Федеральная служба по напору в сфере Никиты прав потребителей и благополучии человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств крезоксим-метила в зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3055—13

ББК51.23

060

060 Определение остаточных количеств крсэоксим-мстила в зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2013— 14 с.

1.    Рачработаны сотрудниками ПГУ «Всероссийский НИИ чащиты растений» (В. И. Долженко. И. Л. Цибульская. Т. Д. Черменская. Л. С. Комарова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией но государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надчору в сфере чащиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надчору в сфере чащи ты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 5 июля 2013 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

€> Росно требна. пор, 2013 © Федеральный центр гигиены н

эпидемиологии Росно требнад тора, 2013

МУК 4.1.3055—13

ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950—79) «Зерновые. Отбор проб зерна». Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Отбор проб свеклы производится в соответствии с ГОСТ 1722-85 «Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая». Для длительного хранения аналитические пробы свеклы (ботва и корнеплоды) помещают в морозильную камеру с температу рой -18 °С и хранят в герметично закрытой полиэтиленовой таре.

9. Проведение определения

9.1. Определение крезоксим-метила в зеленой массе, соломе и зерне зерновых колосовых культур, ботве и корнеплодах сахарной свеклы

Навеску измельченной пробы (10 г - зерно, корнеплоды: 5 г - зеленая масса, солома, ботва) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см³ и добавляют 40 см⁵ ацетоннтрила. Пробирку плотно закрывают, встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 10 мин. центрифугируют при скорости 4 000 об./мин в течение 10 мин. фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу. К остатку добавляют 30 мл ацетонитрила и проводят повторную экстракцию. Объединенные экстракты упаривают досуха на ротационном испарителе при температу ре нс выше 40 °С. Остаток переносят в делительную воронку тремя порциями ацетонитрила по 10 см³, насыщенного гексаном, и дважды промывают гексаном по 10 см³. Ацетонитрильный слой собирают в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном испарителе при температу ре нс выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

9.2. Очистка на двух последовательных патронах для твердофазной жстракцни

Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов (п. 9.1). количественно переносят двумя порциями гексана по 1 см³ на подготовленные патроны (п. 7.5). Промывают патроны 10 см³ гексана. Крсзок-сим-мстил элюируют 12 см³ смеси гсксан-этилацстат (9 : 1 по объему). Элюат количественно переносят в круглодонную колбу емкостью 25 см³ и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре нс выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ подвижной фазы (смесь ацетонитрила и 0.005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50 : 50) и анализируют на содержание крезоксим-метила по п. 9.3.

11

9.3. Условия хроматографирования Ультраэффсктивный жидкостный хроматограф с быстросканирую-щим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка (100x2,1) мм, 1,7 мкм, заполненная сорбентом с функциональными группами С18. связанными этиленгибридными мостиками.

Температу ра колонки (30 ± 1) °С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50 : 50. Скорость потока элюента 0.2 см³/мин. Рабочая длина волны ультрафиолетового детектора 230 нм. Объем вводимой пробы 10 мм³.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание крезоксим-метила в пробе (X мг/кг) вычисляют по формуле:

_X_S_XKV 100

р 'г

S_x - площадь пика крезоксим-метила на хроматограмме испытуемого образца, мм² (AU):

К - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости:

К - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа. см³:

Р - навеска анализируемого образца, г:

/- полнота извлечения крезоксим-метила. приведенная в табл. 2. %.

Содержание остаточных количеств крезоксим-метила в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор крезоксим-метила с концентрацией 1,0мкг/см\ разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает придел повторяемости:

2Щ- <5₂|ЧОО

«5, + 0₂)

МУК 4.1.3055—13

X_tlX₂ - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (г = 2.8а_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( Г) ± Д) мг/кг при вероятности Р = 0.95. где

О - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг:

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

бд

100

6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещество в пробе менее нижней границы определения» (например: менее 0.01 мг/кг*. где * - 0.01 мг/кг - предел обнаружения крезоксим-метила в зерне).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрнлабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

Я* = ^D,₃ + ^D,,3r где

,й_У) ~ характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг: при этом:

Д_л = ± 0.84 Д. где

13

МУК 4.1.3055—13

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|)срс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

5 июля 2013 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств крезоксим-метила в зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3055—13

Свидетельство о метрологической аттестации от 18.01.2013 № 01.5.04.121/01.0004343/2013.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэф(|>сктивной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации крезоксим-метила в зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур, ботве и корнеплодах сахарной свеклы в диапазоне концентраций 0.01—0.1 мг/дм¹.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: крезоксим-метил.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (Е)-метил-2-мето-ксинмнно-2-{2-(о-толилокси-метнл)феннл}ацетат.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: CigH^O*

Молекулярная масса: 313.4.

Химически чистое вещество представляет собой белое кристаллическое вещество со слабым запахом.

Температу ра плавления: 97.2—101.7 °С.

Давление пара при 20 °С: 2.3 * 10 ³ мПа.

Растворимость (в г/дм³ при 20 °С): вода - 0.002. гептан - 1.7. толуол - 111. дихлорметан - 939. метанол - 14.9. ацетон - 217. этилацетат - 123.

Стабильность к гидролизу при 20 °С: DT50 = 34 дня (pH 7), 7 ч (pH 9). В биологически активных почвах в аэробных условиях крезок-сим-метил быстро разрушается: DT90 = менее 3 дней.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность LD50 для крыс более 5 000 мг/кг. острая дермальная токсичность LD*» для крыс превышает 2 000 мг/кг. Не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика, нс обладает мутагенными и сенсибилизирующими свойствами. Нс токсичен для пчел, дождевых червей, полезных насекомых и птиц.

Область применения препарата

Синтетический фунгицид из класса строб илу ри нов. являющихся продуцентами гриба Slrobilurus tenacellus. Вещество эффективно против широкого круга грибных патогенов хлебных злаков, овощных, кормовых. технических и плодовых культур. Обладает защитным, лечебным и искореняющим действием.

В России для крсзоксим-метила гигиенические нормативы нс установлены.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и се составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности /^{> =} 0.95 нс превышает значений, приведенных в табл. 1. для соответствующих диапазонов концентраций.

4

МУК 4.1.3055—13 Таблица 1

Метра пн ическис параметры

Объект анализа Диапазон оиреде.ля-емых конце! пра-ций, мг/кг 1 Указатель повторяемости (относ тельное среднек ва.лраги-ческое отклонение повторяемости), аг, % Показатель внутри.лабораторной прецизионности, ол„ % 11оказа-тель воспроизводимости. Or-,% 1 Указатель точности* (границы о п юс т ельной по- ЦХ.Ч11НОСП1). ±3, % Зеленая масса 0,01—0,1 6 8 10 20 Солома 0,01—0,1 6 8 10 20 Зерно 0,01—0,1 7 8 11 23 Ботва 0,01—0,1 7 8 11 23 Корнеплода 0,01—0,1 7 9 12 25 * Соответствуег расширенной неопределенности 1'^ при кодффшшеше охвата А-=2

Таблица 2

Полноia извлечении крезокенм-метила, стандартноеотклонение, доверительный интервал среднего результата для п - 20, /*= 0,95

Анализируемый обл>ект, мг/кг Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых кон-цешраний, мг/кг Сре;щее значение определе ния, % Стандартное отклонение. S, % Доверительный интервал среднего результата. ±% Зеленая масса 0,01 0,01—0,1 89,5 2,65 1,32 Солома 0,01 0,01—0,1 89,8 2,36 1,18 Зерно 0,01 0,01—0,1 91,0 3,37 1,68 Ботва 0,01 0,01—0,1 92 Д 3,31 1,65 Корнеплоды 0,01 0,01—0,1 88,7 7,46 3,73

2. Метод измерений

Методика основана на определении крезоксим-мстила методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его извлечения из образцов ацетонитрилом. очистки экстракта промывкой гексаном и последующей очистки на патронах для твердофазной экстракции.

Идентификация крсзоксим-мстила проводится по времени удерживания. количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства илмерепии Жидкостный хроматограф с быстросканнру-ющим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допустимой погрешности 0.2 мг

Весы технические с пределом взвешивания до 400 г и допустимой погрешностью 0.1 г Колбы мерные на 10. 100 и 250 см³ Микродозаторы одноканальные переменного объема от 200 до 1 000 мм³ и от 1 до 5 см³ Цилиндры мерные на 50 и 100 см³

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил, хч

Вода для лабораторного анализа (бидистилли-рованная. деионизованная) н-Гсксан. хч

Кислота орто(|юс(1юрная (Н₃Р0₄₎, хч Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 0.005 М H^PO j в соотношении 50 : 50 Смесь н-гсксан-этилацстат в соотношении 9 : 1 по объему

Крсзокси.м-мстил. аналитический стандарт.

98.3 %

Этила цстат. хч

Примечание. Допускается иснользовашю реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

МУК 4.1.3055—13

3.3. Вспомогите.iьныеустройства и материи, im

Аналитическая колонка с функциональными группами С18. свя занными этиленгибридными мостиками (100 х 2.1) мм. 1.7 мкм Аппарат для встряхивания проб Воронки делительные, вместимостью 250 см³ Воронки химические конусные Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 и 100 см³

Патроны для твердофазной экстракции, заполненные гидрофильным слабо кислотным сорбентом на основе силикагеля. 0.4 г Пробирки полипропиленые центрифужные с крышками объемом 50 см³ Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар

Фильтры бумажные средней плотности Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 000 об./мин

Примечание. Допускается применение оборудования аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76. требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009. а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе нс должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308—07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

7

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методик) и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности нс более 80 %:

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению 7. /. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0.1—0.2 см³/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Приготовление растворов

7.2.1.    0,005X/ раствор ортофосфорной кислоты: в мерную колбу объемом 1 дм³ помещают (0.5 ±0.01) г 98 %-й ортофосфорной кислоты, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.

7.2.2.    Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0.005 М раствором ортофос(|юрной кислоты в соотношении 50 : 50 по объему, используя мерные цилиндры.

7.2.3.    Для приготовления ацетонитрила, насыщенного гексаном, в делительной воронке смешивают ацетонитрил и гексан в соотношении 5:1. встряхивают в течение 2 мин. после разделения слоев нижний ацетонитрильный слой готов к использованию.

7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см³: точную навеску крезоксим-метила (50 ± 0.5) мг помешают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

Градуировочные растворы с концентрациями крезоксим-метила 0.05: 0.1: 0.2: 0.5: 1,0 мкг/см³ готовят методом последовательного раз-

МУК 4.1.3055—13

давления по объему, используя раствор подвижной фаты (смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50 : 50).

7.3.2.    Раствор № I с концентрацией 1,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0.2 см³ основного раствора и доводят до метки подвижной фатой.

7.3.3.    Раствор ЛЬ 2 с концентрацией 0,5 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 5,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фатой.

7.3.4.    Раствор ЛЬ 3 с концентрацией 0,2 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фатой.

7.3.5.    Раствор ЛЬ 4 с концентрацией 0,1 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фатой.

7.3.6.    Раствор ЛЬ 5 с концентрацией 0,05мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0.5 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фатой.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты определения крезоксим-метила в зеленой массе, соломе и терне терновых колосовых культур, ботве и корнеплодах сахарной свеклы используют ацетонитрильные растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

7.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация крстоксим-мстила в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм³ градуировочных растворов (нс менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, нс менее 4 точек по диапазон) измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации крстоксим-мстила в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

С = KS. где

S- площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

9

МУК 4.1.3055—13

Градуировочную характеристик) необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

IС-С Л

—~• НЮ    где

С - аттестованное значение массовой концентрации крсзоксим-метила в градуировочном растворе:

С_к - результат контрольного измерения массовой концентрации крезоксим-метила в градуировочном растворе:

А_Контр. - норматив контроля градуировочного коэффициента. % (к,онтр= 10 % при Р = 0.95).

7.5. Подготовка патронов для очистки жстрактов

Два последовательно соединенных патрона для твердофазной экстракции. заполненные гидрофильным слабо кислотным сорбентом на основе силикагеля промывают последовательно 6 см³ смесью гсксан-этилацетат (9 : 1, по объему) и 4 см³ гексана, после чего они готовы к работе.

7.6. Проверка хроматографического поведения крезоксим-метила па патронах

В круглодонную колбу емкостью 10 см³ отбирают 1 см³ стандартного раствора крезоксим-метила с концентрацией I мкг/см³. Отдувают растворитель током воздуха. Остаток растворяют в 1 см³ гексана и переносят на подготовленные патроны. Колбу обмывают 1 см³ гексана и смыв тоже вносят на патроны. Промывают патроны К) см³ гексана, элюат отбрасывают. Затем элюируют крсзоксим-метил смесью гсксан-этилацетат (9 : 1 по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду. Отбирают фракции по 2 см³, упаривают досуха, растворяют в 1 см³ подвижной фазы (ацетонитрил-0.005 М Н^РСЬ. 50 : 50) и анализируют по п. 9.3.

Фракции, содержащие крезоксим-метил объединяют.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения мнкроколи-чсств пестицидов» (от 21.08.79 №2051—79). а также в соответствии с

10

1