Балалар га» амыма жэне ересектерге арна.и ан коспалар

УЛЬТРАЖОГАРЫ ТИ1МД1Л1КТ1 С¥ЙЫКТЫК ХРОМАТОГРАФИЯСЫ ЖЭНЕ ТАНДЕМ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ (UHPLC-MS/MS) АРКЫЛЫ ПАНТОТЕН КЫ111КЫЛЫНЫ11 МОЛШЕРШ АНЫКТАУ

Смеси для детского питания и взрослых

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПАНТОТЕНОВОЙ КИСЛОТЫ С ПОМОЩЬЮ УЛЫ РАВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАЮ! РАФИИ И ТАНДЕМНОЙ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ (UНPLC-MS/MS)

КРСТ ISO 20639-2016

(ISO 20639:2015 Infant formula and adult nutritionals Determination of pantothenic acid by ultra high jterformance liquid chromatography and tandem mass spectrometry method (UHPLC-

MS MS), IDT)

Ресмн басмлмм

Ka за кета и Республнкасм Ннвестнциялар жэне даму miiiihci p.iii i Техникалык реттеу жане метрология комитет! (Мемстандарт)

Балалар тагаммна жэне ерееектерге арна.и ан коспалар

УЛЬТРАЖОГАРЫ ТИ1МД1ЛПСТ1 СУЙЫКТЫК ХРОМАТОГРАФИЯСЫ ЖЭНЕ ТАНДЕМ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЯ (UHPLC-MS/MS) АРКЫЛЫ ПАНТОТЕН КЫШКЫЛЫНЫЦ МОЛШЕРШ аныктау

KPCTISO 20639-2016

(ISO 20639:2015 Infant formula and adult nutritionals Determination of /fanloiltenic acid by ultra high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry method (UHPLC-

MS MS), IDT)

Ресми багылмм

Кизакстан Республнкасы Пнвестнцнялар жэне даму мнннстрлнт Техннкалык реттеу жэне метрология комитет! (Мемстандарт)

Библиография

[1]    Codex Standard 72-1981 Standard for Infant Formula and Formulas for Special Medical Purposes Intended for Infants (72-1981 кодексшщ стандарты. Балаларга арналган арнайы меднциналык максатты балалар жэне сут коспасы).

[2]    ОМА 2012.16, Pantothenic Acid (Vitamin В5) in Infant Formula and Adult/Pediatric Nutritional Formula. Ultra High Pressure Liquid Chromatography -Tandem Mass Spectrometry Method: Collaborative study (OMA 2012.16. Балалар тагамына жэне ересектерге арналган коспасындагы пантотен кышкылы (В5 витамин!). ТшмдЫп жогары суйыкгык хроматография жэнетандемд1 масс-спектрометрия aflici: б1рлескен зерттеу).

[3]    ISO 5725-2:1994, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method (Олшеу wicrcpi мен нэтижелершщ дэлдт (дурыстыгы мен прецизиондыгы). 2-бел1м. Олшеудщ стандартты эдюнщ кайталанушылыгы мен жангыртушылыгын аныктаудын непзп эж\).

[4]    АО AC International АО AC Official Methods Program, Associate Referee’s Manual on development. Study, Review, and Approval Process. Part IV AOAC Guidelines for Collaborative Studies, 1995, pp. 23-51. (AOAC INTERNATIONAL. AOAC ресми эдистержщ багдарламасы, Эз1рлеу. зерделеу, карау жэне бемту npoueci бойынша кауымдаскан соттар нускалыгы. IV бел1м, Б1рлескен зерттеулерге арналган нускаулык АОАС, 1995 ж., 23-51-бет).

[5]    AOAC SMPR 2011.005, Standard Method Performance Requirements for Vitamin В12 in infant formula and Adult/Pediatric Nutritional formula (AOAC SMPR 2011.005, Балалар тагамына жэне ересектерге арналган коспадагы В12 витамин!не арналган стандартты эд1стердщ сипаттамасына койылатын талагттар).

[6]    Thompson М. Recent Trends in Inter-Laboratory Precision at ppb and sub-ppb Concentrations in Relation to Fitness for Purpose Criteria in Proficiency Testing Analyst (Lond ). 2000, 125 pp. 385-386 (M. ТОМПСОН Багалау сынактарында арналу критерий! у min жарамдылыкка катысты миллиард жэне миллиардтан кем бшйктер шогырлануы кезшде зертханааралык прецизиондыктагы сонгы даму каркыны. Аналитик (Лонд ). 2000 ж., 125 бег. 385-386).

[7]    КР СТ 2.79-2004 Казахстан Республнкасынын Мемлекетлк елшем б1рлтн камтамасыз ету жуйесг Шетел шыгаратын заттар мен материалдардын касиеп-epi курамынын стандарттык улплер1. Колдануга руксаттэрт1бг Жалпы ережелер

ЭОЖ 637.1:543.51/.544.5:006.354    МСЖ    67.050

Туй1нд| сездер: балалар тагамына арналган, ересектерге арналган косна, пантотен кышкылы, масс-спектрометрия, суйыктык хроматография, UHPLC-MS/MS _

НАЦИОНАЛЬНЫ И СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

Смеси для детского питания и взрослых

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПАНТОТЕНОВОЙ КИСЛОТЫ С ПОМОЩЬЮ УЛЬТРАВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМА ГОГ РАФИИ И ТА ИДЕМ НОЙ МАСС-СПЕКТРОМ ЕТРИ И (И И PLC-MS/MS)

СТ РК ISO 20639-2016

(ISO 20639:2015 Infant formula and adult nutritionals Determination of pantothenic acid by ultra hifjh />erformance liquid chromatography and tandem mass spectrometry method (l/HPLC-

MS MS), ID T)

Издание официальное

Комитет технического регулирования и метрологии Министерства по инвестициям и развитию Республики Казахстан (Госстандарт)

Предисловие

1    ПОДГОТОВЛЕН II ВНЕСЕН Товариществом с ограниченной ответственностью «Kazakhstan Business Solution» (Технический комитет по стандартизации ТК 91 «Химия»)

2    УТВЕРЖДЕН II ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Председателя Комитета технического регулирования и метрологии Министерства по инвестициям и развитию Республики Казахстан от № 296-од от 23 ноября 2016 года

3    Настоящий    стандарт    идентичен    международному    стандарту

ISO 20639:2015 Infant formula and adult mitritionals Determination of pantothenic acid by ultra high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry method (IJHPLC-MSMS) (Смеси для детского питания и взрослых. Определение содержания пантотеновой кислоты с помощью ультра высокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии (UHPLC-MS/MS))

Международный стандарт разработан Техническим комитетом ISO/TC 34 «Пищевые продукты» совместно с ассоциацией АОАС INTERNATIONAL

Перевод с английского языка (еп).

Официальный экземпляр международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий национальный стандарт и на которые даны ссылки, имеется в Едином государственном фонде нормативных технических документов

Официальной версией является текст на государственном и русском языке

Степень соответствия - идентичная (IDT).

4    В настоящем стандарте реализованы нормы законов Республики Казахстан «О техническом регулировании» от 9 ноября 2004 года № 603-II, «О языках в Республике Казахстан» от 11 июля 1997 года № 151-1

5    СРОК ПЕРВОЙ ПРОВЕРКИ ПЕРИОДИЧНОСТЬ ПРОВЕРКИ

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях и настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Нормативные документы по стандартизации», а текст изменении и поправок в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». И случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национатьные стандарты»

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен без разрешения Комитета технического регулирования и метрологии Министерства по инвестициям и развитию Республики Казахстан

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУ БЛИКИ КАЗАХСТАН

Смеси лля детского питания и взрослых

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПАНТОТЕНОВОЙ КИСЛОТЫ С ПОМОЩЬЮ УЛЬТРАВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ II ТАНДЕМНОЙ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ (UHPLC-MS/MS)

Дата введения 2018-01-01

11рнмсчанне - Использование настоящего стандарта может включать в себя опасные материалы н операции Настоящий стандарт нс предназначен для описания всех мер безопасности, связанных с его использованием. Вся ответственность за установление соответствующих правил техники безопасности, мер но охране здоровья, определение пределов применимости руководства до начала использования настоящего стандарта, лежит на пользователе стандарта

1    Область применения

Настоящим стандарт устанавливает метод количественного определения содержания пантотеновой кислоты, за исключением связанных форм, в смеси для детского питания и взрослых (т. е. порошки), используя ультравысокоэффективную жидкостную хроматографию и тандемную масс-слектрометрню (UHPLC-MS/MS).

2    Термины и определения

В настоящем стандарте применяются следующие термины с соответствующими определениями:

2.1    Смесь для взрослых (adult nutritional): Сбалансированные по питательным веществам, специально разработанные продукты питания, потребляемые в жидкой форме, которые могут представлять собой единственный источник питания, изготовленный из сочетания молока, сои, риса, молочной сыворотки, гндролизованного белка, крахмала и аминокислот, с добавлением и без добавления ^модифицированного белка

2.2    Адаптированные или частично адаптированные начальные или последующие молочные смеси (infant formula): Искусственный заменитель грудного молока, специально изготовленный для удовлетворения потребности младенцев в питании в течение первых месяцев жизни до использования соответствующего прикорма (согласно Стандарт Кодекса 72-1981 (I ]).

3    Сущность метода

Пантотеновая кислота извлекается с помощью буферного раствора ацетата аммония с концентрацией 0,4 моль/л. После фильтрации конечный раствор подвергают воздействию ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии (UHPLC-MS/MS).

Издание официальное

4 Реагенты и вещества

Во время исследования, если не указано иное, используют реагенты известной аналитической степени чистоты и дистиллированную или деминерализованную воду, или воду эквивалентной степени чистоты

4.1    Стандартные растворы

4.1.1    D-пантотенат кальция. Sigma⁰ или эквивалент CAS 137-08-6.

4.1.2    Пантотенат кальция -    [^|3Сб,    ⁱ⁵Nj],    IsoSciences⁰ или эквивалент

CAS 356786-94-2.

4.2    Альфа-амилаза, Sigma А3176¹', из свиной поджелудочной железы, около 25 ед/мг или эквивалент.

4.3    Растворители

4.3.1    Ацетонитрил, степень LC или эквивалент.

4.4    Ацетат аммония, степень чистоты, соответствующая стандарту ACS, более 98 % (Fluka 9690)°.

4.5    Уксусная кислота, степень чистоты, соответствующая стандарту ACS.

4.6    Муравьиная кислота, степень чистоты, соответствующая стандарт)' ACS.

4.7    1 % муравьиной кислоты в воде, степень чистоты, соответствующая стандарту

ACS

4.8    Приготовление стандартных растворов

4.8.1    Основной раствор пантотеновой кислоты (РА), р = 250 мкг/мл. Взвесить

54,5 мг пантотената кальция (см. 4.1.1) в мерной колбе вместимостью 200 мл (необходимо принять во внимание степень влажности, указанную в сертификате поставщика, или осушить до неизменной массы при 105 °С) и довести до нужного объема водой. Хранить аликвоты при температуре минус 20 °С.

4.8.2    Промежуточный раствор пантотеновой кислоты, р = 10 мкг/мл. Поместить 1 мл основного раствора РА (см. 4.8.1) в мерную колбу вместимостью 25 мл и довести водой до нужного объема Хранить аликвоты пои температуре минус 20 °С.

4.8.3    Раствор пантотената кальция - [¹³Сб, ^,5N2j [IS (Внутренний стандартный раствор)], основной раствор, р = 20 мкг/мл. Взвесить 5,0 мг пантотената кальция -[^иСб, ^l5N^!2] (см 5.1.2) в мерной колбе вместимостью 250 мл и довести водой до нужного объема Хранить аликвоты при температу ре минус 20 °С.

4 84 Пятиуровневые стандартные растворы для градуировки. Поместить соответствующие объемы промежуточного раствора РА (10 мг/мл) (см. 4.8.2) в мерные колбы вместимостью 10 мл, чтобы получить пять различных концентраций РА (0,08; 0,16; 0,32; 0,64; 1,20 мг/мл). Добавить 500 мкл основного раствора IS (20 мг/мл) (см 4 8.3) и довести водой до нужного объема. Концентрация IS в каждом стандартном растворе составляет I мг/мл. Хранить аликвоты этих растворов при температуре минус 20 °С в течение не более одного месяца перед использованием

4 8 5 Раствор ацетата аммония, с = 400 ммоль/л, pH = 3,8 (используется для экстракции образца) В химический стакан вместимостью 500 мл поместить (30,80 ± 0,10) г ацетата аммония Добавить приблизительно 300 мл воды и перемешать магнитной мешалкой до растворения. Довести до уровня pH. равного (3,8 ±0,1), осторожно добавляя ледяную уксусную кислоту (около 150 мл). Поместить в мерную колбу вместимостью

¹¹ Пример подходящего продукта, имеющегося н продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является подтверждением того, что данный продукт одобрен ISO. "Эквивалентные продукты могут использоваться, если продемонстрировано, что они приводят к тем же результатам

1000 мл и довести водой до нужного объема. Раствор стабилен в течение одного месяца при температуре 4 °С.

5 Оборудование

Стандартная лабораторная стеклянная посуда и оборудование, а именно, следующее

5.1    Весы, с точностью 0,1 мг, предельной массой взвешивания 210 г, с точностью 0,1 г, предельной массой взвешивания 4100 г.

5.2    11рнбор для измерения pH, с точностью 0,01 единиц pH.

5.3    Гомогенизатор¹*.

5.4    Пластина для смешивания с магнитными мешалками.

5.5    Фильтры Шприцевые фильтры, с размером пор 0,22 мкм. внутренним диаметром 33 мм, Millex-GV PVDF (Millipore)**. Мембранные дисковые фильтры, с размером пор 0,45 мкм (Millipore)*’ или эквивалент.

5.6    Система UHPLC-MS/MS. колонка UPLC, например. ACQUITY UPLC®6 в

сочетании    с тройным квадрупольным детектором, снабженным источником

электрораспылительной ионизации (ESI) и колонкой ТЗ (1,8 мкм, внутренним диаметром (100,0 х 2,1) мм. Waters Согр.)*’ или эквивалент.

11римечанис - lice средства поверки должны быть повсрсны/калиброваны (аттестованы) и иметь действующие сертификаты (св11дстсльетва) о поверкс/калибровкс (аттестации) н/или оттиски повсрительных клейм калибровочные знаки, а стандартные обратны допущены к применению и внесены в реестр I СИ 1’К в соответствии с |7|.

6 Проведения испытания

6.1    Подготовка образцов

6.1.1    Общие положения

Если продукт содержит крахмал, добавляют 50 мг альфа-амилазы к суспензии и выдерживают в течение 15 мин при температуре 40 °С для уменьшения вязкости и упрощения обработки. Тщательно смешать жидкие образцы для обеспечения однородности и перейти непосредственно к извлечению. Если однородность порошкообразного образца неизвестна, то предполагается, что порошок не является однородным и переходят к 6.1.2.

6.1.2    Порошкообразные образцы из сухих смесей

Для порошкообразных образцов из сухих смесей/неоднородных порошкообразных образцов необходима точная навеска примерно 25,0 г (////). Добавить 200,0 г (/;;_>) воды при температуре 40 °С перед смешиванием до получения однородной суспензии. При необходимости используется гомогенизатор (см 4.3). Поместить точную навеску 15,0 г (///.;) аликвоты суспензии гомогенизированного образца в мерной колбе вместимостью

¹¹ Polytron 1^>-ГЗ(ХК) (приводной механизм). Aggregate PT-DA 3012 (Kinematics. Люцерн. Швейцария) представляют собой примеры подходящих продуктов, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является подтверждением того, что данный продукт одобрен ISO. Эквивалентные продукты могут использоваться, если продемонстрировано, что они приводят к тем же результатам.

*' Пример подходящего продукта, имеющегося в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является подтверждением того, что данный продукт одобрен ISO. Эквивалентные продукты мот использоваться, если продемонстрировано, что они ириво.ип к тем же результатам.

50 мл Вычислить массу образца (т, - порошкообразный эквивалент), используя формулу

О):

m,-m₃ m₂ ’

где /и/ - масса взвешенного образца, г,

nt: - масса воды, добавленной перед смешиванием, г;

///?- масса суспензии гомогенизированного образца, г.

6.1    3 Порошкообразные образцы из жидких смесей

Для однородных порошкообразных образцов из жидких смесей необходима точная навеска примерно 2,0 г образца (т„) в мерной колбе вместимостью 50 мл. Добавить 14 г воды при температуре 40 °С. Смешать до получения однородной суспензии.

6.1    4 Жидкие образцы

Для жидких образцов поместить точную навеску примерно 20,0 г (т„) в мерную колбу вместимостью 50 мл.

6.2    Извлечение

Используя приготовленный образец (см. 6.1), добавить 25 мл раствора ацетата аммония концентрацией 0,4 моль/л, уровень pH 3,8. Довести экстракт образца водой до нужного объема. Поместить магнитный элемент мешалки и перемешивать в течение 10 мни. Отфильтровать порцию в 20 мл с помощью фальцованной бумаги (сорт 597 %). Выполнить хроматографический анализ.

6.3    Анализ

6.3.1    Хроматографический анализ

Поместить 1,0 мл аликвоты отфильтрованного раствора, полученного в 6.2 в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 мл, содержащую 500 мкл основного раствора IS (см. 4 8.3). Крайне важно использовать тот же самый раствор, который использовался в приготовлении стандартных растворов для градуировки (см 4 8.3). Разбавить раствор до 10 мл водой, закрыть и перемешать Отфильтровать с помощью шприцевого фильтра с размером пор 0,22 мкм (см. 4.5). Ввести в систему UHPLC-MS/MS.

Примеры типичных хроматограмм приведены в приложении А.

6.3.2    Условия для UHPLC

Вводимый объем:    2 мкл;

Температура колонки:    30 °С;

Скорость потока:    0,45 мл/мин;

Мобильная фаза А:    0,1 % (объемное содержание) муравьиной кислоты в воде;

Мобильная фаза В:    Ацетонитрил.

Градиентный план для колонки приводится в таблице 1.

Таблица 1 - Градиент для колонки

Время, мин Подвижная фаза А, % Подвижная фаза В, % 0 92 8 2,2 80 20

Продолжение таблицы I

Время, мин Подвижная фаза А, % Подвижная фаза В, % 2,4 50 50 4,0 50 50 4,1 92 8 7,0 92 8

Направлять поток жидкостной хроматографии в детектор MS от 0 до 2 мин для предотвращения загрязнения источника.

6.3.3    Условия для MS/MS

-    положительная электрораспылительная ионизация;

-    капиллярное напряжение, 2,2 кВ:

-    напряжение на конусе, 25 В;

-    напряжение экстрактора, 3,0 В;

-    температура источника, 140 °С;

-    температура десольватации. 350 °С;

-    конический поток газа, 40 л/ч;

-    поток десольватации газа, 700 л/ч.

Установить энергию столкновений на 14 В с временем выдержки для каждого контролируемого перехода 0,1 с. Значения являются ориентировочными и их оптимизируют для каждого используемого прибора Отслеживают переходы m/z 220,2 —► 90,1 для РА и m/z 224,2 —► 94,1 для отмеченного изотопом 1S от 0,0 до 2,1 мин.

6.3.4    Обнаружение

Обнаружение MS в режиме однореакцнонного мониторинга включает одновременное обнаружение молекулярных ионов, соответствующих РА и отмеченной изотопом РА. Выбранные преобразования масс равны соответственно m/z 220,2 —* 90,1 и m/z 224,2 —* 94 ,1.

7 Вычисление

Для каждого стандартного раствора рассчитать соотношение площадей пиков между РА и 1S. Составить калибровочную кривую по 5 точкам (на колонке в диапазоне от 0,16 до 2,40 нг) путем построения графика соотношения площадей пиков (ось у) в зависимости от концентрации ПК (ось х). Вычислить линейную регрессию. Рекомендуется использовать средневзвешенную кривую регрессии (1/х).

Вычислить наклон (S) и отсекаемый отрезок (/) калибровочной кривой.

Вычислить массовую долю РА, w, в мг/100 г, используя формулу (2):

(A-n-ViVrlOO

w = ¹—,

SmlViooo *

гдс А - соотношение площадей пиков PA/1S в исследуемом растворе; I - отсекаемый отрезок калибровочной кривой;

S- наклон калибровочной кривой;

V/ - объем экстракта образца, мл (= 50);

Vi- объем отмеренного пипеткой отфильтрованного раствора, мл (= 1); ^-окончательный объем исследуемого раствора, мл (= 10);

/я - масса отбираемой пробы, г;

100 - преобразование в пересчете на 100 г;

1000 - преобразование с нг до мг.

Приложение Л

(информационное)

Примеры хроматограмм

08110*001    WRMo12Chanr»UES»

Рисунок A.I - Хроматограмма стандартно! о раствора (IS) пантотенат кальцня-|^|3Сб,

¹ N₂| с использованием liHPLC-MS/MS

08110*001    MRM о! 2 Channels    ES*

Рисунок Л.2 - Хроматограмма иантотеновон кислоты в обра sue адаптированные или частично адаптированные начальные или последующие молочные смеси с

использованием UHPLX’-MS/MS

Ллгысоз

1    «Kazakhstan Business Solution» жауапкершшп uieicreyni cepiicrecTiri (TK 91 «Химия» стандарттау жешндеп тех ни калы к комитет!) Э31РЛЕП ЕНГ13Д1

2    Ката кета и Республ икаем Инвестпциялар жоме даму министрлтнщ Техникалык ретгеу жэне метрология комитет! Терагасынын 2016 жылгы 23 карашадагы № 296-од буйрыгымен БЕК1Т1Л1П КОЛДАНЫСКА ЕНГШЛД1

3    Осы стандарт ISO 20639:2015 Infant formula and adult nutritionals - Determination of pantothenic acid by ultra high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry method (UHPLC-MS/MS) (Балалардын тамактануына жэне ересектерге арналган коспалар. ТшмдЫп ультражогары суныктык хроматография мен тандемд! масс-спектрометриянык (UHPLC-MS/MS) кемепмен пантотен кышкылынын мелшерж аныктау) халыкаралык стандартына сэйкес келед1

Халыкаралык стандартты АОАС INTERNATIONAL кауымдастыгымен 6ipnecin 1SO/TC 34 «Тамак ежмдерЬ техникалык комитет! эз1рледг

Агылшын тшнен аударылган (еп).

Осы улттык стандарт халыкаралык стаидарттын ресми нускасы непз4нде эз1рленд1 жэне осында бермген алтемелер Норматнвттк техникалык кужаттардын б1рынгай мемлекегпк корында бар

Ресми нуска дегежм1з мемлекегпк жэне орыс ттлдершдеп мэтж болып табылады

Сэйкеслк денгеш - б|рдей (1DT).

4    Осы стандартга Казакстан Республикасынын «Техникалык ретгеу туралы» 2004 жылгы 9 карашадагы 603-II, «Казакстан Республнкасындагы ттлдер туралы» 1997 жылгы 11 иилдедеп № 151 Зандарыньщ нормалары icKe асырылды

5    ЫР1НШ1 ТЕКСЕРУ MEP3IMI ТЕКСЕРУДЩ КЕЗЕЦД1Л1Г1

6    АЛГАШ РЕТ ЕНГШЛД1

Осы стандарту енгЫлгем озгерктер туралы аппарат «Стандарттау бонынша норматштпк цужаттар» ситеместде, а / озгерк млтпн «МелиекеттЫ стандарттар» ait са1'1ынгы акпа/ыттык; ситемесчнде жарияяанады. Осы стандарт trauma щкаган (жчтылган) немесе ауыстырылган жагдайда muiemi ацна/нни «Мемлекетпнк стандарттар» а^па/мтты^ ситемесчнде жарняишады.

Осы стандарт Казакстан Республнкасы Инвестпциялар жэне даму министрлт Техникалык ретгеу жэне метрология комитепнщ руксатынсыз ресми басылым репнде Казакстан Республнкасы аумагында толыктан немесе белшектелш басылып шыгарыла, кебейлле жэне таратыла алмайды

Пр нложемне В

(иш/юр.иагрюнное)

Точность данных

Данные, приведенные в таблице В.1, были получены в межлабораторных исследованиях и опубликованы в 2015 году [2] в соответствии с ISO 5725-2 [3] и Унифицированным протоколом AOAC-IUPAC для процедур совместного исследования для оценки точности характеристик метода анализа [4]. Исследование проводилось на основе требований, приведенных в [5]. Более подробная информация о проверке метода размещена на сайте: http://standards iso.org/iso/20639.

Таблица В.1 - Прецизионные данные для нантотеновон кислоты

Образец 1а 2Ь 3е 4Г 5е Т 7s 8h 9' I01 Год межлабораторных испытаний 2014 2014 2014 2014 2014 2014 2014 2014 2014 2014 Количество лабораторий, оставшихся после выброса 13 14 14 13 13 14 13 14 14 13 Среднее значение, х, мг/100 г 2,590 3.850 6,960 8,070 5,040 5,910 0,549 6,650 2,070 1,570 Среднеквадратическое отклонение повторяемости Sn мг/100 г 0,050 0,050 0,140 0,130 0,140 0,170 0,008 0,220 0,060 0,030 Среднеквадратическое отклонение воспроизводимости Л*, мг/100 г 0,130 0,200 0,350 0,330 0,230 0,290 0,022 0,360 0,140 0.090 Коэффициент вариации повторяемости. (У/?. % 1,9 1.3 2,0 1.6 2,8 2,8 1,5 3,3 2,9 1,7 Коэффициент вариации ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ, С[>, % 5,0 5,3 5,1 4,1 4,7 4,9 4,1 5,4 7,0 5,5 Предел повторяемости г //• 2.8 х Sri. мг/100 г 0,140 0.140 0,390 0,360 0,390 0,480 0.022 0.620 0,170 0,080 Предел воспроизводимости R Щ 2.8 х Л'*/, мг/100 г 0,360 0,560 0,980 0,920 0,640 0,810 0,061 1,010 0,390 0.250 Значение коэффициента Хорвитца. согласно (6| 0,51 0,57 0,60 0,50 0.53 0,57 0,33 0,63 0,69 0,52 *    Порошкообразная молочная смесь для взрослых на основе белка: *’ Частично гилролиюнанная порошкообразная адаптированная или частично алап1иронанная начальная или последующая молочная смесь на основе сон: ‘SRM 1849а; ‘‘ 1 (орошкообразная смесь для взрослых с низким содержанием жира: *    Порошкообразная адаптированная или частично адаптированная начальная или последующая молочная смесь на основе сон; 111орошкообразная адаптированная или частично адаптированная начальная или последующая молочная смесь: *    Адаптированная или частично адаптированная начальная или последующая молочная смесь RTF на основе молока: h Элементарная порошкообразная адаптированная или частично адаптированная начальная или последующая маточная смесь: 'Смесь для взрослых ГУ с высоким содержанием жира: J Смесь для взрослых ГУ с высоким содержанием белка; ГУ - готовый к употреблению.

КАМКСТАН РЕСПУБЛИКАСЫИЫЦ У'ЛТТЫК С ТАНДАРТЫ

Балалар тагамына жонс срссектсрге арналган косиалар

УЛЬТРАЖОГАРЫ ТИ1МД1Л1КТ1 СУЙЫКТЫК ХРОМАТОГРАФИЯСЫ ЖЭНЕ ТАНДЕМ МАСС-СП ЕКТРОМЕТРИЯ (UHPLC-MS/MS) АРКЫЛЫ ПАНТОТЕН КЫШКЫЛЫНЫЦ МОЛШЕРШ АНЫКТАУ

Ентинен куш 2018-01-01

Ескертпе - Осы стаидартгы наП,ia.iaii> кауinn матсриалдар мен онсрацияларды камни мумкш. Осы CTaiuapr они пайлаланумсн байланысты барлык KayilicrvliK шараларын енпаттау упин арнал магам Сайксе KayiiiciuiK тсмшкасы шараларын. дснсаулыкгы коргау бойышпа шараларды белплсу, осы стандартты найдалану оастапаша дейпнп нускаулыкш колдану ШСПН аныкгау yiniii барлык жауаптылык стандартли пайлалany шила болады.

1    Колданылу саласы

Осы стандарт тшмдЫп жогары суйыктык хроматография мен тандемд1 масс-спектрометрияны (UHPLC-MS/MS) пайдаланып балалар тагамы мен ересектерге арналган коспадагы (ягнн, унтактагы), байланыекан mininai коспаганда. пантотенш кышкыл мел ш ерш сандык аныкгау эдюн белплейдг

2    Терминдер мен аныктамалар

Осы стандартта Tiiicri аныктамалары бар мынадай терминдер колданылады:

2.1    Ересектерге арна п ан косна (adult nutritional): Корек кундылыгы боиынша балансталган. сут. соя. Kypiui. сут сарысуы. гидролизденген белок, крахмал мен Typi езгермеген белокты косып немесе коспай амин кышкылынан жасалган. коректенуд1н жалгыз K03iH б!ЛД1ру1 мумкш, суйык куйшде тутынатын, арнайы эз1рленген тамак ежмдерг

2.2    Адапталган немесе жартмлай адапталган бастапкы немесе сонгы сут коспаларм (infant formula): OMipimit oipinuii айынан бастап Tiiicri тамакты колдану куга не дейш (72-1981 [1] Стандарт Кодексше сэйкес) тамактануда сэбилердщ кажетплтн канагаттандыру yuiiH арнайы дайындалган емшектеп суттш жасанды алмастыргышы.

3    О.йсл in мэш

Пантотен кышкылы 0,4 моль/л шогырлануы бар аммоний ацетатынын буферл1 epiтinaicini»i кемепмен шыгарылады. Сузгеннен кейпн сонгы ертшйш тшмдшт жогары ультра суйыктык хроматография мен тандемд1 масс-спектрометрня (UHPLC-MS/MS) эсерше ушыратылады.

Pec ми басылым

4 Реагенттер мен заттяр

Егер езгелей жазылмаса, зерттеу кезжде белгш аналитикалык тазалык денгеш бар реагенттер мен тазартылган немесе мннералсызданган суды немесе балама тазалык денгеш бар суды пайдаланады.

4.1    Стандартты ертждшер

4.1.1    Кальций D-пантотенаты, Sigma¹' немесе балама С AS 137-08-6.

4.1.2    Кальций пантотенаты -    [^|3Сб,    ^,5N₂],    IsoSciences¹*    немесе балама

CAS 356786-94-2.

4.2    Альфа-амилаза, Sigma А3176¹*, шошканын уйкы безжен жасалган, шамамен 25 ед/мг немесе онын баламасы .

4.3    Ероюигтер

4.3.1 Ацетонитрил, денгеш LC немесе балама.

4.4    Аммоний ацетаты, тазалык денгеш ACS стандартына сэйкес келедц 98 %-дан артык (Fluka 9690)°.

4.5    CipKecy кышкылы. тазалык денгеш ACS стандартына сэйкес келедг

4.6    Кумырска кышкылы, тазалык денгеГй ACS стандартына сэйкес келедг

4.7    Судагы 1 % кумырска кышкылы, тазалык денгейн ACS стандартына сэйкес келедг

4 8 Стандартты epiTi imini дайындау

4.8    1 Пантотен кышкылынын непзп epinHaici (РА), р = 250 мкг/мл. Сыйымдылыгы 200 мл елшеутш кутыда 54,5 мг кальций пантотенатын елшеу (5.1.1 кара) жетмзушжж сертификатында бермген ылгалдылык денгейнн назарга алу керек немесе 105 °С кезжде езгермеген массага деГпн Kerrripy кажет) жэне сумен кажетп колемге деГнн жетюзу кажет. Аликвотаны минус 20 °С температурада сактайды.

4.8    2 Пантотен кышкылынын аралык ер1ттнд1с1, р = 10 мкг/мл. 1 мл непзп сртжд1ш РА (5.8.1 кара) сыйымдылыгы 25 мл олшем кутысына салу жэне сумен кажет колемге деГнн жетюзу керек. Аликвотаны минус 20 °С температурага деГнн сактау кажет.

4 8 3 Калций пантотенаты epiTiiwici- [^|3С₆, ^l5N₂] [IS (1шк1 стандартты ертнд|)], непзп ерт1нд1, р = 20 мкг/мл. 5,0 мг кальций пантотенатын [^l3Ce, ^,5N₂] (4.1.2 кара) сыйымдылыгы 250 мл кутыга салу керек жэне кажетп колемге деГнн жетктзу керек. Аликвотаны минус 20 °С температурага деГнн сактау кажет

4 84 влшемдеуге арналган бес денгейл1 стандартты epiniwi Аралык ертндмйн сэйкес квлем1Н РА (10 мг/мл) (5.8.2 кара) РА (0,08; 0,16; 0,32; 0,64; 1,20 мг/мл) турл1 бес шогырлану алу уш1н сыйымдылыгы 10 мл елшеу кутысына салады.

500 мкл непзп epiTiHAiHi IS (20 мг/мл) (4 8 3 кара) косып, сумен кажетп колемге дейпн жетюзу керек Ор стандартты ер1пнд1деп шогырлануы IS I мг/мл-ды курайды. Осы ертнд|н1н аликвотасын пайдаланар алдында oip айдан аспайтын мерз1м 1ш1нде минус 20 °С температурада сактау керек.

4.8.5 Аммоний ацетатынын epinH^ci с — 400 ммоль/л, pH = 3,8 (улгтш шайгындау yiuin пайдаланылады) Сыйымдылыгы 500 мл хнмиялык стаканга (30,80 ± 0,10) г аммоний ацетаты салынады. Шамамен 300 мл суды косып. ер1генше магнитп араластыргышпен араластыру керек. Муздай cipKecy кышкылын абайлап косып (шамамен 150 мл), pH = (3,8 ±0,1) денгейге жетюзу керек. Сыйымдылыгы 1000 мл елшеу кутысына салып, кажетп

¹¹ Сатылымда нар Ko.iati.tu ошмшц y.inci. Оси aKiiapai осы стандарггы natt(a.iaiiyшы.1арлыц колайлылыгы ушш кслт1риш жэпс осы oiiiNui ISO макулдаганына рас ray болын табылмайды. Fivp олар сол Н91НЖС1С алии Kc.iciiiiiii корсетиое, балама он1м;(ср иаНчаланмлуы мумкж

келемге дети сумен жетмзу керек. Ертнд! 4 °С температурада 6ip ай боны тура!сгы болад ы.

5 Жябдык

Стандартты зертчаналык шыны ыдыс пен жабдык, этап айтканда мыналар

5.1    блшеудщ 4100 г uieiai массасы бар, 0,1 г-га дешнп дэлджпен 210 г елшеудш шектт массасы бар 0,1 мг дэлдт бар таразы

5.2    pH, 0,01 дэлджпен елшеуге арналган аспап, pH б!рлж.

5.3    Гомогендеунл¹*.

5.4    Магнитп араластыргышпен араластыруга арналган пластина

5.5    Сузпштер 1ипк диаметр! 33 мм, кеуепнщ елшем1 0,22 мкм шприц сузлш, Mill ex -GV PVDF (Millipore)*'. Кеуепнщ елшем1 0,45 мкм (Milliporc)²' мембраналык дискЫ сузпштер немесе балама.

5.6    UHPLC-MS/MS жуйеа, UPLC баганы. мысалы электр бурку иондау кез1мен (ESI) жэне ТЗ баганмен жаракталган, уш ретпк квадрупольд1 акаутапкымен уйлеспруде ACQU1TY UPLC®6 (iuiKi диаметр! 100 мм * 2,1 мм. Waters Согр,1,8 мкм) *' немесе балама.

Ескертпс. Барлык сллысшрып тскссру куралларм салыстырып тексершу ге/кал мбрлену ie (аттсстатталуга) тюс жэне коачаныстап>1 салыстырып тскссру/калибрлсу (аттсстаттау) ссртфнкаттар (куэлйстер) жэне/немесе калибрлеу белплериин салыстырып тскссру тацбасынын белпа белуга, ал стандарта улплер колдануга жтбериуге жоме (7) еэйкес К)* МОЖ rnuiMiiic енпзшуге Tiiic.

7Сынак журпзу

6.1    Y.irLiep;ii дайынлау

6.1.1    Жалпы ережелер

Егер ен1мде крахмал болса, жузпнге 50 мг альфа-амилазаны косады жэне туткырлыгын азайту жэне жумыс !стеуд! жешлдету уинн 40 °С температу рада 15 минут бойы устау керек Bip тект!л!KTi камтамасыз ету ушш жэне тжелей шыгаруга ету' ушш суйык улплерд! мукият араластыру кажет. Егер унтак тэр1зд! улгшш oipTeKT^iri белпаз болса, онда унгак 6i рте KTi болыи табылмайтыны болжанады жэне 6.1.2 етедг

6.1.2    Кургак коспалардан алынган унтак тэр!зд1 улплер

Кургак коспалардан/унтак тэр!зд1 oipTeKTi емес улплерден алынган унтак тэр1зд! улплер ушш шамамен 25,0 г (mi) дэл елшенд! кажет. BipTeicri жузинш алганга дети араластырар алдында 40 °С температу ра кезшде 200,0 г (т₂) су косу керек. Кажет кезде, гомогендеуаш пайдаланылады (4.3 кара). Гомогсндслгсн улп жузпж аликвотасынын 15,0 г(т.ч) дэл елшенд!с!н сйыымдылыгы 50 мл елшем кутысына салады. Мына формуланы (1) пайдаланып улптн массасын (т, - унтак тэр1зд! балама) есептеу керек:

мундагы mi -влшенген улпнщ масссы, г,

т₂ - араластырар алдында косылган судын массасы, г;

т₃ -гомогенделген улпнщ жузпнжщ массасы, г.

6.1.3    Суйык коспаньщ унтак T0pi3fli улплер1

С'уйык коспадан унтак тор1зд1 6ip теки улплер ушж сыйымдылыгы 50 мл елшеу кутысында шамамен 2,0 г улпнж (т,) дол елшемдю кажет. 40 °С температура ке31нде 14 г су косу керек Bip теюз жузпшп алганга дейнн араластыру кажет.

6.1.4    Суйык улплер

Суйык улплерд1 сыйымдылыгы 50 мл елшем кутысына шамамен 20,0 г (т„) дол блшеншш салу керек

6.2    Шьн ару

Дайындалган улпт пайдаланып (7.1 кара), шогырлануы 0,4 моль/л аммоний ацетатынын 25 мл ертншсш косу керек, денгеГн pH = 3,8. Улп шайгынын кажетп келемге лей in сумей араластыру кажет. Араластыргыштын магнитп элементен 10 минут бойы арастыру керек. Фальц кагазынын квмепмен (сурып 597 %) 20 мл улесп сузу керек. Хроматографнялык талдауды орындау керек.

6.3    Таддау

6.3.1 Хроматографнялык талдау

6.2    алынган суз1лген ертндшщ 1,0 мл аликвотасын iiuiнле 500 мкл непзп ер1т!нд1с1 IS бар келем1 15 мл полипропилен сынауыкка салады (4,8.3 кара), влшемдеу уш1н стандартты epiTinnini дайындауда пайдаланылган сол ер1т1нд1ш пайдалану ете манызлы (4.8.3 кара). Ер1-пнд1ге 10 мл-ге деГпн су косып, жабу жоне араластыру кажет. Кеуект1н елшем1 0,22 мкм шприц сузпн1н кемепмен сузу керек (4.5). UHPLC-MS/MS жуйесше енпзу кажет.

Тшгпк хроматограмма улплер1 А косымшасында бер1лген.

5.3.2    UHPLC уш1н шарттар

Енпз1лген квлем1:    2    мкл;

Ваган темпсратурасы:    30    °С;

Агын жылдамдыгы:    0,45    мл/мин;

Мобильд1 фаза А:    0,1    %    (келемд!    молшер1)    судагы кумырска кышкылы;

Мобильд! фаза В:    Ацетонитрил.

Ваган уилн граднентп жоспар 1-кестеде бер1лген.

1-кесте. Баганга apiia.iiап градиент

Уакыт, мин	Жылжымалы фаза А, %	Жылжымалы фаза В, %
0	92	8
2,2	80	20
2,4	50	50

4,0	50	50
4,1	92	8
7,0	92	8

Суйыктык хроматография агынын дереккездж ластануынын алдын алу ушж 0 бастап 2 минутка дешн MS акаутапкыга ж1беред1

6.3.3    MS/MS ушж шартгар:

-    он электр бурку иондау;

-    каппллярлык кернеу, 2,2 кВ;

-    конустагы кернеу, 25 В;

-    экстрактордагы кернеу, 3,0 В;

-    дереккез температурасы, 140 °С;

-    десольватацня температурасы, 350 °С;

-    конус тэр1зд1 газ агыны, 40 л/саг,

-    газдын десольватация агыны, 700 л/саг.

Бакыланатын эр ауысу ушж 0,1 с устау уакытымен 14 В соктыгысу энергиясын белплеу керек. Мэндер багдарлы болып табылады жэне оны эр пайдаланылатын аспап yuiiH онтайландырады РА ушж m/z 220,2 —* 90,1ауысу жэне 0,0 бастап 2,1 минутка дешн IS нзотоппен белпленген ушж m/z 224,2 —* 94,1.

6.3.4    Табу

Bip реакциялы мониторинг реж1мжде MS табуга сэйкес РА жэне РА изотоппен белпленген молекулярлык иондарды 6ip мезплде табуды камтпды. Массанын тандалган турлену1 сэйкесжше m/z 220,2 —* 90,1 жэне m/z 224,2 —* 94,1 тен.

7 Есептеу

Opoip стандартты ephitui ушж РА жэне IS арасындагы шын ауданынын катынасын есептеу керек. ПК (х oci) шогырлануына карай шын ауданынын катынасы кестесж куру жолымен Калибрлеу кисыгын 5 нуктеш куру керек (0,16 бастап 2,40 нг-ra дешнп аукымда баганда). Сызыктык регресспяны есептеу. Орташа елшенген кисык регрессияны пайдалану усынылады (1/х).

Ешс (S) пен б©л1нбеГгпн кес!нд1н1 (/) калибрлеу кисыгымен есептеу кажет.

Массалык улесп есептейд1 РА, w, мг/100 г-мен, формуланы пайдаланып (2):

_1у _ (A-iyv,-v₃xюо Sm V₂x ЮОО *

мундагы А - зерттелетЫ ер1т1нд1деп шын ауданынын катынасы PA/IS; /-калибрлеу кисыгьшын кес1летпн xecinjici,

S-калибрлеу кисыгынын eHici;

V_t - улп шайгынынын келем1, мл (= 50);

Уj - сузжген ер1т1нд1ден тамшуырмен елшенген келем1, мл (= 1);

У₃ - зерттелетж epiTiiuinin сонгы келем1, мл (= 10); т - 1р1ктелет1н сынаманын массасы, г;

100 -100 г кайта шакканда турлену;

1000 -нг-нан мг-ra дешн турлену.

Л косымшасы

(ацпаратпшч)

Хроматограмма y-iruepi

081106001    MRMol    2    Channel*    ES*

А.1 суре ii-141PLC-MS/IYIS пайдаланып кальций иантотенатынын-|^|,С₆, ^,5N₂| iuiKi стандартты ертндшщ (IS) хрома гограммасы

081106001    MRM Ы 2 Channel*    ES*

А.2 суре ii-141PLC-MS/MS пайдаланып 6a.ia.iap тагамына арналган косна улпандеп пантотен кышкылынын хромаю! раммасы

В косымшасы

(сщпщюттыц)

Деректердщ далдт

В I кестесшде бермген деректер ISO 5725-2 [3] стандартына сэйкес жэне талдау эдюнщ сипаттамасы дэлдтн багалау уинн б1рлескен зерттеу процедуралары уинн АОАС-IUPAC б1регейленген хатта.масына сэйкес 2015 жылы [2] жарияланган зертхана аралык зертгеулерден алынды [4] Зерттеу дсрскккезде [5] бермген талаптар непзжде журпзЫдг Эд1ст1 тексеру туралы толык акпарат http://standards.iso.org/iso/20639 сайтында бер1лген.

B.I KecTeci- Пантотен кмшкылына арналган прецнзиондык деректер

УлН	\л	2Ь	3е	4d	5е	6f	78	8h	9'	10*
Зертхана аралык сынактар жылы	2014	2014	2014	2014	2014	2014	2014	2014	2014	2014
Курт ауыткыган мэндер жойылганнаи кейпн калган зертханалар саны	13	14	14	13	13	14	13	14	14	13
Орташа мэн, х, мг/100 г	2,590	3,850	6,960	8,070	5,040	5,910	0,549	6,650	2,070	1,570
Кайталанушылыкгы орташа квадраттык ауыткуы Sr, мг/100 г	0.050	0,050	0,140	0,130	0,140	0.170	0,008	0,220	0.060	0,030
Жан» ыртушыльпстын орташа квадраттык ауыткуы Sr, мг/100 г	0,130	0,200	0,350	0,330	0,230	0,290	0,022	0,360	0,140	0,090
Кайталанушылыктын турлену коэффициент^ (V.«, %	1.9	1,3	2.0	1,6	2.8	2.8	1,5	3.3	2,9	1,7
Жангыртушылыктын турлену коэффициент^ Сг.г, %	5.0	5,3	5.1	4,1	4.7	4.9	4,1	5.4	7,0	5.5
Кайталанушылык шеп г /г 2,8 х Sr/. мг/100 г	0.140	0,140	0.390	0,360	0.390	0,480	0,022	0,620	0,170	0.080
Жангыртушылык шеп R /К 2,8 х Sr/, мг/100 г	0.360	0,560	0.980	0.920	0.640	0.810	0,061	1,010	0,390	0.250
Дереккезге сэйкес Хорвитц коэффициент!Hiн мэш [6]	0,51	0.57	0,60	0.50	0,53	0.57	0,33	0,63	0,69	0,52
1 Вслок истинен ересекгерге upnu.ii им уктак mpivu суг косиаси; ь Соя Hcirtiiucii балатар тагамына аркам an iiuiHapa пиролмэденген уктак тэргий коспа; 'SRM 1849а: 1 МаЙЛЫЦ а ч Maniicpi бар cpcocKrcpiv аркам ан уктак тэр|ЗД1 коска; *Соя iicrniiueri бататар тагамына аркан ам утгтактэрш» коска: I    Балатар тагамына аркан ам уктак Tspiau косна; •Сут Kciniiucn RTF бататар тагамына аркан ан крепа, II    Бататар тагамына аркан ам карапайым утггак rapi vii уктак; 'Мийлыц жогары Maiinepi бар срссектсрге арканам ТД коспа; ’ Бслоктын жогары Manucpi бар cpcccrrcpic аркан ам ТД косна; ТД - гутынма лаПын.

1

   Polyiron PT3000 (жс1ск11 механизм). Aggregate PT-DA 3012 (Kinematics, Люцерн. Швейцария) сатылымла бар колайлы етмдер y.iricin 6i;uipcvti. Осы акпарат осы стандарта пайдаланушылардыц катайлылыгы ушш Ke.mpi.xii жэне осы ошмд1 ISO макуддаганына раетау болыи табылмайлы. Егер олар сол нэтнжегс алым келеппш корссплсе, балама ошмдер пайлаланылуы мумкш

2

   Сатылымда бар колайлы oniMiiiit y.mci Осы акпарат осы сгаилартлы найлаланушыларлыц колайлылыгы yniiii Ke.rripui,n жэне осы ошмш ISO макулдаганына раетау болыи табылмайлы. Егер олар сол нэтнжеге алып келетппн корссшсс. балама отмлер пайдаланылуы мумкш