Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение остаточного содержания действующих веществ пестицидов в воде, почве, растительном сырье и пищевых продуктах

Сборник методических указаний по методам контроля МУК 4.1.2990—12; 4.1.2992—12

Издание официальное

Москва • 2012

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение остаточного содержания действующих веществ пестицидов в воде, почве, растительном сырье и пищевых продуктах

Сборник методических указаний но методам контроля МУК 4.1.2990—12; 4.1.2992—12

МУК 4.1.2990—12

8. Подготовка к выполнению измерений

Перед проведением измерений проводят следующие операции: очистку органических растворителей, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовку колонки с силикагелем, градуировку хроматографа.

8.1. Очистка органических растворителей

8.1.1. Очистка н-гексана Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

Срок хранения - 1 неделя.

8.1.2. Очистка этилацетата Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5 %. Навеску (5 ± 0,1) г натрия углекислого в конической колбе растворяют в (40—60) см³ дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора - 1 неделя.

Этилацетат промывают последовательно раствором натрия углекислого с массовой долей 5 %, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют. Срок хранения - 1 неделя.

8.1.3. Очистка ацетона Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 дм³ ацетона 10 г КМл0₄ и 2 г К₂СОз). Срок хранения - 1 неделя.

8.2. Кондиционирование хроматографической колонки Капиллярную кварцевую колонку VF-5ms (типа SE-52) устанавливают в термостат хроматографа и, нс подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 290 °С и скорости газа-носителя 2 см³/мин в течение 8—10 ч.

8.3. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 20 см и внутренним диаметром 8—10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля в

11

МУК 4.1.2990—12

10 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают последовательно 15 см³ ацетона и 10 см³ смеси гек-сан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 9 : 1 со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

8.4. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания пириметанила из колонки с силикагелем

При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания пириметанила из колонки с силикагелем.

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,5 см³ градуировочного раствора пириметанила в смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 : 2, с массовой концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.5.2) и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 9:1, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 8.3. Промывают колонку 40 см³ смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 9 : I, со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 50 см³ смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 :2, отбирая последовательно по 5 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, сухие остатки растворяют в 2 см³ смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 : 2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и затем хроматографируют в соответствии с п. 7.2.

По результатам обнаружения пириметанила в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 : 2, необходимый для полного вымывания флуопирама из колонки.

8.5. Приготовление градуировочных растворов

8.5.1. Приготовление исходного градуировочного раствора пириметанила с массовой концентрацией 100 мкг/см³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 ± 0,0001) г пириметанила, растворяют в (30—40) см³ этилацетата, доводят объем раствора до метки этилацетатом, тщательно перемешивают.

12

МУК 4.1.2990—12

Раствор хранят при температуре не выше минус 18°С не более 2 месяцев.

8.5.2. Приготовление градуировочного раствора пириметанила с массовой концентрацией 10 мкг/см³ (раствор N9 1)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного градуировочного раствора пириметанила с массовой концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.5.1), разбавляют смесью гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 : 2 до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов № 2—5.

При оценке полноты извлечения пириметанила для внесения в образцы используют ацетоновые растворы вещества.

Градуировочный раствор № 1 и ацетоновые растворы пириметанила хранят при температуре не выше минус 18 °С в течение месяца.

8.5.3. Приготовление градуировочных растворов пириметанипа с массовой концентрацией 0,2—2,0 мкг/см³ (растворы N.9 2—5)

В 4 мерные колбы вместимостью 50 см³ помещают 1, 2, 5 и 10 см³ градуировочного раствора № 1 пириметанила с массовой концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.5.2), доводят до метки смесью гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 : 2, тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы №2—5 с массовой концентрацией пириметанила 0,2,0,4, 1,0 и 2,0 мкг/см³ соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

8.6. Градуировка хроматографа Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ) от массовой концентрации пириметанила в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4 градуировочным растворам.

В инжектор хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 8.5.3) и анализируют при условиях п. 7.2. Каждый раствор хроматографируют дважды. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предел повторяемости г.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

8.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого ветце-

13

МУК 4.1.2990—12

ства в начале, середине и в конце диапазона измерении, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

S_UXu> Sep - значение площади пика пириметанила в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно, уел. ед.;

К,_р - норматив контроля, К_гр = 0,5 ■ 8, где ± 8-границы относительной погрешности, %, (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

9. Отбор, хранение и подготовка проб

Отбор проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ Р.51592—2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01—83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168—89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. ТУ», ГОСТ 25892-83 «Сок виноградный. ТУ», ГОСТ 27572—87 «Яблоки свежие для промышленной переработки», ГОСТ 1725—85 «Томаты свежие. Требования при заготовке, поставке и реализации», ГОСТ 51808-2001 «Картофель свежий продовольственный, реализуемый в розничной торговой сети. ТУ», ГОСТ 7176-85 «Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. ТУ», ГОСТ 26832-86 «Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ», ГОСТ 6014-68 «Картофель свежий для переработки». ТУ», ГОСТ 6828-89 «Земляника свежая. Требования при заготовках, поставках и реализации».

14

МУК 4.1.2990—12

Пробы воды анализируют в день отбора пробы или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре при температуре не ниже минус 18 °С не более 2 недель.

Пробы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре (А—6)°С не более 4 педель. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не ниже минус 18 °С.

Пробы клубней, ягод и плодов хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более суток; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °С не более 6 месяцев. Пробы сока хранят при температуре (0—4) °С в герметичной упаковке не более недели, при температуре не выше минус 18 °С в течение 2 месяцев. Перед проведением анализа плоды, клубни и ягоды измельчают.

9.1. Экстракция пириметанила

9.1.1. Экстракция пир.метанила из проб воды В делительную воронку вместимостью 500 см³ помещают 200 см³ отфильтрованной вода, добавляют 30 см³ смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 : 2 и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз верхний органический слой отделяют и фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу. Водную фазу экстрагируют указанной выше смесью еще дважды порциями по 20 см³. Объединенную органическую фракцию упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 :2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и анализируют на содержание пириметанила по п. 10.

9.1.2. Экстракция пириметанила из проб почвы Пробу воздушно-сухой почвы массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ смеси ацетон-вода с объемным соотношением компонентов 8 :2, перемешивают. Колбу помещают в ультразвуковую ванну на 10 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Почву повторно экстрагируют 50 см³ смеси ацетон-вода с объемным соотношением компонентов 8 :2 в течение 30 мин при встряхивании и фильтруют. Объединенный экстракт упаривают на роторном вакуумном испарителе при температуре не выше

15

ББК 51.21 И37

ИЗ7    Измерение остаточного содержания действующих веществ

пестицидов в воде, почве, растительном сырье и пищевых продуктах: Сборник методических указаний по методам контроля.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2012.—35 с.

ISBN 978—5—7508—1103—8

1.    Разработаны ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии Россельхоза-кадемии: (Дубовая Л. В., Макеев А. М.).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по саншарно-эпидемиоло-гическому нормированию при Федеральной службе но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2012 № 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 19 марта 2012 г.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

ISBN 978—5—7508—1103—8

© Роспотребнадзор, 2012 О Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2012

МУК 4.1.2990—12; 4.1.2992—12

Содержание

Измерение остаточного содержания пиримстанила в воде, почве, картофеле, винограде, землянике, томатах, семечковых плодовых культурах, виноградном, томатном и яблочном соках методом капиллярной

газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2990—12..........................................4

Измерение остаточного содержания флуопирама в картофеле, винограде, землянике, томатах, семечковых плодовых культурах, виноградном, томатном и яблочном соках методом капиллярной газожидкостной хроматографии: МУК 2992—12..........................................................................21

3

МУК 4.1.2990—12

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

19 марта 2012 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение остаточного содержания пириметанила в воде, почве, картофеле, винограде, землянике, томатах, семечковых плодовых культурах, виноградном, томатном и яблочном соках методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2990—12

МУК 4.1.2990—12

C,₂H_I3N₃

Мол. масса: 199,3

Кристаллическое вещество от белого до светло-бежевого цвета. Температура плавления: 96,3 °С. Давление паров при 25 °С: 2,2 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода при 25 °С: К,„. log Р = 2,84 (pH 6,1). Растворимость (г/дм³) при 20 °С: ацетон - 389, дихлорметан -1 ООО, метанол - 176, этилацстат - 617, толуол - 412, н-гексан - 23,7; растворимость в воде (pH 6,1) при 25 °С - 0,121 г/дм³.

Вещество стабильно при нормальных условиях хранения и не гидролизуется в водном растворе при различных значениях температуры и pH.

В биологически активных почвах в аэробных условиях пиримета-нил разрушается достаточно быстро (DT₅₀ колеблется от 7 до 54 дней).

Краткая токсикологическая характеристика

Пириметанил относится к веществам малоопасным по острой пероральной и дермальной токсичности (LD₅₀ для крыс более 5 ООО млн"'), но умеренно опасным - по ингаляционной токсичности (LC50 для крыс более 1 980 мг/м³). Не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую глаз кролика, не обладает- мутагенным и тератогенным эффектом.

Область применения

Пириметанил - контактный фунгицид с местным системным эффектом, обладающий защитным и лечебным действием. Эффективен в борьбе с возбудителями серой гнили и парши на виноградниках, посадках семечковых и косточковых плодовых, овощных и декоративных культурах. Механизм его действия связан с ингибированием синтеза метионина, приводящего к подавлению секреции ферментов, необходимых для процесса заражения.

Проходит регистрационные испытания в Российской Федерации в качестве фунгицида в составе смесевого препарата на посадках картофеля, винограда, земляники, томатов открытого и защищенного грунта, в яблоневых и грушевых садах с нормой расхода от 150 до 450 г д.в./га.

Гигиенические нормативы для пириметанила в картофеле, винограде, землянике, томатах и яблоках в России не установлены. В странах ЕС для пириметанила установлены следующие гигиенические нормативы: MRL в томатах - 1 млн"¹ (мг/кг), в землянике, яблоках, винограде -5 млн"¹ (мг/кг). Чувствительность разработанного в странах ЕС метода анализа пириметанила для картофеля 0,05 млн"’ (мг/кг).

5

2. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

Таблица 1

Анали зируе мый объект Диапазон измерений содержания пиримста-нила, млн"' (мг/кг) Показатель точности (границы относительной погрешности) ± 5, % при Р = 0,95 Показатель повторяемости (относительное сред-неквадра-тическое отклонение повторяемости), % Показатель воспроизводимости (относительное сред-неквадра-тическос отклонение воспроизводимости), Or, % Предел повторяемости, г, %, Р = 0,95, п- 2 Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, CD0 911, °/о (п,= п>= 2) 1 2 3 4 5 6 7 Вода От 0,0010 до 0,005 вкл. (мг/дм3) 50 12 18 33 44 Св. 0,005 до 0,010 вкл. (мг/дм3) 40 10 15 28 37 Почва От 0,010 до 0.05 вкл. 60 15 22 42 53 Св. 0,05 до 0,10 вкл. 45 9 18 25 47 Карго- фель От 0,05 до 0,10 вкл. 50 12 18 33 44 Св. 0,10 до 0,5 вкл. 40 9 14 25 35 Томаты От 0,5 до 1.0 вкл. 55 14 21 39 51 Св. 1,0 до 5 вкл. 40 9 14 25 35 Томат-ный сок От 0,5 до 1,0 вкл. 40 10 15 28 37 Св. 1.0 до 5 вкл. 30 6 9 17 22 Вино град От 2,5 до 5 вкл. 20 3 5 8 12,5 Св. 5,0 до 10 вкл. 10 1,6 3 4,4 8

МУК 4.1.2990—12

Продолжение табл. 1

1 2 3 4 5 6 7 Вино- От 2,5 до 5 вкл. 18 5 7,5 14 18 сок Св. 5,0 до 10,0 вкл. 9 1,6 3 4,4 8 Земля- От 2,5 до 5 вкл. 14 3 5 8 12,5 ника Св. 5,0 до 10,0 вкл. 7 1.5 2,5 4 6 Яблоки От 2,5 до 5 вкл 21 6,5 10 18 25 Св. 5,0 до 10 вкл. 12 4 6 11 15 Яблоч- От 2,5 до 5 вкл. 12 2,5 4 7 10 ный сок Св. 5,0 до 10 вкл. 6 1,5 2,5 4 6

3. Метод измерений

Метод основан на экстракции пириметанила из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстрактов, содержащих пириметанил, от коэкстрактивных компонентов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем, с последующим измерением содержания пириметанила методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с использованием термоионного детектора (ТИД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

4. Требования к средствам измерений, вспомогательным устройствам, реактивам и материалам *

4.J. Средства измерений Газовый хроматограф «Varian СР-3800» с ТИД (США)

Весы аналитические «Sartorius 6110» с наибольшим пределом взвешивания 110 г Весы лабораторные «Metier Р-160» с наибольшим пределом взвешивания 160 г Набор гирь

Колбы мерные 2-50-2,2-100-2, 2-1000-2

7

МУК 4.1.2990—12

Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2;

1-2-2-5; 1-2-2-10    ГОСТ 29227-91

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2    ГОСТ 1770-74

Цилиндры мерные 1-25;1-50; 1-100; 1-500;

1-1000    ГОСТ 1770-74

Микрошприц МШ-1Ф    ТУ 64-1 -2850

4.2. Реактивы

Пириметанил (CAS 53112-28-0) с содержанием основного вещества не менее 99,5 % («Байер», Германия)

Ацетон, квалификации чда Вода дистиллированная или деионизованная Гелий газообразный, очищенный марки «А» н-Гексан, квалификации хч Калий углекислый, квалификации хч Калия перманганат, квалификации хч Кальция хлорид, квалификации хч Кислота серная, квалификации хч Натрий углекислый, квалификации хч Натрий серно-кислый, безводный, квалификации хч

Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), квалификации ч

4.3. Вспомогательные устройства, материалы Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-бс 1*У 64-1-2851—78 Ванна ультразвуковая, модель Т>-50 («Branson Instr. Со., США)

Гомогенизатор «Omni-mixer» («Sorvatl»,

США) или гомогенизатор МРТУ 42-1505 Генератор водорода, мод. SPE («General Electric», США)

Компрессор (СКБ «Хроматэк», Россия)

Дистиллятор «Cyclon III», модель 4 BD («Fistreem», Великобритания)

Установка «Elgastat В 114» с патроном «Elgacan В 114» для получения деионизированной воды («Elga», Великобритания)

Воронка Бюхнера

Воронки делительные вместимостью 100 см³ ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью

10 и 100 см³    ГОСТ 9737-93

Колбы плоскодонные вместимостью 250 см³ ГОСТ 9737-93

Колонка хроматографическая капиллярная

кварцевая VF-5ms (типа SE-52), длина 30 м,

внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки

0,5 мкм, «Varian» (США)

Колонка хроматографическая стеклянная,

длиной 20 см, внутренним диаметром 8—10 мм

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1 М ТУ 25-11 -917—76

или ротационный вакуумный испаритель

В-169, «ВисЫ» (Швейцария)

Силикагель 60 (0,063—0,2 мм) для колоночной хроматографии («Мерк», Германия)

Стаканы химические вместимостью 100 и 500 см³ ГОСТ 25336-82 Стекловата

Установка для перегонки растворителей с    ГОСТ 9737-93

дефлегматором    (ИС0 641—75)

Фильтры бумажные «красная лента»,

обеззоленные    ТУ 6-09-2678—77

* Примечание. Допускается применение средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов иных производителей с аналогичными техническими и метрологическими характеристиками, приведенными в разделе 4.

5. Требования безопасности, охраны окружающей среды

5.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.

5.2.    При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91, в наличии должны быть средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009— 90. Обучение работающих правилам безопасности труда проводят согласно ГОСТ 12.0.004-90.

5.3.    При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019—79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

9