
ГОСТ
23932-90
|
Примечание. Допускается использование средств измерения иных
производителей с аналогичными характеристиками.
3.2. Реактивы
Аналитический стандарт кломазона с содержанием д.в. 99 %
|
|
Азот газообразный в баллонах с редуктором
|
ТУ 6-16-40-14-88
|
Гексан, х.ч.
|
ТУ 2631-003-05807999-98
|
Этилацетат, х.ч.
|
ГОСТ 1138-84
|
Элюент № 1: гексан/этилацетат (9/1 по
объему)
|
|
Примечание. Допускается
использование реактивов квалификацией не ниже указанных.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Колонка капиллярная кварцевая длиной 30 м, внутренним диаметром
0,25 мм с неподвижной фазой НР-35, толщина слоя 0,25 мкм
|
|
Ванна ультразвуковая УЗВ/100 ТН
|
|
Воронки химические конусные
|
ГОСТ
25336-82
|
Колбы круглодонные емкостью 100 и 250 см3
|
ГОСТ
25336-82
|
Колбы плоскодонные на шлифах емкостью 250 см3
|
ГОСТ
25336-82
|
Концентрирующие патроны Диапак С (БиоХимМак СТ) 0,6 г
|
ТУ 4215-002-0545931-94
|
Пробирки с притертыми пробками на 5 см3
|
ГОСТ
25336-82
|
Ротационный вакуумный испаритель Büchi R-200/205 (Швейцария)
|
|
Установка для упаривания растворителей в токе азота
|
|
Фильтры бумажные «красная лента»
|
ТУ 6.091678-86
|
Примечание. Допускается использование другого вспомогательного
оборудования иных производителей с аналогичными техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо
соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами
по ГОСТ
12.1.007-76, требования
по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ
12.1.019-2009,
а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный
хроматограф.
4.2. Помещение лаборатории должно быть
оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной
безопасности по ГОСТ
12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ
12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК
(ОБУВ), установленных ГН
2.2.5.1313-03 и ГН
2.2.5.2308-07.
Организация обучения
работников безопасности труда - по ГОСТ
12.0.004-90.
4.3. При работе с газами, находящимися в
баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать «Правила
устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок,
воздухопроводов и газопроводов под давлением», ПБ-03-576-03.
Запрещается открывать вентиль
баллона, не
установив на нем понижающий редуктор.
5. Требования к квалификации операторов
Измерения в соответствии с
настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы
методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по
эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший
экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля
погрешности измерений по п. 13.
6. Условия измерений
При выполнении измерений
выполняют следующие условия:
· процессы приготовления растворов и
подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности
не более 80 %;
· выполнение измерений на газовом
хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к
прибору.
7. Отбор проб и хранение
Отбор проб капусты проводят в
соответствии с ГОСТ
1724-85 «Капуста белокочанная свежая. Заготовка и поставка» или ГОСТ 7967-87
«Капуста краснокочанная свежая. Заготовка и поставка».
Для длительного хранения
аналитические пробы капусты помещают в герметично закрытый двойной
полиэтиленовый пакет и хранят в морозильной камере с температурой -18 °С.
8. Подготовка к определению
8.1. Кондиционирование колонки
Капиллярную или насадочную колонку перед
анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °С до установления нулевой линии.
8.2. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Перед началом работы
рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для
этого 100 см3 растворителя упаривают в ротационном вакуумном
испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 см3
и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку
растворителей производят в соответствии с типовыми методиками.
8.3. Приготовление элюента № 1
Для приготовления раствора
гексан/этилацетат
в соотношении 9/1 в мерную колбу на 100 см3
вносят 10 см3 этилацетата и доводят до метки гексаном.
8.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов
8.4.1.
Основной раствор с концентрацией
100 мкг/см3. Точную навеску кломазона (10 ± 0,1) мг помещают в
мерную колбу вместимостью 100 см3,
растворяют в гексане и доводят объем до метки гексаном.
Градуировочные растворы
кломазона с концентрациями 10,0, 5,0, 1,0, 0,2 и 0,1 мкг/см3 готовят
методом последовательного разбавления основного раствора, используя гексан.
8.4.2. Раствор № 1 с концентрацией кломазона
10 мкг/см3.
В мерную колбу
вместимостью 10
см3 вносят 1 см3 основного раствора и доводят объем до
метки гексаном.
8.4.3. Раствор № 2 с концентрацией кломазона 5 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5
см3 раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном.
8.4.4. Раствор № 3 с концентрацией
кломазона 1 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3
помещают 1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном.
8.4.5. Раствор № 4 с концентрацией кломазона
0,2 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3
помещают 2 см3 раствора № 3 и доводят объем до метки гексаном.
8.4.6. Раствор № 5 с концентрацией кломазона
0,1 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1
см3 раствора № 3 и доводят объем до метки гексаном.
Основной раствор можно
хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные
растворы - в течение суток. Для внесения в образец при определении полноты
извлечения используют основной раствор кломазона, разбавленный гексаном до
соответствующей концентрации.
8.5. Построение градуированного графика
Для построения
градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой
концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют
высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты
(площади) пика от концентрации кломазона в градуировочном растворе (мкг/см3).
Градуировочную характеристику
необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или
элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате
контроля градуировочного коэффициента.
Градуировочную зависимость
признают стабильной при выполнении следующего условия:
где
С - аттестованное значение массовой концентрации кломазона в
градуировочном растворе;
Ск - результат контрольного измерения
массовой концентрации кломазона в градуировочном растворе;
λконтр. - норматив контроля градуировочного
коэффициента, % (λконтр.
= 10 % при Р = 0,95).
8.6. Проверка хроматографического поведения
кломазона на патронах Диапак С
Перед употреблением патрон
промывают 10 - 15 см3 гексана. Затем в патрон вносят 3 см3
градуировочного раствора кломазона № 3 (1
мкг/см3 кломазона в гексане) и промывают 5 см3 гексана.
Элюат отбрасывают. Для определения фракции, содержащей кломазон, используют
элюент № 1 (гексан/этилацетат - 9/1 по
объему). В патрон вносят 6 см элюента № 1 и отбирают фракции элюата по 1 см3
в мерные пробирки на 5 см3. Элюаты выпаривают досуха с помощью
установки для упаривания растворителей в токе азота. Сухие остатки растворяют в
1 см3 гексана и последовательно вводят в хроматограф. Фракции,
содержащие кломазон, объединяют.
8.7. Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех
приборов и средств измерения проводятся в соответствии с требованиями
технической документации.
9. Проведение определения
9.1.
Экстракция кломазона из капусты
Капусту измельчают, берут
навеску (10 ± 0,1) г, помещают в коническую колбу на 250 см3,
проводят экстракцию 70 см3 гексана на ультразвуковой бане в течение
10 мин, экстракцию повторяют дважды порциями по 40 см3. Объединенный
экстракт фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» и упаривают на
роторном испарителе при температуре не выше 40 °С до объема 1 - 2 см3. Дальнейшую
очистку проводят на патронах Диапак С по п. 9.2.
9.2. Очистка экстрактов на патронах
Диапак С
Количественно переносят в
патрон 1 - 2 см3
полученного по п. 9.1 экстракта и
промывают 3 см3 гексана, фильтрат отбрасывают. Кломазон элюируют 4
см3 элюента № 1 (гексан/этилацетат
- 9/1), собирая в колбу-концентратор на 10 см3,
выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой
остаток растворяют в 1 см3 гексана и хроматографируют.
9.3. Условия
хроматографирования
Хроматограф газовый «Кристалл
2000М» с ДТИ.
Колонка капиллярная кварцевая
длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с неподвижной фазой НР-35, толщина
слоя 0,25 мкм.
Температура колонки
программируется от 170 °С (1 мин) до 250 °С (5 мин) со скоростью 25 °С/мин,
температура испарителя 280 °С, детектора 380 °С.
Расход газа-носителя (азот)
через колонку Г1 - 3,8 см3/мин (давление на входе 100 кПа), Г2 - 22 см3/мин (сброс пробы),
Г4 - 20 см3/мин (поддув ТИД), Г5 - 13,5 см3/мин
(водород к ТИД), Г6 - 200 см3/мин
(воздух к ТИД). Деление потока 1:1. Объем вводимой пробы - 1 мм3.
Время удерживания кломазона 5
мин (35 ± 5) с.
10. Обработка результатов анализа
Количественное определение
проводят методом абсолютной калибровки, содержание кломазона в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
где
Н1 - высота
(площадь) пика кломазона в стандартном растворе, мм (мв ∙ с);
Н2 - высота
(площадь) пика кломазона в анализируемой пробе, мм (мв ∙ с);
V - объём экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
Р - навеска анализируемого образца, г;
С - концентрация кломазона в стандартном
растворе, мкг/см3.
Содержание остаточных
количеств кломазона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2
параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие,
чем стандартный раствор кломазона 10 мкг/см3, разбавляют гексаном.
11. Проверка приемлемости
результатов параллельных определений
За результат анализа
принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений,
расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
где (1)
X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r - значение предела повторяемости (r = 2,8σr).
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела
повторяемости,
устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа
представляют в виде:
мг/кг при вероятности Р = 0,95, где
- среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг;
Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
где
δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в
соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае, если содержание
компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат
анализа представляют в виде:
содержание вещества в пробе «менее
нижней границы определения» (например: менее 0,01*, где * - 0,01
мг/кг - предел определения кломазона в капусте).
13. Контроль качества
результатов измерений
Оперативный контроль
погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ
Р ИСО 5725-1 - 6-2002 «Точность
(правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений
контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных
растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный
оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением
метода добавок.
Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:
Сд =
Δл,Х + Δл,Х', где
± Δл,Х (± Δл,Х') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность)
результатов анализа, соответствующая
содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания
компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:
Δл =
± 0,84Δ, где
Δ - граница абсолютной
погрешности, мг/кг:
где
δ - граница относительной погрешности методики
(показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по
формуле:
Кк = Х' - Х -
Сд, где
Х', Х, Сд - среднее
арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по
п. 11) содержания компонента в образце
с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг (мг/дм3).
Норматив контроля К
рассчитывают по формуле:
Проводят сопоставление
результата контроля процедуры (Кк) с
нормативом контроля (К).
Если результат контроля
процедуры удовлетворяет условию
|Кк| ≤ К, (2)
процедуру анализа признают
удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При
повторном невыполнении условия (2)
выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают
меры к их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов
измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между
результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно
превышать предела воспроизводимости (R):
где (3)
X1 и X2 - результаты измерений в
двух разных лабораториях, мг/кг (мг/дм3);
R - предел
воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.
14. Разработчики
Долженко В.И., Цибульская
И.А., Остроухова О.К. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт
защиты растений Россельхозакадемии, г. Санкт-Петербург).
Методика прошла
метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 01.5.04.032/01.00043/2011) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2011.10797).