Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование __Российской    Федерации___

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств циазофамида в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, плодах томатов и томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3133—13

Издание официальное

Москва *2014

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств циазофамида в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, плодах томатов и томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.13133—13

ББК 51.21+51.23 060

060 Определение остаточных количеств циазофамида в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, плодах томатов и томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014.—15 с.

ISBN 978—5—7508—1312—4

1.    Разработаны сотрудниками «ГНУ Всероссийский НИИ защиты растений Россельхозакадемии» (В. И. Долженко, И. А. Цибульская,

Т. Д. Черменская, А. С. Комарова); ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава России (М. С. Орлов).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. К? 3).

3.    Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А. Ю. Поповой 12 ноября 2013 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21+51.23

ISBN 978—5—7508— 1312—4

С Роспотребнадзор, 2014 С Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014

МУК 4.1.3133—13

УТВЕРЖДАЮ Врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

А. Ю. Попова

12 ноября 2013 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств циазофамида в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, плодах томатов и томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3133—13

Свидетельство о метрологической аттестации №01.5.04.133/01. 00043/2013.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации циазофамида в воде в диапазоне концентраций 0,001—0,01 мг/дм³, в почве, клубнях картофеля, томатах и томатном соке - в диапазоне концентраций 0,01—0,1 мг/кг, в ботве картофеля - в диапазоне концентраций 0,05—0,5 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: циазофамид.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-хлор-2-циано-Н,Н-диметил-5-р-толилимидазол-1 -сульфонамид.

3

Эмпирическая формула: C13HUCIN4O2S.

Молекулярная масса: 324,78.

Химически чистое вещество представляет собой кристаллический порошок белого цвета без запаха.

Температура плавления: 153 °С.

Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода K._ovv IgP =3,2 (20 °С).

Растворимость в воде (мг/дм³,20 °С): 0,114.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, 20 °С): ацетон

-    41,9; толуол - 5,3; гексан - 0,03; октанол - 0,25.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная

-    ЛД50 > 5 000 мг/кг массы тела. Острая токсичность: рыбы СК50 = = 0,56 мг/л, дафнии ЭК» = 0,19 мг/л.

Область применения. Системный фунгицид, класса цианоимидазо-ла, применяется против фитофтороза и других заболеваний, вызываемых грибами рода Оомицетов на картофеле, томатах, огурцах; обладает высокой эффективностью против фениламидустойчивых грибов.

В России для циазофамида гигиенические нормативы не установлены.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р- 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

МУК 4.1.3133—13 Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Показатель повторяемости (относительное срсднсквадра-тическое отклонение повторяемости), ап % Показатель внутрилабо- раторной прецизион ности, ОюцУо Показатель воспроизводимости, Or, % Показатель точности* (границы относительной погрешности), ± 5, % Вода 0,001-Ю,01 8 9 11 22 Почва 0,01-0,1 9 11 12 24 Ботва картофеля 0,05—0,5 9 11 12 24 Клубни картофеля 0,01—0,1 7 9 12 23 Томаты 0,01—0,1 9 11 12 24 Томатный сок 0,01—0,1 7 9 12 23 * Соответствует расширенной неопределенности С/*** при коэффициенте охвата к = 2

Таблица 2

Полнота извлечения циазофамида, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п = 20, Р= 0,95

Анализируемый объект Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3) Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Полнота извлечения, % Стандартное отклонение, S Доверительный интервал среднего результата, ± % Вода 0,001 0,001—0,01 88,8 3,17 1,59 Почва 0,01 0,01—0,1 92,4 4,18 2,09 Ботва картофеля 0,05 0,05—0,5 82,6 4,30 2,15 Клубни картофеля 0,01 0,01—0,1 82,0 2,39 1,19 Томаты 0,01 0,01—0,1 89,4 4,09 2,05 Томатный сок 0,01 0,01—0,1 87,4 1,77 0,89

2. Метод измерений

Методика основана на определении циазофамида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора (УФ) после его извлечения из образцов

ацетонитрилом и последующей очистке на патроне для твердофазной экстракции (ТФЭ).

Идентификация циазофамида проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с быстросканирую-щим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки

Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допустимой погрешности 0,2 мг

Весы технические с пределом взвешивания до 400 г и допустимой погрешностью 0,1 г Колбы мерные на 10,100 см³ Микродозаторы одноканальные переменного объема от 200 до 1 000 мм³ и от 1 до 5 см³ Цилиндры мерные на 50 и 100 см³

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил, хч

Вода для лабораторного анализа (бидистилли-рованная, деионизованная) н-Гексан, хч

Кислота ортофосфорная, хч

Магний серно-кислый семиводный, хч

Натрий серно-кислый безводный, хч

Натрий хлористый, чда

Смесь № 1: гексан-этилацетат в соотношении

9 : 1 по объему

Смесь № 2: гексан-этилацетат в соотношении 2 :1 по объему

6

МУК 4.1.3133—13

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50 : 50 Циазофамид, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 98,2 %

Этилацетат, хч    ГОСТ 1138-84

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

5.5. Вспомогательные устройства и материалы Аналитическая колонка для неионогенных среднеполярных соединений (100 х 2,1) мм,

1,7 мкм

Аппарат для встряхивания проб    ТУ 64-1-1081—73

Воронки лабораторные конусные    ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25,100 см³    ГОСТ 9737-93

Патроны для ТФЭ с гидрофильным слабокислотным сорбентом с постоянной активностью Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см³ Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум 10 мбар Стаканы химические вместимостью 150 см³ ГОСТ 25336-82 Фильтры бумажные быстрой фильтрации ТУ 6.091678—86 Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 000 об./мин

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не долж-

но превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308—07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7.1. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1—ОД см³/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Кондиционирование патрона для твердофазной экстракции

Патроны для ТФЭ с гидрофильным слабокислотным сорбентом с постоянной активностью промывают 2 см³ смеси № 2, затем 3 см³ смеси № 1.

7.3. Приготовление растворов

7.3.1.    0,005 Мраствор ортофосфорной кислоты: (0,5 ± 0,01) г 98 %-й ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм³, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.

7.3.2.    Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 50 : 50 по объёму, используя мерные цилиндры.

МУК 4.1.3133—13

7.4. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.4.1.    Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см³: точную навеску циазофамида (50 ± 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см , растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.4.2.    Приготовление градуировочных растворов

Градуировочные растворы с концентрациями циазофамида 0,05,

0,1, ОД, 0,5 и 1,0мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50 : 50).

7.4.2.1.    Раствор Ns 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,2 см³ основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.

7.4.2.2.    Раствор Ns 2 с концентрацией 0,5 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 5,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.3.    Раствор Ns 3 с концентрацией 0,2мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.4.    Раствор Ns4 с концентрацией 0,1 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.5.    Раствор Ns 5 с концентрацией 0,05 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,5 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы — в течение 2 дней.

При изучении полноты определения циазофамида в воде, почве, ботве и клубнях картофеля, томатах и томатном соке используют ацетонитрильные растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

7.5. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика -концентрация циазофамида в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм³ градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации циазофамида в градуировочном растворе.

9