Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пенфлуфена в воде, почве и клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3027-12

Издание официальное

Москва

2013

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пенфлуфена в воде, почве и клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3027-12

МУК 4.1.3027-12

Насос водоструйный вакуумный Г ОСТ 25336—82

Патроны для твердофазной экстракции (картриджи) С18 Sep Рак Classic (360 mg), WAT051910 (Waters, США)

Сито с диаметром отверстий 1 мм

Стаканы химические вместимостью ГОСТ 25336-82 400 см’

Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30

Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария

Установка для перегонки растворителей

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Eclipse XDB С18, зернение 5 мк

Термометр с диапазоном измерений от 0 до 55 *С и ценой деления 0,1 *С

Центрифуга роторная, скорость вращения до 3 500 об./мин, с центрифужными стаканами объемом 100 см'

Барометр-анероид М-67    ТУ 2504-1797—75

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50—100 мм'

Шприц медицинский иньекцион-    ГОСТ 24861-91

ный однократного применения вмести-    (ИСО 7886—84)

мостью 10 см³

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений и устройств иных производителей, технические характеристики которых не уступают указанным, а также материалов, обеспечивающих нормативы точности при проведении измерений.

МУК 4.1.3027—12

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03, 2.2.5.2308—07 и 1.2.2701 — 10. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) *С и относительной влажности не более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, раствора внесения, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, приготовление растворов, подготовка колонок с оксидом алюминия и флориси-

11

МУК 4.1.3027-12

лом, концентрирующих патронов, проверка хроматографического поведения пенфлуфена на колонке с оксидом алюминия, патроне С18 Sep Рак Classic.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1. Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетона 10 г перманганата калия и 2 г карбоната калия) или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок нс менее 30.

7.1.2. Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пенток-сидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксила фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм' ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.1.3. Гексан

7.1.3.1.    Приготовление раствора гидроксида натрия

с массовой долей 2,0 %

В мерную колбу вместимостью 250 см', содержащую 100— 150 см’ бидистиллированной воды, помешают (5,0 ± 0,1) г натрия гидроксида, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.1.3.2. Очистка гексана

Гексан встряхивают в делительной воронке с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения визуально наблюдаемого окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2 %-м раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

7. /. 4. Хлористый метилен

7.1.4.1.    Приготовление раствора натрия углекислого

с массовой долей 5 %

Навеску (25 ± 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.4.2. Очистка растворителя

Растворитель промывают последовательно 5 %-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого

МУК 4.1.3027-12

кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне г. числом теоретических тарелок не менее 30.

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

7.2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с объемной долей 0,2% (0,2 %-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 1 ООО см³ помещают 250—300 см³ бидистиллированной воды, вносят 2 см³ ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

7.2.2. Приготовление подвижной фазы

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помешают 600 см³ ацетонитрила, вносят 400 см³ 0,2%-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2.) при скорости подачи растворителя 0,8 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.4.1. Исходный раствор пенфлуфена для градуировки (концентрация 100 мк г/см¹)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,0! г пенфлуфена, растворяют в 50—60 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 “С в течение 3 месяцев.

Растворы N9 1 —5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.4.2. Раствор N9 1 пенфлуфена для градуировки и внесения (концентрация 10мкг/см^г)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора пенфлуфена с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре — 18 °С в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом

13

МУК 4.1.3027-12

«внесено—найдено», а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.4.3. Рабочие растворы № 2—5 пенфлуфена для градуировки (концентрация О, /—1,0 мкг/см³)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см¹ помещают по 1,0; 2,0;

5.0    и 10,0 см' градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см¹ (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2—5 с концентрацией пенфлуфена 0,1; 0,2; 0,5 и

1.0    мкг/см', соответственно.

Рабочие растворы сразу после приготовления помещают в холодильник, где они хранятся при температуре 4—6 *С не более 10 дней.

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мЕА • с) от концентрации пенфлуфена в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки № 2—5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм' каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков действующего вещества, на основании которых строят градуировочную зависимость.

7.6. Подготовка колонки с флорисилом

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 30 см, внутренним диаметром 18 мм уплотняют тампоном из стекловаты, насыпают 2 г безводного сульфата натрия, сверху помещают 1 гфлорисила.

7.7. Приготовление смеси хлористый метилен-ацетон (объемное соотношение 9:1) для очистки картофеля на колонке с флорисилом

В мерную колбу вместимостью 500 см³ помещают 450 см³ хлористого метилена и 50 см³ ацетона, перемешивают.

7.8. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта

Оксид алюминия сушат в сушильном шкафу при 150 ^вС в течение 2 ч охлаждают в эксикаторе, затем дезактивируют 3 % воды по массе (II степень активности по Брокману).

МУК 4.1.3027-12

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 15 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г оксида алюминия в 10 см’ ацетонитрила. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помешают на него слой безводного сульфата натрия высотой 0,5 см. Колонку промывают 10 см* ацетонитрила со скоростью 1—2 капли в секунду. Колонка готова к работе.

7.9. Проверка хроматографического поведения пенфлуфена на колонке с оксидом алюминия

В круглодонную колбу вместимостью 10 см’ помещают 0,5 см’ раствора № 1 пенфлуфена с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.4.2), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 ^вС. Сухой остаток растворяют в 10 см* ацетонитрила, тщательно обмывая стенки колбы и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.8. Элюат собирают и упаривают досуха при температуре не выше 35 ^вС. Исходную колбу обмывают еще двумя порциями ацетонитрила объемом 10 см’ каждая и последовательно наносят на колонку. Каждую порцию собирают в отдельные колбы и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 *С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см’ подвижной фазы для ВЭЖХ, анализируют содержание пенфлуфена по п. 9.4.

Фракции, содержащие пенфлуфен, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Проверку хроматографического поведения пенфлуфена следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

7.10. Подготовка концентрирующих патронов CIS Sep Рак Classic

Патроны Cl8 Sep Рак Classic устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума. Сверху в патрон С18 Sep Рак Classic устанавливают медицинский шприц объемом не менее 10 см’, используемый в качестве емкости для элюента.

Концентрирующие патроны промывают последовательно 3 см³ метанола, затем 5 см’ бидистиллированной воды. Процедуру проводят с использованием вакуума, скорость потока растворителей через патрон не должна превышать 5 см^}/мин_у при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

15

ББК 51.21+51.53 060

060 Определение остаточных количеств пенфлуфена в воде, почве и клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013.-23 с.

ISBN 978-5-7508-1192-2

I. Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф Ф. Эрисмана* Роспотребнадзора (В. И. Ракитский, Т. В. Юдина. Н. Е. Федорова. В. Н. Волкова, Л. П. Мухина).

2    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере зашит прав потребителей и благополучия человека

3    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онишенко 3 июля 2012 г.

4    Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

ВБК 51.21+51.53

© Роспотребнадзор, 2013 © Федеральный центр гигиены

и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013

МУК 4.1.3027-12

Содержание

1.    Метрологические характеристики................................................ 5

2.    Метод измерений........................................................................... 6

3.    Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и

материалы....................................................................................... 7

4.    Требования безопасности.............................................................. II

5.    Требования к квалификации операторов..................................... 11

6.    Условия измерений........................................................................ 11

7.    Подготовка к выполнению измерений......................................... 11

8.    Отбор и хранение проб.................................................................. 16

9.    Выполнение определения............................................................. 17

10.    Обработка результатов анализа..................................................... 20

11.    Проверка приемлемости результатов параллельных определений 20

12.    Оформление результатов............................................................... 21

13.    Контроль качества результатов измерений.................................. 21

3

МУК 4.1.3027-1 2

УТВЕРЖДАЮ Руковолитель Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онишенко

3 июля 2012 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пенфлуфена в воде, почве и клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3027-12

Свидетельство о метрологической аттестации № 00121.22.05.12 от 22.05.2012.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций пенфлуфена в воде, почве и клубнях картофеля в диапазонах 0,0005—0,005 мг/дм³, 0,01—0,1 и 0,01 — 0,1 мг/кг соответственно.

Пенфлуфен

2’-[(К8)-1,3-диметилбутил)-5-фтор- 1,3-диметил- 1Н-пиразол-4-- карбоксамид ид (IUPAC)

C_i>H,.FN_jO

Мол. масса 317,4

4

МУК 4.1.3027-12

Белое кристаллическое вещество. Температура плавления 111 *С. Давление паров 4,1х10“⁷ Па (при 20 ^вС); 1,2x10"⁶ Па (при 25 °С). Растворимость в органических растворителях при 20 °С (г/дм'): ацетон — 139; н-гексан - 1,6; димстилсульфоксид — 162; дихлорметан > 250; метанол — 126; толуол - 62; этилацетат -96. Растворимость в воде при 20 °С (мг/дм¹): 11,0 (pH 4); 10,9 (pH 7); 11,2 (pH 9). Пенфлуфен гидролитически стабилен в кислых, нейтральных и щелочных условиях при комнатной температуре.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD_W) для крыс > 2000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD_M) для крыс > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC*) для крыс > 2022,5 мг/м*.

Область применения

Пенфлуфен - системный фунгицид широкого спектра действия класса пиразолов, рекомендуется к применению на картофеле для обработки клубней до или во время посадки.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и её составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица I Метрологические параметры

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/дм1 (мг/кг) Показатель точности (граница относительной погрешности), %, Р = 0,95 Стандартное отклоне- о~ S и X Э- 5 о Предел повторяемости, г, % Предел воспроизводимости, R, % Норматив оперативного контроля точности. К, мг/дм' (мг/кг), (Р = 0,95, m = 2) 1 2 3 4 5 6 7 Вода от 0,0005 до 0,005 вкл. 50 3,7 10 14 0,59 хТ

5

МУК 4.1.3027-12 Продолжение табл. /

1 2 3 4 5 6 7 Почва от 0,01 до 0,1 вкл. 50 4,1 II 16 0,59 хТ Клубни картофеля от 0,01 до 0,1 вкл. 50 4,2 12 17 0,59 хХ* X — среднее значение массовой концентрации пенфлуфена в пробе (мг/дм\ мг/кг)

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (п = 20) приведены в табл. 2. Таблица 2

Метрологические параметры Р = 0,95, п = 20 Анализи руемый объект Предел обнаружения, мг/дм (мг/кг) Диапазон определяемых концентраций, мг/дм1 (мг/кг) Полнота извлечения всшества. % Стандартное отклонение, % Доверительный интервал среднего результата, ±, % Вода 0,0005 0,0005-0,0OS 91,24 3,43 1,83 Почва 0,01 0.01-0,1 89,74 4,03 2,15 Клубни картофеля 0,01 0,01-0,1 86,18 4,17 2,22

2. Метод измерений

Метод основан на определении пенфлуфена с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после гомогенизирования анализируемого образца измельченного картофеля с флорисилом, последующей экстракции пенфлуфена системой растворителей дихлорметан-апетон и очистки экстракта на патронах для твердофазной экстракции С18 Sep Рак Classic; извлечения вещества из анализируемого образца почвы водным ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешиваю-шимися фазами и на колонке с оксидом алюминия. Для концентрирования и очистки пробы воды использованы патроны для твердофазной экстракции С18 Sep Рак Classic.

6

МУК 4.1.3027-12

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны фирмы «Agilent»

Весы аналитические ВЛА-200

Весы лабораторные обшего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г

Колбы мерные вместимостью 2-100-2,2-250-2,2-500-2, 2-1 000-2

Меры массы

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0;

10 см*

Цилиндры мерные 2-го класса точ- ГОСТ 1770-74 ности вместимостью 25, 50, 100, 250, 500 и 1 000 см³

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Пенфлуфен, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,2 %, CAS 494793-67-8 (фирма «Вауег CropScience»)

Ацетон

Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода для лабораторного анализа (деионизованная, бидистилированная) н-Гексан, хч

7

МУК 4.1.3027-12

Калий марганцово-кислый (перманганат калия), хч

Калий углекислый (карбонат калия), хч, прокаленный

Кальций хлористый (хлорид кальция), хч, насыщенный водный раствор

Кислота ортофосфорная, хч, 85 %

Кислота серная концентрированная

Метилен хлористый (дихлорме-тан), хч

Метиловый спирт (метанол), хч

Натрия гидроокись (гидроксид натрия), хч

Натрий серно-кислый (сульфат натрия) безводный, хч

Натрий углекислый (карбонат натрия), хч

Оксид алюминия (окись алюминия) для хроматографии, нейтральный, 50 -200 микрон, CAS 1344-28-01 (фирма «ACROS ORGANICS», Бельгия)

Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора)

Флорисил (60—100 меш), адсорбент для хроматографии («Флука», Швейцария)

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные средства измерений, устройств и материалы

Аллонж прямой с отводом для вакуума (для работы с концентрирующими патронами)

Аппарат для встряхивания типа    ТУ    64-1 -2851 —78

АВУ-бс или орбитальный шейкер OS-10, диапазон регулировки оборотов 50—200 об /мин, орбита до 10 мм

МУК 4.1.3027-12

Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)

Бумага индикаторная универсальная pH 1-10

Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги Ватман ЗММ

Воронка Бюхнера

Воронка делительная вместимостью 250 см³

Воронки стеклянные конусные типа В-36-80 ХС и В-56-80 ХС

Груша резиновая

Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90%, типа ВИТ-2

Колба Бунзена

Колбы конические (плоскодонные) с пришлифованной пробкой вместимостью 250—300 см³

Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 50, 150 и 250 см³

Стеклянная колонка длиной 30 см, внутренним диаметром 18 мм

Стеклянная колонка длиной 25 см, внутренним диаметром 15 мм

Стеклянные палочки

Мембранные фильтры микропористые, марки ММК, капроновые, диаметром 50 мм, размер пор 0,45 мкм

Набор для фильтрации растворителей через мембрану