4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение массовой концентрации микотоксинов в продовольственном сырье и продуктах питания. Подготовка проб методом твердофазной экстракции

Методические указания МУК 4.1.787—99

ББК 51.23 060

060 Определение массовой концентрации микотоксинов в продовольственном сырье и продуктах питания. Подготовка проб методом твердофазной экстракции: Методические указания.—М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999.—30 с.

ISBN 5—7508—0170—5

1.    Разработаны Федеральным ветром госсанэпиднадзора Минздрава России (Скачков В. Б., Брагина И. В., Королева II. В.) и ЗАО "БиоХимМак СТ” (ведущий научный сотрудник Васияров Г. Г., старший научный сотрудник Алексеева Г. С., старший научный сотрудник Осокин Д. М., доктор химических наук Староверов С. М.).

2.    Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 23 окгября 1999 г.

3.    Введены впервые.

ЬЬК 51.23

ISBN 5—7508—0170—5

О Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999

5.3.1. Концентрирующий патрон Дианак А 3

Вскрыть выходную линию патрона Диапак Л-3, сияв полимерную заглушку. Установить патрон в вертикальном положении узким концом вниз в подходящее устройство для вакуумирования и сбора элюата. Осторожно открыть полимерную крышку патрона, сформировать ровный горизонтальный верхний слой сорбента легким постукиванием по патрону и зафиксировать его с помощью небольшого ватного тампона. Подключить вакуум к устройству для вакуумирования и обеспечить подачу вакуума к патрону.

Концентрирующий патрон Диапак Л-3 одноразового применения и регенерации не подлежит.

5.3.2.    Концентрирующий патрон Диапак ЛУ-3

Подготовка концентрирующего патрона Диапак ЛУ-3 проводится аналогично п. 5.3.1.

Концентрирующий патрон Диапак ЛУ-3 одноразового применения и регенерации не подлежит.

5.3.3.    Концентрирующий патрон Диапак II 3

Установить патрон Диапак 11-3 вертикально в подходящее устройство для вакуумирования и открыть верхнюю крышку. Суспендировать сорбент при перемешивании стеклянной палочкой в 10 см³ бензола, дать отстояться сорбенту и пропустить при слабом вакууме, не допуская попадания воздуха на сорбент, последовательно по 10 см³ бензола и ацетона.

Сохранив слой ацетона около 2 см, ввести пористый полимерный фильтр (имеется в комплекте) и уплотнить его палочкой но верхнему слою сорбента. Затем пропустить оставшийся ацетон и последовательно но 10 см³ экстрагента и смеси экстрагент-вою (1 : 1), нс допуская попадания воздуха на сорбент со скоростью 2—3 капли в секунду.

Сохранив слой последнего элюента около 2 см, отключить вакуум и заглушить патрон сначала верхней крышкой, а затем (после прекращения скапывания) и нижней заглушкой. Подготовленный таким образом патрон может храниться в течение рабочего дня, а при случайном пересыхании приводится в рабочее состояние прокачиванием 10 см³ смеси экстрагент-вода (1 : 1).

Концентрирующий патрон Диапак П-3 многоразового применения и подлежит регенерации по схеме, как указано выше, после проведения иробоподготовки.

5.3.4. Концентрирующий патрон Диапак II

Снять с патрона Диапак II заглушки, пропустить через него с помощью шприца 5 см³ бензола и заглушить оба конца патрона. Подготов-

10

МУК 4.1.787—99

ленный таким обратом патрон может храниться в течение суток при температуре не выше 25 °С.

Концентрирующий патрон Диапак II многоразового применения и подлежит регенерации но следующим схемам посте проведения нробоподготовки:

•    после подготовки пробы ДТ - последовательно пропустить через патрон но 5 см³ этилового спирта, ацетона и бензола;

•    после подготовки пробы АЗ - последовательно пропустить через патрон по 5 см³ ацетона и бензола.

5.3.5. Концентрирующий патрон Диапак С

Снять с патрона Диапак С заглушки, пропустить через него с помощью шприца 5 см³ бензола и заглушить оба конца патрона. Подготовленный таким образом патрон может храниться в течение суток при температуре не выше 25 °С.

Концентрирующий патрон Диапак С одноразового применения и регенерации не подлежит.

5.4. Экстракция микотоксинов

5.4.1. Зерно и зернопродукты

25 г размолотой пробы перенести в коническую колбу и залить 125 см³ экстрагента. Провести интенсивное перемешивание содержимого колбы в течение 30 мин. Экстракт отфильтровать через бумажный фильтр “синяя лента”.

5.4.2. Орехи и семена масличных культур

25 г размолотой пробы перенести в колбу Эрленмейера, добавить 125 см экстрагента и 40 см³ гексана. Провести интенсивное перемешивание содержимого колбы в течение 30 мин. После перемешивания внести в экстракт 1 г хлорида натрия и продолжить перемешивание в течение 5 мин. Отфильтровать через бумажный фильтр “синяя лента”. Отфильтрованный экстракт перенести в делительную воронку и после расслоения раствора собрать нижний водно-ацетонитрильный слой. Ацетонитрильный экстракт обезжирить 25 см³ гексана в делительной воронке вместимостью 250 см.

Экстракт перенести в делительную воронку, добавить еще 25 см гептана и интенсивно перемешать. После расслоения собрать нижний водно-ацстонитрильный экстракт.

5.4.3. Масло растительное

25 г масла перенести в колбу Эрленмейера, добавит ь 40 см³ гексана и 125 см³ экстрагента. Провести интенсивное перемешивание содержимого колбы в течение 30 мин. После перемешивания в экстракт вне-

11

сти 0,2 г хлористого натрия и продолжить перемешивание в течение 3— 5 мин. Экстракт перенести в делительную воронку и после расслоения смеси собрать нижний водно-ацетонитрильный слой. Ацетонитрильный экстракт обезжирить 25 см³ гексана или гептана или петролейного эфира в делительной воронке вместимостью 250 см³.

Экстракт перенести в делительную воронку, добавить еще 25 см³ гептана и интенсивно перемешать. После расслоения собрать нижний водно-ацетонитрильный экстракт.

5.5. Очистка и концентрирование проб

5.5.1. Очистка и концентрирование пробы при определении афлатоксина В / и зеараленона

5.5.1.1. Предварительная очистка и концентрирование пробы

25 см³ обезжиренного экстракта пропустить через патрон Дианак Л-3 со скоростью 2-нЗ капли в секунду и отобрать 20 см³ элюата.

Полученный элюат объемом 20 см³ разбавить равным объемом воды. Полученный раствор пропустить через патрон Дианак П-3 со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего патрон промыть 5 см³ воды и продуть воздухом в течение 1 мин.

Целевую фракцию элюировать с патрона Дианак П-3 последовательно 7 см³ ацетонитрила и 7 см³ 33 %-ного бензола в ацетонитриле -со скоростью 1—2 капли в секунду. Собранный элюат пропустить через слой безводного сульфата натрия (10 г) самотеком. Колбу ополоснуть 2 см³ 33 %-ного бензола в ацетонитриле и содержимое перенести на тот же слой безводного сульфата натрия. Промыть сульфат натрия 3 см³ 33 %-ного бензола в ацетонитриле. Высушенный фильтрат упарить досуха на ротационном испарителе при температуре нс выше 40 °С и немедленно псрсрастворить в 0,5 см³ бензола.

5.5.1.2. Окончательная очистка на патроне Лиапак 11 (вариант 1)

Бензольный раствор нанести на предварительно кондиционированный патрон Дианак П. Колбу, содержавшую сухой остаток, обмыть еще 2 раза по 0,5 см³ бензола и последовательно нанести растворы на патрон Дианак Н. Все смывы с патрона отбросить.

Зеараленон элюировать с патрона Дианак II 4 см³ 2 %-нойуксусной кислоты в бензоле и упарить досуха (до исчезновения запаха уксусной кислоты) на ротационном испарителе при температуре не выше 50 °С (Проба 3). Сухой остаток немедленно псрсрастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению.

Затем элюировать афлатоксин В| 5 см³ 20 %-ного ацетонитриш в бензоле с патрона и упарить досуха в токе азота при температуре нс выше

МУК 4.1.787—99

40 °С (Проба А). Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ афлатоксина В], М_|ф, - 4 г.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ зеараленона, М_1ф, - 4 г.

5.5.1.3. Окончательная очистка на патроне Диапак С (вариант 2)

Рекомендуется для кукурузы и продуктов из нее.

Бензольный раствор нанести на предварительно кондиционированный патрон Диапак С. Колбу, содержавшую сухой остаток, обмыть еще 2 раза по 0,5 см³ бензола и нанести растворы на патрон Диапак С при достижении верхнею фильтра патрона уровнем предыдущей порции раствора. Все смывы е патрона отбросить.

Зсаралснон элюировать с патрона Диапак С 6 см³ 10 %-ного этил-ацетата в бензоле и упарить досуха (до исчезновения запаха бензола) на ротационном испарителе при температуре не выше 50 °С (Проба 3). Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматофафичеекому определению.

Затем через патрон Диапак С последовательно пропустить 3 см³ 5 %-ной уксусной кислоты в бензоле и 4 см³ 25 %-ного гексана в эфире. Все элюаты отбросить. Лфлатоксин В| элюировать с патрона 6 см³ 10 %-ного ацетона в дихлорметане. Элюат упарить досуха в токе азота при температуре не выше 40 °С (Проба А). Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хромато-фафическому определению.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ афлатоксина В|, М_1ф, -4 г.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ зеараленона, М_1ф, -4 г.

5.5.2. Очистка и концентрирование пробы при определении дезоксиниваленола и Т-2 токсина

5.5.2.1. Предварительная очистка и концентрирование пробы

20 см³ экстракта пропустить через патрон Диапак ЛУ-3 со скоростью 2+3 капли в секунду. Элюат собрать. Патрон промыть 5 см³ экстрагента и отфильтровать объединенные элюаты в сердцевидную колбу, фильтр промыть 2 см³ ацетонитрила, собирая промывочную жидкость в ту же колбу. Упарить досуха на ротационном испарителе при температуре около 60+70 °С. Упаривание повторить 2—3 раза с добавлением в колбу 3+5 см³ пропанола-2 или ацетонитрила до исчезновения капель воды на стенках колбы (Проба ДТ).

5.5.2.2. Окончательная очистка на патроне Лиапак И

Пробу ДТ растворить в 0,5 ем³ хлороформа и нанести на предварительно кондиционированный патрон Диапак Н. Колбу обмыть еще

13

2 раза по 0,5 см³ хлороформа и последовательно нанести растворы на тот же патрон, начав сбор фракции, содержащих Т-2 токсин, в отгонную колбу. Завершить элюирование Т-2 токсина 2 см³ хлороформа в ту же колбу. Элюат упарить досуха на ротационном испарителе при температуре 40-S-45 °С и перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению Т-2 токсина (Проба Т).

Лезоксиниваленол элюировать е патрона в другую отгонную колбу 6 см 20 %-ного ацетона в хлороформе. Элюат упарить досуха на ротационном испарителе при температуре 40ч-45 °С и перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению дезоксиниваленола (Проба Д).

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ дезоксиниваленола, М,_ч„ - 4 г.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ Т-2 токсина, М_11р - 4 г.

6. Афлатоксин Mi

6.1. Оборудование, материалы, реактивы

Испаритель ротационный ИР-1 М2 или устройство для упаривания проб в токе азота при ширевании около 40 °С I Центрифуга тала ЦШ1-2, или аналогичная Устройство для создания вакуума около -0,7 мм рт. ст. (водоструйный насос, масляный вакуумный насос, медицинский отсасмватсль) Вакуумное устройство для подготовки проб (вакуумный манифолд), с приемниками проб вместимостью нс менее 10 см³ Концентрирующий патрон Диапак С16М,

ЗЛО “ВиоХимМак СТ”

Концентрирующий патрон Диапак С,

ЗЛО “ВиоХимМак СТ”

Пинцет медицинский, 15 см Шприц вместимостью 10 ши 20 см³ тина Луер Колбы плоскодонные конические с пробками, вместимостью 50 см³

Колбы остродонные с пробками, с взаимозаменяемым конусом 14/23 вместимостью 10 или 25 см³ Колбы грушевидные с пробками, с взаимозаменяемым конусом 14/2.3 вместимостью 25 см³

Цилиндры мерные вместимостью 50 см³,2 кл, или пробирка градуированная вместимостью 15 или 20 см³

МУК 4.1.787—99

Микрошприц вместимостью 100 мм³    ГОСТ    20292

или пипетка с делениями исполнения 4 или 5, 1-го класса точности вместимостью 1 см³ Ва га медицинская не стерилизованная, х/б Ацетонитрил для жидкостной хроматографии,

ОГ1-3, осч, ректифицированный или Ацетонитрил, 1 сорт, кооператив “Криохром”, г. Санкт-Петербург

Ацетон, осч, ОП-2, ректифицированный Гептан, гексан, хч, или петролейный эфир (марки 70—100), ректифицированный Кислота лимонная, 1 -водная, чда Хлорид натрия, хч

Хлороформ меди пинский, выдержа нны й над СаС1₂, ректифицированный Сульфат натрия, безводный, хч Вода дистиллированная

20 % ацетона в хлороформе — к 20 см³ ацетона добавить хлороформ до 100 см³ общего объема или 5 % метанола в хлороформе — к 20 см³ хлороформа добавить 5 см³ метанола, объем раствора довести хлороформом до 100 см³.

6.2. Способ подготовки проб

Афлатоксин Mj извлекают из пробы жидкого молока пропусканием ее через патрон Диапак С16М. Затем фракцию, содержащую афлатоксин Mj, элюируют хлороформом с патрона и, после высушивания и упаривания, проводят окончательную очистку на патроне Диапак С. Подготовленная проба готова к хроматографическому анализу.

Афлатоксин М_ь из кисломолочных напитков и сметаны экстрагируют хлороформом в присутствии хлорида натрия и лимонной кислоты в соответствии с МУ №4082—86¹ и, после высушивания и упаривания, проводят окончательную очистку на патроне Диапак С.

Дзя проверки правильности проведения пробоподготовки и уточнения степени извлечения микотоксинов проводят анализ методом стандартной добавки в исходный экстракт.

„Время проведения пробоподготовки - 60 мин. Степень извлечения - 80 %. Относительное среднее квадратическое отклонение - 10 %.

6.3. Подготовка концентрирующих патронов

Содержание

1.    Назначение и область применения........................................................................3

2.    Способ подготовки проб........................................................................................4

3.    Требования безопасности.......................................................................................4

4.    Условия выполнения подготовки проб.................................................................4

5.    Афлатоксин Bj (AT-Bj), зеараленон (ЗОН), дезоксиниваленол (ДОИ) и

Т-2 токсин (Т-2).........................................................................................................7

5.1.    Оборудование, материалы, реактивы...........................................................7

5.2.    Способ подготовки проб.................................................................................9

5.3.    Подготовка концентрирующих натронов......................................................9

5.4.    Экстракция микотоксинов............................................................................11

5.5.    Очистка и концентрирование проб..............................................................12

6.    Афлатоксин М].....................................................................................................14

6.1.    Оборудование, материалы, реактивы..........................................................14

6.2.    Способ подготовки проб...............................................................................15

6.3.    Подготовка концентрирующих патронов....................................................15

6.4.    Подготовка проб молочных продуктов к анализу......................................16

6.5.    Окончательная очистка пробы.....................................................................17

7.    Нагулян..................................................................................................................17

7.1.    Оборудование, материалы, рсакгивы..........................................................17

7.2.    Способ подготовки проб...............................................................................19

7.3.    Подготовка концентрирующих патронов....................................................20

7.4.    Подготовка проб к анализу...........................................................................21

7.5.    Концентрирование и очистка пробы...........................................................21

Приложение 1. Рекомендуемая методика испытаний конценфирующих патронов Диапак.......................................................................................................23

Введение................................................................................................................23

Общая часть..........................................................................................................23

1.    Испытание патронов Диапак А-3 и Диапак II 3 по афлатоксину В] н

зеараленону...........................................................................................................24

2.    Испытание па фонов Диапак АУ 3 по дезоксиниваленол у и Т 2 токсину .25

3.    Испытания патрона Диапак II.........................................................................25

4.    Испытания патрона Диапак С.........................................................................26

5.    Испытание пафона Диапак П-3 по патулину................................................29

6.    Испытание пафона Диапак С16М по афлатоксину М!.................................29

МУК 4.1.787—99

УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко Дата введения: 1 января 2000 года

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение массовой концентрации микотоксинов в продовольственном сырье и продуктах питания. Подготовка проб методом твердофазной экстракции

Методические указания МУК 4.1.787—99

1. Назначение и область применения

Настоящие методические указания устанавливают способы подготовки проб продовольственного сырья и пищевых продуктов методом твердофазной экстракции для последующего хроматографического анализа микотоксинов и предназначены для проведения лабораторных исследований безопасности пищевой продукции учреждениями госсанэпидслужбы РФ, а также для предприятий и учреждений, осуществляющих контроль качества и исследования продовольственного сырья и продуктов питания в соответствии с СанНиН 2.3.2.560—96 “Гигиенические

Издание официальное Настоящие методические указания не могут быть полностью или частично воспроизведены, тиражированы и распространены без разрешения Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России.

3

требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов” и аккредитованных в установленном порядке.

2.    Способ подготовки проб

Подготовка проб включает следующие разделы:

•    экстракция объекта испытания, предусматривающая получение единого экстракта, содержащего вес микотоксины, нормируемые в данном объекте но СанПиН 2.3.2.560—96;

•    подготовка экстракта проб методом твердофазной экстракции, включающая предварительную очистку, концентрирование и окончательную очистку на концентрирующих патронах Диапак.

3.    Требования безопасности

При работе с реагентами, растворителями и веществами необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами но ГОСТу 12.1.005—88.

4. Условия выполнения подготовки проб

Процессы приготовления растворов и обработки проб проводят в нормальных условиях при температуре окружающего воздуха 18-J-22 °С.

4

5. Лфлатокснн В| (АТ-В|), тсаралснон ( ЮН), дсюкснннвалснол (ДОН) н Т-2 токсин (Т-2)

5.1. Оборудование, матершиы, реактивы

Таблица 1

Оборудование, материалы, рслинны и растворы АТ-В, ЗОН ДОН Т-2 1 вар 2 вар 1 вар 2 вар Аппарат для встряхивания проб тина АВУ-6С по ТУ 64—1—2451—78 или матнитная или механическая мешалка + Весы аналитические с погрешностью взвешивания ±0.01 г + Мельница тина "Циклон" QC-114 + Испаритель ротационный (ИР-1 М2, ТУ 25—1173.102—84 или др) + Устройство для сотдання вакуума около -0.7 мм рт. ст. (водоструйный насос. масляный вакуумный насос, медицинский отсасыватсль) + Вакуумное устройство для подготовки проб (вакуумный маннфолд). с приемниками проб имеем и мост ъю не менее 10 см3 + Устройство для уттаривания проб в токе азота при нагревании около 40 °С (жслателыю сухонотдутштая баня) + + - - - - Кон||снт|>ирук>|ций naipoii Диаттак А-3, ТУ 4215—002—05451931—94. ЗАО "ЬиоХнмМак СТ* + + + + + Концентрирующий патрон Днанак АУ-3, ТУ 4215—002—05451931—94. ЗАО "ЬиоХнмМак СТ" - - - - ♦ + Концентрирующий патрон Днанак П-3, ТУ 4215—002—05451931—94, ЗАО “ЬиоХнмМак СТ’ + + + + - - Концентрирующий патрон Днанак II. ТУ 4215—002—05451931—94, ЗАО “ЬиоХнмМак СГ* + - + - +

ЛТ-В| ЗОИ дон Т-2 Оборудование, материалы, реактивы и ристворы 1 2 mgr 1 вар 2 вар KoiiHCiiipupyioiunfi натром Дианак С. 1У 4215—002—05451931—94. ЗЛО "БиоХимМак СГ*-- + + - - Пинцет медицинский, 15 см + Шпатель металлический или фарфоровая ложка Колбы плоскодонные конические с пробками вместимостью 50 см но ГОСТУ 25336 + + + - - Колбы плоскодонные конические ( )рлсимейсра) с пробками вмисшмостью 250 или 300 cvr по ГОСТу 25336 + Колба Бюхнера вместимостью 500 см + 1 книжка Бунзена вместимостью 200 см + 1 книжка делительная вместимостью 250 см по 1 ОСП у 25336 + Колбы остродонные с пробками по 1 ОСТу 25336 с взаимозаменяемым конусом 14/23 вместимостью 5. 10 или 25 см + Колбы |р)Т11свндныс с нр*Лками по 1 ОСГу 25336 с взаимозаменяемым конусом 14/23 вместимостью 10 и 25 см + 1 + 1 + + - - Цилиндры мерные вместимостью 25. 50. 100 см . 2 кл. по ГОСТу т//и + Микроширин вместимостью 100 мм’ (или пинетка с делениями по IOC 1у + Бумага фильтровалышя (нлоттшя, узкопористая, мсдлстню фильтрующая пм тонких осадков, типа “синяя лета**)-- “ 1 - 1 “ - + + Нага медицинская нс стерилизованная, х/б +

6

МУК 4.1.787—99 Продолжение таблицы 1

Оборудование, материалы, реактивы и растворы АТ-В, ЗОН дон Т-2 1 вар 2 ван 1 вар 2 ван Ацетонитрил для жидкостной хроматотрафнн. ОП-3 осч. но ГУ 6—09— 14—2167—84. ратифицированный + Ацетон, осч. но ГУ 6—09—3513—75 ОН -2. ректифицированный - + - - - - Бензол, хч. но ГОСТу 5955—75. выдержанный над Na:SO,. ректифицированный + + -к + - - Гептан, гексан, хч. но ТУ 6—09—3375—78 или иегролейный эфир (фракция 70—100). хч. ректифицированный + + + + - - Пропанол-2 (изопропиловый спирт), хч. по ТУ 6—09—402—75. ректифицированный - - - - + + Уксусная кислота ледяная, хч. но ГОСТу 61—75 + + + + - - Хлороформ, медицинский, выдержанный над СаС'1;. ректифицированный - - - - + Хлористый метилен (днхлормстан). выдержанный над CaC'U, ректифицированный + + - - - - ')фнр диэткловый, выдержанный над NaOll, ректифицированный - + - - - - Отилацетат (этиловый эфир уксусной кнеюты). хч. по ГОСТу 22300—76, выдержанный над Na*CO, и ректифицированный - + - - - - Сульфат натрия, безводный, хч. но ГОСТу 4166—76 + + +• + - - Хлорид натрия, хч. но ГОСТу 4233—77 + Вода дистиллированная + )кстра1ент - 84 % ацетонитрила в воде, 840 см* ацетонитрила доводятся до 1 литра водой либо получается путем ректификации с водой водно-ацетонитрильной смеси (1:4) +

7

Продолжение таблицы 1

Оборудование. материалы. реаклшы и рас шоры лт-в, ЗОН дон Т-2 1 вир 2 вар 1 вар 2 вар 33 % бстгзола в ацетонитриле - смешать 30 см' бензола и 60 см' анстоннт- рша(1 :2) + + + + - - 20 % uitcioiiinpiuia в бензоле - 20 см’ ацетшпрнла разбавить бензолом до 100 см5 + - - - - - 2 % уксусной кислоты в бензоле - 2 ем3 уксусной кислоты разбавить бензолом до 100 см* - - + - - - 5 % уксусной кислоты в бензоле - 5 ем* уксусной кислоты разбавить бензолом до 100 см5 - + - - - - 10 % пил ацетат в бензоле - 10 ем’ тгилацетата разбавил, бензолом до 100 см* - + - - - 25 % 1сксана в зфирс - 25 ем51свеяна разбавил, дизтнловым эфиром до 100 см5 - + - - - - 10 % ацетона в дихлорметане - 10 см' аиеюна разбавил, дихлормстаном до 100 см* - + - - - - 20 % ацетона в дихлорметане - 20 ем’ ацетона ра збаншь дихлорметаном до 100 см* - - - - + -

X

МУК 4.1.787—99

5.2. Способ подготовки проб

Определяемые микотоксины извлекают экстрагентом из пробы при соотношении масса пробы - объем экстрагента 1 : 5. При определении афлатоксина В] и зсаралснона проводят очистку волно-аиетонитрилыюго экстракта на патроне Диапак Л-3, концентрируют микотоксины на патроне Диапак П-З, высушивают от остатков воды и после упаривания и иерерастворения проводят окончательную очистку на патроне Диапак II (Диапак С - в случае кукурузы и продуктов из нее). Фракционным элюированием получают две фракции, содержащие афла-токсин Bi и зеаралепон, готовые к хроматографическому анализу.

При определении дезоксиниваленола и Т-2 токсина, проводят предварительную очистку водно-ацетонитрильного экстракта на патроне Диапак ЛУ-3 и концентрируют упариванием досуха. После персраство-рсния проводят окончательную очистку на патроне Диапак Н. Фракционным элюированием получают две фракции, содержащие дезоксинива-ленол и Т-2 токсин, готовые к хрома го1рафическому анализу.

Для проверки правильности проведения пробоподготовки и уточнения степени извлечения микотоксинов проводят анализ пробы методом стандартной добавки в исходный экстракт. Основные характеристики пробоподготовки методом твердофазной экстракции приведены в табл. 2.

Для достижения указанной степени извлечения необходимо точно выполнять требования к квалификации органических растворителей, их подготовке и приготовлению растворов, перечисленных в п. 5.1. Алгоритм поиска возможных потерь целевых микотоксинов при подготовке проб приведен в прилож. 1 к настоящим методическим указаниям.

5.3. Подготовка концентрирующих патронов

Патроны Диапак представляют собой пластиковую колонку, содержащую 1 или 3 см³ герметично упакованного сорбента.

9

1

Методические указания по обнаружению, иде1ггификации и определению содержания афлаюксииов и продовольственном сырье и пищевых продуктах с помощью высоко-эффективной жидкостной хроматографии. Утв. М3 СССР 20.03.86 № 4082 86.

При снижении степени извлечения афлатоксина М] см. прилож. 1.

15