Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской Федерации_
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке черной смородины методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.3132—13
Издание официальное
Москва • 2014
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке черной смородины методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указания МУК 4.1.3132—13
ББК51.23
060
060 Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке черной смородины методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—
М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014.—15 с.
ISBN 978—5—7508—1310—0
1. Разработаны сотрудниками ПТУ «Всероссийский НИИ защиты растений Росссльхозакадемии» (В. И. Долженко, И. А. Цибульская,
А. О. Берестецкий, Е. В. Полуэктова); ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава России (М. С. Орлов).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. 3).
3. Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А. Ю. Поповой 12 ноября 2013 г.
ББК 51.23
ISBN 978—5—7508—1310—0
<0 Роспотребнадзор, 2014 О Федеральный центр гигиены и
эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014
МУК 4.1.3132—13
УТВЕРЖДАЮ Врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации
А. 10. Попова
12 ноября 2013 г.
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке черной смородины методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указании МУК 4.1.3132—13
Свидетельство о метрологической аттестации №01.5.04.134/01. 00043/2013.
Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации дифлубензурона в ягодах и соке черной смородины в диапазоне концентраций 0,001—0,01 мг/кг.
Методические указания носят рекомендательный характер.
11азвание действующего вещества по ИСО: дифлубензурон.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 1-(4-хлорфенил)-3-(2,6-диф горбензоил)мочевина.
Ы-{[(4-х;юрфенил)амино]карбонил}-2,6-дифторбензамид (С.А.).
Структурная формула:
CI
Эмпирическая формула: C14H9CIF2N2O2.
Молекулярная масса: 310,7.
Бесцветное кристаллическое вещество (технический - кристаллы от белых до желтых).
3
Температура плавления: 228 °С (техн.: 210—230 °С).
Давление паров при 25 °С: 1,2 х КГ1 мПа.
Коэффициент распределения н-октанол/вода: К** log Р = 3,89.
Растворимость (г/л) при 20 °С: н-гексан - 0,063, толуол - 0,29, ди-хлорметан - 1,8, метанол - 1,1, вода - 0,08 мг/л (при pH 7 и 25 °С).
Вещество стабильно в кислых средах (20 °С, pH 5—7, DTso> 150 дней), разлагается в щелочных растворах (при pH 9 DTjo 42 дня).
Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность (LD50) для мышей и крыс - более 4 640 мг/кг; острая дермальная токсичность (LDso) для кроликов - более 2 000 мг/кг, для крыс -более 10 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс -более 2,88 мг/л. Токсичен для пчел. СК50 для рыб 130—150 мг/л при экспозиции 96 ч.
Мутагенный и онкогенный эффекты при использовании препарата не наблюдались.
Гигиенические нормативы для дифлубснзурона в России в ягодах и соке черной смородины не установлены.
Область применения: Несистемный регулятор роста насекомых с контактным и кишечным действием. Используется для уничтожения широкого диапазона насекомых-врсдителей, питающихся листьями лесных и плодовых деревьев, а также плодами. Эффективен против яблонной плодожорки, листоверток и др.
1. Погрешность измерений
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р- 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1. для соответствующих диапазонов концентраций.
Таблица 1
Метрологические параметры |
Объект
анализа |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) |
Показатель повторяемости (относительное средне-квадратическос отклонение повторяемости), ог, % |
Показатель
внутрила-
бораторной
прецизион
ности,
<**,.% |
Показа
тель
воспро
изводи
мости,
<Jr.% |
Показатель точности* (границы относительной погрешности), ± 5, % |
Ягоды |
0,001—0,01 |
9 |
11 |
12 |
24 |
Сок |
0,001—0,01 |
9 |
11 |
12 |
24 |
* Соответствует расширенной неопределенности при коэффициенте охвата к = 2 |
|
МУК 4.1.3132—13
Полнота извлечения дифлубензурона, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п в 20, Р = 0,95
Таблица 2 |
Анализи
руемый
объект |
Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3) |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) |
Полнота
извлече
ния,
% |
Стандартное отклонение,
S |
Доверительный интервал среднего результата, ± % |
Ягоды |
0,001 |
0,001—0,01 |
89,9 |
4,6 |
2,0 |
Сок |
0,001 |
0,001—0,01 |
92,0 |
4,2 |
1,8 |
|
2. Метод измерении
Методика основана на определении дифлубензурона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после его извлечения из образцов ацетонитрилом и очистке экстрактов на патронах для твердофазной экстракции (ТФЭ).
Идентификация дифлубензурона проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы
3.1. Средства измерении Жидкостный хроматограф с быстроскани-рующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допустимой погрешности 0,2 мг
Весы технические с пределом взвешивания до 400 г и допустимой погрешностью 0,1 г Колбы мерные на 10, 100 и 1 000 см3 Микродозаторы одноканальные переменного объема от 200 до 1 000 мм3 и от 1 до 5 см3 Цилиндры мерные на 50 и 100 см3
Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
5
3.2. Реактивы
Ацетонитрил, хч
Вода бидистиллированная, деионизированная Дифлубензурон, аналитический стандарт 99,9 %
Диэтиловый эфир, ч н-Гексан, хч
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил-вода (60 : 40, по объему).
Элюент № 1: смесь вода-ацетонитрил (60 : 40, по объему)
Элюент № 2: смесь гексан-диэтиловый эфир (80 : 20, по объему)
Элюент № 3: смесь гексан-диэтиловый эфир (55 :45, по объему)
Элюент № 4: смесь вода--ацетонитрил (70 : 30, по объему)
Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, (100 х 2,1) мм, 1,7 мкм Аппарат для встряхивания проб Вакуумный водоструйный насос Воронки химические конусные Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 50 и 100 см3
Колбы плоскодонные конические вместимостью 100 см3
Патроны для ТФЭ с привитыми гексадециль-ными группами, 0,4 г Патроны для ТФЭ на основе силикагеля с постоянной активностью, 0,4 г Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см3 Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар
МУК 4.1.3132—13
Ультразвуковая ванна с рабочей частотой 35 кГц Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 ООО об./мин.
Примечание: Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленные ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда -по ГОСТ 12.0.004-90.
5. Требования к квалификация операторов
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.
6. Условия измерений
При выполнении измерений выполняют следующие условия:
• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7
7. Подготовка к определению
7.1. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1—0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.
7.2. Приготовление растворов
7.2.1. Для приготовления элюента As 1 смешивают в мерной колбе на 100 см3 40 см3 ацетонитрила и 60 см3 бидистиллированной воды, используя мерные цилиндры.
7.2.2. Для приготовления элюента At 2 смешивают в мерной колбе на 100 см3 80 см3 гексана и 20 см3диэтилового эфира, используя мерные цилиндры.
7.2.3. Для приготовления элюента As 3 смешивают в мерной колбе на 100 см3 55 см3 гексана и 45 см3диэтилового эфира, используя мерные цилиндры.
7.2.4. Для приготовления элюента At 4 смешивают в мерной колбе на 100 см3 30 см3 ацетонитрила и 70 см3 бидистиллированной воды, используя мерные цилиндры.
7.2.5. Для приготовления подвижной фазы в мерную колбу на 1 дм3 вносят 600 см3 ацетонитрила и доводят водой объем раствора до метки, встряхивая в течение 2 мин.
7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов
7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску дифлубензурона (50 ± 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
Градуировочные растворы с концентрациями дифлубензурона 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил-вода в соотношении 60:40).
7.3.2. Раствор As 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят ОД см3 основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.
7.3.3. Раствор №2 с концентрацией 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.4. Раствор As 3 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора Jfe 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
МУК 4.1.3132—13
7.3.5. Раствор Ns 4 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
При изучении полноты извлечения дифлубензурона в ягодах и соке смородины используют ацетонитрильные растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.
7.4. Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация дифлубензурона в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе.
Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (А) в уравнении линейной регрессии:
С = KSy где
S - площадь пика градуировочного раствора.
Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:
IC-CJ
L—■■ 100 гае
С - аттестованное значение массовой концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе;
Ск - результат контрольного измерения массовой концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе;
ХКомтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. (Лим*.к 10 % при Р = 0,95).
9
1