Государственное санитарно-эпидемиологическое
нормирование Российской Федерации
4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения
концентрации штамма-продуцента
бутанола Clostridium
acetobutylicum 3108
в воздухе рабочей зоны и атмосферном
воздухе населенных мест
Методические указания
МУК 4.2.2716-10
Москва • 2011
1.
Разработаны ФГУН Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической
регламентации биопрепаратов (д.б.н. Н.И. Шеина); ГОУ ВПО Российский
государственный медицинский университет (к.б.н. С.Н. Успенская, к.б.н. В.И.
Сигаев, к.б.н. А.В. Воробьев).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по
государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной
службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
(протокол от 10.06.2010 № 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по
надзору в сфере защиты потребителей и благополучия человека, Главным
государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 4 августа
2010 г.
4. Введены в действие с 4 октября 2010 г.
5. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Общие положения и область
применения. 2
2. Биологическая характеристика
штамма Cl. acetobutylicum 3108
и его гигиенический норматив. 2
3. Пределы измерений. 3
4. Метод измерений. 3
5. Средства измерений,
вспомогательные устройства, реактивы и материалы.. 3
5.1.
Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы.. 3
5.2.
Реактивы, растворы.. 4
6. Требования безопасности. 4
7. Требования к квалификации
операторов. 4
8. Условия измерений. 4
9. Проведение измерения. 4
9.1.
Условия отбора проб воздуха. 4
9.2.
Выполнение анализа. 5
10. Вычисление результатов
измерения. 5
11. Оформление результатов
измерений. 5
Список литературы.. 5
|
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной
службы по надзору в
сфере защиты прав
потребителей и благополучия
человека, Главный
государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
4 августа 2010 г.
Дата введения: 4 октября 2010 г.
|
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Метод микробиологического измерения
концентрации штамма-продуцента бутанола
Clostridium
acetobutylicum 3108
в воздухе рабочей зоны
Методические указания
1.
Общие положения и область применения
Настоящие методические указания устанавливают методику
проведения микробиологического количественного анализа концентрации
штамма-продуцента бутанола Cl. acetobutylicum 3108 в воздухе
рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500000 клеток в 1 м3
воздуха.
Методические указания разработаны в
соответствии с требованиями ГОСТ
12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические
требования» и ГОСТ
Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».
Методические указания предназначены для
применения в учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека, а также в лабораториях других
предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке
на право проведения микробиологических исследований.
Методические указания одобрены и
рекомендованы секцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного
загрязнения окружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены
окружающей среды».
2.
Биологическая характеристика штамма Cl. acetobutylicum 3108 и его гигиенический норматив
Систематическое положение
микроорганизма.
Класс
|
Schizomycetes
|
Отряд
|
Eubacteriales
|
Семейство
|
Bacillaceae
|
Род
|
Clostridium
|
Вид
|
acetobutylicum
|
Штамм
|
3108
|
Штамм Clostridium acetobutylicum 3108
выделен из почвы, строгий анаэроб, представлен грамположительными
спорообразующими прямыми палочками. Палочки размером 0,6 - 0,9´2,4 - 4,7 мкм подвижны за счет перитрихиальных
жгутиков. Образуют центрально расположенные эндоспоры, обычно растягивающие
клетку. Обладают сахаролитическими и протеолитическими свойствами. Желатин и
глюкозу гидролизуют, ферментируют молоко. Не редуцируют сульфаты.
Каталазоотрицательные.
Штамм растет на жидких и агаризованных
средах. Оптимальная температура роста 36 - 37 °C. На твердой питательной среде
(картофельно-глюкозный агар) на 2 - 3-и сутки роста в анаэростате образует
очень мелкие (0,7 - 1,5 мм), светлые, непигментированные, полупрозрачные
круглые колонии однородной структуры, блестящие, с выпуклой гладкой
поверхностью.
Предельно допустимая концентрация (ПДК)
штамма в воздухе рабочей зоны - 5000 кл/м3, пометка А.
3.
Пределы измерений
Методика обеспечивает выполнения измерений количества
клеток микроорганизма Cl. acetobutylicum 3108 в воздухе
рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500000 клеток в 1 м3
воздуха при доверительной вероятности 0,95.
4.
Метод измерений
Метод основан на аспирации из воздуха производственных
помещений клеток микроорганизма на плотную картофельно-глюкозную среду,
выращивании в анаэростате в течение 2 - 3 суток при температуре 36 - 37 °C и
подсчете количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим
признакам.
5.
Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
При выполнении измерений применяют следующие средства
измерений, вспомогательные устройства и материалы.
5.1.
Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы
Импактор
микробиологический «Флора-100»
|
ТУ 9443-001-05031637-2002
|
Прибор для бактериологического анализа
воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)
|
ТУ 64-12791-77
|
Прибор MAS-100 ECO
фирмы «Merk» (Германия) для отбора проб воздуха*
|
|
_____________
* Возможно также использование других сертифицированных
аналогов пробоотборника.
|
Термостаты электрические
|
ГОСТ 10444.12-88
|
Автоклав электрический
|
ГОСТ 9586-75
|
Бокс, оборудованный бактерицидными
лампами
|
|
Холодильник бытовой
|
ГОСТ 26678-85
|
Весы лабораторные ВЛКТ-500
|
ГОСТ 24104-88
|
Микроскоп биологический с иммерсионной
системой типа «Биолам» Л-211
|
|
Лупа с увеличением ´10
|
ГОСТ 25706-83
|
Чашки Петри бактериологические
плоскодонные, стеклянные, диаметром 90 мм
|
ГОСТ 23932-90
|
Пробирки бактериологические П1 и П2
вместимостью 15 и 20 мл
|
ГОСТ 25336-82
|
Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл
|
ГОСТ 10515-75
|
Колбы конические вместимостью 250 и 500
мл
|
ГОСТ 1770-74
|
Секундомер
|
ГОСТ 9586-75
|
Барометр
|
ГОСТ 246 96-79
|
Марля медицинская
|
ГОСТ 9412-77
|
Вата медицинская гигроскопическая
|
ГОСТ 25556-81
|
5.2.
Реактивы, растворы
Агар
микробиологический
|
ГОСТ 17206-84
|
Вода дистиллированная
|
ГОСТ 6709-72
|
Спирт этиловый ректификат
|
ГОСТ 5962-67
|
Агаризованная картофельно-глюкозная
среда (агар - 20 г/л, очищенный и измельченный картофель - 250 г/л, глюкоза -
5 г/л, сульфат аммония - 1,5 г/л, мел - 2,0 г/л, цистеин - 0,5 г/л), pH
6,2, режим стерилизации: 1 атм., 20 мин
|
|
6.
Требования безопасности
При выполнении измерений концентрации клеток
штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.
6.1. Санитарные правила СП 1.3.2322-08
«Безопасность работы с микроорганизмами III - IV
групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
6.2. Правила техники безопасности при работе с
химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.3. Электробезопасность при работе с электроустановками
по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
6.4. Руководство «Положение об организации работы по
технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980), «Инструкции
по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в
микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности»
(1977).
6.5. Все виды работ с реактивами проводят только в
вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом
осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
7.
Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов
допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших
соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических
исследований.
8.
Условия измерений
Процессы приготовления растворов и подготовки проб к
анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °C,
атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.
9.
Проведение измерения
9.1. Условия отбора проб воздуха
Для определения концентрации клеток микроорганизма
воздух аспирируют при помощи пробоотборника со скоростью 100 л/мин на
поверхность плотной питательной картофельно-глюкозной среды. Время аспирации
воздуха (1 - 5 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма.
Аппарат перед каждым отбором пробы
воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают
поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю
стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со
средой, одновременно снимая с нее крышку.
Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После
отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку
Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом
отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
9.2.
Выполнение анализа
При выполнении анализа воздуха картофельно-глюкозную
среду расплавляют, остужают до 50 - 60 °C, тщательно перемешивают и разливают в
чашки Петри. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при
температуре 37 °C, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки
используют для контроля воздуха.
После отбора проб воздуха чашки Петри
помещают в анаэростат и термостатируют при температуре 36 - 37 °C. Через 48 -
72 ч производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим
признакам.
Ростовые свойства используемой
питательной среды должны быть проверены в соответствии с «Требованиями к
ростовым свойствам питательных сред» (Государственная Фармакопея СССР, изд. XI,
вып. 2, с. 208), что позволит более полно оценить пределы ошибки метода. Для
этого эталонный музейный штамм-продуцент высевается на 2 - 3 чашки используемой
среды, термостатируется в анаэростате и на 2 - 3-и сутки производится подсчет
выросших колоний.
Лиофилизованную культуру музейного штамма
необходимо использовать в 2 - 3 пассажа во избежание потери им заданных
ростовых свойств.
10.
Вычисление результатов измерения
Расчет концентрации клеток
продуцента в пересчете на 1 м3 воздуха производят по формуле:
где
Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;
N - количество зон вокруг колоний продуцента, выросших
на чашке;
1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;
V - объем воздуха, л (произведение
скорости на время аспирации).
11.
Оформление результатов измерений
Результаты измерений
оформляют протоколом по форме:
Протокол №
количественного
микробиологического анализа штамма-продуцента Cl. acetobutylicum
в воздухе рабочей зоны
1. Наименование и адрес испытательной лаборатории
(центра), проводящей измерения, аттестат аккредитации лаборатории.
2. Юридический и фактический адрес
организации-заказчика.
3. Идентификация используемого метода, методики, ссылки
на методы, используемые испытательной лабораторией.
4. Описание состояния объекта исследования.
5. Дата получения объекта измерений и дата проведения
анализа.
6. Место отбора пробы.
7.
Результаты микробиологического анализа
Шифр или № пробы
|
Определяемый микроорганизм
|
Концентрация, кл./м3
|
|
|
|
Ответственный
исполнитель:
Научный руководитель:
Список литературы
1. ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования».
2. ГОСТ Р 8.563-96
ГСИ «Методики выполнения измерений».
3. Положение об организации работы по технике
безопасности в микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с.
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и
личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий
микробиологической промышленности. М., 1977. 7 с.