Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флоникамида в воде, почве, яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указании МУК 4.1.3135—13

Издание официальное

Москва • 2014

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флоникамида в воде, почве, яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3135—13

ББК 51.21+5173

060

060 Определение остаточных количеств флоникамида в воде, почве, яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014.—15 с.

ISBN 978—5—7508—1320—9

1.    Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийский НИИ защиты растений Россельхозакалемии (В. И. Долженко, И. А. Цибульская.

А. С. Комарова Т. Д. Чсрмснская. В В. Чсловсчкова)

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией ни юсударствснному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. Х« 3).

3.    Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А. Ю. Поповой 12 ноября 2013 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.214-51.23

ISBN 978—5—7508—1320—9

© Роспотребнадзор, 2014 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014

МУК 4.1.3135—13

УТВЕРЖДАЮ Врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

А. Ю. Попова

12 ноября 2013 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флоникамида в воде, почве, яблоках и яблочном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3135—13

Свидетельство о метрологической аттестации №01.5.04.143/01. 00043/2013.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации флоникамида в воде в диапазоне концентраций 0,001—0,01 мг/дм\ в почве в диапазоне концентраций 0,02—0,2 мг/кг, яблоках и яблочном соке в диапазоне концентраций 0,05—0,5 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: флоникамид.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-трифтормстил-1^-цианометилникотинамид.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C9H6F3N3O.

Молекулярная масса: 229,2.

Химически чистое вещество представляет собой белый кристаллический порошок без запаха. ¹

Температура плавления: 157,5 °С.

Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода lgP = 0,3.

Растворимость в воде (г/дм¹,20 °С) - 5,2.

Растворимость в органических растворителях (г/дм¹, 20 °С): ацетон -163,5, толуол - 0,55, этилацетат - 34,2, дихлорметан - 4,5.

Краткая токсикологическая характеристика: острая пероральная ЛД50 - 884; 1 768 мг/кг массы тела для самцов и самок крыс соответственно. Острая дермальная для крыс ЛД50 > 5 ООО мг/кг. Не ирритант для кожи и глаз кроликов. Острая токсичность: рыбы ЛК50 > 100 мг/л, дафнии ЭК₅₀> 100 мг/л, зеленые водоросли 3Kso> 100 мг/л. Не токсичен для энтомофагов.

Область применения: селективный, системный инсектицид для сосущих насекомых, повреждающих плодовые, зерновые, овощные культуры.

В России для флоникамида гигиенические нормативы не установлены.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности /> = 0,95 нс превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Показатель повторяемое ги (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), ог, % 11оказатель внутрила-бораторной прецизионности, Or,* % Показатель воспроизводимости, oR% Показатель точности* (границы относительной погрешности), ± 6, % Вода 0,001—0,01 9 11 12 24 Почва 0,02—0,2 8 9 11 22 Яблоки 0,05—0,5 9 11 12 24 Яблочный со к 0,05—0,5 9 ___ 11 _ 12 _ 24 L • Соответствует расширенной неопределенности ишн при коэффициенте охвата к = 2

МУК 4.1.3135—13

Таблица 2 Полнота извлечения флоннкамнда, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п « 20, Р = 0,95

Анализируемый объект Предел обнару жения, мг/кг (мг/дм3) Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Полнота извлече ния, % Стандартное отклонение, S Доверительный интервал среднего результата, ±% Вола 0,001 0,001—0,01 84,1 4,93 2,46 Почва 0,02 0,02—0,2 83,4 1,98 0,99 Яблоки 0,05 0,05—0,5 88,0 2,25 из Яблочный сок 0,05 0,05—0,5 81,4 3,00 1,50

2. Метод измерений

Методика основана на определении флоникамида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового (УФ) детектора после его извлечения из образцов органическим растворителем и последующей очистки на патронах для твердофазной экстракции.

Идентификация флоникамида проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерении Жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-дстектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки

Весы аналитические с пределом взвешивания

до 210 г и пределом допустимой погрешности

0,2 мг    ГОСТ    24104—2001

Весы технические с пределом взвешивания до

400 г и допустимой погрешностью 0,1 г    ГОСТ 24104-2001

Колбы мерные на 10, 100 и 1 000 см³    ГОСТ 23932-90

Микродозаторы одноканальные переменного

объема от 200 до 1 000 мм³ и от 1 до 5 см^{3 2}

Цилиндры мерные на 50 и 100 см³    ГОСТ 23932-90

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетон, осч    ТУ 6-09-3513—86

Ацетонитрил, хч    ТУ 6-09-3534—87

Вода для лабораторного анализа (бидистиллят, деионизованный)    ГОСТ Р 52501-2005

н-Гсксан, хч    ТУ 6-09-3375—78

Калий дигидроортофосфат, ч    ТУ 6-09-5324—87

Калий фосфорно-кислый, двузамещенный,

3-водный, чда    ГОСТ 2493-75

Кислота ортофосфорная, хч    ГОСТ 6552-80

Натрий серно-кислый безводный, хч    ГОСТ 4166-76

Смесь № 1: гексан-этил ацетат в соотношении I : 1 по объему

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 13 : 87

Флоникамид с содержанием основного вещества 91,9 %

Этипацетат, хч    ГОСТ 1138-84

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией. нс требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аналитическая колонка, заполненная сорбе!ггом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, (100 х 2,1) мм, 1,7 мкм Аппарат для встряхивания проб Воронки делительные, вместимостью 250 см³ Воронки химические конусные Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25,50 и 100 см’

Колбы плоскодонные конические вместимостью 100 см³

Патроны для твердофазной экстракции, заполненные гидрофильным слабокислотным сорбентом на основе силикагеля, 0,4 г ³

МУК 4.1.3135—13

Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см³ Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар

Стаканы химические вместимостью 150 см³    ГОСТ 25336-82

Фильтры бумажные быстрой фильтрации    ТУ 6.091678—86

Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 ООО обУмин

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308—07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опьгг работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %; ⁴

МУК 4.1.3135—13

• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7.1. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1—0,2 см³/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Кондиционирование патрона для твердофазной экстракции

Патрон промывают 2 см³ этилацетата, затем 3 см³ смеси № 1 (гексан : этилацетат).

7.3. Приготовление растворов

7.3.1.    0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,5 ±0,01) г 98 %-й ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм³, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.

7.3.2.    Для приготовления 0,1 М фосфатного буфера взвешивают 11.4 г калия фосфорно-кислого двузамещенного 3-водного и 6,8 г калия дигидрофосфата, переносят в мерную колбу вместимостью 1 000 см³, растворяют в воде и доводят объем до метки водой.

7.3.3.    Смесь ацетонитрила с водой в соотношении 20 : 80 готовят по объёму, используя мерные цилиндры.

7.3.4.    Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 13 : 87 по объёму, используя мерные цилиндры.

7.4. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.4.1.    Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см*: точную навеску флоникамида (50 ± 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.4.2.    Приготовление градуировочных растворов

Градуировочные растворы с концентрациями флоникамида 0,1, 0,5,

1,0, 5,0 и 10,0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления но объему, используя смесь ацетонитрила и воды в соотношении 20 : 80.

7.4.2.1. Раствор № 1 с концентрацией 10,0 мкг/см': в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 2,0 см³ основного раствора и доводят до мегки подвижной фазой. ⁵

МУК 4.1.3135—13

7.4.2.2.    Раствор №2 с концентрацией 5,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1,0 см³ основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.3.    Раствор Ns 3 с концентрацией 1,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см⁵ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.4.    Раствор Ns 4 с концентрацией 0,5 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора № 2 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.5.    Раствор Ns 5 с концентрацией 0,1 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора № 3 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - 2 дней.

При изучении полноты определения флоникамида в воде, почве, яблоках и яблочном соке используют ацетоновые растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетоном.

7.5. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика -концентрация флоникамида в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм³ градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации флоникамида в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

С - KS, где

S— площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия: ⁶

1

2

3

4

5

6