Государственное
санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения
концентрации штамма-продуцента
бутанола Clostridium acetobutylicum
3108
в
воздухе рабочей зоны и атмосферном
воздухе населенных мест
Методические указания
МУК 4.2.2716-10
МУК 4.2.2726-10
Москва 2011
1.
Разработаны ФГУН Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической
регламентации биопрепаратов (д.б.н. Н.И. Шеина); ГОУ ВПО Российский
государственный медицинский университет (к.б.н. С.Н. Успенская, к.б.н. В.И.
Сигаев, к.б.н. А.В. Воробьев).
2.
Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному
санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010
№ 1).
3.
Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты
потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом
Российской Федерации Г.Г. Онищенко 4 августа 2010 г.
4. Введены в
действие с 4 октября 2010 г.
5. Введены
впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Общие положения и область применения. 2
2. Биологическая характеристика Clostridium acetobutylicum 3108 и его гигиенический норматив. 2
3. Пределы измерений. 3
4. Метод измерений. 3
5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы.. 3
6. Требования безопасности. 4
7. Требования к квалификации операторов. 4
8. Условия измерений. 4
9. Проведение измерения. 4
10. Вычисление результатов измерения. 5
11. Оформление результатов измерений. 5
|
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
4 августа 2010 г.
Дата введения: 4 октября 2010 г.
|
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения
концентрации штамма-продуцента бутанола
Clostridium acetobutylicum 3108
в атмосферном воздухе населенных мест
Методические указания
1. Общие положения и
область применения
Настоящие методические указания
устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа
концентрации клеток штамма Clostridium acetobutylicum 3108 - продуцента бутанола в атмосферном воздухе населенных мест в
диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха.
Методические указания
разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ
17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам
определения загрязняющих веществ» и ГОСТ
Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».
Методические указания
предназначены для применения в учреждениях Федеральной службы по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также в лабораториях
предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке
на право проведения микробиологических исследований.
Методические указания
одобрены и рекомендованы секцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и
микробного загрязнения окружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы
гигиены окружающей среды».
2. Биологическая
характеристика Clostridium acetobutylicum 3108 и его гигиенический норматив
Систематическое положение
микроорганизма.
Класс
|
Schizomycetes
|
Отряд
|
Eubacteriales
|
Семейство
|
Bacillaceae
|
Род
|
Clostridium
|
Вид
|
acetobutylicum
|
Штамм
|
3108
|
Штамм Clostridium acetobutylicum
3108 выделен из почвы, строгий анаэроб,
представлен грамположительными спорообразующими прямыми палочками. Палочки
размером 0,6 - 0,9´2,4 - 4,7 мкм подвижны за счет перитрихиальных
жгутиков. Образуют центрально расположенные эндоспоры, обычно растягивающие
клетку. Обладают сахаролитическими и протеолитическими свойствами. Желатин и
глюкозу гидролизуют, ферментируют молоко. Не редуцируют сульфаты.
Каталазоотрицательные.
Штамм растет на жидких и
агаризованных средах. Оптимальная температура роста 36 - 37 °С. На твердой
питательной среде (картофельно-глюкозный агар) на 2 - 3-й сутки роста в
анаэростате образует очень мелкие (0,7 - 1,5 мм), светлые, непигментированные,
полупрозрачные круглые колонии однородной структуры, блестящие, с выпуклой
гладкой поверхностью.
Предельно допустимая
концентрация (ПДК) штамма в атмосферном воздухе населенных мест - 500 кл./м3,
пометка А.
3. Пределы измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений
количества клеток плесневого гриба в атмосферном воздухе населенных мест в
диапазоне концентраций от 10 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха при
доверительной вероятности 0,95.
4. Метод измерений
Метод основан на аспирации из атмосферного
воздуха клеток микроорганизма на плотную картофельно-глюкозную среду, выращивании
в анаэростате в течение 2 - 3 суток при температуре 36 - 37 °С и подсчете
количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.
5. Средства измерений,
вспомогательные устройства, реактивы и материалы
При выполнении измерений применяют
следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.
5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы
Импактор
микробиологический «Флора-100»
|
ТУ 9443-001-05031637-2002
|
Прибор для бактериологического анализа
воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)
|
ТУ 64-12791-77
|
Прибор MAS-100 ECO фирмы «Merk» (Германия) для отбора проб воздуха*
|
|
Термостаты электрические
|
ГОСТ 10444.12-88
|
Автоклав электрический
|
ГОСТ 9586-75
|
Бокс, оборудованный бактерицидными
лампами Холодильник бытовой
|
ГОСТ 26678-85
|
Весы лабораторные ВЛКТ-500
|
ГОСТ 24104-88
|
Микроскоп биологический с иммерсионной
системой типа «Биолам» Л-211
|
|
Лупа с увеличением ´10
|
ГОСТ 25706-83
|
Чашки Петри бактериологические
плоскодонные, стеклянные, диаметром 90 мм
|
ГОСТ 23932-90
|
Пробирки бактериологические П1 и П2
вместимостью 15 и 20 мл
|
ГОСТ 25336-82
|
Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл
|
ГОСТ 10515-75
|
Колбы конические вместимостью 250 и 500
мл
|
ГОСТ 1770-74
|
Секундомер
|
ГОСТ 9586-75
|
Барометр
|
ГОСТ 24696-79
|
Марля медицинская
|
ГОСТ 9412-77
|
Вата медицинская гигроскопическая
|
ГОСТ 25556-81
|
5.2. Реактивы, растворы
Агар
микробиологический
|
ГОСТ 17206-84
|
Вода дистиллированная
|
ГОСТ 6709-72
|
Спирт этиловый ректификат
|
ГОСТ 5962-67
|
Агаризованная картофельно-глюкозная
среда (агар - 20 г/л, очищенный и измельченный картофель - 250 г/л, глюкоза -
5 г/л, сульфат аммония - 1,5 г/л, мел - 2,0 г/л, цистеин - 0,5 г/л), рН 6,2,
режим стерилизации: 1 атм., 20 мин
|
|
_____________
* Возможно также использование других сертифицированных
аналогов пробоотборника.
6.
Требования безопасности
При выполнении измерений концентрации
клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.
6.1.
Санитарные правила СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
6.2. Правила техники безопасности при работе
с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.3. Электробезопасность при работе с
электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
6.4. «Инструкции по устройству, требованиям безопасности
и личной гигиены при работе микробиологических лабораториях предприятий
микробиологической промышленности» (1977).
6.5. Все виды работ с реактивами проводят
только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим
материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
7. Требования к
квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их
результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием,
прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области
микробиологических исследований.
8. Условия измерений
Процессы приготовления
растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5)
°С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт.ст. и влажности воздуха не более 80 %.
9. Проведение измерения
9.1. Условия отбора проб
воздуха
Для определения концентрации
клеток штамма-продуцента воздух аспирируют при помощи пробоотборника со
скоростью 100 л/мин на поверхность агаризованной среды. Время аспирации воздуха
(1 - 5 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.
Аппарат перед каждым отбором
пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают
поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю
стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со
средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение
крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки
диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от
данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время
аспирации и дату отбора пробы.
9.2. Выполнение анализа
При выполнении анализа
воздуха картофельно-глюкозную среду расплавляют, остужают до 50 - 60 °С,
тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки с застывшей средой
помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки
бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.
После отбора проб воздуха
чашки Петри помещают в анаэростат и термостатируют при температуре 36 - 37 °С.
Через 48 - 72 ч производят подсчет выросших колоний по
культурально-морфологическим признакам.
Ростовые свойства
используемой питательной среды должны быть проверены в соответствии с «Требованиями
к ростовым свойствам питательных сред» (Государственная Фармакопея СССР, изд. XI, вып. 2, с. 208), что позволит более
полно оценить пределы ошибки метода. Для этого эталонный музейный
штамм-продуцент высевается на 2 - 3 чашки используемой среды, термостатируется
в анаэростате и на 2 - 3-и сутки производится подсчет выросших колоний.
Лиофилизованную культуру
музейного штамма необходимо использовать в 2 - 3 пассажа во избежание потери им
заданных ростовых свойств.
10. Вычисление
результатов измерения
Расчет концентрации клеток продуцента в
пересчете на 1 м3 воздуха производят по формуле:
кл./м3, где
Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;
N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;
1000 -
коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;
V - объем воздуха,
л (произведение скорости на время аспирации).
11. Оформление
результатов измерений
Результаты
измерений оформляют протоколом по форме:
Протокол №
количественного
микробиологического анализа штамма-продуцента
в атмосферном воздухе
населенных мест
1.
Наименование и адрес испытательной лаборатории (центра), проводящей измерения,
аттестат аккредитации лаборатории.
2.
Юридический и фактический адрес организации-заказчика.
3.
Идентификация используемого метода, методики, ссылки на методы, используемые
испытательной лабораторией.
4. Описание
состояния объекта исследования.
5. Дата
получения объекта измерений и дата проведения анализа.
6. Место
отбора пробы.
7.
Результаты микробиологического анализа
Шифр или № пробы
|
Определяемый микроорганизм
|
Концентрация, кл./м3
|
|
|
|
Ответственный
исполнитель:
Научный руководитель:
Список литературы
1. РД 52.04.186-96
«Руководство по контролю загрязнения атмосферы». М., 1991, 693 с.
2. ГОСТ 8.563-96 ГСИ «Методики выполнения измерений».
3. Положение об организации работы по технике
безопасности в микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с.
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и
личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий
микробиологической промышленности. М., 1977. 7 с.
5. ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам
определения загрязняющих веществ». М.: Изд-во стандартов, 1981. 3 с.