Федеральная служба но напору » сфере защиты нрав потребителей и благополучии человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств действующих веществ пестицидов в растительном сырье и пищевых продуктах

Сборник методических указаний по методам контроля МУК 4.1.2983—4.1.2985—12; 4.1.2987—12; 4.1.2991—12; 4.1.3001—12; 4.1.3003—12; 4.1.3005—12

ББК 51.23 060

060 Определение остаточных количеств действующих веществ пестицидов в растительном сырье и пищевых продуктах: Сборник методических указаний по методам контроля.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2012.—140 с.

1.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2012 №2).

2.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 19 марта 2012 г.

3.    Введены в действие с момента утверждения.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

Редакторы II. Е. Акопова, Л. С. Кучурова Технический редактор Е. В. Ломанова

Подписано в печать 31.10.12 Формат 60x88/16    Печ.    л. 8.75

Тираж 200 экз.    Заказ    55

Федеральная служба по надзору в сфере защи ты прав пот реби гелей и благополучия человека 127994. Москва. Вадковский пер., д. 18. стр. 5. 7

Ори шпал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзоре 117105. Москва. Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел. факс 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2012 © Федеральный центр i шиены н

эпидемии ин ии Роспотребнадзора, 2012

МУК 4.1.2984—12

брасывают. Объединенную органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10—15 см³ хлористого метилена. Полу ченный раствор выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ дистиллированной воды и количественно переносят в откондиционированный патрон (п. 7.5). Фильтрат отбрасывают. Римсульфурон элюируют 3 см³ смеси ацетонитрил-вода в соотношении 50 : 50. приготовленной по п. 7.2.5. Элюат упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы и 20 мм³ полу ченного раствора вводят в хроматограф.

9.2. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы Waters с УФ-дстскто-ром (Waters 2487) или другой с аналогичными характеристиками. Рабочая длина волны 230 нм.

Предколонка Waters SunFirc Cl8 (20 х 4.6) мм. 5 мкм (Waters. USA) для защиты аналитической колонки. Колонка SunFirc С18 (250 х 4.6) мм. 5 мкм (Waters. USA). Температура колонки 30 °С. Подвижная фаза: ацетонитрил - 0.005М раствор ортофосфорной кислоты в соотношении 40 : 60. Скорость потока 1 см³/мин. Дозируемый объем 20 мм³. Линейный диапазон детектирования 0.05—1.0 мкг/см³.

Время у держивания римсульфурона (11.5 ± 0.2) мин.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание римсульфурона А'(мг/кг) вычисляют по форму ле:

* .У ЧКЧ^ЧОО

О = —-.    где

Р Ч/

У_х - плошадь пика римсульфурона на хроматограмме испытуемого образца. (AU • с):

К - граду ировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости:

V— объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа. см³:

Р - навеска анализиру емого образца, г:

/- полнота извлечения римсу льфу рона. приведенная в табл. 2. (%).

Содержание остаточных количеств римсульфу рона в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

43

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор рим-сульфурона с концентрацией 1.0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определении

2Щ- д,|чоо

(А + К)

J г, где

О)

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми нс превышает предела повторяемости:

.V/, X: - результаты параллельных определений, мг/кг: г - значение предела повторяемости (г = 2.8<т_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( О ± А) мг/кг при вероятности Р = 0.95. где

D- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг:

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

А = 34—. где

100

3 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в biuc:

«содержание вещества в пробе «.менее нижней границы определения» (например: менее 0,01 мг/кг*).

* - 0,01 мг/кг - предел обнаружения римсулъфурона в плодах томатов.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002

МУК 4.1.2984—12

«Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрнлабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки Q должна удовлетворять условию:

Я = D,.g + D, _Sr где

± D,._a (± D характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг: при этом:

Д, = ± 0.84 А. где

граница абсолютной погрешности, мг/кг:

А = д Ч-. где

100

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К_к=Оу- D -С_д. где

(ly. D, С₀ - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (/Q с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

т<к.    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

45

МУК 4.1.2983—4.1.2985—12:4.1.2987—12:4.1.2991—12: 4.1.3001—12; 4.1.3003—12; 4.1.3005—12

Содержание

Определение остаточных количеств пираклостробина в зеленой массе, зерне

и масле кукурузы, в семенах и масле сои, подсолнечника и рапса, в плодах томатов и огурцов, томатном соке, корнеплодах моркови, луке-репке, кат ете и клубнях картофеля методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2983—12................................................4

Определение остаточных количеств римсульфурона в томатах методом

высокоэффективной жи;ц<остной хроматографии: МУК 4.1.2984—12...........36

Определение остаточных количеств ацетамиприда в плодах и соке яблок методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2985—12................................................................................................47

Определение остаточных количеств тиаклоприда в зеленой массе, семенах и масле рапса, ягодах и соке винограда методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2987—12..............................................59

Определение остаточных количеств флудиоксонила в томатах методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2991—12...........72

овощных культурах (томаты, перец, огурцы), хмеле, винограде и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК 4.1.3001—12....................................................................86

Определение остаточных количеств фснгексамида в ягодах (клубника, киви), томатах, огурцах, винограде и виноградном соке методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.3003—12.........108

Определение остаточных количеств хлорал гранил инрола в капусте

3

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|>ерс защиты прав потребителей и благополу чия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

19 марта 2012 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств римсульфурона в томатах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания

МУК 4.1.2984—12

Свидетельство о метрологической аттестации от 25.07.2011 № 01.5.04.015/01.00043/2011.

Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств римсульфурона в томатах в диапазоне концентраций 0.01—0.1 мг/кг.

S02CH2CH3    ОСНз

Название действующего вещества по ИСО: римсульфурон. Структурная формула:

Название действующего вещества по ИЮПАК: 1 -(4.6-диметокси-пиримидин-2-ил)-3-(этилсульфонил-2-пиридинсульфонил) мочевина. Молекулярная масса: 431.4.

Эмпирическая формула: C14H17N5O7S2.

Химически чистое вещество представляет собой бесцветные кристаллы с температурой плавления 172—173 °С, давлением паров 1.5 х 10"³ мРа (25 °С).

МУК 4.1.2984—12

Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода lgP = 0.288 (pH 5), -1.47 (pH 7).

Растворимость в воде: при 25 °С < 10 мг/л; 7,3 г/л (буферный раствор. pH 7). Хорошо растворим в ацетонитриле, дихлормстанс и хлороформе.

Гидролиз (25 °С). DT»: 4.6 дня (pH 5). 7.2 дня (pH 7). 0.3 дня (pH 9).

Группа токсичности по ВОЗ - U; LD₅₀ для крыс > 5 ООО мг/кг.

Область применения

Послевсходовый системный гербицид, эффективный в борьбе со злаковыми однолетними и многолетними сорняками. Используется хтя зашиты кукурузы, картофеля и томатов.

Гигиенические нормативы для римсульфурона в России: МДУ для римсульфурона в томатах 0.05 мг/кг.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 нс превышает значений, приведенных в табл. 1. для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа Диапазон определяемых концен-граций, мг/кг 1 Указатель повторяемости (отно-сительное средне-квадратическое отклонение повторяемости), ог, % 11оказагель внутрила-бораторной нрецизи-онности, «Ил. % Показатель воспроизво димоста. Or, % 11оказате.'п> точности* (границы oniocHie.ii»-ной noipeiii-ности), ±6,% Томаты 0,01—0,1 8 9 11 22 * Соответствует расширенной неопределенности 1'^ при коэффициенте охвата А- = 2

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п = 20, Р = 0,95

Объект анализа Предел обнару жения, мг/кг Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение S, % Доверительный интервал среднего результата, ±, % Томаты 0,01 0,01—0,1 85,3 5,08 2,54

2. Метод измерения

Методика основана на определении римсульфурона методом ВЭЖХ с использованием УФ-детсктора после его экстракции из томатов с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешн-вающимнся растворителями и на патронах Диапак С 16.

Идентификация римсульфурона проводится по времени удерживания. количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства н материалы

24104—01

24104—01

23932—90

3.1. Средства измерении Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы «Waters» с УФ-дстсктором (Waters 2487) с дегазатором и автоматическим пробоотборником Весы аналитические ВЛА-200    ГОСТ

Весы технические ВЛКТ-500    ГОСТ

Колбы мерные на 10. 100 и 1 000 см³    ГОСТ

50444

29227—91

22261—76

23932—90

Микродозаторы Лснпипст переменного объема от 200 до 1 000 мм³ и от 1 до 5 см³, вид климатического исполнения УХЛЧ.2    ГОСТ

Пипетки градуированные объемом 1.2. 5 и

10 см³ ’    гост

pH-метр универсальный ЭВ-74    ГОСТ

Цилиндры мерные на 50. 100. 500 и 1 000 см³ ГОСТ

Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными характеристиками, но не ниже указанных.

ТУ 6-09-3513—86

ТУ 6-09-3534—87

ГОСТ 6709-79

ТУ 2631 -003-05807999—98

ГОСТ 6552-80

ТУ 2631 -019-44493179—98

ГОСТ 4166-76

3.2. Реактивы

Ацетон, осч

Ацетонитрил для ВЭЖХ. сорт 1 или хч Вода бидистнллированная. деионизированная Гексан, хч

Кислота орто(|юс(|юрная. хч Метилен хлористый Натрий серно-кислый безводный, ч, с веже про кале н н ы й

МУК 4.1.2984—12

Римсульфурон, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99.9% (Sigma-Aldrich)

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичной квалификацией. но не ниже укатанной.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы Аналитическая колонка SunFirc С18 (250 х 4.6) мм. 5 мкм (Waters. USA)

Бидистиллятор

ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98 ГОСТ 25336-82 ГОСТ 25336-82 МРТУ 42-1505—63

ГОСТ 25336-82 ГОСТ 25336-82

Вакуумный манипулятор для работы с патронами для твердофазной экстракции (Waters, кат. № WAT 200677)

Ванна ультразвуковая УЗВ-1.3 Воронки делительные объемом 250 и 500 см³ Воронки лабораторные В-75-110 Г омогенизатор

Колбы плоскодонные на шлифах КШ 250

*/32 ТС

Колбы-концентраторы емкостью 100 и 250 см³ Патроны Диапак С16 (Биохиммак) 0.4 г Прсдколонка Waters SunFirc С18 (20 х 4.6) мм.

5 мкм (Waters. USA).

ГОСТ 25336-82 ТУ 6.091678—86

Ротационный испаритель вакуумный Buchi R-205 Стаканы химические объемом ИХ). 200 и 5(H) см³ Фильтры бумажные «красная лента»

Примечание. Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не ниже указанных.

4. Требования безопасности

4.1.    При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005. 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила элсктробсз-опасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по

39

ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе нс должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэф(|юк-тивной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности нс более 80 %:

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7. /. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку (SunFire Cl8) кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 см³/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1—2 ч.

7.2. Приготовление растворов

7.2.1.    Приготовление 50 %-го раствора ацетона: в мерную колбу емкостью 1 дм³ помещают 500 мл ацетона и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2.2.    Приготовление 2М раствора ортофосфорной кислоты: 200 г 98 %-й (или 225 г 87 %-й) кристаллической НяРО^ помещают в мерную колбу объемом 1 дм³, растворяют в 600 см³ дистиллированной воды и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2.3.    Приготовление 0.005Мраствора ортофос(/юрнои кислоты: в мерную колбу вместимостью 1 дм³ помещают 2.5 см³ 2М раствора Н₃РО., и доводят объем до метки водой для ВЭЖХ.

7.2.4.    Приготовление подвижной фазы: в мерную колбу вместимостью 1 дм³ помещают 400 см³ ацетонитрила и доводят объем до метки 0.005М раствором ортофосфорной кислоты.

МУК 4.1.2984—12

7.2.5. Приготовление элюента: в колбе на 100 см³ смешивают 50 см³ ацетонитрила и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов

Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см³ \ точную навеску римсульфурона (50±0,1)мг помешают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в ацетонитриле и доводят до метки тем же растворителем.

Градуировочные растворы с концентрациями 0.1; 0.2; 0.5 и 1.0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение 1 недели, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты определения для внесения в матрицу используют ацетонитрильные растворы римсульфурона. которые готовят из основного стандартного раствора с концентрацией 0.5 мг/см³ методом последовательного разбавления ацетонитрилом.

7.4. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика -концентрация римсульфурона в растворе) в хроматограф вводят по 20 мм³ градуировочных растворов (нс менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, нс менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации римсульфурона в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (/0 в уравнении линейной регрессии:

С = К S. где

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается нс ниже 0,99.

Граду ировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном резу льтате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следу ющего условия:

41

МУК 4.1.2984—12

IС-СА

^]-ЛОО<л_(Пда .где

С - аттестованное значение массовой концентрации римсульфуро-на в градуировочном растворе:

С_к - результат контрольного измерения массовой концентрации римсульфурона в градуировочном растворе:

Контр ~ норматив контроля градуировочного коэффициента. % (К-оитр = 10 % при Р = 0.95).

7.5. Подготовка патронов Дыапак С16

Непосредственно перед употреблением через патрон последовательно пропускают по 2 см³ ацетонитрила и воды. Скорость потока нс более 2 cmvmhh.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микро количеств пестицидов», от 21.08.1979 №2051—79. а также в соответствии с ГОСТ 1725-85 «Томаты свежие. Требования при заготовках и поставках».

Пробы плодов томатов помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С и хранят в закрытой полиэтиленовой таре.

9. Проведение определения

9.1. Определение римсульфурона в плодах томатов

В коническую колбу емкостью 250 см³ помещают (20 ±0.1) г измельченного образца и экстрагируют римсульфурон 50 см³ смеси ацетон-вода (50 : 50. по объёму) на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют. Объединенный экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре нс выше 40 °С. Объём водного остатка доводят до 100 см³ дистиллированной водой, помещают в делительную вороню объёмом 250 см³ и промывают дважды гексаном порциями по 25 см³, встряхивая смесь каждый раз в течение 2—3 мин и отбрасывая после расслоения верхний органический слой.

Водную фазу подкисляют 2М орто(|юсфорной кислотой до pH 3 и римсульфурон экстрагируют хлористым метиленом дважды по 50 см³, встряхивая вороню каждый раз по 2—3 мин. Верхний водный слой от-