КАЧЕСТВО ВОДЫ Обнаружение и подсчет кишечных энтерококков Часть 1

Миниатюризированный метод (наиболее вероятное число) путем инокуляции в жидкостной среде

СТ РК 1884-1-2009

(ИСО 7899-1:1998, NEQ)

Издание официальное

Комитет по техническому регулированию и метрологии Министерства индустрии и торговли Республики Казахстан (Г осстандарт)

Астана

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Республиканским государственным предприятием «Казахстанский институт стандартизации и сертификации» Комитета по техническому регулированию и метрологии и ТК по стандартизации № 71 в области экологическ безопасности «Объекты окружающей среды. Промышленные отходы».

2    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Председателя Комитета по техническому регулированию и метрологии Министерства индустрии и торговли Республики Казахстан от «17» сентября 2009 г. № 470-од.

3    Настоящий стандарт учитывает требования международного стандарта ISO 7899-1:1998 Water quality - Detection and enumeration of intestinal enterococci in surface and waste water - Part 1: Miniaturized method (Most Probable Namber) by inoculation in liquid medium, (Качество воды. Обнаружение и подсчет кишечных энтерококков. Часть 1. Миниатюризированный метод (наиболее вероятное число) путем инокуляции в жидкостной среде).

Степень соответствия - неэквивалентная, (NEQ).

4 СРОК ПЕРВОЙ проверки ПЕРИОДИЧНОСТЬ ПРОВЕРКИ

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Нормативные документы по стандартизации», а текст изменений - в ежемесячных информационных указателях «Государственные стандарты». В случае пересмотра (отмены) или замены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе «Государственные стандарты»

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Комитета по техническому регулированию и метрологии Министерства индустрии и торговли Республики Казахстан

3190 GOTO 3020

3200    X3=L9

3210    X4=U9

3220    X=(X3+X4)/2

3230    S=0

3240 FOR 1=1 TON

3250    E2=A(I,5)*X

3260 IF E2<E1 GOTO 3290

3270    E2=0

3280 GOTO 3300

3290    E2=EXP(-E2)

3300    S=S+A(I,6)/(1 -E2)

3310 NEXT I

3320 IF ABS(S-S1 )<A1 THEN 3380

3330 IF S-S1>0 THEN 3360

3340 X4=X

3350 GOTO 3220

3360 X3=X

3370 GOTO 3220

3380    Х5=Х*(2^ЛВ1)

PRINT" "

3400 PRINT "MPN=";X5

3410 PRINT "FOR A SAMPLE WITH DILUTION FACTOR 1" 3420 PRINT" AND VOLUME 1"

3430 RETURN

4000 REM CALCS AND PRINTS S.E. OF LOG10 (MPN)

4010    S2=0

4020 FOR 1=1 TON 4030 X3=A(I,5)

4040 E2=X3*X 4050 IF E2<E1 GOTO 4080 4060 X4=0 4070 GOTO 4090 4080    X4=EXP(-E2)

4090 S3=X3*X3*A(I,3)*X4 4100 S3=S3/(1-X4)

4110    S2=S2+S3

4120 NEXT I 4130    V=1/(X*X"S2)

4140    S1=SQR(V)/LOG(10)

4150 PRINT" "

4160 PRINT "S.E. OF LOG10 (MPN)=";S1 4170 RETURN

5000 REM CALCS 95 PERCENT C.I. FOR MPN 5010 X3=LOG(X)+B 1 *LOG(2)

5020 S2=SQR(V)

5030    U=EXP(X3+1.96*S2)

5040 L=EXP(X3 -1.96 * S2)

5050 PRINT" "

5060 PRINT "95 PERCENT C.I. =";L;"TO";U

CT РК 1884-1-2009

RETURN

REM CALCS. AND PRINTS DEVIANCE §3=ft

FOR 1=1 TON

S4=0

IF A(l,4)<=0 GOTO 6110 E2=A(I,5)*X IF E2<E1 GOTO 6090 E2=0

GOTO 6100 E2=EXP(-E2)

S4=A(I,4) *LOG( A(I,4)/(A(I,3 ) * (1-E2)))

S3=S3+S4

S4=0

IF A(I,4)>=A(I,3) GOTO 6160 S4=A(I,3)-A(I,4)

S4=S4*(LOG(S4/A(l,3))+A(l ,5)*X)

S3=S3+S4 NEXT I D=2*S3

REM СШ- SQUARED TEST OF DEVIANCE

V=N-1

PRINT""

PRINT "DEFIANCE =";D;"ON";V;" D.F."

PRINT""

PRINT "СШ-SQUARED SIGNIFICANCE LEVELS FOR";V;" D.F." PRINT"    5 PERCENT    ";X2(1,V)

PRINT"    1 PERCENT    ";X2(2,V)

PRINT"    .1 PERCENT    " ;X2(3,V)

RETURN

END

10

СТ РК 1884-1-2009

Приложение Б

(информационное)

Пример программного обеспечения для вычисления НВЧ

10    DIM Т (20)

20    DIMM (20)

30    DIM Р (20)

40    L =0

45    CLS:L = L + 1

50 PRINT "CALCULATION OF MPN № ";L 60    PRINT"

70    A = 1

80    PRINT

90 INPUT "NB OF DILUTIONS";DI: PRINT: PRINT

110    PRINT

120 P = 0 : S = :U = 0

130 FORI = 1TODI

140 PRINT "DILUTION"; I

150 INPUT "NB OF POSITIVE WELLS .."; P(l)

155 INPUT "NB OF WELLS " ;T(I)

160 INPUT "WATER VOLUME/WELL (ML)..." ;M(I): PRINT

170 P = P(l) + P

180 S = ((T(l) - P(I))*M(I)) + S

190 U = (M(I)*TI)) + U

200    МЕ?ЯЧ_ч

280 К = 1

290 NP = (P/U)*2^a(K + K/2 + K/4 + K/8 + K/16 + ^Af32 + K/64 + K/128 + K/256 + K/512)

300 PM = 0 310 FORI = 1TODI

320 PM = PM + ((P(l) * M (I) * EXP (- M(l) * NP)) / (1 - EXP (- M(l) * NP )))

330    NEXT I

340    IF PM < S THEN 370

350    К    = К + A

360    GOTO 290

370 DT = S - PM

380 IF ABS (DT) < = .000005 GOTO 702 390    К    = K-A

400    A    = A/10

410    GOTO 290

702    FOR I = 1 TO DI:ES = ES + P(I):NEXT I

710 FORI = 1TODI

720 K(l) = (Т(1)*(М(1)^Л2))

730    NEXT I

740 FOR 1=1 TO D1

745    IF (NP * M(l) > 88 THEN E(l) = 1.65E38:GOTO 760

750 E(I) = (EXP (M(I) * NP ) -1)

760    NEXT I

770    LL = 0

11

CT РК 1884-1-2009

780 FORI = 1 ТО D1

790 LL = LL + (K(I)/E(I))

800 NEXT I

810 CL = (LOG (NP)-(1.96 *(1/(NP*SQR(LL)))))

817 CU = (LOG (NP) + (1.96 * (1 / (NP * SQR(LL)))))

840 NP = INT (NP* 100 + .5) /100 850 PRINT PRINT " NPP = ";NP;" / ML"

860 PRINT: PRINT

870 PRINT "LIMITS INF=";INT (EXP (CL)* 100 + 5|/100;" / ML SUP=" ;INT (EXP#U) * 100 + .5)/100;" /ML"

880 PRINT: PRINT: INPUT "DO YOUWANT ANOTHER MPN (Y/N)?";RE$

890 IF RES = "N" THEN END 900 GOTO 45

12

Библиография

[1] МУ по проведению внутреннего контроля точности исследований (измерений) в лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы № 1-4/258 от 09.02.1999.

13

CT РК 1884-1-2009

УДК 628.16:006.35    МКС    13.060

Ключевые слова: кишечные энтерококки, титрационные микропланшеты, инкубация.

Басута_ж.    кол койылды IlimiMi 60x84 1/16

Кдтазы офсетак. K,apin Typi «KZ Times New Roman», «Times New Roman»

Шартты баспа табаты 1,86. Таралымы_дана. Тапсырыс

«Казахстан стандарттау жэне сертификаттау институты» республикалык мемлекеттж кэсторны 010000, Астана каласы Орынбор Kemeci, 11 уй, «Эталон орталыты» тимараты Тел.: 8(7172) 240074

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

КАЧЕСТВО ВОДЫ Обнаружение и подсчет кишечных энтерококков Часть 1

Миниатюризированный метод (наиболее вероятное число) путем инокуляции в жидкостной среде

Дата введения 2010-07-01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает миниатюризированный метод обнаружения и подсчета кишечных энтерококков в сточных и поверхностных водах посредством инокуляции в жидкостной среде.

Настоящий стандарт распространяется на воду с высоким содержанием взвешенных веществ и не применяется для исследования питьевой воды.

2    Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные нормативные документы:

СТ РК ИСО 5667-1-2006 Качество воды. Отбор проб. Часть 1. Руководство по составлению программ отбора проб.

СТ РК ИСО 8199-2006 Качество воды. Общие требования для подсчета микроорганизмов выращенных методом посева на питательной среде.

СТ РК ИСО/МЭК 17025-2007 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий.

ГОСТ 3118-1977 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия.

ГОСТ 4328-1977 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия.

ГОСТ 5962-1967 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия;

ГОСТ 6709-1972 Вода дистиллированная. Технические условия.

ГОСТ 13646-1968 Термометры стеклянные ртутные для точных измерений. Технические условия.

ГОСТ 20289-1974 Реактивы. Диметилформамид. Технические условия.

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования.

ГОСТ 25336-1982 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры.

ГОСТ ИСО 5725-1-2003. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Основные положения и определения;

ГОСТ ИСО 5725-2-2003. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений.

ИСО 5667-3:2003* Качество воды. Отбор проб. Часть 3. Руководство по хранению и обращению с пробами воды.

Издание официальное

применяется в соответствии с СТ РК 1.9

ПРИМЕЧАНИЕ При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов по ежегодно издаваемому информационному указателю «Нормативные документы по стандартизации» по состоянию на текущий год и соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный документ заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) документом. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающий эту ссылку.

3    Сущность метода

Сущность метода заключается в обнаружении энтерококков с помощью УФ-камеры после инкубационного периода в титрационном микропланшете, содержащем обезвоженную питательную среду.

4    Аппаратура, материалы и реактивы

-    автоклав электрический (стерилизатор паровой), с рабочим давлением пара не более 0,22 МПа;

- термостат электрический для выращивания бактерий с автоматическим терморегулятором (44 ± 0,5) С;

-    сушильный шкаф с ламинарным потоком воздуха;

-    УФ-камера, (лампа с длиной волны 366 нм);

-    pH-метр, в режиме измерения активности от (-1) до (+ 19,99) единий pH;

-    пробирки цилиндрические диаметром 16 мм и высотой 160 мм, или диаметром 20 мм и высотой 200 мм, по ГОСТ 25336;

-    дозаторы восьмиканальные, с пределом допускаемой относительной погрешности

± 3%;

-    стерильные наконечники для дозаторов;

-    аппарат для фильтрации с мембранными фильтрами с размером пор 0,2 мкм;

-    стерильные титрационные микропланшеты;

-    стерильные липкие ленты;

-    чашки бактериологические (Петри);

-    магнитная мешалка;

-    электрическая плита;

-    весы лабораторные специального назначения по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой погрешности взвешивания ± 0,01 г;

-    таймер лабораторный с точностью хода ± 1 с;

-    термометр по ГОСТ 13646-68;

-    дистиллированная вода по ГОСТ 6709;

-    бромофенол;

-    этанол по ГОСТ 5962;

-    триптоза;

-    гидрокарбонат натрия;

-    галактоза;

-    полиоксиэтиленсорбитан (Tween 80);

-    гидрокарбонат натрия;

-    налидиксовая кислота;

-    1М)]М-диметилформамид по ГОСТ 20289;

-    ацетат таллия;

-    4-метилзонтичный-р-0-глюкозид;

-    гидроксида натрия, по ГОСТ 4328 , ч.д.а., раствор концентрацией 0,1 моль/дм³;

2

CT РК 1884-1-2009

- соляная кислота по ГОСТ 3118, ч.д.а., раствор концентрацией 0,1 моль/дм¹.

5    Отбор и хранение проб

Отбор, хранение и подготовка проб осуществляются в соответствии с CT РК ИСО 5667-1 и ИСО 5667-3.

6    Питательная среда и растворители

6.1    Приготовление раствора для разбавления из синтетической морской соли

В 1000 см¹ дистиллированной воды растворяют 22,5 г синтетической морской соли и приливают 10,0 см¹ голубого раствора бромофенола. Раствор стерилизуют в автоклаве при температуре (121 ± 3) °С в течение 20 мин. Голубой раствор бромофенола готовят добавлением 0,04 г в 100 см¹ 50 %-ного этанола.

6.2    Дистиллированная вода для разбавления

Дистиллированную воду стерилизуют в автоклаве при температуре (121 ± 3) °С в течение 20 мин.

6.3    Питательная среда. Готовится перед использованием.

6.3.1    Подготовка растворов

6.3.1.1    Раствор А

В 900,0 см¹ дистиллированной воды (30 ± 3) °С помещают 40,0 г триптозы, 10,0 г гидрокарбоната натрия, 2,0 г галактозы и 1,5 см¹ полиоксиэтиленсорбитан моноолеата (Tween 80).

Раствор перемешивают с помощью магнитной мешалки, кипятят на электрической плите до полного растворения веществ и охлаждают до (20 ± 1) °С.

6.3.1.2    Раствор Б

В 50,0 см¹ дистиллированной воды с температурой от 60 °С до 70 °С помещают 4,0 г гидрокарбоната натрия и 0,25 г налидиксовой кислоты.

Раствор перемешивают с помощью магнитной мешалки и охлаждают до (20±1) °С.

6.3.1.3    Раствор В

В 50 см¹ дистиллированной воды с температурой от 60 °С до 70 °С помещают 2,0 г ацетата таллия и 0,1 г 4-метилзонтичного-р-0-глюкозида.

Раствор перемешивают с помощью магнитной мешалки и охлаждают до (20 ± 1) °С.

6.3.1.4    Раствор Г

В 2,0 см¹ 1\1,1\1-диметилформамида помещают 0,15 г 4-метилзонтичного-р-0-глюкозида.

6.3.2 Подготовленные растворы А, Б, В, Г смешивают и регулируют pH (7,5 ± 0,2) раствором гидроксида натрия или соляной кислотой. Полученный объем питательной среды стерилизуется путем фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0,2 мкм и распределяется в 96-луночный титровальный микропланшет по 100 мкл в каждую лунку. Микропланшет помещают в сушильный шкаф до полного обезвоживания.

7    Проведение испытания

Количество разбавлений с целью инокуляции изменяется согласно предполагаемому уровню загрязнения воды. Примеры разбавлений приведены в Таблице 1.

Таблица 1-Разбавление воды согласно предполагаемому уровню загрязнения

Происхождение образца Количество разбавлений Количество лунок и разбавлений Измеряемые диапазоны бактерий в 100 см3 Вода из плавательных бассейнов 2 64 лунки до 1:1 32 лунки до 1:10 от 15 до 3,5-104 Поверхностная вода 4 24 лунки до 1:1 24 лунки до 1:10 24 лунки до 1:100 24 лунки до 1:1000 от 40 до 3,2-106 Сточные воды и водоочистные станции 6 16 лунок до 1:1 16 лунок до 1:10 16 лунок до 1:100 16 лунок до 1:1000 16 лунок до 1:10000 16 лунок до 1:100000 и выше от 60 до 6,7-108

7.1    Расчет разбавлений

7.1.1    Разбавление для воды соленостью менее 30 мг/дм³.

Соленость определяется рефрактометром или эквивалентным методом. Подготавливают количество стерильных пробирок согласно количеству предполагаемых разбавлений.

Подготовить исходное разведение 1:1 (9,0 см³ исследуемого образца и 9,0 см³ раствора синтетической морской соли). Интенсивно перемешивают анализируемый образец воды. Используя новую стерильную пипетку, переносят 1,0 см³ раствора первой пробирки во вторую, содержащую 9,0 см³ раствора синтетической морской соли (разбавление 1:10). Из второго разведения, готовят последующее. Разведение продолжают, пока не будут подготовлены все разбавления. Для приготовления каждого разведения используют новую стерильную пипетку.

7.1.2    Разбавление для воды с соленостью 30 мг/дм³ и более.

Подготавливают количество стерильных пробирок согласно количеству предполагаемых разбавлений.

Подготавливают исходное разведение 1:1 (9,0 см³ исследуемого образца и 9,0 см³ дистиллированной воды). Интенсивно перемешивают. Используя новую стерильную пипетку, переносят 1,0 см³ раствора первой пробирки во вторую, содержащую 9,0 см³ раствора синтетической соли (разбавление 1:10). Из второго разведения, готовят следующее. Разведение продолжают, пока не будут подготовлены все разбавления. Для приготовления каждого разведения используют новую стерильную пипетку.

7.2    Инокуляция и инкубация титрационных микропланшетов

7.2.1 Инокуляция

Содержимое первой пробирки переносят в стерильную чашку Петри. Используя многоканальную пипетку, распределяют 200 мкл в каждую лунку титрационного микропланшета в соответствии с первым разбавлением. Таким образом, переносят и последующие разбавления, меняя чашку Петри и стерильные наконечники перед каждым разбавлением. ²

CT РК 1884-1-2009

7.2.2 Инкубация

После инокуляции титрационного микропланшета, его покрывают одноразовой стерильной клейкой лентой. Титрационный микропланшет помещают в термостат и инкубируют при температуре (44 ± 0,5) °С от 36 ч до 72 ч.

8 Расчет и выражение результатов

8.1    Считывание результатов

Подсчет микроорганизмов проводят в соответствии с требованиями СТРКИСО 8199.

Каждый титрационный микропланшет с липкой лентой помещают в УФ-камеру. Все лунки, в которых наблюдается голубое флуоресцирование рассматривают как положительные.

8.2    Выражение результатов

Необходимо обращать внимание на число положительных лунок.

ПРИМЕР 1 Вода из плавательного бассейна В разбавлении 1:1: из 64, положительные 32 лунки.

В разбавлении 1:10: из 32, положительные 5 лунок.

32:5 - характерное число (далее - ХЧ).

ПРИМЕР 2 Вода поверхностная В разбавлении 1:1: из 24, положительные 24 лунки.

В разбавлении 1:10: из 24, положительные 18 лунок.

В разбавлении 1:100: из 24, положительные 5 лунок.

В разбавлении 1:1000: из 24, положительные 1 лунка.

18:5:1 -ХЧ.

ПРИМЕР 3 Воды сточные

В разбавлении 1:1: из 16, положительные 16 лунок.

В разбавлении 1:10: из 16, положительные 16 лунок.

В разбавлении 1:100: из 16, положительные 12 лунок.

В разбавлении 1:1000: из 16, положительные 5 лунок.

В разбавлении 1:10000: из 16, положительные 0 лунок.

В разбавлении 1:100000: из 16, положительные 0 лунок.

12:5:0 - ХЧ

Если разбавлений было 3 и более, то ХЧ из трех цифр заканчивающихся на 0 и регистрируют полученный результат в соответствии с СТ РК ИСО 8199.

8.3    Расчет наиболее вероятного числа и его доверительного интервала производят с помощью программного обеспечения приведены в Приложениях А и Б.

Наиболее вероятное число (далее - НВЧ) - статистическая оценка плотности микроорганизмов, соответствующих распределению Пуассона в инокуляционных объемах. Программное обеспечение позволяет выполнить расчеты НВЧ кишечных энтерококков на 1,0 см³ воды для каждого разбавления с доверительным интервалом 95 %.

ПРИМЕР 1 Предположим, что характерное число (ХЧ), наиболее низкий предел (далее - ННП), наиболее высокий предел (далее - НВП). Если ХЧ составляет 32:5, программное обеспечение выдает

7,56 энтерококков на 1,0 см³. (ННП=5,42-НВП), (ННП=10,54 энтерококков на 1,0 см³ исследуемой

воды).

ПРИМЕР 2 Если ХЧ составляет 18:5:1, программное обеспечение выдает 159,08 энтерококков на 1,0 см³ (ННП=101,99-НВП), (ННП=248,11 энтерококков на 1,0 см³ исследуемой воды).

ПРИМЕР 3 Если ХЧ составляет 12:5:0, программное обеспечение выдает 1724,61 энтерококков на 1,0 см³. (ННП=1003,98-НВП), (ННП=2962,50 энтерококков на 1,0 см³ исследуемой воды)

Если положительные лунки отсутствуют, то результат выражают в следующей форме:

< и /100 см³,

где и - наиболее вероятное число для одной положительной лунки.

5

8.4 Контроль точности измерений

8.4.1    Расчет значений повторяемости и воспроизводимости производится в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1 и ГОСТ ИСО 5725-2. Внутрилабораторные испытания воды для плавательных бассейнов показали следующие результаты: 100 лабораторий исследовали 3 образца воды (один образец морской воды и два образца пресной воды). При уровне в 100 кишечных энтерококков на 100 см³ воды R=5,2, г=3,6. При уровне 400 кишечных энтерококков на 100 см³ воды: R=3,7, г=2,1 Во время испытаний при участии 9 лабораторий исследующих 4 естественно-загрязненных образца воды. В речной воде содержащей от 2,2 10³ до 1,5 10⁴ кишечных энтерококков на 100 см³ воды: г= 1,5, R=2,7. В сточной воде содержащей от 1,9 10⁴ до 5,1 10³ кишечных энтерококков на 100 см³ воды: r=2,6, R=3,9.

8.4.2    Внутренний контроль точности измерений проводится в соответствии с требованиями [1].

9 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен быть оформлен в соответствии с требованием СТ РК ИСО/МЭК 17025.

СТ РК 1884-1-2009

Приложение А

(информационное)

Пример программного обеспечения для статистического анализа НВЧ

о REM

20 REM GENERAL PURPOSE PROGRAM FOR MPN, IISEOL 30 REM AND HOMOGENEITY TEST STATISTICS 50 REM

60    DIMA(10,6),X2(3,9)

70 REM SET PROGRAM LIMITS

80    D9=10

90    U9=50

100    L9=0

110    Al=.0005

120    El=85

130 REM SET CHI-SQUARED SIGNIFICANCE LEVELS 140 GOSUB 1000

150 REM READ IN RESULTS OF A DILUTION SERIES 160 GOSUB 2000

170 REM CALC AND PRINT THE MPN 180 GOSUB 3000

190 REM CALC AND PRINT S.E. OF LOGIO(MPN)

200 GOSUB 4000

210 REM CALC AND PRINT 95 PERCENT C.I. FOR MPN 220 GOSUB 5000

230 REM CALC AND PRINT DEVIANCE 240 GOSUB 6000 250 STOP

1000 REM SET СШ-SQUARED SIGNIFICANCE LEVELS 1010 FOR 1=1 TO 3 1020    F0RJ=1T09

1030 READX2(I,J)

1040 NEXTJ 1050 NEXT I

1060 REM 5 PERCENT LEVELS DF=1.9 1070 DATA 3.84, 5.99, 7.81, 9.49, 11.07 1080 DATA 12.59, 14.07, 15.51, 16.92 1090 REM 1 PERCENT LEVELS 1100 DATA 6.63, 9.21, 11.34, 13.28, 15.09 1110 DATA 16.81, 18.48, 20.09, 21.67 1120 REM. 1 PERCENT LEVELS 1130 DATA 10.83, 13.81, 16.27, 18.47, 20.52 1140 DATA 22.46, 24.32, 26.12, 27.88 1150 RETURN

2000 REM READ IN RESULTS OF A DILUTION SERIES 2010 PRINT "MPN GENERAL PURPOSE PROGRAM" ⁴

PR TNT PRINT" "

PRINT "M.A. HURLEY AND M E. ROSCOE"

PRINT" "

PRINT "NUMBER OF DILUTION LEVELS K="; INPUT N

IF N<1 THEN GOTO 2060 IF N<=D9 THEN GOTO 2120

PRINT "ERROR *** LEVELS EXCEED MAXIMUM"

STOP S1=0

FOR 1=1 TON PRINT" "

PRINT "LEVEL NUMBER 1=";1 PRINT "DILUTION FACTOR D=";

INPUT A(l,2)

PRINT "SUBSAMPLE VOLUME V=";

INPUT A(l,l)

PRINT "NUMBER OF SUB SAMPLES N=";

INPUT A(l,3)

PRINT "NUMBER OF POSITIVE SUBSAMPLES«P=";

INPUT A(l,4)

PRINT "IS THE DATA CORRECT FOR LEVEL ";1;"(Y OR N)' INPUT R$

IF R$="Y" THEN 2280 GOTO 2140 A(I,5)=A(1,1)* A(I,2)

A(I,6)=A(I,5)*A(I,4)

S1=S1+A(I,5)*A(I,3)

NEXT I RETURN

REM CALCULATES AND PRINTS MPN В 1=0

S3=0

FOR J=1 TON

E2=A(J,5)*U9 IF E2<E1 GOTO 3080 E2=0

GOTO 3090 E2=EXP(-E2)

S3=S3+A(J,6)/(1-E2)

3|0Д_|МЕр-Ду

3110 IFS3-S1>=0THEN 3130 GOTO 3200 FOR 1=1 TON A(I,5)=A(I,5)*2 A(I,6)=A(I,6)*2 NEXT I S1=S1*2 B1=B1+1

1

2

3

4