Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств тиаметоксама и его метаболита клотианидина в бананах, цитрусовых, чае и кофе-бобах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3444—17

Издание официальное

Москва • 2017

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств тиаметоксама и его метаболита клотиапидина в бананах, цитрусовых, чае и кофе-бобах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3444—17

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка ацетонитрила (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, смесей солей для экстракции и сорбентов для очистки экстрактов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

7. /. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентокси-дом фосфора (на 1 дм ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.2. Подготовка подвижной фалы для ВЭЖХ

Компонент А: раствор 0,05 % (по весу) формиата аммония + 0,01 % (по объему) муравьиной кислоты в воде.

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 0,5 г формиата аммония, растворяют в 300—400 см³ бндистиллированной воды, вносят 0,1 см ’ муравьиной кислоты, доводят до метки водой, перемешивают.

Компонент Б: раствор 0,01 % (по объему) муравьиной кислоты в метаноле.

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 500 см³ метанола, вносят 0,1 см’ муравьиной кислоты, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают.

Растворы компонентов подвижной фазы хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

7.3.    Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ

Промывают колонку подвижной фазой (смесь компонентов А и Б,

приготовленных по п. 7.2, в соотношении 1:1) при скорости подачи растворителя 0,4 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.4.    Приготовление раствора уксусной кислоты в ацетонитриле с

объемной долей 1% (1%-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 300—400 см³ ацетонитрила, вносят 10 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

7.5. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения

7.5.1.    Исходный раствор тиаметоксама для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см* помешают (0,0100 ±0,0001) г тиаметоксама, добавляют 50—70 см³ ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение 6 месяцев.

7.5.2.    Исходный раствор клотианидина для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 ± 0,0001) г клотианидина, добавляют 50—70cm^j ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температу ре (4 ± 2) °С в течение 6 месяцев.

Растворы № 1—6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.

7.5.3.    Растворы № 1 тиаметоксама uitt клотианидина для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см*). В мерную колбу вместимостью 100 см’ помещают 10 см³ исходного раствора тиаметоксама (п. 7.5.1) или клотианидина (п. 7.5.2) с концентрацией 100 мкг/см³, разбавляют ацетонитрилом до метки, перемешивают.

Раствор № I хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение 6 месяцев.

7.5.4.    Раствор № 2 тиаметоксама и клотианидина для градуировки и внесения (концентрация каждого вещества 1 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают по 10,0 см³ градуировочных растворов № 1 с концентрацией тиаметоксама и клотианидина

10.0    мкг/см³ (п, 7.5.3), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор № 2 с концентрацией тиаметоксама и клотианидина 1 мкг/см³.

Раствор № 2 хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение одного месяца.

7.5.5.    Рабочие растворы № 3—б тиаметоксама и клотианидина для градуировки (концентрация каждого вещества по 0.01—0.1 мкг/см³). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 10,0; 5,0; 2,0;

1.0    см³ градуировочного раствора № 2 с концентрацией тиаметоксама и клотианидина 1 мкг/см³ (п. 7.5.4), доводят до метки раствором, приготовленным по п. 7.4, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 3—6 с концентрацией тиаметоксама и клотианидина 0,1; 0,05; 0,02; 0,01 мкг/см³ соответственно.

Растворы хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение одной недели.

7.6. Приготовление смеси солей для экстракции

Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4 ±0,01) г магния сернокислого и (1 ±0,01) г натрия хлористого, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).

Примечание. Возможно использование других наборов солей для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г.

7.7. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 2 см³ помещают (50 ± 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (50 ± 4) мг графитизирован-ной сажи, (150 ± 4) мг магния сернокислого и (50 ± 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование дисперсионных наборов для фрукгов и овощей с маслом и пигментами, помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 2 см³.

7.8. Установление градуировочных характеристик

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика (1) от концентрации тнаметоксама и клотианидина в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 2 мм³ каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 7.5.5, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков веществ, на основании которых строят градуировочные зависимости.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб осуществляют в соответствии с ГОСТ Р 51603-2000 «Бананы свежие. Технические условия»; ГОСТ Р 53596-09 «Плоды цитрусовых культур дтя употребления в свежем виде. Технические условия»; ГОСТ 32573-13 «Чай черный. Технические условия»; ГОСТ ИСО 4072—15 «Кофе зеленый в мешках. Отбор проб» и «Унифициро-

ванными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79).

Пробы бананов, цитрусовых, чая и кофе-бобов хранят при температуре (4 ± 2) °С не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше -18 °С.

Перед анализом образцы измельчают.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция

Образец измельченных плодов бананов, цитрусовых массой 10 г, кофе-бобов массой 5 г, чая массой 2 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³. В пробирки с пробой кофе-бобов и чая вносят по 10 см³ бидистиллированной воды, перемешивают, оставляют на 5 мин.

Затем в пробирки с пробами бананов, кофе-бобов и чая вносят 10 см³ 1%-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле, с пробой цитрусовых - 10 см³ ацетонитрила, помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 с, вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 7.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4 000 об./мнн и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 9.2.

9.2. Очистка экстракта

Аликвоту экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 1,5—1,8 см³ с помощью пипетки переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 7.7, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную в течение 30 с. Центрифугируют 15 мин при скорости вращения 4 000 об./мин. Отбирают с помощью медицинского шприца раствор, фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,22 мкм) в виалу вместимостью 2 см* с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой. Помещают в автосамплер хроматографа для анализа в условиях хроматографирования по п. 9.3.

9.3. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.

Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации, оснащенным соосной подачей горячего азота для эффективной десольвации ионов.

Источник ионизации: электростатическое распыление.

Режим работы: регистрация дочерних положительных ионов после разрушения материнских ионов (регистрация «перехода»).

Тиимемоксам

Материнский ион (масса/заряд): 292,2.

Дочерние ионы (масса/заряд): 211,0 (количественный расчет), 181,0.

Напряжение на фрагментаторе, В: 85.

Энергия    разрушения    (соударения),    В:    4    (292,2->211,0),    16

(292,2-> 181,0).

Кюпишнидип

Материнский ион (масса/заряд): 250,0.

Дочерние ионы (масса/заряд): 169,1 (количественный расчет), 132,1.

Напряжение на фрагментаторе, В: 90.

Энергия    разрушения    (соударения),    В:    7    (250,0-> 169,1),    15

(250,0-> 132,1).

Скорость сканирования: 200 мс.

Давление на распылителе: 35 psi.

Скорость осушающего газа 1 (азот): 10 дм³/мин.

Температура газа 1: 250 °С.

Скорость газа 2 (азот): 11 дм³/мин.

Температура газа 2: 340 °С.

Напряжение на капилляре: 4 500 В.

Температура квадруполей (1 и 3): 100 °С.

Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращено-фазовым сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, зернением 1,8 мкм.

Температура колонки: 45 °С.

Скорость потока элюента: 0,4 см³/мин.

Объем вводимой пробы: 2 мм³.

Подвижная фаза: компонент А - раствор 0,05 % (по весу) формиата аммония + 0,01 % (по объему) муравьиной кислоты в воде; компонент Б - раствор 0,01 % (по объему) муравьиной кислоты в метаноле.

Режим элюирования (градиентный), пробег 10 мин (табл. 3), промывка колонки после анализа 10 мин.

Таблица 3 Режим элюирования

Время, мин Компонент А. % Компонент Б. % 0 90 10 5,0 35 65 6.5 5 95 8.5 5 95 10 90 10

Линейный диапазон детектирования 0,02—0,2 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0.1 мкг/см³, разбавляют ацетонитрилом, содержащим 1 % уксусной кислоты (не более чем в 50 раз).

10. Обработка результатов анализа

Содержание тиаметоксама с учетом его метаболита клотианидииа (в эквиваленте действующего вещества) в пробах бананов, цитрусовых, чае и кофе-бобах (Л', мг/кг) рассчитывают по формуле:

т

А - концентрация тиаметоксама или клотианидина. найденная по градуировочным графикам в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см³;

V- объем экстракта (10 см³);

т - масса анализируемого образца, г.

При необходимости представления содержания тиаметоксама с учетом его метаболита в эквиваленте действующего вещества рассчитанное содержание клотианидина умножается на коэффициент пересчета по соотношению молекулярных масс (равен 1,17) и суммируется с содержанием тиаметоксама.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

А'/» X: - результаты параллельных определений, мг/кг; г —значение предела повторяемости (табл. 1), при этом г = 2,8 сг_г. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( X ± А) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание тиаметоксама ши клотианидина в пробе бананов и цитрусовых - менее 0,01 мг/кг; в пробе чая - менее 0,05 мг/кг; в пробе кофе-бобов - менее 0,02 мг/кг».

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 -6—02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

15./. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание тиаметоксама и клотианидина в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,01 до 0,1 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

_А .1*-с|-ню

С

X - концентрация тиаметоксама или клотианидина в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора тиаметоксама или клотианидина, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

В - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 10 % при Р = 0,95).

Если величина расхождения (А) превышает 10 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тиаметоксама и клотианидина, предусмотренных МИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.8.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С,- должна удовлетворять условию:

с,>л_а+^д

±Д_т^(±Д_?г,) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

А, - ± 0,84 А, где А - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

SX

100

5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К_к= X'- X - О, где

Х\ X, Со - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле: ^{к =} +

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

т <к_У    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (/?):

²'1^Л‘ —'^У:1-|_00< /? . где    (3)

+ *»

X_hX₂- результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Определение остаточных количеств тиаметоксама и его метаболита клотианидина в бананах, цитрусовых, чае и кофе-бобах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3444—17

Ответственный за выпуск Н. В. Карташева

Редактор Л. С. Кучурова Компьютерная верстка Е. В. Ломановой

Подписано в печать 09.10.17 Формат 60x84/16    Печ.    л.    1,25

Тираж 125 экз.    Заказ

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковскин пер., д. 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделением издательского обеспечения отдела научно-методического обеспечения Федерального ueirrpa гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Реализация печатных изданий, тсл./факс: 8 (495) 952-50-89

ББК 51.23

0-62

0-62 Определение остаточных количеств тиаметоксама и его метаболита клотианидина в бананах, цитрусовых, чае и кофе-бобах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2017.—18 с.

1.    Разработаны ФБУ11 «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора (В. Н. РакитскпЙ, Н. Е. Федорова. В. В. Баюшевл, Ж. А. Чистова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. № 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 13 марта 2017 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

€> Роспотребнадзор, 2017

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

13 марта 2017 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств тиамегоксама и его метаболита клотианидина в бананах, цитрусовых, час и кофе-бобах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указании _МУК    4.1.3444—17_

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в бананах, цитрусовых, чае и кофе-бобах массовой концентрации тиамегоксама и его метаболита клотианидина в диапазонах 0,01—0,1 мг/кг, 0,01—0,1 мг/кг, 0,05—0,5 мг/кг и 0,02—0,2 мг/кг соответственно.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Тиаметоксам

3-(2-хлор-1,3-тиазол-5-ил мстил )-5-метил-[ 1,3,5]оксадиазинан-4-илиден-Ы-нитроамин (ИЮПАК)

C₈H_l0ClN5O₃S Молекулярная масса: 291,7.

Белый кристаллический порошок без запаха. Температура плавления 139,1 °С. Давление паров 6,6 х 10'⁶ МПа (при 25 °С). Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kqw log Р = -0,13. Растворимость в ор-

тонических растворителях при 25 °С (в г/дм³): ацетонитрил - 78; ацетон - 42,5; дихлорметан - 43; метанол - 10,2; этил ацетат - 5,7; толуол - 0,6. Растворимость в воде при 20 °С: 4,1 г/дм³. Стабилен к гидролизу при температуре 20 °С при pH от 1 до 7; DT₅₀ при pH 9 - 11,5 дней.

В присутствии света в водных фотолитических условиях тиаме-токсам быстро деградирует с периодом полураспада 2,3 дня.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - 1 560мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс - более 2 ООО мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LCso) для крыс - более 3 720 мг/м³ воздуха.

Основным продуктом метаболитмческой деградации тиаметоксама в растительной продукции является клотпанидин.

Клотианидпн

(Е)-1 -(2-хлор-1,3-тиазол-5-илметил)-3-метил-2-нитрогуанидин (ИЮПАК)

c₆h₈cin₅o₂s

Молекулярная масса: 249,7.

С ветл о-кремовый порошок без запаха. Температура плавления 176,8 °С. Давление паров 2,8 х 10"⁸ МПа (при 25 °С). Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_Qw log Р = 0,905. Растворимость в органических растворителях при 25 °С (в г/дм³): ацетон - 15,2; этилацетат -2,03; ксилол - 0,0128. Растворимость в воде при 20 °С: 0,34 г/дм³. Стабилен к гидролизу при pH 5, 7,9 (при 20 °С).

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD$o) для крыс - более 5 000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LDjo) для крыс - более 2 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс - более 6 141 мг/м³.

I. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Значения характеристики погрешности, нормативов оперативного контроля точности, повторяемости, воспроизводимости

Таблица 1

Анализи руемый объект Диапазон опреде ляемых концен траций, мг/кг Показатель точности (границы относительной погрешности, /> = 0,95), ± 8, % Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), о/ (Гг, % Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), о* % 11 редел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений). г, % 1 (редел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), /?, %, (Р = 0,95) Тиаметоксам Бананы о 0 1 © 50 6.1 8.5 17 24 Цитрусо вые 0,01—0,1 50 6.7 9.4 19 26 Чай 0,05—0,5 50 5,6 7,8 16 22 Кофе-бобы 0.02—0.2 50 6.4 9.0 18 25 Клотианидин Бананы 0.01—0,1 50 8,4 11,7 23 33 Цитрусо вые 0,01—0,1 50 6,5 9,1 18 25 Чай 0.05—0,5 50 5,7 8,0 16 23 Кофе-бобы 0.02—0,2 50 7,4 10,3 21 29

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (п = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95. п = 20
	предел обнаружения, мг/кг	диапазон определяемых концентраций. мг/кг	полнота извлечения вещества. %	стандартное отклонение. %	доверительный интервал среднего результата, ±, %
1	2	3	4	5	6
Тиаметоксам
Бананы	0.01	0.01—0,1	98,3	6.2	3.2
Цитрусовые	0,01	0,01—0,1	95.1	6,7	3,5

Продолжение табл. 2

1 2 3 4 5 6 Чай 0.05 0.05—0,5 100,2 6.4 3,3 Кофе-бобы 0,02 0,02—0.2 95.9 6,7 3,5 Клотианидин Бананы 0.01 0.01—0.1 99.6 10,3 5.4 Цитрусовые 0.01 0,01—0,1 91.7 9,9 5,2 Чай 0,05 0,05—0.5 95,8 6,5 3,4 Кофе-бобы 0.02 0.02—0.2 90,0 10,7 5.6

2. Метод измерений

Методика основана на определении веществ с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором.

Экстракцию веществ из анализируемых проб выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солен для экстракции (смесь сульфата магния и хлорида натрия), очистку экстрактов проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе амина, октадецилсилана и графитизированной сажи.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

Нижний предел измерения тиаметоксама или его метаболита кло-тианидина в анализируемом объеме пробы -0,02 нг.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст.    ТУ 2504-1797—75

Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ± 0,1 мг    ГОСТ Р 53228-08

Весы лабораторные, наибольший предел взвешивания 420 г, предел допустимой погрешности ± 0,01 г

Колбы мерные вместимостью 2-50-2,2-100-2, 2-1000-2 Меры массы

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 cm^j Термометр лабораторный, пределы измерения -35—+55 °С

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 100, 250 и 500 см³ Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90 %

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Тнаметоксам, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99,7 % Клотианидин, аналитический стандарте содержанием основного компонента 98,2 % Азот осч, из баллона

Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода для лабораторного анализа (бидистил-лированная или деионизованная)

Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный

Магний сернокислый (сульфат магния), безводный, хч

Натрий хлористый (хлорид натрия), хч Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми пропиламин-ными группами: (СНгХ^Но), площадь поверхности -570 м²/г, средний размер пор 67 А, средний размер частиц 60 мкм Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми октадецильны-ми группами (СН2Х7СН3 (С 18), площадь поверхности -547 м²/г, средний размер пор 64 А, средний размер частиц 58 мкм

Графитизированная сажа, специфическая площадь поверхности -100 м"/г, размер частиц 120/400 меш Метиловый спирт (метанол), хч Муравьиная кислота, 99,7 %, чда Уксусная кислота, 99,5 %, чда Аммоний муравьинокислый (формиат аммония), 99,0 %, чда

Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора), хч

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Баня ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц

Воронки химические конусные диаметром

40—45 мм

Груша резиновая

Мельница лабораторная

Мембраны микропористые капроновые,

диаметр пор 0,45 мкм

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Керамические гомогенизаторы для пробирок на 50 см³

Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками, вместимостью 50 и 2 см³ Пробирки со шлифом вместимостью 5 см³ Установка для перегонки растворителей Фильтры мембранные для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,22 мкм Холодильник обратный водяной Хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращено-фазовым сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, зернением 1,8 мкм Центрифуга лабораторная, роторная, скорость вращения до 4 000 об./мин с центрифужными стаканами на 100 см³

Шприцы медицинские одноразовые с разъемом Льюера вместимостью 5 см³    ГОСТ 22090

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 - 250 мм³

Примечание. Допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требовании безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда -по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3.    При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см'), необходимо соблюдать Федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности «Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением» (утв. Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

6. Условии измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.