Федеральная сдужба но напору в сфере защиты нрав потребителей н бдагонодучии человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флудиоксонила в репке лука, чесноке и зеленой массе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3074—13

ББК 51.23 060

060 Oiipc tc.iciiiic остаточных количеств флудиоксонила в репке лука, чесноке и зеленой массе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2013.—16 с.

1.    Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (В. Н. Ракитский. Т. В. Юдина.

И. Е. Федорова. В. II. Волкова. В. М. Волков).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. № 1).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 19 июля 2013 г.

4.    Введены впервые.

ББК S1.23

Редакюр Л. С. Кучурова Технический редактор Е. В. Ломанова

Подписано в печать 19.12.13 Форма! 60x88 16    Неч.    л. 1,0

Тираж 200 экз.    Заказ    90

Федеральная сл>жба по надзору в сфере занппы прав по|реби1слей и блаюполучия человека 127994. Москва. Вадковский пер., д. 18. стр. 5.7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105. Москва. Варшавское ш.. 19а Отделение реализации, тел. факс 8(495)952-50-89

< Роспотребнадзор, 2013 <' Федеральный центр i ш пены н эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013

МУК 4.1.3074—13

помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 см³ смеси гсксан-этилацстат в объемном соотношении 8 : 2. скорость прохождения растворителя 1—2 капли в секунду. Колонка готова к работе.

7.8. Проверка хроматографического поведения (/иудиоксонила на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0.5 см³ раствора № 1 флудиоксонила с концентрацией 10 мкг/см³. упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 3 ем³ смеси гексан-этилацетат (8 : 2. по объему), помещая на ультразвуковую баню на 40—60 с. и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают дважды этой же смесью растворителей порциями по 3 см³, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1—2 капли в секунд) . Промывают колонку 40 см³ смеси гсксан-этилацстат в объемном соотношении 8 : 2. элюат отбрасывают.

Затем колонку промывают 60 см³ смеси гексан-этилацетат (8 : 2. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунд)'. Фракционно (по 10 см³) отбирают элюат. упаривают, остатки растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ. анализируют содержание флудиоксонила по п. 9.4.

Фракции, содержащие флудиоксонил. объединяют и вновь анализируют.

Примечание. Проверку хроматографического поведения флудиоксонила следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой пар ши сорбентов и растворителей.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными: ГОСТ 1723-86 «Лук репчатый свежий заготовляемый и поставляемый. Технические условия». ГОСТ Р 51783-01 «Лук репчатый свежий. реализуемый в розничной торговой сети. Технические условия». ГОСТ 7977-87 «Чеснок свежий заготовляемый и поставляемый. Технические условия». ГОСТ 27569-87 «Чеснок свежий, реализуемый. Технические условия». «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микро количеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051—79).

Отобранные пробы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике нс более 5 дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Перед анализом образцы измельчают.

11

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция

Измельченный образец массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250—300 см³, вносят 100 см³ смеси ацетонитрил-вода (8 : 2. по объему) и помещают на встряхнватсль на 1 ч.

Пробе дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной бумажный фильтр средней плотности. Осадок на фильтре промывают 30 см³ смеси ацетонитрил-вода (8 : 2. по объему). Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр, перемешивают, измеряют объем раствора. Vi его часть (эквивалентную 10 г образца) переносят в делительную воронку на 100— 250 см³ и очищают в системе несмсшнвающи.хся растворителей по п. 9.2. затем на колонке с силикагелем по п. 9.3.

9.2. Очистка жстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей К аликвоте экстракта пробы (Vi часть), находящейся в делительной воронке, добавляют 20 см³ гексана, интенсивно встряхивают 1 мин. Верхний гексановый слой отбрасывают. Нижнюю ацетонитрильную фазу переносят в колбу для упаривания на 250 см³ и упаривают до водного остатка (5—10 см³) при температу ре 35—10 °С.

Водный остаток в колбе переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 70 см³ дистиллированной воды. 20 см³ насыщенного хлористого натрия и 20 см³ смеси гсксан-трст-бутилмстиловый эфир (4 : 1. по объему), предварительно обмыв ими колбу, в которой находилась проба, интенсивно встряхивают в течение 1 мин. после полного разделения фаз верхний слой собирают, нижний водный слой возвращают в воронку и экстракцию повторяют новой порцией смеси гсксан-метил-третбутиловый эфир объемом 20 см³. Нижний водный слой отбрасывают.

Объединенный экстракт фильтруют через слой (около 2 см) безводного сульфата натрия, помещенного на бумажном фильтре в химическую воронку, в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 150 см³, упаривают досуха. Остаток растворяют в 3 см³ смеси гексан-этилацстст (8 : 2. по объему) и очищают на колонке с силикагелем по п. 9.3.

9.3. Очистка жстракта па колонке с силикагелем Растворенный в 3 ем³ смеси гексан-этилацетат (8 : 2. по объему) остаток наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Колбу обмывают смесью гексан-этилацетат дважды (8 : 2. по объему), порциями по 3 см³, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя

МУК 4.1.3074—13

через колонку - 1—2 капли в секунду. Промывают колонку 40 см³ смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 8 : 2. элюат отбрасывают.

Флудиоксонил элюируют с колонки 50 см³ смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 8 : 2 со скоростью 1—2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 см³, раствор упаривают досуха при температу ре нс выше 35 °С. остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы и анализируют содержание флудиоксонила по п. 9.4.

9.-4. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым и/или флуоресцентным детекторами с переменной длиной волны, снабженный дегазатором. автоматическим пробоотборником и термостатом колонки.

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4.6 мм. заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18. зернением 5 мкм.

Температу ра колонки: 25 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (50 : 50. по объему).

Скорость потока элюента: 0.8 см³/мин.

Объем вводимой пробы: 50 мм³.

Линейный диапазон детектирования 2.5—25 нг.

У. Ультрафиолетовый детектор с переменной длиной волны

Рабочая длина волн: 268 нм.

2. Флуоресцентный детектор с переменной длиной волны

Длина волны: возбуждение 265 нм;

эмиссия 312 нм.

Проб) вводят в инжектор хроматографа нс менее двух раз. Устанавливают площадь пика вещества, находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию флудиоксонила в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0.5 мкг/см³. разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2. нс более чем в 50 раз.

Примечание. Идентификация с применением 2 альтернативных детекторов повышает надежность определения.

10. Обработка результатов анализа

Содержание флудиоксонила в пробе (А’, мг/кг) рассчитывают по формуле:

_Л N44K О =-.    где

т

13

С - концентрация флудиокеонила. найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

V-объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

т - масса анализируемого образца, г;

К - коэффициент, учитывающий объем аликвоты экстракта, используемый для анализа (равен 2).

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми нс превышает предел повторяемости:

2Щ- <3₂|ЧОО

«5,+ <5_г)

Л'/, А% - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (табл. 1). при этом г = 2,8сг_г. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( D ± Д) мг/кг при вероятности I* = 0.95. где

D- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

л ^д0 А =-,    где

100

3 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1). %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание флудиокеонила в пробе менее 0,01 мг/кг»*

* 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

МУК 4.1.3074—13

13.1.    Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в

начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения нс менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание флудноксонила в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0.05 до 0.5 кг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

. IО- yvlqoo

А= i-^-J В. где

N

X- концентрация флудноксонила в пробе при контрольном измерении. мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора флудиоксо-нила. взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики. мкг/см³;

В - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики. % (равен 10 % при Р = 0.95).

Если величина расхождения (А) превышает 10%. делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов флу-диоксонила. предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.5.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом «добавок».

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

W.i ^D,.s ⁺ °,.зг^гдс

±D _td (±D,_5y) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг. при этом:

Д_т=±(0.84- Д). где

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

15

МУК 4.1.3074—13

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|>ерс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

19 июля 2013 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флудиоксоннла в репке лука, чесноке и зеленой массе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3074—13

Свидетельство об аттестации от 24.08.2012 № 0129.24.08.12.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций флудиоксоннла в репке лука, чесноке и зеленой массе в диапазоне 0.01—0.1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: флудиоксоннл.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 442.2-Дифтор-1.3-бензодиоксол-4-ил)пиррол-3-карбонитрил.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: Ci2H₆F_:N:(X Молекулярная масса: 248.2.

Кристаллическое вещество желтоватого цвета без запаха. Температура плавления: 199,8 °С. Давление паров при 25 °С: 3,9 х 10 ’ мПа. Растворимость в органических растворителях (г/дм¹ при 25 °С): ацетон -

МУК 4.1.3074—13

190; этанол - 44. толуол - 2,7; н-октанол - 20; гексан - 0,0078. Растворимость в воде: 1.8 мг/дм³ (25 °С). Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow log Р = 4.12 (25 °С). Гидролитически стабилен до 70 °С в диапазоне pH 5—9.

Кроткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс и мышей

>    5 000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD*>) для крыс

>    2 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LKso) для крыс

>    2.6 мг/м³ (4 ч).

Область применения препарата

Флудиоксонил - контактный фунгицид широкого спектра действия с продолжительной активностью.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и её составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 нс превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анали зируе мый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	11оказа толь точности (граница относительной погрешности), ± Sy % Р - 0,95	1 Указатель повторяемости (средне-квадратич-ное отклонение повторяемости), СГп %	Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), г,%	Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатам измерений, полученных в разных лабораториях), /?, %
Лук (репка)	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	3,7	10	14
Чеснок (головка)	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	3,6	10	14
Зеленая масса	от 0,01 до 0,1 вкл.	50	3,5	10	14

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (п = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2 По. ню I а извлечении веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 предел обнару жения, мг/кг диапазон определяемых конце! ггра-ций, мг/кг полнота извлечения вещества, % стандартное отклонение, S, % доверитель! 1мй интервал среднею результата. ±,'% Лук (репка) 0,01 0,01—0,1 83,49 3,21 1,63 Чеснок 0,01 0,01—0,1 82,45 2,81 1,43 Зеленая масса 0,01 0,01—0,1 83,09 3,73 1,90

2. Метод измерении

Метод основан на определении флудиоксонила с использованием обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым и/или флуоресцентным детекторами после извлечения вещества из анализируемых образцов смесью ацетонитрил-вода (8 : 2. по объему), очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы н материалы

3.1. Средства измерений Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым и/или флуоресцентным детекторами с переменной длиной волны, снабженный дегазатором. автоматическим пробоотборником и термостатом колонки

Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 110г. предел допу стимой погрешности ± 0.2 мг Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ± 0,01 г Колбы мерные вместимостью 2-100-2. 2-500-2.

2-1000-2 Меры массы ²

МУК 4.1.3074—13

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2.0: 5.0: 10.0 см³    ГОСТ 29227-91

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 и 10 см³    ГОСТ 1770-74

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25. 50. 100. 250. 500 и 1 ООО см³ ГОСТ 1770-74

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы Флудиоксонил, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99.7 %

Ацетон, осч

Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода для лабораторного анализа (деионизованная. б ид ист ил иро ванная) н-Гсксан (гексан), для высокоэффективной жидкостной хроматографии Калий марганцово-кислый (перманганат калия), хч

Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч. прокаленный

Кальций хлористый (хлорид кальция), хч. насыщенный водный раствор Кислота серная концентрированная, хч Метилен хлористый (дихлормстан). хч Натрий серно-кислый (сульфат натрия) безводный, хч

Натрий углекислый (карбонат натрия), хч Натрий хлористый, хч. насыщенный водный раствор

Силикагель, для колоночной хроматографии (размер частиц 0,200—0.5(H) мм), нейтральный, активный

Фос(|юр (V) оксид (фосфорный ангидрид, псн-токсид фосфора)    ТУ 6-09-4173—85

Этиловый эфир уксусной кислоты

(этилацетат). хч    ГОСТ 22300-76

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей. ³

МУК 4.1.3074—13

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50—100 мм³

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерении необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76. требования по элсктробсзопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09. а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе нс должно превышать ПДК (ОБУВ), установленные ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда -по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение. освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на жидкостном хроматографе и подтвердившего соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности нс более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, раствора внесения, подвижной фазы дтя ВЭЖХ. кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик, приготовление смеси растворителей дзя очистки экстрактов на колонке, подготовка колонки с силикагелем, проверка хроматографического поведения флудиоксонила на ней.

МУК 4.1.3074—13

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1. Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.2. Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пснтоксидом фосфора (на 1 дм³ацетонитрила 20 г пснтоксида фосфора) нс менее 1 ч. после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.1.3. н-Гексан

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор. пока она нс перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод. перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.4. Хлористый метилен и этилоцетат

7.1.4.1.    Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5 %. Навеску (25 ± 0.1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в бидистиллнрованной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.4.2.    Очистка растворителей. Каждый растворитель промывают последовательно 5 %-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.2. Подготовка подвижной фиш для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 500 см³ ацетонитрила. вносят 500 см³ бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 0.8 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов

7.4.1. Исходный раствор флудиоксонила для градуировки (концентрация ЮОмкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают ⁴

МУК 4.1.3074—13

0.010 г флудиоксонила. растворяют в 50—70 см³ ацетонитрила доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике при температуре 4—6 °С в течение 3 месяцев.

Градуировочные растворы №2—5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2.    Раствор № 1 флудиоксонила Оля градуировки и внесения (концентрация 10мкг/см). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помешают 10.0 см³ исходного раствора флудиоксонила с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.4.1). доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике при 4—6 °С в течение 3 месяцев.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено» и контроле точности методом «добавок».

7.4.3.    Рабочие растворы №2—5 флудиоксонила для градуировки (концентрация 0,05—0,5мкг/см³).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 0,5; 1.0; 2.5 и 5 см³ раствора № 1 флудиоксонила с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.4.2). доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2. тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2—5 с концентрацией флудиоксонила 0.05; 0.1; 0.25 и 0.5 мкг/см³ соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при 4—6 °С в течение месяца.

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площадей пиков от концентрации флудиоксонила в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки № 2—5.

В инжектор хроматографа вводят 50 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют нс менее 3 параллельных измерений.

7.6. Приготовление смеси гексан-этилацетат дли очистки жстрактов на колонке с силикагелем

Смесь гексан этилацетат (объемное соотношение Н: 2). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 80 см³ гексана и 20 см³ эти-лацетата. перемешивают.

7.7. Подготовка колонки с силикагелем дли очистки жстрактов

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см. внутренним диаметром 10—12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 30 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, на который

1

2

3

4