Г 'осу дарственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение содержания N-нитрозоаминов (N-диметилнитрозоамин, N-метилэтилнитрозоамин, N-диэтилнитрозоамин, N-дипропилнитрозоамин, N-дибутилнитрозоамин, N-пиперидиннитрозоамин) в пищевой продукции (консервы из мяса, мясорастительные) методом хромато-масс-спектрометрии

Методические указании МУК 4.1.3588—19

Издание официальное

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты нрав потребителей и блатополучнн человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение содержания N-нитрозоаминов (N-диметилнитрозоамнн, N-метилэтилннтрозоамин, N-диэтилнитрозоамнн, N-дипропилнитрозоамин, ГМ-днбутилнитрозоамин, N-пиперидиннитрозоамин) в пищевой продукции (консервы из мяса, мясорастительные) методом хромато-масс-спектромегрии

Методические указании МУК 4.1.3588—19

VII. Требования к квалификации операторов

7.1. К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие квалификацию не ниже инженера-хнми-ка и опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения хромато-масс-спектрометрометрического анализа.

VIII. Условия измерений

8.1.    При выполнении измерений в лаборатории соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха (20 ± 5) °С;

-    атмосферное давление от 84.0 до 106.7 кПа (630—800 мм рт. ст.);

-    относительная влажность воздуха от 30 до 80 %;

-    напряжение в сети (220 ± 10) В;

-    частота переменного тока (50 ± 10) Гц.

Выполнение измерений на хромато-масс-спектрометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору .

XI. Подготовка к выполнению измерений

9.1.    Подготовка посуды.

9.1.1.    11риготовление 3%-го раствора калия двухромовокислого в серной кислоте.

В термостойкий стакан вместимостью 2 дм помещают 50 г калия двухромовокислого, осторожно приливают по палочке частями 1 дм’ концентрированной серной кислоты, тщательно перемешивая.

9.1.2.    Используемую посуду необходимо замочить в свежеприготовленном 3 % растворе калия двухромовокислого в серной кислоте, затем промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть бидистил-лированной водой и высушить в сушильном шкафу при температуре 105 °С.

9.2.    Подготовка хроматографической системы.

Подготовку хроматографа к работе осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации хроматографа.

9.2.1. Кондиционирование кварцевой капиллярной колонки.

Новую кварцевую капиллярную колонку предварительно кондиционируют, нагревая в термостате хроматографа ступенчато с 70 до 250 °С в течение 2 часов, и выдерживают при 250 °С в течение суток. После охлаждения термостата до комнатной температуры выход колонки подсоединяют к устройству сопряжения с масс-спектрометром и проверяют стабильность нулевой линии при рабочей температу ре термостата колонок.

9.2.2. Устанавливают режим работы хромато-масс-спектрометра в соответствии со следующими условиями:

Таблица 3

Параметры и условия режима работы хромато-масс-спектрометра

11арамсфы Условия Температура термостата колонки: 50 °С- 1 мин 8 °С/.мнн до 120 °С -- 0 мин 120 °С/мин до 185 °С - 0 мин 25 °С до 240 °С 5 мин 1 ем 1 iepaiу ра испарю е.iя 270 °С Темперагу ра переходной линии 220 СС Режим импу льсный без деления потока 1 мин Скорость газа-носителя гелия 20 мл/м нн Скорость газа-носителя - гелия через колонку 1.0 мл/мин Температура ионною источника 230 °С Температура квадру полыни о масс-анализазора 150 °С Ток ЭМИССИИ 70 эИ Режим сканирования N-диметилнитрозоамина но масс-селективпому иону -74 N-.метилэтилнитрозоамин но масс-сслсктявному иону 88 N -ли эти л нитрозоам им по масс-сслсктивному иону 102 N-дипропилниз розоамин но масс-селективпому иону - 130 N-днбутил нитрозоамин по масс-сслсктивному иону - 84 \-|1ппсрили1Н1ит розоамин но масс-сслсктивному иону - 114 Объем пробы 2 мкл Время удерживания: N-димезнлни грозоамин (7.279 ± 0.05) мин N-мстилэтилиит розоамин (8.210 ± 0.05) мин N'-ли >1 илни 1 розоамин (8,621 ±0.02) мин N-липропилни грозоамин (10.594 ±0.02) мин N -либу т и л низ розоам и и (12.944 ±0.02) .мин N-нинсрилшншгрозоамин (13,189 ±0.02) мин

Записывают нулевую линию при установленных режимных параметрах. При отсутствии флуктуации приступают к работе.

9.3. Приготовление растворов.

9.3.1. Приготовление раствора серной кислоты.

В термостойкий химический стакан помещают 36 см³ бидисгиллиро-ванной воды, при непрерывном помешивании приливают 60 см³ концентрированной серной кислоты. Раствор охлаждают. Срок хранения не ограничен.

9.3.2.    Приготовление 2%-го раствора сульфаминовой кислоты. Растворяют 2 г сульфаминовой кислоты в 100 см' бндистиллиро-

ванной воды. Срок хранения 1 месяц.

9.3.3.    Приготовление исходного раствора N-ннтрозоаминов. Исходный раствор N-нитрозоаминов готовят из смеси N-нитроэо-

аминов ГСО 7881 (С = 2мг/см*). В мерную колбу, содержащую 25 см*¹ метилового спирта, вводят микрошприцем 2 мм' смеси N-нитрозоамии-нов ГСО. Массовая концентрация N-нитрозоаминов в исходном растворе составляет 0,16 мкг/см . Срок хранения раствора 5 часов.

9.3.4.    Приготовление градуировочных растворов.

Градуировочные растворы N-нигрозоамннов готовят в мерных колбах объемом 50 см'. Для этого в каждую колбу вносят по 50 см' биди-стиллнрованной воды и добавляют исходный раствор для градуировки в соответствии с табл. 3, содержимое колбы доводят до метки бидистил-лированной водой и тщательно перемешивают.

Таблица 4

РасI норы для установления градуировочной характеристики

1 разуировочный раствор 1 -> 3 4 5 Объем рабочего раствора. см3 0.0625 0.125 0.25 0.375 0.5 Содержание N-диметилнитрозоамi ша. ш 10 20 40 60 80 Кош id п pai ш я N-ли метил нитро юам и-на (навсека 50 г), мкг/г 0.0002 0,0004 0.0008 0,0012 0.0016 С одержание N-мети л л илнитро зоами-на. ш 10 20 40 60 Ж) Концентрация N-мстил лилнитрозо-амипа (навеска 50 г), мкг/i 0.0002 0,0004 0.0008 0.0012 0.0016 Содержание N-дилилнитроюамин. нг 10 20 40 60 80 Конценграция N-ди лилшпрозоамина (навеска 50 г), мкг/г 0.0002 0.0004 0.0008 0.0012 0.0016 Содержание N -л и 11 poi i и л н итроюам и -на. ш 10 • 20 40 60 80 Концентрация Х-дипропилниi розоами-на (навеска 50 i). мкг/г 0.0002 0.0004 0.0008 0.0012 0.0016 Содержание N-дибу гидтпроюачииа, ш И) 20 40 60 Ж) Коннен1рания N-либу гилнн1розоамин (навеска 50 г), мкг/г 0.0002 0.0004 0.0008 0.0012 0.0016 Содержание N-iimiepn uiniiiiipojo- ЛМИИП. Ill К) 20 40 60 80 Концентрация Х-пинеридиннигро-зоамина (навеска 50 i). мкг/г 0.0002 0.0004 0.0008 0,0012 0.0016

9.4. Построение фазуировоч ной характеристики.

9.4.1.    Градуировочные характеристики устанавливают на градуировочных растворах N-нитрозоампнов методом абсолютной градуировки. Приготовленные растворы хроматографируют на капиллярной колонке не менее 5 раз. На полученной хроматограмме определяют площади пиков молекулярных ионов компонентов и по средним результатам измерений по 5 концентрациям для градуировки строят градуировочную характеристик). Она выражает зависимость площади пика молекулярных ионов N-нитрозоаминов на хроматограмме (мВ - при автоматическом обсчете с использованием программно-аппаратного комплекса) от содержания (нг).

9.4.2.    Градуировочный раствор (табл. 3) помещают в перегонную колбу объемом 500 см’, подкисляют 2.5 см’ 2 % сульфаминовой и 0.5 см' 60 % раствором серной кислоты до pi I = 3 (по лакмусовой бумажке). ‘Затем добавляют высачивающие реагенты (5 г сульфата натрия и 5 г хлорида натрия). С помощью перегретого водяного пара

({парообразователя ^— (100 i 5) С И tколбы с градуировочным растем ~ (80 i 5) С). ООра-зуемого в парообразователе, выполняют процедуру отгонки. Дистиллят, сконденсированный в холодильнике, собирают в объеме 70 см’ в коническую колбу-приемник. Затем дистиллят пропускают через угольный картридж 6 см’ автоматической системы ТФЭ, элюирование осуществляют хлористым метиленом объемом 2.5 см’. По истечении 30 минут экстракт хлористого метилена объемом 2 мм' через испаритель вводят в хроматографическую колонку хроматографа и анализируют при условиях по п. 9.2.2. Каждый градуировочный раствор хроматографируют два раза. Процедуру повторяют аналогично ад я каждого градуировочного раствора. На полученной хроматограмме определяют плошали пиков молекулярных нонов для N-нитрозоаминов m/z. рассчитывают средние значения площади пиков N-нитрозоаминов для каждою градуировочного раствора и проверяют приемлемость результатов параллельных определений площадей пиков.

Выходные сигналы считают приемлемыми при выполнении условия:

- S„ < 0.01 ■ /;    ,    где    (I)

S_nk„ - максимальная площаль пика для соответствующего градуировочною раствора мВ;

S,„,„ - минимальная площадь пика для соответствующего градуировочною раствора. мВ;

г_ч - предел повторяемости площади пика граду ировочною раствора,

г,-20%.

Результат проверки признаётся положительным при выполнении условия (1). Если условие не выполняется, то градуировку прибора проводят повторно.

По средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику.

Процедуру градуировки проводят при внедрении методики в практику лаборатории, после ремонта хромато-масс-спектрометра. смене партии реактивов, а также при отрицательных результатах контроля стабильности градуировочной характеристики по п. 9.5.

9.5. Контроль стабильности г радуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят I раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация N-нитрозоаминов соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:

Кя--»'<₁|^0.14-/я_Лг.гле    <-)

mix - расчетное содержание N-нитрозоаминов в градуировочном растворе, нг;

W/ vm - результат измерения содержания N-нитрозоаминов в образце для градуировки, нг.

При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики требуется установление причин, приводящих к неудовлетворительным результатам, и устранение причин нестабильности ipa-дуировочной характеристики.

X. Выполнен не измерений

10.1. Отбор проб

Для составления исходного образца консервированных пищевых продуктов, расфасованных в стеклянну ю тару, отбирают для вскрытия не менее 5 единиц упаковки. Отбор единиц упаковки производят из разных мест партии. Выборки отдельных единиц расфасовки объединяют, и они являются исходным образцом. Отбор проб образцов консервированных пищевых продуктов и испытания выполняются в соответствии с ГОСТ 8756.0.

Для физико-химических испытаний от каждого образца отбирают по 40    50 г продукта в одну емкость для получения усредненной пробы.

После тщательного перемешивания пробы продукта отбирают навеску для испытаний массой 40—50 г мясных и мясорастительных консервов.

Допускается хранение отобранных образцов в морозильной камере при температуре от 8 до -18 °С от I до 3 суток в зависимости от сроков реализации продукции.

10.2. Выполнение измерении пробы пищевого продукта (консервы и t мяса, мясорастительные)

Навеску 40—50 г продукта помещают в перегонную колбу объемом 500 см\ соединенную с паровиком и прямым холодильником. К пищевому продукту добавляют высаливающие реагенты (5 г сульфата натрия и 5 г хлорида натрия), 50—100 см 'дистиллированной воды, 2,5 см⁴ 2% сульфаминовой и 0,5 см'60°о раствора серной кислоты до pH = 3 и N-нит-

рОЗОаМИНМ ОТГОНЯЮТ С Перегретым ВОДЯНЫМ ПарОМ (trupoo^ioiHiic/w ⁼ ( 100 i 5) Си tn),^ с ооряшом иишоюю проаума " (80 ^5) С). СООИрЭЯ 70 СМ дистиллята. Полученный дистиллят пропускают через угольный картридж 6 см’ автоматической системы ТФЭ. Элюирование осуществляют хлористым метиленом объемом 2.5 см\ Экстракт хлористого метилена, содержащий нитрозоамины. получают на выходе угольною картриджа.

По истечении 30 минут экстракт хлористого метилена объемом 2 мм' через испаритель вводят в хроматографическую колонку хроматографа и анализируют при условиях по п. 9.2.2.

Процедуру повторяют аналогично для второго образна и проводят измерение двух параллельных проб пищевого продукта. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 9.2.2).

XI. Обработка (вычисление) результатов измерений

11.1. На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют содержание N-нитрозоаминов в анализируемом растворе пробы.

Концентрацию С, мг/кг N-нитрозоаминов в пробах пищевого продукта (консервы из мяса, мясорастительные) рассчитывают по формуле:

т,

т 1000

/Я/ v - содержание N-нитрозоаминов, установленное по градуировочной характеристике, нг;

ш - навеска пробы пищевого продукта, взятая для анализа, г;

1000 - коэффициент перевода нг в мкг.

В методике определяют отдельные N-ннтрозоамины. Суммирование N-нитрозосоедннений не проводят.

11.2.3а окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение С двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости С/, С*? (параллельных определений), для которых выполняется условие:

г - предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены в табл.4.

При невыполнении условия (4) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:

CR„.45(4) - критический диапазон. Значения критического диапазона приведены в табл. 4.

При невыполнении условия (5) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условий (4) и (5).

Таблица 5

Диапазоны измерений, значения пределов повторяемости, критического диапазона, внутрнлаборагорной прецизионности при доверительной вероятности Р = 0,95

Диапазон измерений. мг/кг Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя розу ды агами измерений. полученными в одном лаборатории в условиях повторяемости). г. °/о Критический диапазон (относительное значение допускае-Moi о расхождения между наибольшим и наименьшим из чегырех результатов измерений, полученных в одной .забора трин в условиях повторяемости). C'R„f,<(4). % Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, подученными в разных лабораториях). R. % N-лимсгиднитрозоачин оз 0.0002 до 0.0016 вкл. « " 19 N-мети л нилнигрозоамин от 0.0002 до 0.0016 вкл. 14 IX 19 N-ainTii.iHHif юзоамин оз 0.0002 до 0.0016 вкл. " 15 22 М-дипроииднигрозоамии oi 0.0002 до 0.0016 вкл 14 18 22 N-дибутилнитрозоамин от 0.0002 ло 0.0016 вкл. " 15 25 М-пиисрилиннитрозоамин от 0.0002 до 0.0016 вкл. 14 IX 35

XII. Оформление результатов измерений

12.1. Результат измерений представляют в виде:

( С ±А) мг/кг, Р = 0.95, где

С - результат измерении, полученный в соответствии с процедурами разделов 10, II, мг/кг;

А - характеристика погрешности, мг/кг при Р = 0.95. Значение А рассчитывают по формуле:

д - относительное значение характеристики погрешности измерений концентрации N-нитрозоаминов. %(табл. I).

XIII. Процедуры обеспечения достоверности измерений

13.1.    Обеспечение достоверности измерений в пределах лаборатории организуют и выполняют путем проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях повторяемости, воспроизводимости, оперативного контроля процедуры измерений и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6.

13.2.    Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости.

Образцами для проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости, являются образцы продукта (консервы из мяса, мясорастительные) с внесенными в них добавками растворов N-нитрозоаминов, подготовленные в соответствии с п. 10.1.

Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности воспроизводимости (результаты измерений получены в разных лабораториях), проводят по результатам измерений массовых концентраций N-нитрозоаминов в образцах продукции с одинаковым содержанием N-нитрозоаминов.

Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:

|С\ -С\|

-*-!■-100% < R. где    (7)

(С,+С,)/2

С/ и С2 - результаты измерений концентраций N-нитрозоаминов. полученные в условиях воспроизводимости, мг/кг;

R - предел воспроизводимости, значения которого приведены в табл. 4.

Если условие (7) не выполняется, процедуру повторяют. При повторном превышении предела воспроизводимости устанавливаются причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимаются меры по их устранению.

13.3. Оперативный контроль процедуры измерений с использованием метода добавок.

Оперативный контроль процедуры измерений с использованием метода добавок проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры К_к с нормативом контроля К.

Результат контрольной процедуры /С рассчитывают по формуле:

К, =|С'—С—С„|, где

С' - результат измерений концентрации N-нитрозоаминов в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (4), мг/кг

С - результат измерений концентрации N-нитрозоамина в исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (4). мг/кг.

С_д - величина добавки, мг/кт.

В качестве добавки используют растворы N-нитрозоаминов, приготовленные по п. 9.3.3

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

(9)

A_tC. , А- значения характеристики погрешности результатов

измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие концентрации N-нитрозоамина в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно.

Примечание. Допустимо характеристику по1рсшносги результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражений:

Д -, =0,84 0,01-6-С¹ А - = 0.84-0,01 -6-С

л.С ’    *

с последующим уточнением но мерс накопления информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.

Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:

К'йК    (12)

При невыполнении условия (10) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (10) устанавливают причины. приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.4. Оперативный контроль процедуры измерений, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов выполняемых измерений приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.

Нормативные и методические документы

1. СанПиН 2.3.2.1078—01 «Продовольственное сырье и пищевые продукты. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».

2.    ГН 2.2.5.3532—18 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

3.    ГН 2.2.5.2308—07 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

4.    Приказ Ростехнадзора от 25.03.2014 Л» 116 «Об утверждении Федеральных норм и правил в области промышленной безопасности «Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением».

5.    ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».

6.    ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».

7.    ГОСТ 12.1.019 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».

8.    ГОСТ 12.0.004 «Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения».

9.    ГОСТ 12.1.004 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования».

10.    ГОСТ 12.1.005 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».

ББК 51.23 ИЗ 7

И37 Измерение содержания N-нитрозоаминов (N-диметнл-нитрозоамин, N-метилэтиднкгрозоамин, ^диэтилнитрозо-амин, N-дипропилнитрозоамин, N-дибутилнитрозоамин, N-пиперидиннитрозоамнн) в пищевом продукции (консервы из мяса, мясорастительные) методом хромато-масс-спектромет-рин: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2020.—20 с.

ISBN 978 5-7508 1724-5

1.    Разработаны ФЬУИ «Федеральный научный цешр медикопрофилактических технологий управления рисками здоровью населения» (Т. С. Уланова. II. В. Зайцева. Т. В. Нурпсламова. И. Л. Попова.

О. Л. Мальцева, Г. И. Геренгьев).

2.    Утверждены Руководителем Федеральной службы но надзору в сфере заишгы прав потребителей и благополучия человека. Главным государезвенным санитарным врачом Российской Федерации Л. К). Поповой 8 ноября 2019 г.

3.    Введены впервые.

ЬЬК 51.23

Компьютерная верстка Г. В. Ломановой Подписано в почин. 29.01 2020

Тираж 100 >кз.

Фелеральная служба но над юру в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека 127944. Москва. Валковскпй пер., д IX. стр 5. 7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован Фелеральным Петром 1И1иены и hhucmho.ioihh Росно 1рсбнадзора 117105, Москва. Варшавское ш . 19а Рсаликшия печатных изданий, тел /факс 8 (495)633-Х6-59

< Роспотребнадзор, 2020

11.    ГОСТ 12.1.007 «Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».

12.    ГОСТ 12.4.009 «Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные вилы. Размещение и обслуживание».

13.    ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия».

14.    ГОСТ 2222 «Спирт метиловый. Технические условия».

15.    ГОСТ 4204 «Кислота серная. Технические условия».

16.    ГОСТ 4220 «Реактивы. Калий двухромовокнслый. Технические условия».

17.    Г ОСТ 4233 «Натрий хлористый. Технические условия».

18.    ГОСТ OIML R 111-1 «Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(l), Е(2), F(l). F(2), M(l), М(1-2), М(2). М(2-3) и М(3). Часть I. Метрологические и технические требования».

19.    ГОСТ 12026 «Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия».

20.    ГОСТ 21458 «Сульфат натрия кристаллизационный. Технические условия».

21.    ГОСТ 25336 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

22.    ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования».

23.    ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».

24.    ГОСТ Р 52501    2005    «Вода для лабораторного анализа. Техни

ческие условия».

25.    ГОСТ 8756.0 «Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию».

26.    ТУ 2.833.106 «Микроширицы серии МШ-10».

27.    ТУ 2121-278-00204197 «Сульфаминовая кислота».

28.    ТУ 16-531.743 «Электрощкаф СНВ С-4.5.4,5.4'3-111. Технические условия».

29.    ТУ 25-11.1630 «Шкаф вытяжной химический».

30.    ТУ 0271-001-45905715 «Гелий газообразный высокой чистоты (сжатый). Технические условия».

31.    ТУ 3645-032-00220531 «Редукторы баллонные односту пенчатые малогабаритные для газопламенной обработки».

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека.

Г лавный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

8 ноября 2019 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение содержании N-нитрозоамннов (N-лимстнлнитрозоамин, N-метнлэтилннтрозоамин,

N-диэтнлнитрозоамнн, {Ч-дипропнлинтрозоамнн, N-дибутилнитрозоамин, N-iiniiepiuininnз розоамин) в пищевой продукции (консервы из мяса, мясорастительные) метолом хромато-масс-снсктрометрин

Методические указании _МУК    4.1.3588—19_

Свидетельство о метрологической аттестации № 88-16207-083-RA.RU.310657-2016 от 26.12.2016.

1. Общие положения и область применении

ЕЕ Настоящие методические указания (далее - МУК) определяют порядок газохроматографического анализа с масс-селективным детектированием для измерения содержания N-нитрозоаминов (N-диметил-нитрозоамин, N-дибу гилнитрозоамин, N-пипериднннитрозоамин) в пробах пищевой продукции (консервы из мяса, мясорастительные) в диапазоне концентраций 0,0002—0,0016 мг/кг.

Е2. МУК предназначены дня органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области безопасности н качества нишевой продукции и продовольственного сырья.

ЕЗ. МУК носят рекомендательный характер.

II. Физико-химические и токсикологические свойства

2.1.    N-нитрозоамины. малоустойчивые соединения, стабильны только при температу рах ниже О °С. являются жидкими или твердыми веществами жёлтого цвета. N-нитрозоамины являются высокотоксичными соединениями. При попадании в организм поражают печень, вызывают кровоизлияния. Большая часть N-нитрозосоединений обладаег сильным канцерогенным действием даже при однократном действии, проявляют мутагенные свойства. N-нитрозодиметиламин обладает отдаленными эффектами: змбриотропным. гонадотропным, мутагенным.

N-диметилнитрозоамин: CAS 62-75-9. формула С4 1₍₎N_:0/(C1T)>NN= О, молекулярная масса 148,0. Т**,,, °С 153. растворимость в воде хорошая, давление паров. Па при 20 °С 360. класс опасности I, характеристичные ионы, m/z N-ннтрозодиметиламина 74-42.

N-метилзтилннтрозоамин: CAS 10595-95-6. формула CH^CNHsJN-NO, молекулярная масса 88,13, Т_кип, °С 154,4, класс опасности 1, характеристичные ионы, m/z N-метнлэтилнитрозоамина 88-42.

N-диутилнитрозоамин: CAS 55-18-5, формула C:H₀N20/(C2H5):NN=0, молекулярная масса 176,0, Т_М||1. °С 175, растворимость в воде, г/100 мл при 20 °С 10.6, класс опасности 1. характеристичные ионы, m/z N-диэтилнитрозоамина 102-57.

N-дипропилнитрозоамин: CAS 621-64-7. формула (C\lb):N-NO, молекулярная масса 130,19, Т_юш, "С 206. характеристичные ионы, m/z N-нитрозодипропиламина 130-70.

N-дибутилнитрозоамнн: CAS 924-16-3. формула (C₄H.,):N-NO. молекулярная масса 158.25. характеристичные ионы, m/z N-дибутилнитро-замина 84-57.

N-пиперидннннтрозоамин: CAS 100-75-4, формула (C^^N-NO. молекулярная масса 114,15, характеристичные ионы, m/z N-пипериднн-нитрозоамина 114-55.

III. Требования к показателям точности измерений

3.1.    При соблюдении всех регламентированных условий и проведения анализа в точном соответствии с данной методикой значения погрешности (и ее составляющих) измерений не превышают значений, приведенных в табл. I.

Таблица 1 Диана юны и «меренни, значения пока $а i еден точности, правильности, повторяемости, внутрилабора ioption преии тонкоети

Диапазон измерений, нг 1 (оказатсди прецизионное] и (относительные значения). % 11оказатедь правильности (1рани-цы от пост ельной систематической погрешности При доверительной вероя пккд и 0.95). ±г)«>% 11оказатель точное! и (ipa-нины относительной погрешности при вероятности Г - 0.95), ± % стандартное отклонение повторяем^! и. а„ % craiuapTnoe отклонение виутрилабора-торной прсци-зионности, а к,- % N-диметилнитрозоамин от 10до80нк.1. 3.0 6,0 12.0 17.0 N- метил ттилнитротоамин от 10 ло 80 вк.т. 5.0 6,0 8.0 '4 N-лиэтил нитро юамин от 10 ло 80 вкд. 4.0 7.0 8.0 16.0 N -л и п ро п ил н и т ро юа м и и от 10 до 80 вкд. 5.0 7.0 8.0 16.0 > -либутилнитро юачин от 10 до 80 вкд. 4.0 8.0 7.0 17.0 N- пиперилиннитроюимин от 10 до 80 вкд. 5.0 8.0 7.0 17.0

Значения показателя точности используют при:

- оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией: -оценке деятельности лабораторий на предмет качества проведения измерений;

-оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики измерений в конкретной лаборатории.

IV. Метод измерений

4.1. Измерение содержания N-нитрозоаминов (N-диметилнитрозо-амин, N-метилэтилнитрозоамин. N-диэтилннтрозоамин. N-дипропил-нитрозоамин, N-днбутилнитрозоамин. N-иипериднннитрозоамин) в пищевой продукции (консервы из мяса, мясорастительные) выполняют методом газохроматографического анализа с масс-спектрометрическим детектированием. Извлечение и концентрирование N-нитрозоаминов из проб пищевой продукции проводят методом дистилляции с водяным паром в кислой среде с высаливающими реагентами, концентрированием N-нитрозоаминов на картриджах с помощью системы твердофазной

экстракции (далее - ТФЭ), идентификации веществ по масс-спектрам и времени выхода; количественном хромато-масс-спектромстрическом определении методом абсолютной калибровки.

Определению не мешают углеводороды, спирты. Длительность измерений составляет 30 минут.

V. Требования к средствам измерений, вспомогательным устройствам, реакт ивам и материалам

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерении, реактивы, вспомогательные устройства и материалы. приведенные в табл. 2.

Таблица 2

Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

Наименование средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов	Обозначение и наименование документов. в соответствии с которыми выпускают средства измерений. вс 1 юмо1 а те. н>н ые устройства, реактивы и материалы
1	2
Средства измерений
Хромато-масс-спектрометрическая система, включающая нижеперечисленные блоки, модули и программы:
Хроматограф с полным электронным контролем газовых потоков и режимом цифровою контроля давления и потоков е автоматическим определением параметров колонки и поиск утечек по канал) газа-носителя Диапазон массовых чисел от 1,6 до 700а.е.м. СКО выходною сигнала при автоматическом дозировании: -    по высотам пиков: 4 %: -    по временам удерживания: 0,008 %; С'КО выходною сигнала при ру чном дозировании: по высотам: 6 % по временам у держивания: 0.1 %
- автосампдер (высокотехнологичное устройство, предназначенное для автоматического ввода жидких проб)	-
- программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех масс-спектров в процессе проведения хромато-масс-спсктромстричсского анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расче! хрома-тофамм. вывод и вычитание фона масс-спектров, количественный анализ, поиск и сравнение с библиотекой масс-спектров

Продолжение табл. 2

1 2 - капиллярная колонка, режим профаммирования oi 50 иС-120 °С - 220 °С библиотека масс-спектров Секу нломер: 60-минутная шка_1а с ценой деления 1 мин, 60-секундная шкала с иеной деления 0.2 с ГУ 25-1894.003 Микрошприиы. диапазон дозируемого объема, мм * 1—10 с иеной деления 0,2 мм\ предел допускаемою относительною СКО случайной сосгавляюшей погрешности: ± 1 °о ГУ 2.833.106 Весы лабораюрные в юрою класса точности; наибольший предел взвешивания 2(Ю г. диапазон взвешивания по шкале mi от 0 до 100 мг. цена деления делит слыю! о усгройа ва - 0,05 мг. 1 lor реши ость взвешивания по шкале мг± 0.15 мг ГОСТ Р 53228 Меры массы ГОСТ OIMI. R 111-1 Метеоскоп-М, давление возду ха (80— 110 кПа). влажность воздуха (3—97 %>. температура воздуха (-40... -85) ТУ 43 1110-003-18446736—11 11осуда и оборудование лабораюрные стеклянные ГОСТ 25336 Колбы мерные вместимостью: 2-100-2. 2-1000-2 см1 ККГ 1770 Пипетки градуированные 1-го класса точности вместимостью: 1-2-1-1, 1-2-1-2, 1 -2-2-5 см* ГОСТ 29227 Дозаторы жидкости механические с пофешностыо ± 0.1 мм ’ объемом дозирования: 1 —10 см\ 100-1000 мм3. 20 200 мм ’ с одноразовыми наконечниками ГОСТ 28311 Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лу чшими характеристиками. Реактивы Вода для лабораторно!о апаш га бидисгиллнрованная ГОСТ Р 52501 Кали!) дву хромовокислый, чда 1 'ОСТ 4220 Кислота серная, хч ККГ 4204 Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233 Су л ьфат на три я криста, ь i и за пион 11 ый ГОСТ 21458

Продолжение табл. 2

1 2 Судьфамиповая кис.юга, хч ГУ 2121-278-00204197 Спирт метиловый 1 (X I 2222 Кислота бром ист оводоро.тная 1 (х: 1 2062 Кислота уксусная ледяная ГОСТ 61 Метилен хлористый (CAS 75-09-2) массовая доля > 99.90 % ТУ 263161168410 Смесь N-питрозоаминов (N-лимсгилнит розоачип. N-мстилэтилнитрозоамин. N-дитгилнитроюамин. N-дипропилнитрозоачин. N-дибутилнитрозоамин. N-ииперилиннитрозоачин) 2 ООО мкг/мл в метаноле ГСО 7881 1 елий газообразный, в баллонах 1У 0271-001 -459055715 Азот газообразный особой чисгогм. 1 сорт, объемная доля азота, %. не менее 99,999 ГОС Г 9293 Примечание. Допускается использование реактивов е более высокой квалификацией. Вспомогательные устройства и материалы Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с пну греи ним диаметром 0.25 мм длиной 30 м и толщиной пленки 0.25 мкм с полярной неподвижной фазой Автоматическая система ГФ') - Картридж наугольной основе 1*е,ту кт ор кислородный ГУ 3645-032-00220531 Установка для перегонки с водяным паром Колба К ГС (НК). 200. 500. КИК) см ) ГОСТ 25336 Холодильник Либиха XI ГГ-1-100-14/23-14/23 с адон-жем ГОСТ 25336 11арообразователь Стакан В-1-2000 ТС ГОСТ 25336 Облу чатель-рсиирку лятор ультрафиолетовый бактерицидный - Система очистки воды, позволяющая пол>чить дистиллированную и деионизованн>юводу - Материалы Лакмусовая бумага Бумага фильтровальная лабораторная ТОСТ 12026 Примечание. Допускается использование других вспомогательных устройств и материалов аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным.

VI. Требования безопасности

6.1.    При выполнении работ необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

6.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004. иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

6.3.    При выполнении измерений с использованием хромато-масс-спектрометра соблюдают правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.4.    При работе с сосудами, работающими под давлением, необходимо соблюдать правила их безопасной эксплуатации¹.

6.5.    Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать гигиенических нормативов², а также соответствовать ГОСТ 12.1.005.

6.6.    Работу с N-нитрозоаминами. стандартами, другими химическими соединениями и растворителями следует проводить в вытяжном шкафу с использованием индивидуальных средств защиты (очки, перчатки и др.).

6.7.    В лаборатории, где проводится работа с летучими N-нитрозо-аминамн. необходимо всегда иметь 2—3 % раствор газообразного бро-моводорода (НВг) в уксусной кислоте для разрушения N-нигрозоаминов при попадании их на рабочие места и пол.

6.8.    В целях разрушения летучих N-нитрозоаминов в воздухе по окончании работы помещение необходимо обработать ультрафиолетовым светом.

6.9.    N-нитрозоамины хранят в специальном холодильнике в отсутствие анализируемых проб.

6.10.    При работе с продуктами питания соблюдают требования санитарно-эпидемиологических правил'.

1

Ирика) Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116 «Об утверждении Федеральных норм и правил в области промышленной безопасности «Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее пол избыточным давлением».

2

I II 2.2.5.3532—18 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей юны»; ГН 2.2.5 2308 —07 «t )ptieiri иропочные безопасные у ровни воисйствня (ОЬУВ) вредных веществ в во «ухе рабочем юны»

Caul lull 2.3.2.1078—01 «Продовольственное сырье и пищевые продукт. Гигиенические ■ рсбования безопасности и нишевой исшюсти пищевых продуктов».