Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации клеток и спор микроорганизмов в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе

Сборник методических указаний МУК 4.2.2233—4.2.2239—07

Издание официальное

Москва • 2010

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации клеток и спор микроорганизмов в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе

Сборник методических указаний МУК 4.2.2233—4.2.2239—07

10. Вычисление результатов измерения

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м³ воздуха проводят по формуле:

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по приведенной форме.

Протокол №

количественного микробиологического анализа штамма-продуцента Bacillus lichemformis 103 в атмосферном воздухе населенных мест

1.    Дата проведения анализа_

2.    Место отбора пробы_

3.    Название лаборатории_

4.    Юридический адрес организации __

Результаты микробиологического анализа

Ответственный исполнитель: Научный руководитель:

Список литературы

1.    ГОСТ 12.1. 005—88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования».

2.    ГОСТ 8.563-96 ГСИ «Методики выполнения измерений».

3.    Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с.

4.    Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. М., 1977. 7 с.

36

МУК 4.2.2233—4,2.2239—07

Содержание

Микробиологическое измерение концентрации клеток и спор Bacillus subtilis 24Д- действующего вещества микробиологического

фунгицида «Интеграл» в воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.2233—07................3

Микробиологическое измерение концентрации клеток плесневого гриба PeniciUium canescens PlPh33 - продуцента пектинлиазы и фитазы в

воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.2234—07.........................................................13

Микробиологическое измерение концентрации клеток плесневого гриба PeniciUium canescens PlPh33 - продуцента пектинлиазы и фитазы в

атмосферном воздухе населенных мест: МУК 4.2.2235—07............................21

Микробиологическое измерение концентрации клеток Bacillus licheniformis 103 - продуцента а-амилазы в атмосферном воздухе

населенных мест: МУК 4.2.2236—07.................................................................29

Микробиологическое измерение концентрации клеток Bacillus licheniformis 103 - продуцента а-амилазы в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.2237—07................................................................................................37

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма PeniciUium canescens F-912 - продуцента р-ксиланазы в воздухе

рабочей зоны: МУК 4.2.2238—07.......................................................................47

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма PeniciUium canescens F-912 - продуцента р-ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест: МУК 4.2.2239—07...................................................55

ББК 51.21 М59

М59 Микробиологическое измерение концентрации клеток и спор микроорганизмов в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе: Сборник методических указаний.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010.— 63 с.

ISBN 978—5—7508—0822—9

1.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 марта 2007 г. № 1).

2.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко б августа 2007 г.

ББК 51*21

ISBN 978—5—7508—0822—9

© Роспотребнадзор, 2010 © Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации клеток Bacillus licheniformis 103 -продуцента а-амилазы в атмосферном воздухе населенных мест

Методические указания МУК 4.2.2236—07

МУК 4.2.2236—07

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

6 августа 2007 г.

Дата введения: 1 октября 2007 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации клеток Bacillus licheniformis 103 - продуцента а-амилазы в атмосферном воздухе населенных мест

Методические указания МУК 4.2.2236—07

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма В. licheniformis 103 - продуцента а-амилазы в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50 000 клеток в 1 м³ воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и ГОСТ Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Методические указания одобрены и рекомендованы секцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды».

31

2. Биологическая характеристика В. Ucheniformis 103 и его гигиенический норматив

Штамм Bacillus licheniformis 103 продуцирует а-амилазу.

Клетки представляют собой грамположительные одиночные подвижные палочки размером 0,6—0,8 * 0,2—0,3 мкм, образующие споры. В первые часы роста (логарифмическая фаза) образуются цепочки из 2—3 клеток вытянутой формы. К 48—56-му ч (стационарная фаза) цепочки распадаются, клетки утолщаются, появляются споры, имеющие центральное положение и овальную форму.

При выращивании на мясопептонном агаре (МПА) в течение 24— 48 ч штамм дает обильный рост, колонии неправильной формы с приподнятым центром, слизистые, гладкие, непрозрачные, максимальный диаметр - 13 мм, в начале роста кремового цвета, затем постепенно розовеющие.

На мясопептонном бульоне штамм дает обильный рост клеток, раствор становится мутным, к 24-му ч роста появляется кремовато-розовый оттенок.

На агаризованной среде с крахмалом штамм дает обильный рост и образование зон гидролиза вокруг колоний. Колонии неправильной формы, слизистые, гладкие, непрозрачные, с приподнятым центром. К 72-му ч роста колонии имеют коричневато-бордовый цвет.

Оптимальная температура роста - 40—42 °С, оптимум pH - 7,5— 7,8. Желатин разжижает, крахмал быстро гидролизует. Восстанавливает лакмусовое молоко. Нитраты восстанавливает до нитритов, каталазоположительный, образует сероводород, вызывает гемолиз.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферном воздухе населенных мест - 5 000 кл./м³, пометка А.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток микроорганизма в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50 000 клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Прямой метод основан на аспирации из воздуха производственных помещений клеток микроорганизма на среду МПА и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.

32

МУК 4.2.2236—07

Дополнительный физиолого-биохимический метод основан на аспирации из воздуха клеток микроорганизма на поверхность плотной питательной среды, содержащей крахмал, и подсчета зон гидролиза (просветления) вокруг колоний через 24—48 ч. При данном методе на одной чашке Петри после забора пробы может быть учтено не более 50 колоний на чашке, т. к. большее количество колоний на чашке образуют сливающиеся зоны гидролиза, что затрудняет подсчет колоний.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы Импактор микробиологический «Флора -100» ТУ 9443-001-05031637—2002 Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)    ТУ 64-12791—77

Прибор MAS -100 ECO фирмы Merk (Германия) для отбора проб воздуха Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический    ГОСТ 9586—75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами Холодильник бытовой

Ареометр-сахарометр с диапазоном измерений

0—10 % с ценой деления 0,1 %    ГОСТ 18481-87

Весы лабораторные аналитические, типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной

системой типа «Биолам» Л-211

Лупа с увеличением * 10    ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные, диаметром 90 мм    ГОСТ 23932-90

Пробирки бактериологические П1 и П2,

вместимостью 15 и 20 мл    ГОСТ 25336-82

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл    ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл ГОСТ 1770-74 Секундомер    ГОСТ 9586-75

Барометр    ГОСТ 24696-79

Марля медицинская    ГОСТ 9412—77

Вата медицинская гигроскопическая    ГОСТ 25556-81

33

5.2. Реактивы, растворы Агар микробиологический    ГОСТ 17206-84

Экстракт солодовый    ГОСТ 418-84

Вода дистиллированная    ГОСТ 6709-72

Антибиотики: ампициллина натриевая соль Спирт этиловый ректификат    ГОСТ 5962-67

Растворимый крахмал    ГОСТ 10163-76

Агаризованная среда МПА (агар - 1,5—1,8 %, pH 7,5—7,8, режим стерилизации 1,1—1,2 ати в течение 30 мин).

Среда МПБСА (мясо-пептонный бульон и солодовое сусло 7°Б в соотношении 1:1, растворимый крахмал - 1 %, агар - 2,5 %). Для приготовления солодового сусла 7°Б солодовый экстракт растворяют в дистиллированной воде до 7 % содержания сахара с помощью ареометра.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток штамма-проду-цента в воздухе рабочей зоны соблюдают требования:

•    санитарных правил СП 1.2.731—99 «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности и гельминтами»;

•    правил техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;

•    правил электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора;

•    «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 630—800ммрт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

МУК 4.2.2236—07

9. Проведение измерения

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения концентрации клеток микроорганизма воздух ас* пирируют при помощи пробоотборника со скоростью 10 л/мин на по* верхность плотной питательной агаризованной среды. Время аспирации воздуха (5—20 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.

Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность под* вижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

При выполнении анализа воздуха прямым методом МПА расплавляют, остужают до 50—60 °С, добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор антибиотика ампициллина из расчета 120—150 мкг/мл среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат с температурой 40—42 °С. Через 24—48 ч проводят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим признакам (прямой метод).

При микробиологическом анализе воздуха производственных помещений дополнительными функциональными методами пробы воздуха отбирают на чашки Петри с МПБСА. Затем чашки инкубируют в термостате при 40—42 °С в течение 24—48 ч и подсчитывают количество зон гидролиза (просветления) вокруг выросших колоний.

Ростовые свойства всех используемых питательных сред должны быть проверены в соответствии с «Требованиями к ростовым свойствам питательных сред» (Государственная Фармакопея СССР, изд. XI, вып. 2. С. 208), что позволит более полно оценить пределы ошибки метода. Для этого эталонный музейный штамм-продуцент высевается на 2—3 чашки каждой используемой среды.

35