Государственное
санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
|
4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Микробиологическое измерение
концентрации клеток и спор
микроорганизмов в воздухе
рабочей зоны и атмосферном воздухе
Сборник методических указаний
МУК
4.2.2233 - 4.2.2239-07
Москва
• 2010
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному
санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 марта
2007 г. № 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным
санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 6 августа 2007 г.
4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Микробиологическое измерение
концентрации клеток плесневого гриба
Penicillium canescens PlPh33 - продуцента
пектинлиазы и фитазы в атмосферном
воздухе населенных мест
Методические
указания
МУК 4.2.2235-07
1. Разработаны ГОУ ВПО «Российский государственный
медицинский университет» (к.б.н. Н.И. Шеина).
2. Введены в действие с 1 октября 2007 г.
3. Введены впервые.
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г.
Онищенко
6 августа 2007 г.
Дата введения: 1 октября 2007 г.
|
4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Микробиологическое
измерение концентрации клеток
плесневого гриба Penicillium canescens PlPh33 -
продуцента пектинлиазы и фитазы
в атмосферном воздухе населенных мест
Методические
указания
МУК 4.2.2235-07
|
1. Общие положения и область применения
Настоящие методические указания устанавливают методику
проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток
штамма P. canescens PlPh33 - продуцента пектинлиазы и фитазы в
атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 5000
клеток в 1 м3 воздуха.
Методические указания разработаны в соответствии с
требованиями ГОСТ
17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам
определения загрязняющих веществ» и ГОСТ
Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».
Методические указания предназначены для применения в
учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и
благополучия человека, а также в лабораториях предприятий, организаций и
учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения
микробиологических исследований.
Методические указания одобрены и рекомендованы секцией
«Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды»
Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды».
Биологическая характеристика
P. canescens PlPh33 и его
гигиенический норматив
Штамм мицелиального гриба Penicillium canescens PlPh33
является продуцентом пектинлиазы и фитазы. Получен из штамма Penicillium
canescens ВКПМ F-178 путем селекции. Депонирован во Всероссийской коллекции
микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под номером ВКМ F-3867D.
Растет на агаризованных средах (среда Чапека с дрожжевым
автолизатом, сусло-агар, Мальц-агар, глюкозо-картофельный агар) при температуре
2528 °С в течение 57 сут., pH 5,0 - 6,0. При температуре 5 и 37 °С роста
колоний не наблюдается.
На среде Чапека с дрожжевым автолизатом и сусло-агаре
колонии достигают максимального диаметра 56 см. Колонии радиально складчатые,
средней плотности, ростовая зона плотная. Мицелий белый, конидиальная зона
голубовато-серебристая, конидиогенез обильный. Обратная сторона палевая,
буроватая, со временем темно-коричневая.
При микроскопическом исследовании конидиеносцы двухъярусные,
терминальные, фуркатные, шероховатые, длиной 150 мкм, шириной 34мкм. Метулы
шероховатые, размером 10 - 18×2,5 - 3,5 мкм, фиалиды ампулиформные,
размером 7 - 8×2 - 3 мкм, конидии чаще округлые, гладкие, размером 2,2 -
3,0×2,0 - 3,0 мкм.
Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферном
воздухе населенных мест - 200 кл./м3, пометка А.
3. Пределы измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток
плесневого гриба в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций
от 10 до 5 000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности
0,95.
4. Метод измерений
Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба
на поверхность агаризованной среды и подсчета выросших колоний по типичным
культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим признакам на 3-и сут.
5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы
При выполнении измерений применяют следующие средства
измерений, вспомогательные устройства и материалы.
5.1. Средства измерений, вспомогательные
устройства, материалы
Импактор
микробиологический «Флора-100»
|
ТУ 9443-001-05031637-2002
|
Прибор MAS-100 ECO
фирмы Merk (Германия) для отбора проб воздуха
|
|
Прибор для
бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)
|
ТУ 64-12791-77
|
Термостаты
электрические суховоздушные или водяные
|
|
Автоклав
электрический
|
ГОСТ 9586-75
|
Бокс,
оборудованный бактерицидными лампами
|
|
Холодильник
бытовой
|
|
Ареометр-сахарометр
с диапазоном измерений 0,10 % с ценой деления 0,1 %
|
ГОСТ
18481-87
|
Весы
лабораторные аналитические, типа BЛA-200
|
|
Микроскоп биологический
с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211
|
|
Лупа с
увеличением×10
|
ГОСТ
25706-83
|
Чашки Петри бактериологические
плоскодонные стеклянные, диаметром 90 мм
|
ГОСТ
23932-90
|
Пробирки
бактериологические П1 и П2, вместимостью 15 и 20 мл
|
ГОСТ
25336-82
|
Пипетки мерные
на 1, 5 и 10 мл
|
ГОСТ 10515-75
|
Пипетки мерные
на 1, 5 и 10 мл
|
ГОСТ
1770-74
|
Колбы
конические, вместимостью 250 и 500 мл
|
ГОСТ
1770-74
|
Секундомер
|
ГОСТ 9586-75
|
Барометр
|
ГОСТ
24696-79
|
Марля
медицинская
|
ГОСТ 9412-77
|
Вата
медицинская гигроскопическая
|
ГОСТ
25556-81
|
5.2. Реактивы, растворы
Среда сусло-агар: солодовое сусло 7
°Б - 98 %, агар-агар - 2 %, pH среды 4,55,0, режим стерилизации: Р - 0,8 кгс/см
, 40 мин. Для приготовления солодового сусла 7 °Б солодовый экстракт растворяют
в дистиллированной воде до 7 %-го содержания сахара с помощью ареометра.
6. Требования безопасности
При выполнении измерений концентрации клеток
штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают требования:
• санитарных правил СП
1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп
патогенности и гельминтами»;
• правил техники безопасности при работе с химическими
реактивами по ГОСТ
12.1.005-88;
• правил электробезопасности при работе с электроустановками
по ГОСТ
12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора;
• «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и
личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий
микробиологической промышленности» (1977).
Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу
при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в
боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
7. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускают
лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую
подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
8. Условия измерений
Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу
проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном
давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.
9. Проведение
измерения
9.1. Условия отбора проб воздуха
Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух
аспирируют при помощи пробоотборника со скоростью 10 л/мин на поверхность
агаризованной среды. Время аспирации воздуха (5 - 20 мин) зависит от
предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.
Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно
протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска
и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный
диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с
нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой
недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают,
быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки
Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора
пробы.
9.2. Выполнение анализа
Метод предполагает учет количества типичных колоний,
выросших на 3-и сут. после посева проб воздуха по культурально-морфологическим
признакам. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.
Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50 -
60 °С, добавляют молочную кислоту из расчета 2 мл на 0,5 л среды (для
подкисления среды и подавления посторонней бактериальной микрофлоры, pH 5,0 -
6,0), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на
горизонтальной поверхности.
Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при
температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки
используют для контроля воздуха.
После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат
при температуре 28 °С. Через 3 - 4 сут. проводят подсчет выросших типичных по
морфологическим признакам колоний продуцента. При необходимости культуру
подвергают микроскопированию.
При микробиологическом анализе воздуха производственных
помещений дополнительным функциональным методом является отбор пробы воздуха на
чашки Петри с агаризованной средой. После отбора проб чашки покрывают слоем 2
%-го водного пектина толщиной 0,5 см. Затем инкубируют в термостате при 28 °С в
течение 48 - 72 ч и подсчитывают количество зон осветления и разложения пектина
вокруг выросших колоний.
Ростовые свойства всех используемых питательных сред должны
быть проверены в соответствии с «Требованиями к ростовым свойствам питательных
сред» (Государственная Фармакопея СССР, изд. XI, вып. 2. С. 208), что позволит
более полно оценить пределы ошибки метода. Для этого эталонный музейный
штамм-продуцент высевается на 2 - 3 чашки каждой используемой среды.
10. Вычисление результатов измерения
Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м3
воздуха проводят по формуле:
, где
X- концентрация клеток
продуцента в воздухе, кл./м3;
N количество колоний продуцента, выросших на чашке;
1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;
V объем воздуха, л (произведение скорости на время
аспирации).
11. Оформление результатов измерений
Результаты измерений оформляют протоколом по приведенной
форме.
Протокол №
количественного
микробиологического анализа штамма-продуцента
P. canescens PlPh33 в атмосферном воздухе населенных мест
1. Дата проведения анализа_________________________________________________
2. Место отбора
пробы_____________________________________________________
3. Название
лаборатории___________________________________________________
4. Юридический адрес организации__________________________________________
Результаты
микробиологического анализа
Шифр или № пробы
|
Определяемый микроорганизм
|
Концентрация, кл./м3
|
|
|
|
Ответственный исполнитель:
Научный руководитель:
|
Список литературы
1. Руководство по контролю загрязнения атмосферы: РД
52.04.186-96. М., 1991.693 с.
2. ГОСТ
8.563-96 ГСИ «Методики выполнения измерений».
3. Положение об организации работы по технике безопасности в
микробиологической промышленности. М., 1980.27 с.
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и
личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий
микробиологической промышленности. М., 1977.7 с.
5. ГОСТ
17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам
определения загрязняющих веществ». М.: Изд-во стандартов, 1981.
6. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. М.: МГУ. С. 122.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Общие положения и область применения. 2
Биологическая характеристика P. canescens PlPh33 и его гигиенический норматив. 2
3. Пределы измерений. 2
4. Метод измерений. 2
5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы.. 3
5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства,
материалы.. 3
5.2. Реактивы, растворы.. 3
6. Требования безопасности. 3
7. Требования к квалификации операторов. 4
8. Условия измерений. 4
9. Проведение измерения. 4
9.1. Условия отбора проб воздуха. 4
9.2. Выполнение анализа. 4
10. Вычисление результатов измерения. 5
11. Оформление результатов измерений. 5
Список литературы.. 5
|