Государственно* санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств оксатиапипролина в воде, почве, клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата и томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Методические указания МУК 4.1.3562—19

Издание официальное

Москва • 2019

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств оксатиапипролина в воде, почве, клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата и томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Методические указания МУК 4.13562—19

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 12.5 мм. внутренним диаметром 2.1 мм. зернением 5 мкм. заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18 Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100—500 см’    ГОСТ    25336

Стаканы фарфоровые, термостойкие объемом 600 см³    ГОСТ 9147

Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 см³ и приемной конической колбой объемом 1 000 см³

Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см. зольность одного фильтра 0.00072 г Центрифуга лабораторная, настольная с максимальным рабочим числом оборотов 4 000 об./мин, с рабочим объемом ротора 200 см³ х 4 ячейки, выбираемый временной диапазон работы от 0 до 100 минут, и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см³ Шарики из углеродистой стали для экстракции диаметром 8 мм

Примечание. Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

V. Требования безопасности

5.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019. а также требования, изложенные в технической документации на комплекс жидкостного хроматографа с масс-спектро-метрическим детектором.

5.2.    Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов¹.

VI. Требования к квалификации операторов

6.1.    Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VII. Условия измерений

7.1.    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С. относительной влажности не более 80 %;

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

VIII. Подготовка к определению

8.1.    Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

Подготовка органических растворителей.

8.1.1.    Очистка ацетонитрила.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

8.1.2.    Приготовление бийистипированмои вобы.

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

8.1.3.    Очистка хлористого метилена.

Хлористый метилен промывают равным объемом 5 % раствора гидрокарбоната натрия, осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают

его над осушителем в течение 12—24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температу ре 40.0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40.0 °С. отбрасывают.

8.2. Приготовление растворов для проведения анализа.

8.2.1.    Приготовление рабочих растворов

8.2.1.1.    Приготовзение 5 % раствора гидрокарбоната натрия.

В мерную колбу объемом 1 ООО см* переносят 50 г гидрокарбоната натрия, добавляют 200—300 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Раствор используют для очистки хлористого метилена.

8.2.1.2.    Приготовзение 1.0% раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ ацетонитрила, прибавляют 10.0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом.

8.2.1.3.    Приготовление 0.1 % раствора муравьиной кислоты в аце-тонитриле.

В мерную колбу объемом 1 дм* помещают 500 см³ ацетонитрила, прибавляют 1,0 см * муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом.

8.2.1.4.    Приготовзение 0.05% водного раствора муравьиной кислоты.

В мерную колбу объемом 1 дм¹ помещают 500 см³ бидистиллиро-ванной воды, прибавляют 0.5 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

8.2.1.5.    Приготовзение 0.01 % раствора муравьиной кислоты в метаноле.

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ метанола, прибавляют 0.1 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки метанолом. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

8.2.1.6.    Приготовзение насыщенного раствора хзорида натрия

В стеклянную емкость объемом 1 000 см* переносят 400 г хлорида натрия, доливают 800 см' дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли.

8.2.2. Приготовление градуировочных растворов.

Стандартный раствор с концентрацией оксатиапипролина 100,0 мкг/civr в ацетонитриле стабилен при хранении при температуре не выше -18 °С в течение 6 месяцев.

Все стандартные растворы, приготовленные в ацетонитриле или в растворе 0,1 % муравьиной кислоты в ацетонитриле, остаются стабильными в течение 3 месяцев при хранении при температуре не выше -18 °С.

Стандартные растворы следует помещать в морозильную камеру непосредственно после каждого использования.

8.2.2.1 .Стандартный раствор .Vs I с концентрацией оксатиапи-про 7 и на 100.0 мкг/см³.

Взвешивают 10 мг оксатиапипролина в мерной колбе объемом 100 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Полученный стандартный раствор № 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики.

8.2.2.2.    Стандартный раствор .Vs 2 с концентрацией оксатиапипролина 10.0 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помешают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Стандартный раствор Х° 2 используют для приготовления градуировочных растворов и стандартных растворов для внесения в контрольные образцы.

8.2.2.3.    Стандартный раствор МеЗ с концентрацией оксатиапипролина I.Omkzcu³.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1 % раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор № 3 используют для приготовления градуировочных растворов.

8.2.2.4.    Стандартный раствор .Vs 4 с концентрацией оксатиапипролина 0.1 мкг/см³.

Из стандартного раствора X? 3 отбирают пипеткой 1,0 см и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1 % раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор X? 4 используют для приготовления градуировочных растворов.

8.2.2.5.    Стандартный раствор .Vs 5 с концентрацией оксатиапипролина 0.025 мкг/см³.

Из стандартного раствора X? 4 отбирают пипеткой 2,5 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1 %

раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор № 5 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.6.    Стандартный раствор Ns б с концентрацией оксатиапипро-лини 0,02 лпсг слг.

Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 2,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1 % раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор X® 5 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.7.    Стандартный раствор Ns 7 с концентрацией оксатистипро-.7 и на 0.01 ло&см.

Из стандартного раствора X® отбирают пипеткой 1.0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1 % раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор X? 7 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.8.    Сташкартныи раствор Ns 8 с концентрацией оксатиапипро-шна 0.005 мкг/см³.

Из стандартного раствора X® 7 отбирают пипеткой 5,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0,1 % раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор X? 8 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.9.    Стандартный раствор Ns 9 с концентрацией оксатиапипро-лина 0,002 мкг/см³.

Из стандартного раствора X? 6 отбирают пипеткой 1,0 см' и помещают в мерну ю колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0.1 % раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор Х®9 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.1.10.    ('тандартный раствор Ns 10 с концентрацией оксатиапи-пролина 0.0014 мкг/сАГ.

Из стандартного раствора X® 9 отбирают пипеткой 7,0 см³ и помешают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки 0.1 % раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле при перемешивании. Стандартный раствор X® 10 используют для установления градуировочной характеристики.

8.2.2.11. Стандартные растворы оксатиапипро.тина с концентрацией 5,0; 2.5; 1.0; 0.5; 0.2 и 0.1 мкг/см³ Оля внесения в контрольные образцы.

Метолом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора X? 2 готовят растворы, содержащие по 5.0; 2,5; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ оксатиапипролина и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

8.3.    Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристик), выражающую зависимость отклика фрагментарного иона, используемого для количественного определения. от концентрации оксатиапипролина в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6-ти растворам для градуировки с концентрацией 0,0014; 0,002; 0,005; 0,01; 0.02 и 0.025 мкг/см³.

В инжектор хроматографа вводят по 10 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.8. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Производят расчет параметров градуировочной характеристики (при помощи программного обеспечения): формулы зависимости отклика фрагментарного иона от концентрации оксатиапипролина в растворе, коэффициента корреляции, который должен быть не менее 0.995. и регрессионных остатков, которые не должны превышать 20 % для каждого уровня градуировочной характеристики.

Если линейность градуировочной характеристики была продемонстрирована, то при анализе серий образцов допускается устанавливать градуировочную характеристику методом абсолютной калибровки при однократном измерении по 5 и более уровням концентраций, охватывающим весь диапазон измерений. Данные для построения градуировочной зависимости набираются перед началом серии анализов и после ее окончания. По полученным данным производят расчет параметров градуировочной характеристики. Рекомендуется в серию анализов включать не более 12 инъекций.

8.4.    Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной храчатографи и

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 40 °С в течение 3—4 часов.

IX. Отбор проб и хранение

9.1.    Отбор проб производится в соответствии с утвержденными документами*.

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С не более 10 суток.

Для длительного хранения проб почвы почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Пробы клубней картофеля, лука, плодов томата и ягод винограда хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре (4 ± 2) °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С.

Пробы томатного и виноградного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С не более 5 суток.

X. Выполнение определения

10.1. Вода

10.1.1.    Экстракция.

К пробе воды объемом 100 см³ прибавляют 1,0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают и помещают в делительную воронку объемом 250 см³. Оксатиапипролин экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 20 см³ каждая, встряхивая делительную воронку кажчый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают через слой безводного сульфата натрия, обмывают осушитель 5 см³ хлористого метилена, элюаты объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С.

Остатки кислоты отдувают током холодного возду ха.

С^хой остаток растворяют методом последовательного разведения в 250 см³ 0.1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0.1 % раствора муравьиной кислоты в

^; Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, нишевых предметов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов. ГОСТ 31861. ГОСТ 174 301. ГОСТ 28168. ГОСТ 26832; ГОСТ 34306. ГОСТ 1723. ГОСТ 34208. ГОСТ Р 32876. ГОСТ 32786 ГОСТ 32101

ацетонитриле, отбирают 0,1 см^; экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 4,9 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм' вводят в хроматограф.

10.2. Почва

10.2.1.    Экстракция.

При экстракции в каждую банку с пробой и растворителем помешается по 3 стальных шарика для экстракции, которые перед центрифугированием удаляют.

Образец почвы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования обьемом 200см\ прибавляют 5 см³ дистиллированной воды, 50 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и помешают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют 5 минут при скорости 4 000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще раз. используя 50 см³

0.1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и помещая пробы на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют в течение 5 минут при скорости 4 000 оборотов в минуту. Экстракты фильтруют, объединяют в концентраторе объемом 250 см³. К экстракту в концентраторе прибавляют 5 см дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (-4—5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С.

10.2.2.    Очистка экстракта перераспреОаениеи в системе несме-шивающихся растворителей.

К водному остатку в концентраторе, полученному по п. 10.1.1, прибавляют 100 см³ дистиллированной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Концентратор обмывают 30 см³ хлористого метилена, переносят смыв в ту же делительную воронку и встряхивают ее в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще двумя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³ каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. Нижний слой (хлористый метилен) собирают через слой безводного сульфата натрия, обмывают осушитель 10 см³ хлористого метилена, элюаты объединяют в концентраторе объемом 250 см¹ и упаривают до-

суха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С.

Сухой остаток растворяют методом последовательною разбавления в 50 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0.1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³. прибавляют туда же 9 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.3. Клубни картофеля

10.3.1. Экстракция.

Образец измельченных клубней картофеля массой 10 г помещают в прочный фарфоровый стакан объемом 600 см³, прибавляют 50 см³ раствора 0,1 % муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают 1 минуту с помощью погружного миксера. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см^ через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще одной порцией объемом 50 см³ раствора 0,1 % муравьиной кислоты в ацетонитриле в тех же условиях. Экстракты фильтруют и объединяют в концентраторе объемом 250 см³. К экстракту' в концентраторе прибавляют 5 см^ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4—5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 10.2.2.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разбавления в 50 см' 0.1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ 0.1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.4. Плоды томата и ягоды винограда

10.4.1 Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворитаей.

Образец измельченных плодов томата или ягод винограда массой Юг помешают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ раствора 0,1 % муравьиной кислоты в ацетонитриле и помешают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см³ через фильтр низкой плотности. Экс-

тракцию повторяют еще одной порцией объемом 50 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле в тех же условиях. Экстракты фильтруют и объединяют в делительной воронке объемом 250 см³.

К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 30 см³ гексана и интенсивно встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой сливают в химический стакан объемом 250 см³, верхний слой (гексановый) отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом 30 см³ в тех же условиях. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³.

К ацетонитрильному экстракту в концентраторе прибавляют 5 см³ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (- 4—5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 10.2.2.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разбавления в 50 см³ 0.1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм³ вводят в хроматограф.

10.5. Томатный сок

10.5.1. Экстракция и очистка полученного экстракта переросnpe-делением в системе несмешивающихся растворителей.

Образец томатного сока массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³. прибавляют 100 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см³ через фильтр низкой плотности.

К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 30 см³ гексана и интенсивно встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой сливают в химический стакан объемом 250 см³, верхний слой (гексановый) отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом 30 см³ в тех же условиях. После полного разделения

ББК 51.23 0-62

0-62 Определение остаточных количеств оксатиапипролина в воде, почве, клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата и томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, 2019.—30 с.

ISBN 978-5-7508-1717-7

1.    Разработаны ФГВОУ ВО «Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А. В. Довгилсвич. Е. В. Довгилевич. Е. Н. Тестова)

2.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, Г лавным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 11 октября 2019 г.

3.    Введены впервые

ББК 51.23

ISBN 978-5-7508-1717-7

© Роспотребнадзор, 2019

фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см\

К ацетонитрильному экстракту в концентраторе прибавляют 5 см дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4—5 см ) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 10.2.2.

Сухой остаток растворяют методом последовательного разбавления в 50 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Для этого сухой остаток растворяют в 5 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле и перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 10 мм вводят в хроматограф.

10.6. Виноградный сок

10.6.1. Экстракция и очистка нау ченного экстракта перераспределением в системе нес.мешивающихся растворитетеи

Образец виноградного сока массой 10 г помещают в делительную воронку объемом 250 см³, прибавляют 20 см³ насыщенного раствора хлорида натрия и перемешивают. Оксатиапипролин экстрагируют тремя порциями 0,1 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле объемом по 50 см³, 30 см³ и 30 см³, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 минуты. Каждый раз после разделения фаз в делительной воронке верхний ацетонитрильный слой с небольшим количеством эмульсии объединяют в плоскодонной колбе объемом 250 см³. Затем объединенный экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 см³, после разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой отбрасывают.

К ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 30 см³ гексана и интенсивно встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке отбрасывают выделившуюся воду (нижний слой), средний ацетонитрильный слой сливают в химический стакан объемом 250 см³, верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще одной порцией гексана объемом 30 см³ в тех же условиях. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см’.

К ацетонитрильному экстракту в концентраторе прибавляют 5 см³ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4—5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С.

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

11 октября 2019 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств оксатиапипролина в воде, почве, клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата и томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Методические указания _МУК    4.13562—19_

I. Общие положения и область применения

1.1.    Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовых концентраций оксатиапипролина в воде в диапазоне 0,005—0,050 мг/дм³ и в почве в диапазоне 0,01—0,10мг/кг, а также уровня его остаточных количеств в клубнях картофеля, луке-репке, плодах томата и томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке в диапазоне 0,01—0,10 мг/кг.

1.2.    Физико-химические свойства оксатиапипролина.

Название действующего вещества по ИЮПАК: l-(4-{4-[(5RS)-5-(2.6-дифторфенил )-4,5-дигидро-1,2-оксазол-З-ил]-1,3-тиазол-2-ил} -1 -пиперидилЬ2-[5-метил-3-(трифторметил)-1Н-пиразол-1-ил]этанон.

Структурная формула:

F

Эмпирическая формула: Qu^sFsNsCbS.

Молекулярная масса: 539,5.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белого цвета, без запаха.

Давление паров: 1.41 * 10 ³ мПа.

Коэффициент распределения октанол/вода (при pH 7, 20°С): K_ovJogP = 3.66.

Температура плавления: 146,4 °С.

Растворимость в воде (мг/дм\ 20 °С): 0,1749.

Растворимость в органических растворителях (г/дм\ при 20 °С): хлористый метилен - 352; ацетон - 147; ацетонитрил - 111; этилацетат -31,7; метанол - 13; толуол - 5,7; н-октанол - 0,04; гексан - 0,01.

Гидролитически стабилен при pH 7 и температуре 20 °С.

Устойчив в почве ДТ50 121 день.

1.3.    Краткая токсикологическая характеристика: оксатиапипро-лин относится к веществам мало опасным по острой оральной (ЛД50 для крыс более 5 000 мг/кг). дермальной токсичности (ЛД₅₀ для крыс более 5 000 мг/кг) и ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 ч) более 5 000 мг/м* воздуха). Не раздражает слизистую глаз и кожу.

Область применения: оксатиапипролин - фунгицид системного действия. Ингибирует оксистеролсвязывающий белок, который предотвращает прорастание споры и ингибирует образование зародышевой трубки и рост мицелия.

1.4.    МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть исполь-

зованы организациями, аккредитованными в установленном порядке на проведение исследований продовольственного сырья, пищевых продуктов.

1.5. МУК носят рекомендательный характер.

II. Погрешность измерений

2.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице I для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для оксатиапипролина

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Показатель точности (граница относительной погрешности) ±6, %Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости. ап % Предел повто ряемо сти, г.% Предел воспро изводи мости. R.% Вода 0,005—0.010 Biei. 50 8 22 30 0.010—0.050 вкл. 40 5 13 18 Почва 0,01—0,10 вкл. 50 5 13 19 Клубни картофеля 0,01—0,10 вкл. 50 7 20 28 Лук-репка 0,01—0,10 вкл. 50 5 14 20 Плоды томата 0.01—0,10 вкл. 50 7 19 27 Томатный сок 0.01—0.10 вкл. 50 5 14 20 Ягоды винограда 0.01—0.10 вкл. 50 7 20 28 Виноградный сок 0.01—0.10 вкл. 50 7 21 29

Таблица 2 Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднею результата .тля оксатиапипролина

Анализируемый объект Метрологические параметры. Р = 0.95. п = 20 предел обнаружения. мг/кг (мг/дм3) диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) полнота извлечения вещества. % стандартное отклонение. 5.% доверительный интервал среднего результата. ±.% Вола 0.005 0.005—0.050 100.1 4.7 2.2 Почва 0.01 0.01—0.10 97.2 5.2 2.4 Клубни картофеля 0.01 0.01—0.10 98.7 7.0 3.2 Лук-репка 0.01 0.01—0.10 85.3 5.2 2,1 Плоды томата 0.01 0.01—0.10 87.3 8.3 3.4 Томатный сок 0.01 0.01—0.10 93.8 4.6 2.0 Ягоды винограда 0.01 0.01—0.10 97.4 5.5 2.5 Винофалный сок 0.01 0.01—0.10 92.5 6.7 2.9

III. Метод измерения

3.1. Метод основан на определении оксатиапипролина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенной фазе с использованием тандемного масс-спектрометрического детектора (ВЭЖХ-МС-МС).

Определение оксатиапипролина в воде проводится после его экстракции хлористым метиленом из подкисленного образца воды.

Определение оксатиапипролина в почве, клубнях картофеля, луке-репке. плодах томата, томатном соке, ягодах винограда и в виноградном соке проводится после его экстракции из образцов подкисленным ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающим ися фазами.

Идентификация оксатиапипролина проводится по времени удерживания. наличию характеристичных фрагментарных ионов и соотношению интенсивностей (площадей) пиков этих ионов. Количественное определение оксатиапипролина проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования масс-спектрометричес-кого детектора.

IV. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

4.1. Средства измерении Весы аналитические класса точности - специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г    ГОСТ Р 53228

Весы лабораторные общего назначения класса точности - средний (III), с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности ± 0,5 г    ГОСТ Р 53228

Колбы мерные объемом 10, 100, 500 и 1000 см’    ГОСТ 1770

Пипетки мерные объемом 1,0; 2,0; 5,0 и 10.0 см’    ГОСТ 29227

Система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектро-метрическим детектором, включающая:

- модульный жидкостной хроматограф, состоящий из градиентного насоса на два растворителя, позволяющий регулировать поток элюента от 0,001 до 5,0 см³/мин и создавать давление от 0 до 600 бар; вакуумного дегазатора; термостата колонок с двумя независимо нагреваемыми зонами с диапазоном температур от 10 до 80 °С и с возможностью использования стандартного автосам-плера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему. ВЭЖХ система соединена с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройной квадруполь с двумя высокопроизводительными турбомолекулярными насосами, позволяющим регистрировать отдельные ионы с заданными массами от 5 до 3000 а.е.м;

- система оснащена компьютерной системой обработки данных, контролирующей работу всего прибора, обеспечивающей сбор и хранение всех масс-хроматограмм в процессе проведения хромато-масс-спектрометрического анализа, обеспечивающей обработку результатов измерений, вывод и расчет масс-хроматограмм и количественный анализ Цилиндры мерные объемом 10. 25. 50, 100. 500 и 1000 см'    ГОСТ    1770

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.2. Реактивы Оксатиапипролин. аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 98.9 %

Азот, осч    ГОСТ

Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм

Вода дистиллированная и (или)    ГОСТ

бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости)

Калий марганцовокислый, чда    ГОСТ

Кальций хлористый, ч

Кислота муравьиная, чда    ГОСТ

Метилен хлористый, хч

Натрий сернокислый, безводный, хч    ГОСТ

Натрий углекислый, кислый, хч    ГОСТ

Натрий хлористый, хч    ГОСТ

Спирт метиловый (метанол), хч    ГОСТ

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.3. Вспомогательные устройства, материи.1Ы Аппарат для встряхивания проб с возвратнопоступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту

Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см³ Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная

Ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм³

Виалы объемом 2 см³, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб

Виалы с тефлоновыми прокладками, стеклянные, объемом не менее 20 см³ Воронки делительные объемом 250 см³ Воронки лабораторные, стеклянные Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3 000 см³, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием, объемом 5 дм³ и с диапазоном температур от 20 до 100 °С

Колбы конические плоскодонные объемом 100, 250 и 1 000 см³

Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) объемом 100, 250 см³ и 4 000 см³ ТС Колонка хроматографическая стальная, длиной 100 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18 Миксер ручной погружной, мощностью 260 Ватт и с максимальной скоростью вращения от 2 000 до 12 500 об./мин Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс., с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм³/мин

1

ГН 2 2.5 3532—18 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». ГН 2.2 5 2308—07 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны»